Abstract
Bakgrunn
metylering nivåer av lange ispedd nucleotide elementer (LINE-1) er representative for genome-wide metylering status og avgjørende for å opprettholde genomisk stabilitet og uttrykk. Deres prognostisk betydning for tykktarmskreftpasienter som får adjuvant kjemoterapi har ikke vært godt etablert. Vi har evaluert assosiasjonen mellom LINE-en metylering status og clinicopathologic funksjoner og postoperative onkologiske resultater i fase III tykktarmskreftpasienter.
Materialer og metoder
129 UICC stadium III tykktarmskreftpasienter som hadde fått radikal reseksjon og FOLFOX adjuvant kjemoterapi ble inkludert. Global metylering ble estimert ved å analysere tumor LINE-en metylering status ved hjelp av bisulfitt-polymerase kjedereaksjon (PCR) og pyrosekvensering assay. Demografi, clinicopathological data og postoperative utfall ble registrert av opplært abstractors. Utfallet målinger inkludert postoperativ tilbakefall og sykdomsfri overlevelse. Univariate, multivariat, og overlevelse analyser ble utført for å identifisere prognostiske faktorer av onkologiske resultater.
Resultater
LINE-en metylering av alle 129 pasienter ble målt på en 0-100 skala (gjennomsnittlig 63,3 ; median 63,7, standardavvik 7,1), LINE-en hypometylering var mer vanlig hos pasienter i alderen 65 år og oppover (61,7% ± 7,6% vs. 64,6 ± 6,4,
p
= 0,019) og de med post- terapeutisk tilbakefall (61,7 ± 7,4 vs 64,3 ± 6,7,
p
= 0,041). Tatt i betraktning risikojustering ble LINE-en hypometylering funnet å være en uavhengig risikofaktor for post-terapeutisk tilbakefall (Justert OR = 14,1,
p
= 0,012). Kaplan-Meier analyse indikerte at pasientene i lav metylering gruppen hadde kortere sykdomsfri overlevelse (
p
= 0,01). I en stratifisert analyse som inkluderte 48 pasienter med post-terapeutisk tilbakefall, ble det funnet at de som opplevde kortere sykdomsfri overlevelse (≦ seks måneder) så ut til å ha lavere LINE-1 metylering nivåer enn pasienter som rapporterte for tilbakefall etter 6 måneder (56,68 ± 15,75 vs 63,55 ± 7,57,
p
= 0,041)
Konklusjon
Det var en betydelig større risiko for tidlig postoperativ tilbakefall og en kortere periode sykdoms- overlevelse i Stage III tykktarmskreftpasienter stiller LINE-en hypometylering status etter å ha blitt behandlet med radikal reseksjon og FOLFOX kjemoterapi
Citation. Lou YT, Chen CW, Vifte YC, Chang WC, Lu CY, Wu IC, et al. (2015) LINE-en Metylering Status korrelerer sterkt til Post-Terapeutisk Regelmessighet i Stage III tykktarmskreft pasienter som fikk FOLFOX-4 adjuvant kjemoterapi. PLoS ONE 10 (4): e0123973. doi: 10,1371 /journal.pone.0123973
Academic Redaktør: John Souglakos, Universitetet i Kreta, Hellas
mottatt: 07.10.2014; Godkjent: 24 februar 2015; Publisert: 28 april 2015
Copyright: © 2015 Lou et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. Denne studien ble støttet av Kaohsiung Medical University Research Foundation (KMU-1M-30), Senter for Biomarkører og Biotech Drugs, Kaohsiung Medical University (KMU-TP103C03 , KMU-TP103H11), og Grant Biosignature i kolorektal kreft, Academia Sinica, Taiwan. CWC og JYW mottatt finansiering. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Det har vært en jevn økning i tykk- og endetarmskreft (CRC) tilfeller over hele verden de siste årene. Ifølge GLOBOCAN estimater presentert i 2008, er CRC den tredje vanligste kreftformen hos menn og den nest vanligste hos kvinner [1]. På grunn av spredning av usunt kosthold og livsstil i Taiwan, har CRC blitt den tredje vanligste årsaken til kreftrelaterte dødsfall. I de senere årene har mer enn 4000 CRC pasienter døde årlig (https://www.doh.gov.tw/statistic/index.htm, åpnes i desember 2013). Nylige forbedringer i svulstdeteksjon og adjuvant behandling har imidlertid økt levealder av CRC pasienter [2]. Men til tross for kurativ kirurgi og adjuvant kjemoterapi, er det fortsatt et betydelig antall pasienter som møter tumorresidiv under oppfølgingsperioden. Mange postoperative overvåkingsprogrammer er blitt foreslått for å detektere muligheten for tilbakefall på et tidlig stadium. Medisinske forskere har også nådd en enighet om rutinemessige overvåkingen av stadium II og III CRC pasienter som har blitt behandlet med kurativ kirurgi [3-5]. Samtidig er det mange forskere fortsette å søke etter sofistikerte biomarkører som er i stand til effektivt å detektere asymptomatisk tilbakefall av CRC etter operasjonen. I dag, noen biomarkører er lovende, men fortsatt langt fra å være assessable hos de fleste pasientene. I mellomtiden, merking av høyrisikogrupper som er utsatt for tilbakefall ser ut til å være en annen taktikk blant de intensive postoperativ overvåking strategier som brukes i disse mottakelige populasjoner.
