Abstract
Bakgrunn
Selv om tidlig stadium ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) regnes som en potensielt helbredelig sykdom etter komplett reseksjon, pasienter har et bredt spekter av overlevelse i henhold til trinn (IB, II, HIA). Innenfor hvert trinn, kan genuttrykk profiler identifisere pasienter med en høyere risiko for tilbakefall. Vi antok at endret mRNA uttrykk i ni gener kan bidra til å forutsi sykdom utfallet: excision reparasjon kryss utfyller 1 (ERCC1), myeloid sink finger 1 (MZF1) og Twist1 (som regulerer N-cadherin uttrykk), ribonukleotidreduktase subenhet M1 (RRM1 ), thioredoxin-en (TRX1), tyrosyl-DNA fosfodiesterase (Tdp1), nukleær faktor av aktiverte T-celler (NFAT), BRCA1, og den menneskelige homolog av gjær spirende uhemmet av benzimidazol (BubR1).
Methodology og hovedfunnene
Vi utførte sanntid kvantitativ polymerase chain reaction (RT-QPCR) i frosne lungekreft vevsprøver fra 126 chemonaive NSCLC pasienter som hadde gjennomgått kirurgisk reseksjon og evaluert sammenhengen mellom genuttrykk nivåer og overlevelse. For validering, brukte vi parafininnstøpte prøver fra 58 andre NSCLC pasienter. En sterk inter-genet korrelasjon ble observert mellom uttrykk nivåer av alle gener unntatt NFAT. En Cox modellen indikerte at sammen med sykdomsstadiet, BRCA1 mRNA uttrykk signifikant korrelert med total overlevelse (hazard ratio [HR], 1,98 [95% konfidensintervall (CI), 1,11 til 6]; p = 0,02). I den uavhengige kohort av 58 pasienter, BRCA1 mRNA uttrykk også signifikant korrelert med overlevelse (HR, 2.4 [95% CI, 1,01 til 5,92]; p = 0,04).
Konklusjoner
Overuttrykte BRCA1 mRNA ble sterkt assosiert med dårlig overlevelse i NSCLC pasienter, og validering av dette funnet i en uavhengig datasett ytterligere styrket denne foreningen. Siden BRCA1 mRNA uttrykk har tidligere vært knyttet til forskjells følsomhet for cisplatin og antimikrotubulær legemidler, kan BRCA1 mRNA uttrykk gi ytterligere informasjon for å tilpasse adjuvant antimikrotubulær basert kjemoterapi, spesielt i stadium IB, hvor rollen som adjuvant kjemoterapi ikke har blitt tydelig demonstrert.
Citation: Rosell R, Skrzypski M, Jassem E, Taron M, Bartolucci R, Sanchez JJ et al. (2007) BRCA1: A Novel prognostisk faktor i resected Ikke-småcellet lungekreft. PLoS ONE 2 (11): E1129. doi: 10,1371 /journal.pone.0001129
Academic Redaktør: William Pao, Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, USA
mottatt: 20 juni 2007; Godkjent: 01.08.2007; Publisert: 07.11.2007
Copyright: © 2007 Rosell et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Forskningen rapportert her ble finansiert av den spanske Lung Cancer Group og Medical University of Gdansk. Det ble delvis finansiert av det spanske helsedepartementet gi FIS 05/1621. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
i 2006 i Europa, var det anslagsvis 386,300 lunge krefttilfeller, med en betydelig høyere forekomst hos menn enn hos kvinner [1]. Blant helt resected ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) pasienter, 40% av stadium I, 66% av stadium II og 75% av stadium IIIA pasientene dør innen fem år etter reseksjon [2], og fordelen av adjuvant kjemoterapi har ikke påvist i stadium IB. I ANITA randomiserte studien, 5-års overlevelse for pasienter med stadium IB sykdom var 62% i kjemoterapi gruppen og 64% i kontrollgruppen; tilsvarende priser var 52% og 39% for stadium II pasienter og 42% og 26% for stadium IIIA [3]. I tillegg til sykdom stadium, har flere studier undersøkt genuttrykk profiler i NSCLC, identifisere molekylære undergrupper forbundet med pasientens utfall [4], [5], [6], [7]. Genekspresjonssignaturer alt fra fem til 64 gener er identifisert [6], [7], og kryss-studie sammenligninger har avdekket betydelig, men ufullstendig, avtalen mønstre forutsi utfallet [4]. Videre er evnen til å tolke betydningen av de individuelle gener i disse signaturene er fortsatt en utfordring [8]. De genekspresjonssignaturer identifiserte gener for det meste i forbindelse med kreft metastase [6], men ikke beskrive gener involvert i DNA-reparasjon av veier.
