Abstract
Bakgrunn
microRNAs (mirnas) er små, ikke-kodende RNA (ribonucleic syrer) som regulerer oversettelse. Flere mirnas har vist seg å endres i hele kreftvevet sammenlignet med normalt vev når kvantifisert ved microarray. Basert på tidligere slike bevis av differensial uttrykk, valgte vi å studere den funksjonelle betydningen av miRNAs
MIR-30a Hotell og
-191
endringer i menneskers lungekreft.
Metodikk /hovedfunnene
den funksjonelle betydningen av miRNAs
MIR-30a Hotell og
-191
ble studert ved å skape stabile transfektanter i lunge adenokarsinom cellelinje A549 og udødelig bronkial epitelceller linjen BEAS-2B med beskjeden overekspresjon av
MIR-30a
eller
-191
ved hjelp av en lentiviral system. Sammenlignet med tilsvarende kontroller, begge cellelinjene overekspresjon
MIR-30a
eller
-191
ikke viser noen signifikante endringer i cellesyklus distribusjon, celleproliferasjon, tilhenger koloni formasjon, myk agar koloni dannelse, xenograft formasjon i et subkutant SCID-musemodell, og medikamentsensitivitet til doxorubicin og cisplatin. Det er en beskjeden økning i celle migrasjon i cellelinjer overekspresjon
MIR-30a
forhold til sine kontroller.
Konklusjon /Betydning
Overuttrykte
MIR-30a
eller
-191
ikke fører til en endring i cellesyklus, proliferasjon, xenograft formasjon, og kjemosensitivitet av A549 og BEAS-2B cellelinjer. Ved hjelp av microarray data fra hele svulster til å velge bestemte mirnas for funksjonell studien kan være en suboptimal strategi
Citation. Patnaik SK, Kannisto E, Yendamuri S (2010) Overuttrykte mikroRNA
MIR-30a
eller
MIR-191
i A549 Lung Cancer eller BEAS-2B normal lunge cellelinjer endrer ikke Phenotype. PLoS ONE 5 (2): e9219. doi: 10,1371 /journal.pone.0009219
Redaktør: Mikhail V. Blagosklonny, Roswell Park Cancer Institute, USA
mottatt: 11. desember 2009: Godkjent: 24 januar 2010; Publisert: 15 februar 2010
Copyright: © 2010 Patnaik et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet støttes av forskningsmidler fra Thoracic Surgery Foundation for forskning og utdanning og Kreft og leukemi Gruppe B; SY er støttet av et fellesskap fra Buswell Foundation. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
betydningen av ikke-kodende RNA i reguleringen av cellulære prosesser har kommet for å bli stadig mer verdsatt [1]. De mest studerte ikke-kodende RNA er microRNAs (mirnas), 18-25 nt lange tynn RNA som epigenetiske regulere oversettelse ved å binde seg til en komplementær «seed» sekvens som er felles for deres «target» mRNA [2]. Ettersom dette komplementaritet ikke trenger å være perfekt, kan en enkelt miRNA regulerer uttrykket av flere hundre gener samtidig [3]. Eksplosjonen av microarray teknologi har ført til sin søknad i miRNA genomikk. Derfor, før funksjonen av en betydelig andel av mirnas var kjent, miRNA profilering av flere normale og unormale humane vev er utført i [4]. Den distinkte forskjellen mellom data innhentet mellom miRNA profilering og mRNA profilering er i størrelsesorden differensial uttrykk sett i sammenligningsgruppene. Mens flere fold endringer blir ofte sett i mRNA uttrykk ved hjelp av disse teknologiene, fold endringer med miRNA eksperimenter er mer beskjedne og er vanligvis i 1- til 2-fold range. Derfor eksperimenter for å studere biologiske relevansen av disse beskjedne fold endringer er viktig å vurdere betydningen av disse endringene. Basert på tidligere publiserte miRNA microarray data som viser forskjeller i uttrykk i kreft hos mennesker sammenlignet med tilsvarende normalt vev, ble to mirnas valgt i denne studien for slike biologiske eksperimenter. Disse to mirnas ble valgt på grunn av konsekvente endringer i deres uttrykk mellom normal og kreftvev av ulike organer, en bio-informatic analyse av deres spådd mål som foreslo viktige roller i celleproliferasjon og migrasjon og litt publiserte arbeider på sine funksjonelle roller i lungekreft .
