Abstract
Long ispedd element-1 (L1) er en transposable element som kan bevege seg i genomet, som potensielt kan føre til genom mangfold og modifisert gen-funksjon. Selv L1 aktivitet i somatiske celler er normalt undertrykkes gjennom DNA-metylering, er noen L1S aktivert i tumorer, inkludert kolorektalt karsinom. Men hvordan L1-retrotransposition (L1-RTP) er involvert i gastrointestinale lidelser er ikke avklart. Vi antok at L1-RTP i somatiske celler kan bidra til kolitt-assosiert kreft (CAC). For å løse dette, vi benyttet en eksperimentell modell av CAC å bruke transgene L1-reporter mus som bærer en menneskelig L1-EGFP reporter genet. Mus ble utsatt for gjentatte sykluser av kolitt indusert ved administrering av dekstran natriumsulfat (DSS) i drikkevann med injeksjon av kreftfremkallende azoxymethane (AOM). L1-RTP-nivåene ble målt ved en kvantitativ polymerasekjedereaksjon rettet mot den nyinnsatte reporter EGFP i forskjellige vev og celletyper, inkludert prøver oppnådd ved laser mikrodisseksjon og cellesortering med flowcytometri. DNA-metylering nivåer av human L1-promoteren ble analysert ved hjelp av bisulfitt pyrosekvensering. AOM + DSS-behandlede mus oppviste betydelig høyere nivåer av L1-RTP i hele colon vev i løpet av den akutte fasen av kolitt når sammenlignet med kontroll naive mus. L1-RTP-nivåer i hele colon vev ble positivt korrelert med den histologiske alvorlighet av kolitt og graden av neutrofil infiltrasjon inn i lamina propria (LP), men ikke med tumorutvikling i tykktarmen. L1-RTP ble beriket i LP mesenchymalceller snarere enn epitelceller (ECS), myeloid eller lymfoid celler. DNA metylering nivåer av menneskelig L1 promoter-regionen viste en negativ korrelasjon med L1-RTP nivåer. L1-RTP var fraværende fra de fleste tumorer som finnes i 22 uker gamle mus. Avslutningsvis viste vi at L1-RTP ble indusert i mus CAC slimhinnene i henhold til den akutte betennelsesresponsen; synes imidlertid retrotransposition ikke å ha direkte relevans til kolitt-indusert initiering kreft
Citation. Otsubo T, Okamura T, Hagiwara T, Ishizaka Y, Dohi T, Kawamura Yi (2015) Retrotransposition av Long ispedd nukleotid Element -1 er assosiert med kolitt, men ikke Svulster i en Murine Colitic Cancer Model. PLoS ONE 10 (2): e0116072. doi: 10,1371 /journal.pone.0116072
Academic Redaktør: Emiko Mizoguchi, Massachusetts General Hospital, UNITED STATES
mottatt: 30 september 2014; Godkjent: 05.12.2014; Publisert: 24 februar 2015
Copyright: © 2015 Otsubo et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er innenfor papir
Finansiering:. Denne forskningen ble delvis støttet med tilskudd fra programmene Grants-i-Aid for unge forskere; Grants-i-Aid for Scientific Research (C); Grants-i-Aid for Scientific Research på Prioriterte områder fra Kunnskapsdepartementet, kulturer, sport, vitenskap og teknologi; Internasjonalt samarbeid Stipend fra Helsedepartementet, Arbeids- og velferds; og National Center for Global helse og medisin (21-110, 22-205, 21-129, 23-101, 25-104, 26-110); og Grant-i-Aid for Forskning fra Helsedepartementet, Arbeids- og velferds av Japan (09156296)
Konkurrerende interesser:. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning.
