Abstract
Hypoksi har vært assosiert med malign progresjon, metastasering og motstand mot terapi. Derfor studerte vi uttrykk for hypoksi-regulerte gener i 100 prostatakreft (CAP) bulk vev og 71 tilstøtende godartet vev. Vi fant 24 transkripsjoner betydelig overuttrykt (p≤0.02). Viktigere, høyere transkripsjonsnivåer av platen store (Drosophila) homolog-assosiert protein 5 (DLGAP5) /plater stor homolog 7 (DLG7) /hepatoma oppregulert protein (HURP), hyaluronan-mediert motilitet reseptor (HMMR) og cyclin B1 (CCNB1 ) var assosiert med høyere Gleason score og mer avansert systemisk progresjon. Siden produktene av HMMR og CCNB1 har nylig blitt identifisert som molekylære markører for Cap progresjon, postulerte vi at DLG7 har prognostisk verdi også. For å teste denne hypotesen, vi målte transkripsjonsnivåer for DLG7 i en 150-pair case-control kohort. Sakene (progresjon til systemisk sykdom innen seks år etter operasjonen) og kontroller (ingen progresjon innen åtte år) ble matchet for kliniske og patologiske prognostiske variabler, inkludert grad, scene, og preoperative serumnivåer av PSA. Den samlede prognostisk evne DLG7, som testet i mottakeren opererer karakteristisk analyse var på 0,74 (95% CI, 0,68 til 0,8). Totalt sett, våre data indikerer at uttrykk for DLG7, en hypoksi-kontrollerte genet, har prognostisk potensial i høy-risiko cap; Dette viser også at variasjon av oksygen spenning kan utgjøre et verktøy for identifisering av nye biomarkører for Cap
Citation. Gomez CR, Kosari F, Munz J-M, Schreiber CA, Knutson GJ, Ida CM, et al. (2013) prognostisk verdi av plater Large homolog 7 transkripsjonsnivåer i prostatakreft. PLoS ONE 8 (12): e82833. doi: 10,1371 /journal.pone.0082833
Redaktør: Sharon A. Glynn, National University of Ireland Galway, Irland
mottatt: Mai 20, 2013; Godkjent: 29 oktober 2013; Publisert: 09.12.2013
Copyright: © 2013 Gomez et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av DOD PC094680 (CRG), PCF Kreativitet Award (CRG), Minnesota Partnerskap for bioteknologi og medisinsk Genomics (GV), og Mayo Clinic prostata SPORE 5P50CA091956 (FK). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
rollen av oksygen spenning (
Potentias oxygenii
,
p
O
2) i tumorbiologi har vært verdsatt i lang tid; en grunn for det har vært den relative oksygen uavhengighet av svulster ( «the Warburg effekten», ref. [1]) som førte til antagelsen av tumor ufølsomhet overfor endringer i oksygen spenning. Mer nylig er tumor-assosiert hypoksi blitt assosiert med malign progresjon, metastase, resistens overfor terapi, og dårlig klinisk resultat [2,3]. I likhet med andre solide tumorer,
p
O
2 i prostatakreft (CAP) svinger, noe som gir opphav til akutt og kronisk hypoksi [4]. Noen hevder at lav
p
O
2 er en uavhengig indikator på dårlig klinisk utfall for Cap pasienter [5], men
p
O
2 verdier målt i hatten nidus ikke alltid korrelerer med klinisk utfall [4] antyder behovet for mer relevante hypoksi-forbundet biomarkører for aggressiv Cap.
Foreløpig brukes markører som forutsier utfallet hos menn med cap inkluderer Gleason score, TNM stadium, kirurgisk margin status, og preoperative serumnivåer av prostataspesifikt antigen (PSA) [6-8]. Mens stratifisering av disse variablene ofte effektivt spår sykdomsforløp, kan svulster med lignende biokjemiske, histopatologiske og kliniske tilstander fortsatt oppfører seg svært forskjellig. Nylig, transkriptom studier av Cap identifisert flere gener assosiert med sykdom utfall. Blant dem, ekspresjon av hypoksi-regulert molekyler [ie, vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF), hypoksi-induserbar faktor (HIF) -1, osteopontin, lysyl- oksidase (LOX) og glukosetransportør-1 (GLUT-1)] korrelerte med patologiske status og pasientens funksjoner (anmeldt i ref [4].). Disse studiene viser muligheten for å identifisere biomarkører knytte Cap, hypoksi og prognose og etablering av bidraget fra hypoksi-forbundet gener til Cap progresjon. Identifisering av hypoksi-relaterte biomarkører kan bidra til å identifisere pasienter som kan ha nytte av hypoksi-målrettede terapier [4]. Her rapporterer vi studiet av transkripsjon av gener, tidligere finnes under hypoksi kontroll, i Cap pasienter. Våre data viser at hypoksi-sensitive gener har en prognostisk verdi i høyrisiko cap og at variasjonen av oksygen spenning kan utgjøre et verktøy for videre identifisering av biomarkører for Cap.
