Abstract
RAS forening domene familie protein 1a (RASSF1A) er en antatt tumor suppressor genet ligger på 3p21, har vært ansett som spiller viktige roller i regulering av ulike typer humane tumorer. Tidligere rapporter har vist at hyppigheten av RASSF1A metylering var signifikant høyere hos pasienter gruppe sammenliknet med kontroller, men forholdet mellom RASSF1A promotoren metylering og patologiske funksjoner eller tumor grad av blærekreft fremdeles kontroversiell. Derfor En meta-analyse av publiserte studier som undersøker effekten av RASSF1A metylering status i blærekreft forekomst og sammenheng med både pTNM (p, patologisk stadium, T, tumorstørrelse, N node status, M, metastatisk status) og tumor karakter i blærekreft ble utført i studien. Totalt 10 kvalifiserte studier med 543 tilfeller og 217 kontroller ble inkludert i de samlede analysene. Under faste-effekter modell, OR av RASSF1A metylering i blærekreftpasienter, sammenlignet med ikke-kreft kontroller, var 8. 40 med 95% KI = 4. 96-14. 23. samlet eller med tilfeldig effekt modell av pTNM og tumor karakter i RASSF1A denaturert pasienter, sammenlignet med unmethylated pasienter, var 0. 75 (95% KI = 0. 28-1. 99) og 0. 39 (95% KI = 0. 14-1. 09). Denne studien viste at RASSF1A metylering ser ut til å være en uavhengig prognostisk faktor for blærekreft. Dagens funn krever også bekreftelse gjennom tilstrekkelig utviklet for prospektive studier
Citation. Gao T, Wang S, han B, Pan Y, Song G, Gu L, et al. (2012) The Association of RAS Association Domain Familie Protein1A (RASSF1A) Metylering statene og blærekreft Risk: en systematisk oversikt og meta-analyse. PLoS ONE 7 (11): e48300. doi: 10,1371 /journal.pone.0048300
Editor: William B. Coleman, University of North Carolina School of Medicine, USA
mottatt: 24 juli 2012; Godkjent: 20 september 2012; Publisert: 06.11.2012
Copyright: © 2012 Gao et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Studien ble støttet av National natur Science foundation of China (81172141 /H1611, https://isisn.nsfc.gov.cn/egrantweb/). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Blærekreft er den vanligste kreftformen i urinveiene, og den niende mest vanlige kreftdiagnose hele verden, med mer enn 330 000 nye tilfeller hvert år, og mer enn 130 000 dødsfall per år. Det er generelt antatt at mannlige: Kvinne insidensratio er 3. 08:01. 0 [1]. Den histologiske og patologiske type blærekreft er hovedsakelig urothelial karsinom, også kalt overgangsordning celle carcinoma, og står for ca 90% [2]. Andre typer inkludert plateepitelkarsinom og adenokarsinom, står for 3-7% og mindre enn 2% henholdsvis [3]
DNA metylering av promotorområdene fremstår som den viktigste mekanismen for inaktivering av TSGs (tumor suppressor. genet). DNA er denaturert bare på cytosines ligger 5 «til guanosines i CpG dinukleotider og DNA metylering er en hyppig epigenetisk hendelse i mange humane kreftformer [4]. Denne endringen har viktige regula-stillende effekter på genekspresjon, spesielt når involverer CpG-rike områder kjent som CpG øyer, som ligger i promotorområdene av mange gener. I mange tilfeller har avvikende metylering av CpG island gener blitt korrelert med et tap på genekspresjon, og det foreslås at DNA metylering gir en alternativ vei til genet sletting eller mutasjon for tap av TSG funksjon. Markører for avvikende metylering kan representere en lovende metode for overvåking av forekomst og progresjon av kreft. Den RASSF1 (Ras-foreningen domene familie 1) familie av proteiner representerer en klasse av Ras effektorer som besitter svulst undertrykkende egenskaper. RASSF1A, en av de syv forskjellige isoformer av RASSF1, er en antatt tumorsuppressorgen plassert på 3p21, en region av felles heterozygote og homozygot delesjoner i forskjellige typer av humane tumorer [5] – [6]. Den deler høy sekvenshomologi med en kjent museprotein (Nore1) og kan tjene som en effektor som medierer de apoptotiske effekter ved binding Ras i en guanosin-trifosfat-avhengig måte [6]. Påfølgende rapporter tyder på at hypermethylation av CPG øyene i RASSF1A promoter-regionen, snarere enn klassiske mutasjon /sletting hendelser, er den viktigste årsaken til tap-av-uttrykk [6]. Celler behandlet med demetylering midler re-ekspress RASSF1A bekrefter rollen til DNA-metylering i inaktivering av RASSF1A i tumorcellelinjer [7]. I mange menneskelige organ tumorer, og metylering av RASSF1 blitt identifisert [Genebank Accession # AC002481, nukleotidene 17730-18370] og dens frekvens varierer mellom 30% og 50% [8], [9]. Videre ble RASSF1A metylering rapportert som en prognostisk indikator på nyrecellekreft, ikke-småcellet lungekreft, nevroblastom, melanom, livmorkreft og brystkreft [10] – [17]. Alle disse funnene antydet at det kan spille en sentral rolle i utviklingen av kreft hos mennesker.