Long ispedd element -1 (L1) er en transposable element som kan bevege seg innenfor genomet til å indusere genet slettinger, inversjoner, og innskudd, som potensielt kan føre til genom mangfold samt endre gen-funksjon [1,2] . L1 er til stede i alle pattedyr, inkludert mennesker, og omfatter omtrent 17% av det humane genom [3,4]. Selv om L1 aktivitet er vanligvis undertrykkes i somatiske celler gjennom epigenetiske mekanismer, slik som DNA-metylering, er noen L1S aktiveres ved miljømessige faktorer, inkludert karsinogener og proinflammatoriske forbindelser [5-8]. Viktigere, ble L1 innsett påvist i flere typer kreft hos mennesker, inkludert kolorektal kreft [9-11]. Hypometylering av CpG øyer i L1 5′-UTR er rapportert ikke bare i kreftformer, men også i humane inflammatoriske lidelser [12,13] tyder på en mulig rolle for L1 innarbeiding i inflammatoriske tilstander. Denne muligheten er spesielt viktig i gastrointestinal kreftutvikling, fordi kronisk betennelse er en av de viktigste risikofaktorene for gastrointestinal kreft [14,15]. Men hvordan L1-retrotransposition (L1-RTP) er involvert i gastrointestinal betennelse og kreft er ikke avklart. Vi hypotese at L1-RTP i somatiske celler kan bidra til kolitt-assosiert kreft (CAC). For å løse denne muligheten, vi benyttet en eksperimentell modell av CAC ved hjelp av kreftfremkallende azoxymethane (AOM) sammen med induksjon av kolitt av dekstransulfat natrium (DSS) i drikkevannet i forbindelse med en transgen mus L1 reporter system. Mekanismen for denne CAC modellen har blitt grundig undersøkt ved hjelp av forskjellige typer av gen-manipulert mus. For eksempel, TNF-reseptor 1 (TNFR1) -deficient mus viste redusert antall tumorer, som var avhengig av mangel av TNFR1 fra de hematopoetiske celler [16]. Som et nedstrøms signal av TNFR1, er atomtranskripsjonsfaktor kappa B (NF-kB) som er rapportert å være kritisk i den betennelses tilhørende utvikling av colitic kreft [17]. IL-6 fremmer også tumorvekst, eventuelt gjennom aktivering av Janus-aktivert kinase (JAK) og signalet transduseren og aktivator av transkripsjon (STAT) 3 trasé [18-20].
I denne undersøkelsen, fant vi at L1-RTP var positivt assosiert med alvorlighetsgraden av kolitt. Aktivering av L1 ble korrelert med hypometylering av CpG øyer på L1 5′-UTR. Men L1-RTP ble ikke økt i svulstene i denne modellen antyder at L1-RTP ikke er vesentlig involvert i startfasen i denne CAC modell.
Materialer og metoder
Etikk uttalelse
Alle eksperimenter med mus ble utført i henhold til institusjonelle retningslinjer for omsorg og bruk av forsøksdyr i forskning med godkjenning av Animal Care og bruk komité Research Institute, National Center for Global helse og medisin (godkjenningsnummer 14 039). Dyrene ble avlivet med ketamin og xylazin og hver innsats ble gjort for å minimere lidelse.
Mus og CAC-modellen
En linje av transgene mus huse en menneskelig L1-EGFP reporter genet (
HL1-EGFP
), oppkalt Linje 4, ble utviklet i anlegget vårt [5] og brukes i alle forsøk. Mus ble holdt under spesifikke patogenfrie forhold under forsøkene. CAC modell protokoller er vist i fig. 1A. Ukentlige peritoneal injeksjon av azoxymethane (AOM, 10 mg /kg, Sigma-Aldrich Japan) ble satt igang ved 6 ukers alder og gjentatt fire ganger. Mus ble sultet i 12 timer før AOM injeksjon for å forsterke effekten av karsinogenese med AOM [21]. Mus i den eksperimentelle gruppen ble gitt 3,5% (vekt /volum) dekstran-sulfat natrium (DSS, Sigma-Aldrich Japan) i drikkevannet i 5 dager ved 7 ukers alder, og denne behandling ble gjentatt fire ganger på en månedlig basis. Ved 22 ukers alder (tumor fase), ble kolon vev oppnådd. Synlige tumorer ble kuttet fra slimhinnen og separat analysert fra bakgrunnen mucosa. I noen eksperimenter ble kolon vev oppnådd fra 8 uker gamle mus etter to injeksjoner av AOM og i løpet av syv dager etter stopper DSS behandling (akutt fase).