Materialer og metoder
prostatakreft transkriptomet
Alle studiene i denne rapporten ble godkjent av Mayo Clinic Institutional Review Board. Generelt, vi fulgt våre tidligere beskrevet metode [9]. I korthet anvendes vi frosset vev for å studere transkriptomet i kreftceller isolert ved laser-capture mikrodisseksjon (LCM) eller uten isolering ( «bulk tissue»). Prøvene ble oppnådd fra ikke-neoplastisk prostatavev, primær prostatakreft og prostatacancermetastaser. Detaljer av frossen prøvetaking, bevaring, seksjonering, hematoxylin og eosin farging, patologisk vurdering, LCM, analyse av RNA integritet, og lineær forsterkning har vært publisert tidligere [10]. Vi har innhentet og analysert transkriptom av 102 LCM-isolert prostatakreft celleprøver; 19 prøver av ikke-neoplastisk prostata epitel inntil svulst; 10 prøver av benign prostatahyperplasi (BPH); og fem prøver av høyverdig prostata intraepitelial neoplasi (HGPIN). Tumorprøver inkludert Gleason mønster (GP) 3 celler fra 28 Gleason score (GS) (3 + 3) pasienter og tre GS (3 + 4) pasienter; GP4 celler fra 10 GS (4 + 4) pasienter, 4 GS (4 + 3) pasienter, og 6 GS (4 + 5) pasienter; og GP5 celler fra 5 GS (5 + 5) pasienter og 5 GS (5 + 4) pasienter. Tumorprøver omfattet også sju Cap metastaser fra lymfeknuter. Expression profiler av bulk prøver (n = 37) ble hentet fra høyrisikopasienter med GS7 og høyere; Disse tumorene ble uavhengig fra de som utsettes for celleisolasjon ved LCM. Prøvene tatt svulster fra 18 pasienter der sykdommen utviklet systemisk og som døde i mindre enn seks år etter operasjonen (aggressiv sykdom) og 19 pasienter som overlevde mer enn åtte år etter operasjonen (ikke-aggressiv sykdom). Sykdom utfallet ble ikke åpenbart for forskere på dette studiet før gjennomføring av eksperimenter og avslutning av alle analyser.
Probe satt uttrykk verdier ble innhentet fra rå microarray data (.cel filer) ved hjelp av gcrma pakken i R Project for Statistiske Computing (https://www.r-project.org/). For ytterligere analyse valgte vi sondene overexpressed todelt eller mer i Cap over gjennomsnittet uttrykk nivåer i ikke-neoplastisk prostata vev og BPH vev, både i bulk og i LCM-isolerte celler.
Case-kontroll matching av menn med høy risiko prostatakreft
Ett hundre og femti menn som Cap systemisk kommet (SP, dokumenteres med biopsi eller radiografiske bevis for metastaser) eller som døde med metastatisk cap innen seks år etter prostatektomi ble identifisert i Mayo Clinic Radical prostatektomi database for årene 1994 til 2004. Vevsprøver for disse pasientene var arkivert; bevis på biomarkører og validerings prosjekter for denne studiegruppen har tidligere blitt offentliggjort av oss [9,11,12]. En datastyrt system [7] matchet disse pasientene med 150 kontroll menn med sykdom som ikke fremgang og som ikke døde for minst åtte års oppfølging; samsvarende kriterier inkludert Gleason score, TNM stadium, margin status, preoperativ PSA, og GPSM score (tabell 1). Multivariat analyse som inkluderte DLG7 og noen av de kliniske parametre ikke legge til nøyaktigheten av modellen i forhold til en modell som inkluderte DLG7 alene. Prøvene ble blindet for klinisk status og gjennomgått av J.C.C., en bord-sertifisert patolog. Av det totale av 300 prøver, ble 141 SP prøver og 117 kontrollprøver utvalgt ved patologi kriterier og ved det faktum at de har gitt tilstrekkelig vev av høyeste Gleason mønster for eksperimentell analyse. For SP pasienter median oppfølging fra radikal prostatektomi til progresjon eller siste oppfølging var 2,4 år; for kontrollpasienter median oppfølgingstid var 13,2 år.