Prekliniske studier har vist at en mangel på et hvilket som helst av de mer enn 30 gener involvert i nucleotide excision reparasjon (NER) pathway overfører merket overfølsomhet for cisplatin [9]. Hypoteser som forhøyede nivåer av NER gener kan være ikke bare forutsigbar, men også prognostiske markører, valgte vi å undersøke følgende gener, basert på tidligere rapporter om deres prediktiv verdi: excision reparasjon kryss utfyller 1 (ERCC1) [10], BRCA1 [11 ], human homolog av gjær spirende uhemmet av benzimidazol (BubR1) [12], [13], [14], myeloid sink finger 1 (MZF1) [15], [16], [17], ribonukleotidreduktase subenhet M1 (RRM1 ) [18], [19], [20], tioredoksin-1 (TRX1) [21], [22], tyrosyl-DNA-fosfodiesterase (Tdp1) [23], [24], [25]. I tillegg, undersøkte vi Twist [26], [27] og nukleær faktor av aktiverte T-celler (NFAT) [28], [29], som er involvert i den invasjon-metastasering prosess. (Nærmere om de ni gener undersøkt kan bli funnet i tekst S1.)
Ingen av disse ni gener har blitt identifisert i genuttrykk profiler forbundet med NSCLC pasient utfall [4], [5], [6] , [7], med unntak av TRX1, som ble identifisert ved analyse og proteomikk assosiert med dårlig overlevelse [21]. For å belyse den prognostiske verdien av disse genene, har vi undersøkt deres uttrykk ved real-time kvantitativ revers transkriptase PCR (RT-PCR) på 126 helt resected NSCLC pasienter som ikke fikk adjuvant kjemoterapi og korrelerte resultatene med overlevelse.
Metoder
pasienter
NSCLC prøver ble innhentet fra 126 påfølgende pasienter som gjennomgikk kurativ lunge reseksjon ved Medical University of Gdansk (Gdansk, Polen) mellom 2000 og 2004, etter innhente godkjenning fra Institutional Review board of Medical University of Gdansk og pasientenes signert informert samtykke. Pasientene var 98 menn og 28 kvinner, med alder diagnose som strekker seg fra 37 til 77 år (median alder, 64 år). Sytti-en pasientene hadde stadium I sykdom, 33 trinn II, og 22 stadium IIIA. Tjuesyv pasientene hadde dårlig differensiert, 74 moderat differensiert, og ni godt differensiert NSCLC; de resterende 16 pasientene var uspesifisert. Åtti pasienter var røykere og 39 tidligere røykere, og de resterende syv aldri-røykere. Ett hundre og tjueto pasienter gjennomgikk formell lunge lobektomi eller mer, med systematisk ipsilaterale mediastinale lymfeknutetoalett; de fire gjenværende pasientene gjennomgikk segmentectomy grunn av dårlig lunge reserve. Stages ble bestemt etter patologisk evaluering av resected prøver i henhold til det internasjonale systemet for Staging Lung Cancer [30] (tabell S1). Ingen av pasientene fikk adjuvant kjemoterapi.
Vi validert BRCA1 prognostisk verdi i 58 scene IB-IIB NSCLC pasienter som hadde gjennomgått kirurgisk reseksjon ved Azienda Ospedaliera Santa Maria (Terni, Italia) mellom februar 1997 og desember 2003 , etter å ha innhentet godkjenning fra Institutional Review board of Azienda Ospedaliera Santa Maria og pasientenes signert informert samtykke. Pasient egenskaper er vist i tabell S1.
genekspresjonsanalyser
tumorprøver fra 126 pasienter ble oppnådd under operasjonen som blokker av 1cm3 og hurtigfrosset i flytende nitrogen. Vevene ble lagret i -80 ° C inntil total-RNA ble ekstrahert med AllPrep sett (Qiagen, Valencia, CA). Bare tumorprøver inneholdende mer enn 60% av tumorvevet på en mikroskopisk seksjon var kvalifisert for videre behandling. Konsentrasjonen av RNA ble vurdert i Nano-slipp ™ og kvaliteten oppnådde RNA ble testet på agarosegel. Første tråd cDNA ble syntetisert fra 1 mikrogram total RNA ved hjelp av High-Capacity cDNA Arkiv Kit (Applied Biosystems, Foster City, California). De ni genene som ble undersøkt, er vist i tabell 1. Kvantitativ RT-PCR-reaksjoner av hvert gen ble utført i en ABI PRISM 7900 HT Sequence Detection System (Applied Biosystems).