(A) Skjematisk tidsskjema av AOM + DSS kolitt musemodell. Pilene viser tidspunktene knyttet til akutte inflammatoriske og kreft fasene for høsting av tykktarm vev og /eller svulster. (B) L1-RTP-nivåene ble analysert med genomisk DNA ekstrahert fra hele distale colon vev og /eller tumorer. Den EGFP kopi /genom ble beregnet ved hjelp av ß-aktin som intern kontroll. Prøver merket «Akutt AOM + DSS» ble oppnådd i akuttfasen i panel A, og andre ble samlet inn under svulsten fasen. AOM + DSS indikerer rest kolon vev etter å ha fjernet synlige svulster. Data ble vist som gjennomsnitt ± SD. P-verdier ble beregnet med en uparet tosidige t test.
Kvantifisering av L1-RTP
For PCR analysen, ble genomisk DNA fremstilt fra vev og celler ved hjelp av en DNA- utvinning system (QuickGene, Fujifilm, Tokyo, Japan). Fremgangsmåte for deteksjon av frekvensen av L1-RTP med en PCR-targeting retrotranspositioned EGFP ble beskrevet tidligere [22]. For analyse av svulster, ble en tilfeldig valgt svulst fra hver mus utsatt for DNA-ekstraksjon og L1-RTP analyse.
Histologisk analyse og laser mikrodisseksjon
Hele kolon vev innhentet under den akutte inflammasjonsfasen ble rullet opp og snap-frosset i flytende nitrogen. Frysesnitt ble fiksert med kald aceton og farget med hematoxylin og eosin for histologisk analyse. Histologiske score for graden krypten tap og celleinfiltrasjon ble blindt tildelt hver kolon. Crypt tap ble vurdert som den relative nedgangen i epitelceller område sammenlignet med naive kolon ved bruk av et tatt bilde analysert etter bilde J programvare (NIH, Bethesda, MD, USA): 0-ingen endring eller mindre enn 10% nedgang fra naive tykktarm , 1-10-30% av epitelceller ble tapt, 2-30-50%, 3-50-70%, 4-70-90%, 5 mer enn 90%. Cell infiltrasjons score: 0-ingen endring fra naive tykktarm, en-focal infiltrasjons begrenset til slimhinnen, to-focal infiltrasjon i både slimhinne og submukøse lag, 3-diffuse slimhinnene og submucosal infiltrasjon. En score for hver mus ble bestemt som summen av krypten stillingen og celleinfiltrasjon stillingen. Nøytrofil infiltrasjon ble bestemt ved den kjernefysiske morfologi. I noen eksperimenter genomisk DNA ble hentet fra frosne seksjoner ved hjelp av en laser mikrodisseksjon system (LMD 7000, Leica Microsystems, Wetzlar, Tyskland) i henhold til produsentens instruksjoner.