styrer
Cases
p-verdi
†
Patologisk Gleason score (GS) 0.77GS542GS654GS76182GS82317GS93738GS1012TNM stage0.46T2aN0129T2bN02721T3aN02033T3b4N03454TxN + 2928Margin status0.540455518690Preoperative serum PSA0.67mean (utvalg) ng /ml19 0,0 (0,9 – 119 CAD) 20,1 (1,3 til 143) GPSM0.56mean (område) 11,5 (6,0 til 16,0) 11,7 (6,0 til 16,0). Tabell 1. Kliniske parameterverdier i saker og kontroller
† p -verdiene refererer til sammenligning av saker og kontroller. CSV Last ned CSV
RNA ekstraksjon og real-time PCR for case-control studie
Hematoxylin og eosin-farget tumorsnitt hentet fra formalinfiksert parafin-embedded blokker ble blindet med hensyn til om de tilhørte SP prøver eller kontrollprøver; delene ble gjennomgått av patologer C.M.I. og J.C.C. som er tilordnet de primære og sekundære, men ikke tertiære Gleason mønstre. Blokken er tilordnet den høyeste poengsum for den primære eller sekundære Gleason mønster og inneholdende den mest tumorvev at mønsteret ble valgt ut for videre analyse. Hver blokk ble delt inn i 10-mikrometer tykke seksjoner. Tumorvev ble deparaffinized i xylen og skrapt fra skyve under RNase-frie betingelser i en 1,5 ml rør inneholdende fordøyelse buffer (RecoverAll kit, Ambion, Carlsbad, CA). Detaljer om RNA ekstraksjon fra parafinblokker og kvalitetskontroll har blitt publisert tidligere [9]. Totalt RNA ble isolert i henhold til den prosedyre RecoverAll og behandlet med DNase ved hjelp av Ambion Turbo DNA-settet i henhold til produsentens instruksjoner. RNA ble kvantifisert med den Quant-iT RiboGreen sett (Invitrogen, Carlsbad, CA). Kvantitativ PCR ble brukt som rapportert tidligere [11] for å vurdere transkripsjonsnivåer for skivene stor homolog 7 (DLG7) [a.k.a. plate store (Drosophila) homolog-assosiert protein 5 eller hepatoma oppregulert protein], hyaluronan-mediert motilitet reseptor (HMMR) og cyklin B1 (CCNB1). Vi omvendt transkribert 500 ng RNA i 40 ul reaksjonsvolum ved anvendelse av Superscript III First Strand Synthesis System (Invitrogen). Primere for kvantitativ PCR ble konstruert ved anvendelse av Primer Express programvare (Applied Biosciences, Carlsbad, CA) for å forsterke et 70-bp i 85-bp-fragment identisk med målsekvensen på Affymetrix microarray. Forskjeller i syklusen terskel, Δ (
Ct
), ble oppnådd ved å trekke
Ct
verdien av normalisering genet fra
Ct
verdien av testen gen av det samme revers transkripsjonsreaksjon. Den normaliserende genet, 40S ribosomalt protein S28 (RPS28), ble valgt som den tidligere mest stabilt uttrykt i alle normale og netting prøver [12]. Nivåene av DLG7 og RSP28 transkripsjoner i 22 aggressive og 32 ikke-aggressive svulster ble ikke målbart på grunn av utilstrekkelig RNA kvalitet.
Statistiske metoder
Vi analyserte data med R-pakken (https://www.r-project.org/). Utdeling av kliniske og patologiske parametre ble sammenlignet med de χ
2 og
t
tester. Mottaker som opererer karakteristisk (ROC) kurve områder ble beregnet for kliniske og patologiske parametre for alle pasienter. Standardfeil av middelverdien for områder under kurvene ble beregnet av rang korrelasjon for sensurerte data (rcorr.cens) test.