Relativ genekspresjon verdier ble beregnet etter den ΔΔCt metoden bruker Sequence Detection System (SDS) 2.1 programvare (Applied Biosystems). Den ΔΔCt metoden gir mengden av target gen normalisert til en endogen referanse genet (ribosomale 18S RNA) og i forhold til en kalibrator prøve (referanse for alle prøvene,. Kommersielt tilgjengelig normal lunge og lever Menneskelig RNA (Stratagene, La Jolla, California) Grunning for de ni gener er oppført i tabell S2.
ERCC1, RRM1 og BRCA1 genuttrykk ble undersøkt i formalinfikserte, parafininnstøpte kirurgiske prøver fra 58 pasienter i valideringen kohort. Ved hjelp av laser capture mikrodisseksjon teknikk ( Palm Micro, Oberlensheim, Tyskland) sikret et minimum på 80% av tumorvevet. Etter standard vevsprøve deparaffinization ved hjelp av xylen og alkohol, ble prøver lysert i en tris-klorid, EDTA, natriumdodecylsulfat (SDS) og proteinase K-holdig buffer. RNA ble deretter ekstrahert med fenol-kloroform-isoamylalkohol, etterfulgt av utfelling med isopropanol i nærvær av glykogen og natriumacetat. RNA ble resuspendert i DEPC vann (Ambion Inc, Austin, TX, USA) og behandlet med DNAse i (Ambion Inc) for å unngå DNA-kontaminering. cDNA ble syntetisert ved anvendelse av M-MLV retrotranscriptase enzym. Templat cDNA ble tilsatt til Taqman Universal Master Mix (Applied Biosystems) i en 12,5-pl reaksjon med spesifikke primere og prober for hvert gen. Den primer og probe-sett var identiske med de som brukes i de frosne prøvene; den endogene referansen genet var β-aktin. Kvantifisering av genuttrykk ble utført ved hjelp av ABI Prism 7900HT Sequence Detection System (Applied Biosystems).
Statistiske analyser
Medianverdier og områder ble utledet for kvantitative variabler og mRNA genuttrykk. Kvalitative variabler ble oppsummert ved hjelp av absolutte frekvenser og prosenter. Den Kruskal-Wallis test ble brukt for å se etter normalitet. Forskjeller i median mRNA uttrykk nivåer mellom histologiske typer ble vurdert av U Mann-Whitney test. Spearmans rank-korrelasjonskoeffisient (rho) ble brukt til å måle sammenhenger mellom genuttrykk nivåer. Vi gjorde en
a priori
beslutning om å klassifisere mRNA gen-uttrykk nivåer så høye eller lave, med et minimum P-verdi metoden modifisert av Lausen og Schumacher [31]. Den Bonferroni-metoden ble brukt for korrigering av effekten av multiple sammenligninger, og empiriske P for hvert gen ble bekreftet gjennom 5000 permutasjon tester. Når ingen optimal cut-off point ble funnet, brukte vi prøven median for analyse av tid til tilbakefall og overlevelse. Tid til tilbakefall og overlevelse ble beregnet ved hjelp av Kaplan-Meier estimater og forskjeller mellom kurvene ble testet ved hjelp av log-rank test. For å velge en passende undergruppe av gener for tilknytning til noen klinisk variabel (histologi, scene og klasse), utførte vi en forover og bakover Cox regresjonsanalyse. For alle beregninger, tester utført var tosidig, signifikans ble satt til 5%, og strømmen var 80%. Analysene ble utført ved hjelp av statistikkprogrammet for samfunnsvitenskap (SPSS) for Windows versjon 14 (SPSS Inc, Chicago, IL) og S-Plus 6.1 for Windows.