Cell separasjon
Epitelceller (ECS ) ble isolert fra tykktarm og behandlet med 10 mM EDTA i Hanks balanserte saltoppløsning (HBSS, Sigma Aldrich). Lamina propria (LP) celler (LPC) ble isolert ved hjelp av en Gentle MACS Dissociator (Milteny Biotech, Köln, Tyskland) med lamina propria Dissosiasjon Kit for musen (Milteny Biotech). LPC ble farget med fluorescein-isotiocyanat (FITC) -, R-fykoerytrin (PE) -, eller allofykocyanin (APC) -merket anti-CD3, anti-CD11b, CD11c anti-, anti-B220, anti-Gr-1 eller anti -EpCAM antistoffer (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA), og 7-Aminoactinomycin D for å identifisere levende celler, og cellene ble sortert med et strømningscytometer (MoFlo, Beckman Coulter, Tokyo, Japan). Cell type sortering ble utført med følgende overflatemarkører: T-celler, EpCAM
-CD3
+ CD11b
-CD11c
-; B-celler, inkludert B220-lav plasmaceller, EpCAM
-B220
+ CD11b
-CD11c
-; dendrittiske celler /makrofager, en blanding av EpCAM
-CD3
-CD11b
+ celler, EpCAM
-CD3
-CD11c
+ celler, og EpCAM
-CD3
-F4 /80
+ celler; granulocytter, EpCAM
-Gr-en
høye celler; ikke-epitelial non-hematopoetiske celler, EpCAM
-CD3
-B220
-CD11b
-CD11c
-F4 /80
-Gr-en
-. celler
DNA metylering analyse
for å vurdere metylering status for L1, ble sulfitt-pyrosekvensering utføres med en PyroMark Q24 pyrosekvensering maskin (Qiagen, Hilden, Tyskland) ved hjelp av pyro LINE kit (PyroMark Q24 CpG line- en 4 x 24, kat. no.970042, QIAGEN).
statistisk analyse
statistisk analyse ble utført ved hjelp av Prism 6 statistikkprogrammet (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA) med de metoder som er angitt i figuren legender. For analysene av forskjell sammenkoblingen er en- eller tosidige Student t tester ble brukt. Korrelasjoner ble testet med to-tailed Pearson beregninger. Verdier for P 0,05 ble betraktet som signifikant.
Diskusjon
L1-RTP nivåer
Resultater og økte i den akutte fasen av kolitt
Den eksperimentelle protokollen for CAC-modellen er illustrert i fig. 1A. Transgene mus som skjuler en human L1-EGFP reporter-gen (
HL1-EGFP
) [5] ble benyttet i alle forsøk. I denne modellen vi lykkes oppnådd colontumorer fra 22 uker gamle mus etter fire injeksjoner av AOM og fire sykluser av DSS kolitt. Tre til tjuefire svulster ble funnet i hver colon (gjennomsnitt = 11,5, 11 mus). Ubehandlet (naivt) eller mus behandlet med bare AOM eller DSS ikke utvikler colontumorer. For å undersøke induksjonen av L1-RTP, først erholdt vi hele tykktarmen vev fra hver gruppe av mus i løpet av tumor fase (22 uker gamle) eller i løpet av den akutte fasen etter den første administrering av DSS (8 uker gamle). Vi først forsøkt å påvise celler som uttrykker EGFP histologisk eller med flowcytometri; Men EGFP uttrykk var ikke synlig, sannsynligvis på grunn av lav forekomst av L1-RTP. Derfor har vi kvantifisert frekvensen av L1-RTP med en PCR-targeting retrotranspositioned EGFP som tidligere beskrevet [22]. Som et resultat, har vi funnet at L1-RTP var signifikant økt i løpet av den akutte fasen i AOM + DSS kolitt gruppe, men ikke i tumorer, eller i bakgrunnen slimhinnene i tumorbærende kolon (Fig. 1B). Induksjon av L1-RTP ble ikke sett i mus som ble behandlet bare med AOM eller DSS. Disse resultater indikerer at induksjon av L1-RTP er assosiert med akutt kolitt, men ikke opprettholdes inntil tumoren fase, og heller ikke er direkte involvert i tumordannelse i dette kolitt-assosiert tumormodell.