MiR-30a
ligger på menneskelig kromosom 6q.13 og er generert fra en intronic transkripsjonsenhet som produserer tre mirnas:
MIR-30a
,
30C Hotell og
-30e product: [5]. To modne former av genet eksisterer –
MIR-30a-3p Hotell og
MIR-30a-5p
. Flere studier har påvist endringer i
MIR-30a
uttrykk i menneskelig kreft. Calin et al. vist en nedregulering av
MIR-30a
i kroniske pasienter lymfatisk leukemi (KLL) [6]. Tilsvarende
MIR-30a
er nedregulert i lungekreft [7], tykktarmskreft [8], bukspyttkjertelkreft [9], metastatisk leverkreft (sammenlignet med primær) [10] og i akutt myelogen leukemi (AML) pasienter med klokken (11q23) trans (sammenlignet med andre AML-pasienter) [11].
MiR-30a
er viktig for utviklingen av den prefrontale cortex via reguleringen av hjerne-avledet neurotrofisk faktor (BDNF) [12] og i virveldyr hepatobiliær utvikling [13]. Andre eksperimentelt bekreftet målene for
MIR-30a
er adenylatkinasen (AK1) og GW182 protein (Tnrc6a), en komponent av RNA-interferens stanse kompleks [13].
MiR -191
ligger på menneskelig kromosom 3p21.31 og er generert fra en intronic transkripsjonsenhet som kan produsere to mirnas:
MIR-191 Hotell og
-425 product: [5]. Bare en enkelt moden form for
MIR-191
er kjent for å eksistere.
MiR-191
uttrykk er oppregulert i bukspyttkjertelen [14], tykktarm, lunge og prostata [7] kreft. Det er også oppregulert i AML pasienter med unormale Karyotyper [11], og nedregulert i pasienter med KLL [6].
MiR-191
uttrykk er også endret i lungene utsatt for sigarettrøyk [15]. Ingen mRNA mål for
MIR-191
har blitt eksperimentelt verifisert.
I denne studien, vurderer vi de fenotypiske endringer sett av konstituerende over-uttrykk for
MIR-30a Hotell og
-191
, på en lunge adenokarsinom-cellelinje (A549) [16] og en immortalisert bronkial epitelcellelinje (BEAS-2B) [17]. Den A549-cellelinjen ble valgt på grunn av at det foreligger en stor mengde av eksperimentelle data med hensyn til bruk i forskjellige analyser. Den BEAS-2B-cellelinjen ble valgt fordi det er det udødeliggjort cellelinje som ligger nærmest normal bronkialepitelet. Som virkningene av overekspresjon av en mikroRNA er kontekstspesifikk, sammenlignet vi endringer i fenotype av maligne og ikke-maligne celler.
Materialer og metoder
Etikk erklæringen
alle in vivo studier ble godkjent av Institutional Animal Care og bruk komité i Roswell Park Cancer Institute.
Cell Culture
A549 menneskelig bronchioloalveolar lungekarsinom og BEAS-2B normale bronkial epiteliale cellelinjer var innhentet fra ATCC® (Manassas, Virginia). Celler ble dyrket, henholdsvis, i Dulbeccos modifiserte Eagle-medium (DMEM +; Invitrogen®, Carlsbad, CA) med 10% føtalt bovint serum (PAA Laboratories®, Østerrike), og LHC-9 medium (Invitrogen®) ved 37 ° C i 5% CO
2. Stabilt-transfekterte celler ble dyrket i nærvær av 2 ug /ml puromycin (Roche®, Indianapolis, IN).
Generering av stabilt transfekterte cellelinjer
enkelttrådet DNA oligonukleotider med humant
pre-MIR-30a
eller
-191 plakater (miRBase tiltredelse IDer MI0000088 og MI0000465, henholdsvis) sekvenser og med restriksjonsenzym språk overheng ble hentet fra Integrated DNA Technologies® (Coralville, IA). Komplementære sekvenser ble glødet og den resulterende dobbelt-trådet DNA ble ligert til XhoI /Not I-spaltet pLemiR ™ vektor (Åpne Biosystems®, Huntsville, AL). A549 cellene ble så infisert med plasmider ved hjelp av Trans-Lentiviral ™ GIPZ pakkesystem (Åpne Biosystems, Huntsville, AL) i henhold til produsentens protokoll. Kort sagt ble TLA-HEK293TTM-celler transfektert ved hjelp av arrest-I ™ med 37,5 ug plasmid-DNA i serumfritt medium i 4 timer. Media ble deretter byttet ut med seruminneholdende medium i 36 timer. Media ble oppsamlet, sentrifugert for å fjerne cellerester og anvendt for å transfektere A549 og BEAS-2B-celler. Førtiåtte timer etter tilsetning av virus, ble transfekterte celler utvalgt for ved tilsetning av 2 ug /ml puromycin til vekstmediet.