Til tross for en rekke enkeltstudier utført på pasienter med blærekreft, den prognostiske verdien av RASSF1A metylering status i blærekreft pasientens diagnose og forholdet mellom RASSF1A metylering og patologiske funksjoner eller svulst grad av blærekreft er fortsatt kontroversielt. Derfor ble en systematisk gjennomgang utført av litteraturen med meta-analyse for å få en mer nøyaktig vurdering av sin prognostisk verdi i blærekreft.
Materialer og metoder
Publikasjon utvalg
studier ble identifisert via et elektronisk søk i PubMed og EMBASE ved hjelp av følgende stikkord: blærekreft, UBC, RAS forening domene familie protein1A, RASSF1A, metylering, prognostisk, prognose, patologiske funksjoner og svulst klasse. Vi har også manuelt søkte referansene til disse publikasjonene for å hente ytterligere studier. Bare de publisert som fulltekstartikler og engelsk ble inkludert som kandidater. Jakten oppdatert 28. juli 2012.
Hvert punkt representerer en egen studie for den angitte foreningen. Logor naturlig logaritme av OR, horisontal linje mener effektstørrelse. Fig. 1: Begg trakten tomt på publikasjonsskjevhet test
inklusjons- og eksklusjonskriterier
Studier ble valgt for analyse hvis de oppfylte følgende kriterier:. 1) de var opprinnelig epidemiologisk studier på sammenhengen mellom RASSF1A promoter metylering og prognosen for blærekreftpasienter, patologiske funksjoner eller svulst grad av blærekreft; 2) RASSF1A metylering status ble undersøkt ved hjelp av metylering spesifikke PCR (MSP) eller kvantitativ MSP (QMSP); 3) fagene i hvert studie omfattet pasienter og ikke-kreft kontroller; 3) studier bør være med fulltekst ikke bare abstracts for relevant informasjon utvinning; 4) når den samme pasientpopulasjon rapportert i flere publikasjoner, bare den siste rapporten eller den mest komplette ett ble inkludert i denne analysen for å unngå overlapping mellom kohorter; 5) antall pasienter og kontroller i hver studie bør være mer enn tre kroner.
Datainnsamling
For hver kvalifisert undersøkelse, vi samlet informasjon om forfattere, år og kilde for offentliggjøring, country opprinnelsesland, inklusjonskriteriene, eksklusjonskriterier, patologiske funksjoner, svulst klasse, RASSF1A metylering frekvenser i ikke-kreft kontroller og pasienter med blærekreft og metoden for metylering deteksjon. Alle inkluderte studiene brukt ikke-kreft folk som kontrollgruppe, selv om noen av dem ikke gi definisjonen av noncancer. I studier som danner ikke-cancer mennesker, er det to definisjoner: (1) normal frisk person; (2) personer med urologiske sykdommer, men ingen tidligere historie med urin malignitet. Siden det er umulig å redefinere ikke-cancer mennesker på en felles standard, kombinert vi ikke-cancer mennesker i vår meta-analyse i henhold til deres opprinnelige gruppe i hvert enkelt studium. Av disse studiene ble tumor grad ≤1 definert som lav-klasse, og tumor grad ≥2 ble definert som høy klasse som ble definert av cellulær differensiering. De endelige kvalifiserte artikler er valgt for ytterligere meta-analyse ble evaluert uavhengig av to anmeldelser. Mindre avvik ble løst ved forfatternes diskusjon.
Meta-analyse og statistisk analyse
Den fremste analyse undersøkte forskjeller i hyppigheten av RASSF1A metylering mellom blærekreftpasienter og ikke-kreft folk ved odds ratio (OR) med den tilsvarende 95% CI. Videre styrken på sammenhengen mellom RASSF1A metylering og pasientenes pTNM (p, patologisk stadium, T, tumorstørrelse, N node status, M, metastatisk status) og tumor grad ble også vurdert av OR med tilsvarende 95% CI. For å vurdere heterogenitet på tvers av studiene ble en statistisk test for heterogenitet utført basert på statistikk [18]. Hvis studiene ble vist å være homogent med P 0. 05 for Q-statistikken, var oppsummeringen av OR beregnes ved en fast effekt-modell (den Mantel-Haenszel metoden) når mellom-studie heterogenitet var fraværende [19]. Ellers var en tilfeldig effekt-modellen (DerSimonian og Laird metode) valgt [20]. I tillegg ble det stratifiserte analyser også utført av materiale og fremgangsmåte. Videre ble en sensitivitetsanalyse, ved hvilken en enkelt undersøkelse i meta-analyse ble slettet hver gang for å bestemme innvirkningen av de individuelle datasettet til den generelle samles OR, utført for å vurdere stabiliteten av resultatene. Potensialet publikasjonsskjevhet ble undersøkt visuelt i en trakt plotting av log [OR] mot dens standardfeil (SE), og graden av asymmetri ble testet ved Egger test [21]. Denne meta-analyse ble utført ved hjelp av programvaren Stata versjon 12. 0. Alle P-verdier var basert på to-sidige tester og en P-verdi mindre enn 0. 05 ble ansett som statistisk signifikant.