Resultater
Hypoksi-kontrollerte transkripsjoner er forbundet med sykdom scenen og prognose
Fordi CAP vises preget av en hypoksisk transkriptomet [13-15], vi hypotese at hypoksi-regulerte gener vil gi større innsikt i mekanismene for Cap progresjon. Vi testet denne hypotesen ved utfyllende data mining [16]. Vi analyserte 88 hittil kjente transkripsjoner regulert av hypoksi-induserbar faktor 1 (HIF-1) [17]; 500 hypoksi-forbundet gener identifisert i cellelinjer [17]; 23 gener av den konserverte kjernen hypoksi signatur [18]; tolv HIF-1 mål testet i Cap [13]; og 708 gener i oppfinnsomhet hypoksi signalveien [19]. Blant alle hypoksi-regulerte gener, i våre prøver vi identifisert 24 gener betydelig overuttrykt i Cap med minst todelt
både
i bulk vev og LCM-isolerte celler (
p
≤0.02; Tabell 2 ). Viktigere, transkripsjonsnivåer for DLG7, CCNB1, og HMMR var høyere i prøver som er kjennetegnet ved høyere Gleason score og hos pasienter med dårligere prognose (figur 1). Vi beskrev prognose for pasientene i denne studien tidligere [9].
Bulk vev
LCM
Symbol
Navn
CAP /N log
2 ratio
p-verdi
CAP /N log
2 ratio
p-verdi
ACACAacetyl-koenzym A karboksylase alpha1.501.20.002123CDCA3cell divisjon syklus-assosiert protein 31.701.50CEP55centrosomal protein 55kDa1.801.40CCNB1cyclin B11. 801.30CKS2cyclin-avhengige kinaser regulatorisk subenhet 21.10.0000431.20.000001DLGAP5discs stor homolog 7 (DLG7) 1.801.50SLC7A1high affinitet kationiske aminosyre transporter 11.601.20.000023HMMRhyaluronan-mediert motilitet receptor2.101.70HIG2hypoxia-induserbar protein 21.501.20.000001LOXlysyl oxidase1.10.0000441.50MMP10matrix metalloproteinase -10 1.20.0215211.40.000066MCOLN2mucolipin 2 (kation kanal protein) 1.10.0003321.40NLNneurolysin (metallopeptidase M3 familie) 1.201.20.000012PDLIM5PDZ og LIM domene 5 (Stillas protein) 1.101.20.000121PSD3pleckstrin og Sec7 domene som inneholder 31.10.0000011.20C20orf74Ral GTPase aktiverende protein subenhet alpha-21.301.20.000092FAM80Aribosomal modifisering protein rimK lignende familiemedlem A1.701.20.000013SDK1sidekick homolog 1, celle adhesjon molecule1.501.50STC2stanniocalcin-2 (utskilt) 1.20.0090531.30.000059SOX4transcription faktor SOX-41.201.20.000001TMEM200Atransmembrane protein 200A1.301.30. 000886TFF3trefoil faktor 3 (intestinal, stabil sekresjonsprotein) 1.20.0018891.20.001276UBE2Cubiquitin-konjugering enzym E2 C1.401.20UBE2E3ubiquitin-konjugering enzym E2 E3 1.801.30.000079Table 2. Hypoksi-forbundet gener betydelig overuttrykt i Cap bulk vev og prøver isolert av LCM.
Forkortelser: Cap, prostatakreft; N, normal; LCM, laser capture mikrodisseksjon CSV ned CSV
Blant de hypoksi-regulerte gener betydelig overuttrykt i Cap, cyclin B1 (CCNB1), DLGAP5 og hyaluronan-mediert motilitet reseptor (HMMR) var assosiert med Gleason score og sykdom utfallet.