Real Time RT-PCR (qPCR) for Kvantifisering av små RNA
Total RNA (20 ng), isolert fra celler ved hjelp av PureLink ™ Micro-til-Midi total RNA isolering sett (Invitrogen) i følge produsentens protokoll, ble revers transkribert ved hjelp av TaqMan ™ revers transkripsjon kit (Applied Biosystems®, Foster City, CA) og RNA-spesifikke primere er forsynt med TaqMan ™ mikroRNA assays (Applied Biosystems®) i 15 ul, med annealing ved 16 ° C i 30 minutter, fulgt av forlengelse ved 42 ° C i 30 minutter. 1,33 mL av RT reaksjonen ble deretter brukt med 1 mL spesifikke primere for enten
RNU6B
,
MIR-30a
, eller
MIR-191 plakater (Applied Biosystems®, Foster city, CA) i tre eksemplarer brønner for 44-syklus PCR på en 7900HT termo (Applied Biosystems®). Denatureringstrinnet ved 95 ° C ble utført i 15 s, og gløde og forlengelsestrinn ved 60 ° C var i 1 min. SDS-programvare (Applied Biosystems®, Foster City, CA) ble anvendt for å bestemme syklus-terskel (Ct) verdier av fluorescensen målt i løpet av PCR. Prism 5.0b programvare (GraphPad®, La Jolla, CA) ble brukt for statistisk analyse og grafer
Pathway Enrichment Analyse
offentlig tilgjengelig miRgator programvare (http: //genome.ewha.. ac.kr/miRGator/miRGator.html) ble brukt til å utføre pathway anrikning analyse. De spesifikke mirnas valgte var
MIR-191 Anmeldelser og –
30a-5p
. Målet utvalg algoritmen valgt var Miranda [3]
celleproliferasjonsanalyse
celleproliferasjon ble utført ved hjelp av Cell Titer 96® kit. (Promega, Madison, WI) som bruker konvertering av MTS (3- (4,5-dimetyltiazol-2-yl) -5- (3-carboxymethoxyphenyl) -2- (4-sulfofenyl) -2H-tetrazolium, indre salt) til formazan for å måle cellenes levedyktighet. I korthet ble cellene platet ut på 96-brønners plater ved 4000 celler i 100 ul per brønn. Celler ble høstet i fire eksemplarer ved forskjellige tidspunkter etter 150 timer. Til de høstede cellene, ble 20 ul av assay-reagens tilsatt, og levedyktige celler ble målt ved absorbans ved 450 nm 1 time senere på en Multiskan Plus (MTX Lab Systems, Vienna, VA) plateleser. Absorbans verdier ble normalisert til mediekontroll.
Heftkolonidannelse
Celler i kultur ble trypsinert og belagt i to eksemplarer i seks-brønns plater ved 200 og celler per brønn for A549 og 500 celler per brønn for BEAS-2B cellelinje derivater hhv. Celler ble tillatt å vokse ved 37 ° C, 5% CO2 med mediet endres hver 3-4 dager inntil kolonier var synlige ved øyet. Media ble aspirert og cellene ble farget med 0,2% metylenblått i 40% metanol i 30 minutter. Cellene ble vasket og platene ble skannet med en Epson Perfection V700 Photo scanner som en transparent. Kvantifisering av kolonier ble gjort ved hjelp ImageJ programvare (Research Services Branch, National Institute of Mental Health, Bethesda).