CRC utvikler på grunn av genetiske og epigenetiske forandringer. I det siste tiåret, har mange studier undersøkt hvilken rolle epigenetiske faktorer i utviklingen av CRC hos pasienter [6,7]. Epigenetikk, som har blitt beskrevet som en bro mellom genetikk og miljø, er blitt funnet å ha en nær relasjon med kreft biologi [8,9]. Epigenetiske forandringer kan være arvelig, men disse faktorene er også reversible og kan vise seg å være nyttig i å belyse mange tvetydige aspekter ved kreftutvikling og tumor tilbakefall i CRC pasienter. Videre, siden epigenetiske hendelser kan reverseres, er vi i stand til å regulere prosessen med kjemisk modifikasjon, inkludert potensiell anti-neoplastisk aktivitet [7,10].
Blant ulike epigenetiske hendelser, er DNA metylering en viktig del av epigenetikk i pattedyrgenomet som resulterer i tilsetning av et metyl- (CH
3) gruppe i karbon-5-stillingen av cytosin ring. To store metylering mønstrene hyppig observert i CRC: en er hypermethylation, som vanligvis innebærer CpG øyer, og den andre er hypometylering, noe som ofte innebærer gjentatte DNA sekvenser [6,8]. Selv om rapporter om hypermethylation i maligniteter tallmessig rapporter om hypometylering, synes sistnevnte å ha blitt et tema for intens etterforskning i de senere år [9,11]. I tillegg kunne metylering nivåer bli påvirket av prøvetakingsteknikker, tumor steder, miljømessige faktorer, og pasientens alder [9,12-15].
Globalt DNA hypometylering kan føre til genetisk ustabilitet. Dens nært forhold til en rekke kreftformer, inkludert CRC, har blitt rapportert i tidligere studier [6,7,9]. Retroelements, gjentatte sekvenser av lange ispedd kjerneelementene-1 (LINE-1), forekommer i nesten 18% av det menneskelige genom [16]. Disse retroelements kan forårsake skadelige virkninger i vertscellen, men det er generelt inhiberes av undertrykkende mekanismer. Imidlertid kan retroelements bidra til tumorigenesis i ulike settinger. Globalt metylering kan måles indirekte ved å vurdere metylering status for LINE-1 [17]. Tidligere studier har vist at pyrosekvensering analyse for LINE-en metylering er kvantitativ, effektiv og reproduserbar [18-20].
Nylig har mange epigenetiske studier belyst forholdet mellom LINE-en metylering og kreft. Det har vært antydet at graden av LINE-en hypometylering fungerer som en selvstendig faktor i å bestemme ugunstige onkologiske resultater i CRC pasienter [18,21,22]. Ogino et al. fant at LINE-en hypometylering er en uavhengig risikofaktor, noe som indikerer høy kreftspesifikk dødelighet og total dødelighet i kolon kreftpasienter [21]. Sunami et al. rapporterte også at det er en lineær sammenheng mellom progresjon av LINE-en metylering og tumorprogresjon [23]. Goel et al. rapportert at arvelig nonpolyposis tykktarmskreft (HPNCC) var assosiert med lavere grad av LINE-en metylering [24]. I tillegg har noen studier funnet at tidlig debut CRC er assosiert med lavere LINE-metylering og har markert sin potensielle rolle som en prognostisk biomarkør hos yngre CRC pasienter [18,25]. Imidlertid har mange forskere foreslått LINE-en som en lovende markør for å forutsi CRC prognose. Derfor bør mer pasient og behandlingsrelaterte confounders kontrolleres for å generere mer overbevisende konklusjoner, særlig i lys av moderne strategier som synliggjør skreddersydd behandling for ulike stadier av CRC.