Resultater
median-verdier for hvert gen for hele gruppen av prøver er vist i Tabell S3. Geneamplifikasjon var ikke vellykket i et mindretall av prøvene for hver transkripsjon analysert. Det var signifikante forskjeller i uttrykk i henhold til histologi for alle gener unntatt NFAT, med høyere nivåer observert i plateepitelkarsinom enn i adenokarsinomer (tabell 2). Det var ingen forskjeller i genuttrykk i henhold til scenen (tabell S4). En sterk korrelasjon ble observert mellom ekspresjonsnivåer av forskjellige gener, for eksempel mellom nivåer av TRX og RRM1 (rho = 0,52, P = 0,0003) og mellom ERCC1 og BRCA1 (rho = 0,62, P = 0,0001) (tabell 3)
med en median oppfølgingstid på 29,7 måneder (range, 1.7-65.9 måneder), total event-free og median overlevelse har ikke blitt nådd. Når event-free og median overlevelse ble analysert i henhold til uttrykk nivåer av de ni gener, TRX og BRCA1 viste signifikante forskjeller. Overlevelse for 21 pasienter med lave TRX nivåer ikke er nådd, mens det var 32 måneder (95% KI,) for de resterende 93 pasienter med høye nivåer (P = 0,02). For 77 pasienter med lave nivåer av BRCA1, har overlevelse ikke er nådd, mens det var 22 måneder (95% KI, 14.9-29 mnd) for de med høye nivåer (P = 0,04) (tabell S5, Fig. 1 ). Overlevelse kurver i henhold til ekspresjonen av de andre syv genene er vist i figur S1. Median overlevelse for 24 pasienter med lave TRX nivåer ikke er nådd, mens det var 39 måneder for de resterende 101 pasienter med høye nivåer (P = 0,03). For 83 pasienter med lave nivåer av BRCA1, er median overlevelse ikke er blitt nådd, mens det var 29 måneder (95% CI, 22.2-35.7 mnd) for de med høye nivåer (P = 0,04) (tabell 4, fig. 1). Mediane overlevelseskurver i henhold til ekspresjonen av de andre syv genene er vist i figur S2. Men når bare scenen jeg pasienter ble undersøkt, overlevelse var signifikant forskjellig i henhold til uttrykk nivåer av MZF1 og BRCA1 (tabell S6, fig. S3), og median overlevelse var signifikant forskjellig i henhold til uttrykk nivåer av ERCC1, MZF1, Twist og BRCA1 (tabell S7, fig. S4).
Hendelses-fri (A, B) og median (C, D) overlevelse i henhold til uttrykk av TRX (A, C) og BRCA1 (B, D) .
Cox modellen valgt patologisk stadium IIIA og BRCA1 uttrykk som uavhengige prognostiske faktorer for overlevelse. Hazard ratio (HR) var 7,91 (95% KI, 2,27 til 27,54; P = 0,001) for stadium IIIA og 1,98 (95% KI, 1,11 til 6); P = 0,02) for BRCA1 uttrykk (tabell S8).
Validering av BRCA1
Median oppfølging av de 58 pasientene i valideringen kohorten var 40 måneder. Ifølge Cox modell, HR for pasienter med høye nivåer av BRCA1 var 2,4 (95% KI, 1,01 til 5,92; P = 0,04). Det var ingen stadium IIIA pasientene i denne kohorten.
Diskusjoner
genekspresjonssignaturer har vist seg å forutsi utfallet i resected stadium I NSCLC [5], [6], men bruk av mikromatriser er begrenset på grunn av behovet for ferskt frosset vev. RT-QPCR som omfatter et lite antall gener gir et praktisk alternativ, slik at for nøyaktig og reproduserbar kvantifisering av resultater for RNA oppnådd fra små mengder av parafininnstøpte prøver. Resultatene av RT-QPCR utført på fem [7] og åtte [32] gener korrelerte med utfall av NSCLC [7] og lunge adenokarsinom [32] pasienter. Vi har undersøkt uttrykk for ERCC1, BRCA1, BubR1, MZF1, RRM1, TRX1 og Tdp1, involvert i DNA reparasjon pathways, og Twist og NFAT, knyttet til metastasedannelse. I den multivariate modellen, ble bare BRCA1 og stadium IIIA identifisert som uavhengige prognostiske variabler. I en uavhengig validering kohort av 58 scene IB-IIB NSCLC pasienter, ble BRCA1 bekreftet som den eneste uavhengige prognostisk markør.
Pasienter med tumorer hadde høy BRCA1 uttrykk hadde signifikant lavere overlevelse og bør være kandidater for adjuvant kjemoterapi.