Soft Agar Colony Forming analyse
Base agar /mediemiksen ble lagt til 6-brønn plater (sluttkonsentrasjon på 0,7% agar, 1x + DMEM, 10% FBS, 2 ug /ml puromycin) for å belegge platen og tillates å polymerisere. Cellene suspensjoner ble foretatt til 100 celler /ml i media /agar-blanding (sluttkonsentrasjon på 0,35% agar, 1x + DMEM, 10% FBS, 2 ug /ml puromycin). 1,5 ml av cellesuspensjonen ble sådd ut på toppen av basis agar i hver brønn og tillates å polymerisere. 2 ml komplett medie ble lagt på toppen av agar gang polymerisert. Platene ble satt på 37 ° C, 5% CO2, og overlegg mediet ble skiftet hver 3-4 dag. Kulturer ble dyrket inntil noen få kolonier var synlige ved øyet, 2 mg /ml Thiazolyl blå tetrazoliumbromid i PBS ble tilsatt til cellene og ble returnert til inkubatoren inntil kolonier var farget. Når kolonier ble farget blå, ble flekken fjernet fra brønnene og bildene ble tatt med Cannon Powershot A590IS kamera.
In Vitro Scratch analysen
For å beregne forskjeller i cellevandring, en in-vitro scratch-analysen ble utført. Korset ble trukket på undersiden av 6-brønns plater til orientering for avbildning. Celler ble sådd ut i triplikate brønner med høy tetthet for å nå 100% konfluens 24 timer senere. En ripe ble deretter gjort direkte ved siden av den loddrette linje trukket på platen ved hjelp av konsekvente moderat og trykk ved hjelp av en 10 mL spiss og platen lokket som en rett kant. Riper ble fotografert umiddelbart på en Axio Observer mikroskop (Zeiss, Maple Grove, MN) på 5x forstørrelse og orientering til trådkorset bemerket. Cellene ble deretter returnert til 37 ° C, 5% CO2 og avbildes ved forskjellige tidspunkter før alle riper ble lukket.
Xenotransplantat Formation analysen
Alle in vivo studier ble godkjent av Institutional Animal Care og bruk komité Roswell Park Cancer Institute. Kontroll og over-uttrykker A549 cellelinjer (6,0 x 105 celler) ble injisert subkutant mellom skulderbladene på 4-5 uker gamle SCID-mus (5 mus i hver gruppe). Svulster ble overvåket 2-3 ganger per uke ved kalibermålinger før den største svulsten var 2 cm i lengste retning, noe som medførte at alle musene ble ofret. Svulster ble dissekert og veid.
Cell Cycle Analysis
Celler dyrket til 70% -90% samløpet ble løsnet ved trypsinering, faste i 70% etanol ved 4 ° C i 1-2 dager, vasket med PBS, og inkubert ved en tetthet på 1-2 x 10
6 celler /ml med 0,3 uM 4,6-diamidino-2-fenylindol-dihydroklorid (DAPI, MP Biochemicals®, Solon, OH, USA) i PBS ved værelses temperaturen i mørket i 100 min. Etter vasking en gang med PBS, ble DAPI fluorescens fra celler analysert ved flow-cytometri ved anvendelse av en LSR II (BD Biosciences®, San Jose, CA) instrument utstyrt med en fiolett laserdiode 408 nm og en emisjons 450/50 nm filter.
Drug Sensitivity Assay
Når cellene ble dyrket til 50% -60% konfluens i 96-brønners plater (5 brønner per celle-linje), ble mediet erstattet med det inneholdende 1 pg /ml doxorubicin hydrochloride (Enzo Livet Sciences®, Farmingdale, New York) eller cisplatin (Calbiochem®, San Diego, California). Etter 1,5-2 dager med kultur, ble levedyktighet av celler målt som beskrevet for celleproliferasjon analysen og sammenlignet med de som ikke ble utsatt for narkotika.
Resultater
Opprettelse av stabile cellelinjer med overuttrykk av MIR-30a og -191
stabile cellelinjer overekspresjon
MIR-30a Hotell og
-191
ble generert ved hjelp av en lentiviral system som beskrevet ovenfor.
MiR-30a
ble overexpressed ~ 2 ganger og ~3 brett i både A549 (A-30a) og BEAS-2B (B-30a) henholdsvis sammenlignet med kontroller (A0 og B0 henholdsvis). Sammenlignet med kontroller,
MIR-191
ble overexpressed ~ 2 ganger og -7 ganger i A549 (A-191) og BEAS-2B (B-191) henholdsvis (figur 1). Overekspresjon ble også bekreftet av visualisering av RFP inneholder celler ved mikroskopi.