L1-RTP-nivåer korrelerer med den kolitt alvorlighetsgrad, men ikke med kreft tall
Selv om L1-RTP ble betydelig indusert i den akutte fasen av CAC-modellen, nivåene av induksjon viste betydelige individuelle forskjeller (fig. 1B). Derfor har vi videre undersøkt forholdet av L1-RTP med alvorlighetsgraden av kolitt. Vi fant at histologiske score, som består av krypten tap og celleinfiltrasjon ble positivt korrelert med hyppigheten av L1-RTP (fig. 2A). Fordi vi observert at histologisk alvorlig betennelse ble karakterisert ved massiv infiltrasjon av granulocytter med et bredt spekter av epitelceller tap (fig. 2B), ble prøvene klassifisert av nærvær eller fravær av granulocytt infiltrering. En tendens mot høyere L1-RTP ble observert i vev med granulocytt infiltrasjon enn de uten granulocytter (Fig. 2C). Selv om betydelig L1-RTP ikke ble påvist i svulstene, trodde vi det mulig at svulster kan ha vokst med klonal ekspansjon av L1-RTP negative celler, men forekomsten av L1-RTP i colonic bakgrunnen slimhinnen kan ha muliggjort utviklingen av svulster. Derfor, undersøkte vi forholdet mellom tumor tall og hyppigheten av L1-RTP i bakgrunnen slimhinnen; Det var imidlertid ingen signifikant korrelasjon mellom disse to faktorer (fig. 2D). Disse resultatene hevder at L1-RTP induseres under akutt kolitt henhold til alvorlighetsgraden av betennelse; imidlertid er L1 i tykktarmen ikke opprettholdt i en aktivert tilstand fra akutt betennelse til utvikling av tykktarmskreft etter gjentatte utbrudd av kolitt. Dermed gjør L1-RTP ikke ut til å være direkte involvert i tykktarm startfasen.
(A) kolitt histologiske score og L1-RTP nivåer i hele distale colon i den akutte fasen mus viste en positiv korrelasjon. (B) Typiske histologiske bilder av kolitt med nøytrofil infiltrasjon (til venstre) og uten nøytrofil infiltrasjon (til høyre) er vist. Baren representerer 100 mikrometer. (C) Den L1-RTP-nivåene ble sammenlignet mellom den tykktarmen vev uten /med neutrofil infiltrering inn i tykktarmen lamina propria i løpet av de akutte og tumor faser. Data ble vist som gjennomsnitt ± SD. P-verdien ble beregnet med en uparet ensidige t-test. (D) Den L1-RTP nivå av bakgrunnen tarmslimhinnen og synlige tumor tall ble ikke korrelert.
L1-RTP ble anriket i kolon LP-fraksjonen i den akutte fasen av kolitt
Deretter ønsket vi å identifisere de celletyper hvor L1-RTP fant sted i tykktarmen. Vi separerte epitelial og ikke-epitelceller ved mikrodisseksjon av mucosal lag av kolon ble oppnådd ved den akutte fase av inflammasjon. ECS ble stanset ut, og deretter de resterende slimhinnelaget ble dissekert og underkastet DNA-ekstraksjon (fig. 3A). Det ble uventet L1-RTP anriket i den ikke-epiteliale cellefraksjon av LP (fig. 3B). Derfor, siden vi forsøkt å identifisere celletyper med L1-RTP ved isolering av LPC med collagenase fordøyelse og cellesortering ved hjelp av flow cytometri. Som et resultat ble L1-RTP ikke oppdaget i CD3
+ T-celler, B220
+ B-celler /plasmaceller, CD11b
+ /CD11c
+ /F4-80
+ makrofag /dendrittiske celler, eller GR1
+ granulocytter (fig. 3C). L1-RTP var høy i cellefraksjon, som var negativ for disse overflatemarkører. Basert på disse resultatene, mesenchymale typen celler (MES) er mest sannsynlig å være ansvarlig for den økte L1-RTP ved akutte fase kolitt. På den annen side, hyppigheten av L1-RTP i andre celletyper oppholdt seg på lave nivåer. Ytterligere detaljert analyse for å identifisere celletypene som induserer L1-RTP gjenstår å bli undersøkt.