Resultater
Studie Kjennetegn
Ifølge våre inklusjonskriterier, totalt 10 kvalifiserte studier [22] – [31] som involverer 543 tilfeller og 217 kontroller ble inkludert i de samlede analysene. Karakteristikkene for disse studiene er oppsummert i tabell 1. Av disse studiene, ble seks studier utført i Asia, to var i Europa, og resten var i USA, Brasil. Det metylerte RASSF1A nivåer ble påvist ved anvendelse av enten metylering spesifikk PCR (MSP) [22], [24], [25], [28] – [31] eller kvantitativ metylering spesifikk PCR (QMSP) [23], [26], [ ,,,0],27]. DNA-metylering status av RASSF1A promoteren ble vurdert i urin eller tumorvev. Blærekreft ble bekreftet histologisk eller patologisk i alle studiene.
metaanalyse
Generelt frekvensene RASSF1A metylering ble testet i ti pålitelige studier. Hovedresultatene ble sammenfattet i tabell 2. Under den faste effekt-modell, den samlede OR av RASSF1A metylering i blærekreftpasienter, sammenlignet med ikke-kreft kontroller, var 8. 40 med 95% KI = 4. 96-14. 23. I stratifisert analyse av materialet, ble signifikant økt risiko som finnes i urinprøver i detction RASSF1A metylering i blærekreft (OR = 7. 29, 95% CI = 4. 20-12. 65) og i vev (OR = 28 . 76, 95% CI = 3. 73-221. 59). Som stratifisert analyse av metode, ble betydelig økt risiko også i MSP (OR 14. 76, 95% CI = 6. 89-31. 61) og QMSP (OR = 3. 68, 95% CI = 1. 69-8 . 03). I evaluere RASSF1A metylering og pTNM /karakter i blærekreft, ble hver utført i seks studier. Hovedresultatene ble oppsummert i tabell 3. Under tilfeldig effekt modellen, den samlede OR av pTNM og tumor karakter i RASSF1A denaturert pasienter, sammenlignet med unmethylated pasienter var 0. 75 (95% KI = 0. 28-1. 99) og 0. 39 (95% KI = 0. 14 til 1 september.)
Følsomhet analyser
Følsomhetsanalyse analyse~~POS=HEADCOMP viste at fire uavhengige studier var den viktigste kilden til heterogenitet [22] -. [ ,,,0],25]. Da heterogenitet RASSF1A metylering i blærekreftpasienter, sammenlignet med ikke-kreft kontroller ble redusert når disse fire studiene ble fjernet (P = 0,49). I tillegg ble det ingen annen enkelt studie funnet å påvirke den samlede OR som indikert av sensitivitetsanalyser.
publikasjonsskjevhet
Som vist i figur 1, formen av trakten tomter virket asymmetrisk i metylering sammenligning mellom pasienter med blærekreft og ikke-kreft-kontroller, noe som tyder på tilstedeværelsen av publikasjonsskjevhet. Deretter gir Egger test statistisk bevis på trakt tomten asymmetri (t = 5. 14, P = 0. 001). For å justere denne skjevheten, en trim-and-fill metode utviklet av Duval og Tweedie [32] ble gjennomført (figur 2). Meta-analyse med eller uten trim-and-fill metoden ikke trekke ulike konklusjoner, noe som indikerer at resultatene var statistisk robust. Trakt tomt og Egger test ble utført for å vurdere publikasjonsskjevhet i studier av sammenhengen mellom RASSF1A metylering og pTNM /klasse, gjorde Formen trakten tomten indikerer ikke noen bevis for åpenbar asymmetri (figur ikke vist) og Egger test foreslo fravær av publikasjonsskjevhet (P . 0 05).
Diskusjoner
resultatene fra vår systematisk gjennomgang viste at RASSF1A metylering i blærekreft ble assosiert med svulst risiko som enten påvises i urin eller vev av MSP eller QMSP. Imidlertid ble det RASSF1A metylering ikke forbundet med økt risiko for å utvikle patologiske funksjoner eller svulst grad av blærekreft sammenlignet btween RASSF1A metylert blære cnacer pasienter og unmethylated pasienter.