Expression er normalisert til å kontrollere cellelinjer (A0 eller B0).
Pathway Enrichment Analyse
Target prediksjon av Miranda algoritmen identifisert 731 mål for
MIR-30a-5p Kjøpe og 570 mål for
MIR-191
. De ti beste banene identifisert av veien berikelse analyse inkludert trasé som påvirker cellesyklus, celleproliferasjon, resistens og cellemotilitet, blant andre (tabell 1).
Over-Uttrykk for
speil 30a
eller
-191
endrer ikke Måler av spredning både in vitro og in vivo i A-549 og BEAS-2B cellelinjer
Pathway berikelse analyse antydet at
MIR -30a Hotell og
-191
påvirket cellesyklus og celledeling. For å undersøke effekten av overekspresjon av
MIR-30a Hotell og
-191
på A549 og BEAS-2B, ble vekstkurver plottet basert på målinger av cellenes levedyktighet på ulike tidspunkter i løpet av en 150- timers periode. Ingen forskjell i vekstkurver ble sett i A-30a og A-191 sammenlignet med A0 og i B-30a og B-191 sammenlignet med B0 (figur 2A, 2B). Celleproliferasjon i forskjellige cellelinjer ble også sammenlignet ved bruk av heftkolonidannelse. Ingen forskjell ble sett i enten antall eller størrelse på heft kolonier i cellelinjer over-uttrykker
MIR-30a
eller
-191
sammenlignet med tilsvarende kontrollcellelinje (figur 2C).
A, B. Kurvene celleproliferasjon for cellelinjer A0, A-30a og A-191 (A) og B0, B-30a og b-191 (B), som viser ingen forandring i celleformering. C. metylenblått farget cellekulturplater som viser ingen forskjell i vedheftende kolonidannelse i A-30a og A-191 sammenlignet med A0 og i B-30a og B-191 sammenlignet med B0. D. Xenotransplantat formasjonen i SCID-mus med A549 endres ikke ved over uttrykk for
MIR-30a
eller
-191
.
Anchorage uavhengighet er en av kjennetegnene ved transformasjon. Vi har søkt for å bestemme effekten av overekspresjon av
MIR-30a
eller
-191
på forankringsuavhengig vekst av A549 og BEAS-2B-celler ved å bruke myk agar-kolonianalyse som beskrevet ovenfor. Alle linjer dannet svært få kolonier som var synlig ved mikroskopi med bare 2-3 kolonier synlige ved blotte øye. Ingen forskjeller ble sett etter farging eller ved mikroskopi (data ikke vist).
Xenotransplantat dannelsen er antatt å representere en biologisk relevant mål på tumor aggressivitet. Vi vurderte effekten av overekspresjon av
MIR-30a
eller
-191
på xenograft formasjonen i SCID mus ved A549 celler. Når sammenlignet med kontrollcellelinje (A0), har A-30a og A-191 ikke danne større xenotransplantater (figur 2D). Økningen av tumorvolum over tid er også ikke forskjellig i disse cellelinjer sammenlignet med kontroll (data ikke vist). Som BEAS-2B cellelinje er ikke-tumorigen, kan vi ikke vurdere xenograft formasjon ved hjelp B0, B-30a eller B-191.
Effekten av overuttrykk av
MIR-30a
eller
-191
på cellemigrasjon og Cell Cycle Distribution A-549 og BEAS-2B cellelinjer
Økt cellemigrasjon er en viktig mekanisme som er antatt å øke metastatisk potensial av kreftceller . Dette kan være uavhengig av celleproliferasjon priser. Derfor studerte vi effekten av
MIR-30a
eller
-191
på cellemigrering av A549 og BEAS-2B cellelinjer ved hjelp av skrape analyse som beskrevet ovenfor. Det er en beskjeden økning i migrasjon av A-30A og B-30a sammenlignet med henholdsvis A0 og B0. Det var ingen signifikant forskjell i migrasjon avstanden mellom cellelinjer overekspresjon
MIR-191
sammenlignet med tilsvarende kontrollcellelinjer (figur 3A).
A. Celle migrering av A-B-30a og 30a er økt sammenlignet med kontroller; ingen effekt av overekspresjon av
MIR-191
er sett. B. Cellesyklus analyse av stabile transfektanter som viser ingen forskjell mellom celler over-uttrykker
MIR-30a Hotell og
-191
sammenlignet med kontroller.