In vitro
studier har vist at BRCA1 kan regulere forskjellig sensitivitet til forskjellige klasser av kjemoterapeutika [33]. Fraværet av BRCA1 gir høy følsomhet overfor cisplatin, mens dens tilstedeværelse øker følsomheten til antimikrotubulær midler [33]. Derfor tror vi at pasienter med de høyeste uttrykk nivåer bør få antimikrotubulær, ikke-platinabasert kjemoterapi. Vi har gjennomført en pilotstudie av tilpasset adjuvant kjemoterapi basert på BRCA1 mRNA nivåer i 88 helt resected stadium II-IIIA NSCLC, der de med høyest uttrykk nivåer mottatt adjuvant docetaxel og de med lavere nivåer fikk cisplatin-basert kjemoterapi. Interimsanalysen viser at overlevelse er lik i begge gruppene. Disse funnene støtter våre tidligere funn i fase II-IIIA pasienter som fikk neoadjuvant gemcitabin /cisplatin, hvor de med høyest BRCA1 nivåene hadde en forferdelig kamp overlevelse på 12 måneder [11].
Ingen forskjeller i uttrykk nivåer av alle av de ni gener ble observert i henhold til scenen eller tumorstørrelse ( 4 vs 4 cm). Men av alle de ni gener undersøkt, bare BRCA1 viste en trend mot å påvirke overlevelse i henhold til tumorstørrelse. I stadium I NSCLC pasienter, har overlevelse blitt omvendt korrelert med tumorstørrelse [34]. I denne studien, den univariate overlevelsesanalyse viste at i tillegg til BRCA1, ERCC1 og MZF1 betydelig påvirket overlevelse i fase I (Tabell S7, Fig. S4). Disse funnene markere potensielle rolle ERCC1 og MZF1, som er høyt korrelert med BRCA1, som sterke prognostiske markører i stadium I NSCLC. Ikke uventet, imidlertid, tatt i betraktning den høye korrelasjonen mellom de ekspresjonsnivåene av disse tre genene (tabell 3), når alle tre gener ble kombinert, ble det ikke observert noen ytterligere forbedring i forhold til den prognostiske verdi av BRCA1 alene.
Selv om mekanismer som noen av de ni undersøkte gener påvirker pasientens prognose er ikke helt klart, overekspresjon av ERCC1 og RRM1 synes å være oncogen-drevet [35], [36], [37], [38], [39]. BRCA1 metylering og oppheving av BRCA1 mRNA er funnet i sporadiske brystkreft [40] men svært sjelden i NSCLC [41]. I visse sporadiske brystkreft, kan den dårlige resultatet forbundet med BRCA1 metylering og lave nivåer av ekspresjon forklares ved MYC amplifikasjon [42].
Andre studier, ved å bruke det monoklonale antistoff 8F1 [43] har rapportert at forekomsten av ERCC1 protein er en prognostisk markør for overlevelse i tidlig NSCLC og en prediktor for utfallet på adjuvant cisplatin-basert kjemoterapi; imidlertid, i en tidligere studie i magekreft [44], var det uklart hvorvidt den dårlig klinisk respons hos pasienter med tumorer hadde høyt før behandling mRNA-nivåer av ERCC1 resulterte fra tumorcelle motstand mot cisplatin-kjemoterapi eller fra en mer aggressiv tumorbiologi. Videre, i ERCC1-positive normale humane fibroblaster og celler fra pasienter med nedarvede mutasjoner i ERCC1, er ikke ERCC1 rektor antigen gjenkjent av 8F1 antistoffet på farging [45]. Videre i en annen studie, ERCC1 protein status korrelerte ikke med å overleve i stadium IV NSCLC [46], mens i en prøveversjon av tilpasset cisplatin basert på ERCC1 mRNA uttrykk, svarprosenten var 39% i kontrollgruppen og 50% i den tilpassede arm (P = 0,02) [47].