Figur 2 viser transkripsjonsnivåer for CCNB1, DLGAP5, og HMMR gener på ulike sykdomsstadier. Både i svulstvev og LCM-isolerte celler, transkripsjonsnivåer høyere i Cap enn i normalt vev. Også disse transkripsjoner ble uttrykt ved betydelig høyere nivåer i celler isolert fra Cap vevet på stadier GP4 og GP5 enn på GP3 stadium, noe som tyder på en sammenheng med tumorprogresjon. Videre transkripsjoner nivåene var høyere i metastaser fra pasienter som utviklet seg til døden, noe som tyder på en sammenheng med sykdom utfall (se Methods) (figur 2).
Paneler til venstre sammenligningen transkripsjonsnivåer i Cap bulk vev (full symboler ) med nivåene målt i benign prostata vev (åpne symboler) fra menn uten cap (BP) og i godartet prostatavevet (BPC) ved siden av Cap av kombinert Gleason scorer seks (gs6). Paneler på de riktige skjermtranskripsjonsnivåer målt i ikke-neoplastiske prostata epitelceller isolert med laser capture mikrodisseksjon (LCM) i godartede vev (åpne symboler): BP, benign prostatahyperplasi (BPH) og BPC ved siden av hetten på angitt Gleason score ( gs). Full symboler i paneler på høyre betegne transkripsjonsnivåer målt i LCM-isolert cap celler: høyverdig prostata intraepitelial neoplasi (HGPIN), celler isolert fra områder med kombinert Gleason score 6 til 8 og celler isolert fra lymfeknutemetastaser (oppfylt) . CCNB1, cyclin B1; DLG7, plater stor homolog 7; HMMR, hyaluronan-mediert motilitet reseptoren.
Produktene av CCNB1 [20] og HMMR gener [16] har nylig blitt identifisert som molekylære markører for Cap progresjon. Derfor har vi hevdet den potensielle nytten av hypoksi-forbundet gener som Cap biomarkører med prognostisk verdi. For å granske denne ideen, vi korrelert de DLG7 transkripsjonsnivåer med de av DNA topoisomerase 2α (TOP2A), et gen som utskrifter er av prognostisk betydning i Cap [21], spesielt i høyrisiko form [11]. Vi fant en høy korrelasjon mellom nivåene av de to karakterutskrifter (Pearson koeffisient = 0,816). Den avslørende av denne foreningen bedt oss om å hypoteser om at DLG7 transkripsjoner uavhengig kunne forutsi sykdomsforløp hos menn med høy risiko cap.
DLG7 transkripsjoner som potensielt en uavhengig prediktor for Cap utfallet
Vi undersøkte sammenhengen av DLG7 karakterutskrift med systemisk progresjon og død ved Cap i en 150 par case-control kohort [11]. Sakene og kontrollene var tett lik i kliniske og patologiske funksjoner med unntak av DNA ploidiresultat [11]. Ved ROC analyse vi har funnet området under kurven (AUC) for DLG7 på 0,74 (95% KI, 0,68 til 0,8); for HMMR på 0,67 (95% KI, 0,60 til 0,74); og for CCNB1of 0,64 (95% KI, 0,57 til 0,71). ROC score for DLG7 demonstrere den generelle separasjon av saker og kontroller (figur 3). Dermed konkluderer vi med at DLG7 transkripsjonsnivåer forutsi sykdomsforløp hos menn med høy risiko fra Cap. I tillegg fant vi at transkripsjonsnivåer av hypoksi-kontrollerte gener CCNB1 og HMMR-tidligere identifisert som molekylære markører for Cap progresjonsfri var assosiert med Gleason score og sykdom prognose også.
Arealet under kurven var 0,74 (95% KI, 068 til 0,80). Innfelt: Scatter tomt på de normaliserte uttrykk verdier for tilfeller (rød) og kontroller (grønn)
Diskusjoner
genuttrykksmønster har blitt brukt som et verktøy for å identifisere prognostiske markører for. Cap [22-26]. Tidligere har vi og andre bevist den prognostiske verdien av utvalgte transkripsjoner for menn som gjennomgår radikal prostatektomi [9,11,12,27]. I denne kommunikasjonen viser vi at transkripsjoner av DLGAP5, en hypoksi-forbundet genet [17], har en prognostisk verdi i høyrisiko cap.