En undersøkelse av de antatte målene for
MIR-30a Hotell og
-191 Hotell og de cellulære prosessene påvirket av dem viser en statistisk signifikant berikelse av veier som involverer cellesyklusen. Derfor studerte vi effekten av overekspresjon av
MIR-30a
eller
-191
på cellesyklus distribusjon. Flow cytometri etter farging med DAPI ble brukt til å utføre cellesyklusanalyse av alle cellelinjer. Sammenlignet med kontrollene, cellelinjer over-uttrykker
MIR-30a
eller
-191
ikke viser vesentlige endringer i cellesyklus distribusjon (figur 3B).
Over uttrykking av
MIR-30a
eller
-191
endrer ikke kjemosensitivitet til Doxorubicin eller cisplatin
Doksorubicin og cisplatin, kjemoterapi. A549 er moderat følsom overfor cisplatin og doksorubicin (https://dtp.nci.nih.gov), slik at vurderingen av både økt og redusert følsomhet for disse stoffene. Overekspresjon av
MIR-30a
eller
-191
endrer ikke kjemosensitivitet av A549 og BEAS-2B til enten narkotika (figur 4).
sensitiviteten til A549-celler ( A, B) og BEAS-2B-celler (C, D) til doksorubicin og cisplatin. Grått indikerer kontrollceller.
Diskusjoner
Mirna endringer blir ofte sett i kreftvev i forhold til sine normale kolleger. Størrelsen av disse endringene er beskjedne og deres funksjonelle betydning i ukjent. En av vanskelighetene i studiet av miRNAs er at en miRNA har flere hundre spådd mål og disse bio-informatic spådommer er ikke veldig nøyaktig. Dessuten rolle mirnas i en celle avhenger av den genetiske konstitusjon og transkriptomet av en celle til enhver tid, og denne kompleksiteten fanges ikke bare ved sin tvunget over-ekspresjon. Men fenotypiske endringer sekundært til tvunget over-uttrykk kan gi ledetråder til å forstå deres bidrag til ondartet fenotype. I denne studien, genererte vi stabile transfektanter som konstitutivt over-express
MIR-30a
eller
-191 Hotell og viser ikke vesentlige endringer i fenotype i de ulike analysene som ble utført. En rekke mulige forklaringer kan forklare det manglende forandring av fenotype. For det første er det mulig at nivået av ekspresjon av mirnas oppnådd er ikke nok til å skape en forskjell. Selv om brette endringer sett av microarray eksperimenter er vanligvis beskjeden, kan slike forsøk undervurdere faktiske endringer i maligne epitelceller på grunn av fortynning av forandringer i maligne epitelceller fra stromale celler som utgjør en betydelig andel av patologiske prøver. Også omfanget av endringer sett av mikromatriser er ofte mindre enn de tilsvarende endringer sett av RT-PCR. Derfor kan den faktiske endringer i ondartede celler være mer enn det som ble oppnådd i vår modell system. Motsatt er det mulig at endringer sett i miRNA mikromatriser spuriously overvurdere endringer. For eksempel i en studie av Peltier et al [18] som vurderes nøye flere kandidat mirnas for stabilitet i uttrykket over fem typer kreft og normalt vev ved RT-PCR,
MIR-191
var så stabilt uttrykt at det ble foreslått som et gen som skal brukes for normalisering. Dette argumenterer mot en rolle for
MIR-191
i kreftutvikling. Derfor velger mirnas basert på microarray data er ikke nødvendigvis en god strategi. Tredje, alle mirnas kan ikke være i stand til å føre til fenotypiske endringer på egenhånd; effekten kan være sammenheng spesifikke og kan trenge å bli kombinert med endringer i uttrykk av enten andre mirnas eller mRNA å endre fenotype.
I sammendraget, konkluderer vi med at over-uttrykk for
MIR-30a
eller
-191
ikke fører til en endring i cellesyklus, proliferasjon, xenograft dannelse og kjemosensitivitet av A549 og BEAS-2B cellelinjer. Ved hjelp av microarray data fra hele svulster til å velge bestemte mirnas for funksjonell studien kan være en sub-optimal strategi. Det er viktig å bekrefte den funksjonelle betydningen av endringer sett i miRNA uttrykket data i bestemte krefttyper for å definere de biologiske rollene til spesifikke miRNAs.