(A) Representant fotografi av en seksjon etter mikrodisseksjon for epitelceller (EC, topp), lamina propria (LP, nederst) og de gjenværende vev (inkludert submucosa og muskel lag) av tykktarms delen av laser mikrodisseksjon. (B) L1-RTP-nivåene ble analysert i colonic ECS, LP, og submucosa pluss muskellaget (SM) isolert ved mikrodisseksjon fra mus i den akutte fasen kolitt. Den relative L1-RTP verdi ble normalisert ved hjelp av ß-aktin som en intern kontroll. Hver tomt indikerer en individuell mus. P-verdier ble beregnet med en uparet ensidige t-test. (C) L1-RTP nivåer ble undersøkt i isolert ECS eller sortert EpCAM negativ-gated ikke-EC fraksjoner ved flowcytometri fra mus i den akutte fasen kolitt, som følger: T-celler (EpCAM
-CD3
+) , B-celler (EpCAM
-B220
+), makro /dendrittiske celler (Mii /DC, EpCAM
-CD11b
+ /CD11c
+ /F4 /80
+) , Nøytrofile (EpCAM
-Gr
-1
+) og andre typer celle, mest sannsynlig mesenchymalceller (MES, EpCAM
-CD3
-B220
-CD11b
-CD11c
-F4 /80
-Gr-en
-). Nivåer av L1-RTP fra sammenslåtte cellefraksjoner hentet fra fire mus er vist.
DNA metylering nivåer av Tg-L1 promoter ble omvendt korrelert med L1-RTP nivåer
Siden DNA metylering av L1-promoteren er kjent for å forebygge retrotransposition, vi undersøkt DNA-metylering nivåene av human L1-promoteren i transgene mus. Vi har valgt forskjellige kolon prøver fra naive mus og mus med akutt kolitt pluss AOM, avvikende krypten foci som induseres av fire injeksjoner av AOM, ECS, og LPC, sammen med 2-amino-1-metyl-6-fenylimidazo [4,5-b ] pyridin (PhIP) -behandlet mus (en positiv kontroll for den humane L1-RTP reporter [8]), og målte DNA-metylering nivåer av CpG øy forbundet med human L1 ved hjelp av bisulfitt pyrosekvensering av 5’UTR region av transgenet. Som forventet, DNA-metylering nivåene var generelt høy (mer enn 80%) i alle prøver. Imidlertid ble det observert en statistisk signifikant negativ korrelasjon mellom DNA-metylering nivåer og L1-RTP (fig. 4) i disse prøvene. Uventet, metylering nivåer av naive L1-RTP mus var ikke den høyeste blant disse prøvene, noe som tyder på forskjellige nivåer av DNA metylering av HL1 promoter i enkelte naive mus.
DNA metylering nivåer av den transgene menneskelig L1 promoter ble analysert av sulfitt pyrosekvensering med primere rettet mot bare den menneskelige L1 promotorsekvens. Korrelasjon mellom nivåene av human L1 promotor-DNA-metylering og L1-RTP-nivåene ble analysert ved hjelp av hele distale colon vev med AOM + akutt DSS kolitt (uten etikett), isolert colonic ECS (EF) eller LP (LP) fraksjoner fra AOM + DSS kolitt, avvikende krypten foci (ACF) indusert av AOM, hele colon av en naiv mus, eller 2-amino-1-metyl-6-fenylimidazo [4,5-b] pyridin (PhIP) -behandlet mus (en positiv kontroll av human L1-RTP reporter [8]). P-verdien ble bestemt av en to-tailed Pearsons beregning.