Selv om kvantifisering
p
O
2 i Cap vev
in situ
er på et innledende stadium [4,28], har hypoksi vært en selvstendig indikator på dårlig resultat [5] assosiert med kliniske og patologiske variabler [28]. Viktigere er transkripsjonsnivåer av hypoksi-responsive molekyler [dvs. VEGF, HIF-1α, osteopontin, LOX og GLUT-1] positivt korrelert med patologi og aggressivitet (gjennomgått av Stewart et al., Ref. [4]). Disse studiene viser muligheten for å identifisere biomarkører som knytter hypoksi og prognose i Cap og etablere bidrag av hypoksi-forbundet gener til Cap progresjon.
På grunn av den tilsynelatende foreningen av hypoksisk transkriptom og Cap [13-15], vi antok at hypoksi-forbundet gener kan gi ytterligere innsikt i mekanismene for Cap progresjon. Av data mining vi identifisert hypoksi-forbundet gener med uttrykket betydelig endret i Cap, både i bulk vev og Cap vev isolert av LCM. Av disse genene, fant vi at transkripsjonsnivåer av DLGAP5, CCNB1, og HMMR var assosiert med Gleason score og systemisk progresjon. Bemerkelsesverdig, sammenhengen mellom transkripsjon og sykdom utfallet ble ikke observert for andre hypoksi-kontrollerte gener som tidligere er rapportert som potensielle prognostiske biomarkører (Lox, ref [13] .; Tabell 1) og dermed antyder potensialet i transkripsjoner for DLG7, CCNB1 og HMMR som hypoksi -regulated biomarkører spesifikke for cap.
Siden produktene i CCNB1 og HMMR genene har tidligere blitt assosiert med transformerte celler og foreslått som markører for dårlig prognose for mange kreftformer [29-33] inkludert Cap [16,20 ], fokuserte vi på DLGAP5. Den DLGAP5-genet koder for et cellesyklus-regulert, mikrotubul-assosiert protein som kalles DLG7, DAP-5 eller HURP [34] som fungerer som en GTPase Ran effektor involvert i stabilisering av den mitotiske kinetochore fiberen [35]. I leverkreft [36], meningeom [37] og binyrebark svulster [38] nivåene av vitnemål koder DLG7 økt med sykdom aggressivitet. Disse transkripsjoner ble oppdaget i leveren og kolon svulster, men ikke i normale tilstøtende vev som tyder på en sammenslutning av DLG7 og kreftutvikling [39,40]. Imidlertid er informasjon om DLG7 i urologiske sykdommer og spesielt i Cap begrenset [34]. I en studie ble transkripsjoner for DLG7 påvist i nesten 90 prosent av overgangsordning celle carcinoma (TCC) av blæren, men ikke i gunstige urologiske sykdommer; et høyt nivå av transkripter for DLG7 ble funnet i tilbakevendende TCC [41].
I lys av informasjon som tyder DLG7 som en prognostisk markør, vi utforsket sitt potensial som resultat prediktor i høyrisiko cap. Derfor analyserte vi korrelasjonen av transkripsjonsnivåer for DLG7 og TOP2A fordi den prognostiske verdien av TOP2A i Cap er godt dokumentert [21,26,42]. Spesielt rapporterte vi at TOP2A transkripsjoner [11] og proteinproduktet [12] var prognostisk av høy-risiko cap. Vi fant ut at transkripsjonsnivåer for DLG7 og TOP2A var sterkt korrelert og foreslår at DLGAP5 gentranskripsjon bør videre undersøkt for sitt potensial som prediktor for utfall i høyrisiko cap. Av notatet, har overekspresjon av vitnemål for TOP2A og DLG7 nylig blitt identifisert i klasse III meningeom i forhold til grad jeg meningeom [37]. Denne informasjonen tilfører verdi til den oppfatningen at co-uttrykk for TOP2A og DLG7 er relevant i tumorigenesis og bør videre utforsket i jakten på biomarkører for avansert sykdom.