i sammendraget, vår studie viser at for det første, er BRCA1 nært knyttet til ERCC1, RRM1 og andre gener som MZF1, men skiller seg ut som den mest betydningsfulle prognostisk markør for tilbakefall . Vi hypotese at pasienter med høye BRCA1 nivåer vil dra nytte av antimikrotubulær-basert, men ikke cisplatin-basert kjemoterapi. Dernest, høye nivåer av disse transkripsjonene gi en høyere risiko for tilbakefall, i motsetning til det som er blitt rapportert av andre forskere, som understreker behovet for videre forskning på dette området for å belyse prediktiv rolle disse NER relaterte gener og til riktig tilpasse behandling (fig. S5). Selv om befolkningen i vår studie ble forskjøvet til mannlige røykere med plateepitelkarsinom, våre resultater garanterer videre undersøkelser for å bekrefte sin anvendbarhet til andre histologiske undergrupper av NSCLC, for å kaste ytterligere lys over disse problemene, planlegger vi å undersøke BRCA1, ERCC1 , MZF1 og RRM1 uttrykk i 200 vevsprøver fra ANITA studien [3] og i 620 pasienter inkludert i den spanske Lung Cancer Gruppe natch utprøving av neoadjuvant vs adjuvant kjemoterapi vs kirurgi alene.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
overlevelse i henhold til uttrykk av ERCC1 (A), MZF1 (B), Twist (C), RRM1 (D), Tdp1 (E), NFAT (F), og BubR1 (G)
doi: 10,1371 /journal.pone.0001129.s001 plakater (0,09 MB TIF)
Figur S2.
Median overlevelse i henhold til uttrykk av ERCC1 (A), MZF1 (B), Twist (C), RRM1 (D), Tdp1 (E), NFAT (F), og BubR1 (G)
doi: 10,1371 /journal.pone.0001129.s002 plakater (0,09 MB TIF)
Figur S3.
overlevelse kurver for stadium I pasienter i henhold til genuttrykk nivåer av de ni gener undersøkt
doi: 10,1371 /journal.pone.0001129.s003 plakater (0,10 MB TIF)
Figur S4.
Median overlevelseskurver for stadium I pasienter i henhold til genuttrykk nivåer av de ni gener undersøkt
doi: 10,1371 /journal.pone.0001129.s004 plakater (0,10 MB TIF)
Figur S5.
sprikende funn fører til motsatte strategier for å tilpasse adjuvant kjemoterapi. Olaussen et al (NEJM 2006; 355: 983-991) rapporterer at mangel på ERCC1protein innebærer en høyere risiko for tilbakefall og en større følsomhet for cisplatin-basert kjemoterapi. (Cisplatin følsomhet basert på manglende ERCC1 uttrykk har blitt vist i prekliniske og kliniske studier.) Våre funn tyder på at en høyere risiko for tilbakefall er knyttet til høye nivåer av flere utskrifter, inkludert ERCC1. Disse pasientene kan være motstandsdyktig mot cisplatin og følsomme for taxaner eller andre antimikrotubulær narkotika
Doi: 10,1371 /journal.pone.0001129.s005 plakater (0,13 MB TIF)
Tabell S1.
Pasient kjennetegn for rektor kohort (N = 126) og for validering kohort (N = 58)
doi: 10,1371 /journal.pone.0001129.s006 plakater (0,04 MB DOC)
Tabell S2.
Primere og prober for de ni gener undersøkt
doi: 10,1371 /journal.pone.0001129.s007 plakater (0,03 MB DOC)
tabell S3.
Relativ genekspresjon verdier
Doi: 10,1371 /journal.pone.0001129.s008 plakater (0,03 MB DOC)
Tabell S4.
Gene uttrykket i henhold til sykdomsstadiet
doi: 10,1371 /journal.pone.0001129.s009 plakater (0,04 MB DOC)
Tabell S5.
overlevelse i henhold til genuttrykk nivåer
Doi: 10,1371 /journal.pone.0001129.s010 plakater (0,06 MB DOC)
Tabell S6.
overlevelse i stadium I pasienter i henhold til genuttrykk nivåer
Doi: 10,1371 /journal.pone.0001129.s011 plakater (0,06 MB DOC)
Tabell S7.
Median overlevelse for stadium I pasienter i henhold til genuttrykk nivåer
Doi: 10,1371 /journal.pone.0001129.s012 plakater (0,06 MB DOC)
Tabell S8.
multivariat Cox modell for å overleve, viser en større risiko for død hos pasienter med høye nivåer av BRCA1 og for de med stadium IIIA sykdom
doi: 10,1371 /journal.pone.0001129.s013 plakater (0,03 MB DOC )
Tekst S1.
Nærmere om de ni gener undersøkt
doi: 10,1371 /journal.pone.0001129.s014 plakater (0,09 MB DOC)