Dette er den første rapporten der L1-RTP ble direkte påvist
in vivo
, indusert ved administrasjon av et kreftfremkallende med induksjon av kolitt. I denne studie av CAC viser vi at L1-RTP ikke blir indusert i epitel-celler eller hematopoetiske celler, men mest sannsynlig i en mesenchymale celletype. Videre har vi lykkes målte DNA-metylering nivåer av human L1-promoteren i denne musemodellen, og fant en negativ korrelasjon mellom L1-RTP og DNA-metylering av dets promoter. Dette resultatet støtter tanken om at hypometylering av L1 er forbundet med L1-aktivering. På den annen side, fant vi ikke L1-RTP i kolon svulster eller deres bakgrunn slimhinner i denne murine tykktarmskreft modell, selv om en korrelasjon er etablert mellom L1-RTP og kreft hos mennesker som beskrevet i en fersk gjennomgang [23]. I stedet ble L1-RTP forbundet med akutt inflammasjon. Positiv korrelasjon av L1-RTP-nivåer med de histologiske score og graden av celleinfiltrasjon antyder en potensiell bidrag av L1-RTP til alvorlighetsgraden av den akutte kolitt. I denne forstand kan L1-RTP være involvert i mekanismen for forverring av betennelse. Våre innledende spekulasjon var at hyppigheten av L1-RTP skulle økes i løpet av betennelse-assosiert tumorutvikling. Men våre samlede resultater indikerer at L1-RTP har en begrenset direkte innvirkning på tumorigenesis. Mulige årsaker til dette uventede resultat er som følger. Først gjør vår
in vivo
systemet ikke oppdager den endogene musen L1-RTP, selv om påvisning av RTP av menneske L1 transgenet var klart. Nivåer av menneskelig L1-RTP i tykktarmen var generelt lav, og dette deteksjonsfølsomhet kan ikke akkurat representerer den endogene retrotransposition i mus, som kan påvirke hyppigheten av CAC. Men det faktum at vi har oppdaget øket L1-RTP i akutt kolitt, men ikke i tumorer indikerer at virkningen av L1-RTP på tumorigenesis er i det minste indirekte. For det andre, tidligere studie rapporterte at L1 retrotransposition var til stede i preneoplastiske leveren, men ikke i den etterfølgende leveren adenokarsinom [24]. Forfatterne argumenterte med at tumorprogresjon kan ha valgt for tap av kromosomet som inneholder det aktive L1. Ved CAC, kan forekomsten av kromosomalt tap i tumorer også redusere hyppigheten av L1-RTP i tumorer. Til slutt, i denne musemodellsystemet, er svulstvekst begrenset til slimhinnen i tykktarmen, og svulster ikke gå videre til avanserte stadier som humane kreftformer som viser ondartede trekk ved invasjon og metastasering. Derfor kan dette ikke være en egnet modell for undersøkelse av avansert stadium av ondartet kreft. Således Våre resultater tyder på at virkningen av L1-RTP på initieringen av tykktarmskreft er begrenset i dette CAC modellen; imidlertid mulige roller L1-RTP i tumorprogresjon og metastase forbli ubestemt. For å vurdere potensialet involvering av L1-RTP i avansert stadium kreft vil kreve etablering av ulike modeller for avansert kreft som ondartede tumorcellelinjer ved å fremkalle mutasjoner i onkogener eller anti-onkogener i disse transgene mus.
Nylig, rollen til mesenchymale stromale celler i forskjellige inflammatoriske tilstander, inkludert kolitt har vært rapportert. De reparerende og anti-inflammatoriske egenskaper mesenchymale stromale celler har blitt testet i en rekke dyremodeller, og har blitt brukt i spesielle kliniske settinger [25]. Spesielt i AOM + DSS indusert kolitt modell, benmarg avledet stamceller ble vist å ha anti-kreftfremkallende egenskaper gjennom transformerende vekstfaktor-ß signale [26]. Disse resultatene tyder på muligheten for at L1-RTP, som vi har funnet i mesenchymale celler, kan forstyrre anti-inflammatorisk cellefunksjon. Videre undersøkelser av mesenchymale celler som et mål celle type retrotransposition vil være interessant og kan belyse deres potensielle rolle til å påvirke kolitt alvorlighetsgrad i den tidlige fasen av CAC.
Takk
PL1-EGFP (PEF -06R) konstruere for å forberede transgene mus ble vennlig levert fra Dr. Eline Tjetske Luning Prak, Clinical Immunology Laboratory ved Hospital ved University of Pennsylvania.