For å gi mulighet for å teste den prognostiske verdien av DLG7 i høyrisiko cap i sammenheng med andre prognostiske transkripsjoner undersøkte vi de pasientene vi undersøkte tidligere [9,11,12]. Menn som gjorde og ikke systemisk fremgang eller dø av CAP ble matchet på Gleason score, TNM stadium, margin status, og preoperativ serum PSA. AUC for DLG7 var 0,74 (95% KI, 0,68 til 0,8). Interessant, AUC for DLG7 var lik den verdien som er rapportert for TOP2A alene (0,71, ref [11].). ROC for HMMR [0,67 (95% KI, 0,60 til 0,74)] og CCNB1 [0,64 (95% KI, 0,57 til 0,71)] avslørte lavere AUC-verdier for disse genene enn for DLG7. Av denne grunn har vi ikke inkluderer HMMR og CCNB1 i en prognostisk kreft modell. Likevel, sammenlignet med HMMR og CCNB1, DLG7 utstilt en høyere AUC tyder på en overlegen prognostisk verdi for høy risiko cap.
Biology av DLGAP5 genet er kompatibel med engasjement i kreftdannelse og progresjon, og tyder på at -genet og dets produkt kan være potensielle terapeutiske mål. DLGAP5 transkripsjon stiger i løpet av S-fase og holdes ved begge G2-fasen og M-fasen av cellesyklusen [43]. DLG7 lokaliserer på spindel polene under mitose [34], hyperstabilizes den mitotiske spindelen og aktiverer spindel sjekkpunkt, og dermed utøve kontroll på spindel stabilitet i hele cellesyklus [44]. Nyere data i eggstokkreft celler indikerer at DLG7 er en direkte nedstrøms mål av Notch 3 [45]. Denne informasjonen legger Notch veien til de molekylære signalnettverk kontrollerende DLG7 uttrykk og gir en ny avenue verdt å forfølge når utforske mulighetene for terapeutisk målretting av DLG7. Når overexpressed i 293T celler, DLG7 forbedret cellevekst ved lave serumnivåer og forbedret kolonidannelse [34]. Lignende resultater ble funnet i NIH3T3-embryonale fibroblaster overekspresjon DLG7 [46]. Mer nylig er det blitt foreslått at DLG7 er onkogene ved sin virkning å redusere nivåene av tumor suppressor p53-protein [47]. Overekspresjon av DLG7 i NIH3T3 celler forbedret mottakelighet for deoxycytosine analoger [46]; derfor utforske målretting av DLG7 (for eksempel ved å gripe inn med trasé kontrollerende DLG7, som de påvirket av aurora-A kinase eller Notch) kan øke effekten av kjemoterapeutika i kastrering-resistente cap. Disse observasjoner støtter rollen til DLG7 i progresjon av kreft og foreslå det som et potensielt terapeutisk mål verdig videre forskning.
Selv om rollen av hypoksi i DLG7 uttrykk ikke er blitt demonstrert direkte, det har blitt avledet av det funn at DLG7 er et hakk tre mål i eggstokkreft celler [45]. Det har vist seg at hypoksi kontroller transkripsjon av Notch mål i nevroendokrin differensiering av menneskelige Cap celler [48]; Det innebærer muligheten av Notch signalisering i hypoksi-formidlet kontroll av DLG7 ekspresjon i hetten og dens rolle i manifestasjonen av tumor aggressivitet. For å se etter potensielle mekanistisk grunnlag av DLG7 følsomhet for hypoksi, vi søkte arrangøren regionen DLG7 for bindingsstedene for transkripsjonsfaktoren HIF. Bruk av publisert informasjon om minimal
cis
regulatoriske elementer som kreves for HIF-avhengig trans [49,50] fant vi fem antatte HIF bindingssteder ligger 1134, 2498, 2616, 3815, og 8310 nt oppstrøms DLG7 transkripsjon start, henholdsvis (CRG og AEK, upublisert data). De fleste av disse områdene ligger i et svært metylert region; siden promoter metylering regulerer uttrykket av hypoksi-kontrollerte gener i en kontekstavhengig måte [50], effekten av oksygen spenning på uttrykk for DLG7 fortjener mer etterforskning.
Våre resultater validere transkripsjoner av DLGAP5, en
p
O
2-regulert gen [17], som en uavhengig prognostisk biomarkør i Cap. Dens potensielle bruksområder er avgrensningen av dagens prognostisk verktøy for Cap og bedre predikator for terapeutisk utfall. Beviset på betydelig følsomhet av Cap celler til hypoksi kan føre til økt effekt av behandling, ikke bare for Cap, men det kan også tjene som et paradigme for andre former for kreft.
Takk
takker legene. Lucio Miele og Mohamed Hassan for kritisk lesing av manuskriptet.