Akkumulerte data dokumentert at pasienter med blærekreft alltid vise RASSF1A metylering [31]. Tidligere rapporter har også vist at genetiske varianter av RASSF1A påvirke blærekreft mottakelighet [28] og hyppigheten av RASSF1A metylering ble funnet å være signifikant høyere hos pasienter gruppe sammenliknet med kontroller [27], [28]. For ytterligere å bekrefte RASSF1A promoter metylering status i blærekreft pasientens diagnose, gjennomførte vi en meta-analyse av 10 studier med 543 tilfeller og 217 kontroller for å utlede en mer presis estimering av foreningen. Våre resultater antydet at RASSF1A metylering er en potensiell risikofaktor for blærekreft som oppdaget både i urin og tumorvev. Frekvensen av RASSF1A metylering i blærecancerpasienter var 8. 40 ganger høyere enn i ikke-cancer mennesker. Imidlertid er MSP en nonquantitative nonfluorometric PCR-metode for å undersøke arrangøren metylering. Denne metoden kan mislykkes i å detektere lave konsentrasjoner av denaturert alleler, i motsetning QMSP som kan registrere opptil 1/1000 denaturert alleler [27]. I denne meta-analyse, både av dem presentere en positiv effekt i deteksjon i RASSF1A metylering. Videre ble hyppig metylering detektert i RASSF1A med signifikant sammenheng med tumorstadium, klasse og muskel invasivitet [30], [38] som ikke ble funnet i andre studier [27], [31]. For å løse de motstridende resultatene, har vi også gjennomført en meta-analyse som viste at hyppigheten av RASSF1A metylering ikke korrelerer med pTNM eller svulst grad av blærekreftpasienter. Disse resultatene antydet at inaktivering av RASSF1A kan være et tidlig hendelse i blæren kreftutvikling.
epigenetiske forandringer er et kjennetegn på kreft hos mennesker. Spesielt er DNA-metylering en felles mekanisme for inaktivering av tumor-suppressor og andre kreft gener i tumorceller [33]. De avvikende metylering mønstrene har blitt brukt som mål for påvisning av tumorceller i kliniske prøver slik som vevsbiopsier eller kroppsvæsker [34]. RAS forening domene familie protein 1A (RASSF1A) er en antatt tumor suppressor genet ligger på 3p21, har vært ansett som spiller viktige roller i regulering av ulike typer humane tumorer [5], [6]. Det er godt dokumentert at Ras-proteiner binder et mangfoldig utvalg av effektor molekyler og formidle tumor undertrykkende effekter som terminal differensiering og apoptose samt onkogene effekter [35], [36]. Videre aktivering av Ras-signalveien er en viktig hendelse i ferd med kreftutvikling. Mutasjoner i Ras proto-onkogen forekommer vanligvis i kreft, som fører til hyperaktive, avvikende vekst signalering, og ukontrollert celledeling. Det ble foreslått at RASSF1 kan mediere Ras-aktiverte vekstinhibering gjennom sin proapoptotiske funksjon og RASSF1A inaktivering kan være en tumorigen mekanisme som er forskjellig fra den onkogene aktivering av Ras-signalisering i tumorer [37]. Tidligere studier har også vist at arsen forurensning er forbundet med DAPK og RASSF1A metylering i blærekreft, [39], [40]. Det kan også være en av faktorene som bidrar til dette distinkt metylering epigenotype.
Etter alt dette meta-analyse fortsatt eksisterer noen begrensninger. Først kontrollene inkludert i analysen var ikke ensartet. De fleste av kontrollene var friske befolkningen mens noen av dem var pasienter. På denne måte, noen av kontrollene, spesielt de som har benign sykdom bør ha forskjellige risikoer som lider av blærekreft. For det andre var det bare to studier av påvisning i vev i subgruppeanalyse. Utvalgsstørrelsen var for liten til å ha betydelig makt til å utforske den virkelige fotballkrets. Tredje, var det bare seks litteratur innmeldt i meta-analyse av sammenhengen mellom metylering og pTNM /klasse, og mellom-studien heterogenitet ble observert. Derfor ble de sammenslåtte ORS beregnet ved tilfeldig modell. Fjerde, detaljert informasjon (for eksempel alder, kjønn og livsstil) kunne ikke spores slik at våre ujusterte estimatene bør bekreftes av videre studier.
Konklusjon
Vår meta-analyse foreslo at påvisning av RASSF1A metylering i annullert urin er en potensiell ikke-invasiv diagnostisk verktøy i blærekreft. Det er nødvendig å gjennomføre store prøven størrelse studier av sammenhengen mellom RASSF1A metylering og blærekreft risiko, til slutt fører til våre bedre forståelse.