Følgelig, i denne studien, har vi fokusert utelukkende på Stage III tykktarmskreft befolkningen. Vi undersøkte tumor LINE-en metylering status for stadium III tykktarmskreftpasienter etter at de ble behandlet med radikal reseksjon og FOLFOX adjuvant kjemoterapi. I denne studien ble spesiell oppmerksomhet til deres onkologiske resultater, inkludert postoperativ tilbakefall og kreftspesifikk dødelighet. Ved å kontrollere andre potensielle prognostiske faktorer, søkte vi å undersøke den prognostiske betydningen av LINE-en metylering i fase III tykktarmskreftpasienter.
Materialer og metoder
Etikk uttalelse
studien ble godkjent av Institutional Review Board of Kaohsiung Medical University Hospital (KMUHIRB-20120043) i Kaohsiung, Taiwan. Alle deltakerne i denne studien inngikk informert-samtykkeskjema.
forsøkspersonene
Vi retrospektivt anmeldt registreringer av alle kolon kreftpasienter som ble kirurgisk behandlet ved Kaohsiung Medical University Hospital mellom januar 2008 og juli 2012. totalt 150 stadium III tykktarmskreftpasienter som gjennomgikk radikal reseksjon og påfølgende FOLFOX adjuvant kjemoterapi ble først meldt. Fjorten pasienter ble ekskludert som optimale vevsprøver var utilgjengelig. Blant de resterende 136 pasienter, sju ble ekskludert fordi pasientens kliniske data var ufullstendig. Dermed totalt 129 pasienter kvalifisert for den endelige analysen (figur 1). Alle pasientene fikk regelmessig oppfølging med 2-3 måneders intervaller til død eller slutten av juni 2013.
Postoperativ adjuvant kjemoterapi
Alle deltakerne i studien fikk adjuvant FOLFOX-4 kjemoterapi i henhold til senterets retningslinjer for kreftbehandling. Følgende protokoll ble brukt for å administrere FOLFOX-4 kjemoterapi: oksaliplatin 85 mg /m
2 ble tilført i en to-timers periode på dag 1; folinsyre 200 mg /m
2 ble tilført samtidig med oksaliplatin løpet av en to-timers periode på dag 1, etterfulgt av en bolus 5-FU 400 mg /m
2; deretter en kontinuerlig infusjon av 5-FU 600 mg /m
2 ble gitt over 22 timer. Denne protokollen ble gjentatt annenhver uke × 12 sykluser.
Klinisk datainnsamling
Pasient egenskaper, som alder, kjønn, tumor plassering, og clinicopathological funksjoner, ble hentet fra elektronisk pasientjournal og kliniske diagrammer . Clinicopathological funksjoner og stadier av primære svulster ble definert ved hjelp av kriteriene foreslått av theAmerican Joint Commission on Cancer /Union for International Cancer Control (AJCC /UICC) [26]. Histologi karakterer ble klassifisert som følger: godt differensiert (WD), moderat differensiert (MD), eller dårlig differensiert (PD). Som rapportert i en tidligere studie, ble tumor steder kategorisert som proksimalt eller distalt til milt bøyning [27]. Vaskulær invasjon, perinevral invasjon, tumor invasjon dybde, og lymfeknutemetastase ble faktorer spesielt kategorisert før ytterligere sammenligning ettersom hver faktor ble betraktet som en uavhengig risikofaktor [28-31].
Genomisk DNA
Disse formalinfiksert, parafininnebygd (FFRE) eksemplarer innhentet fra 129 pasienter ble anmeldt for å identifisere de representative områder av kreft. FFPE- vevsblokker ble microdissected å erverve 10 mikrometer seksjoner fra hver prøve. Bisulfite behandling av tumor DNA ble deretter utført med en EpiTech bisulfit kit (Quiagen, Valencia, CA) i henhold til produsentens protokoll.
pyrosekvensering for å måle LINE-en metylering
I tillegg til de nevnte natriumbisulfitt DNA konverteringsprosessen (EpiTech bisulfite Fast FFPE- Kits, Qiagen, No.59844), den pyrosekvensering analyser også omfattet polymerase chain reaction (PCR) forsterkning (Pyromark PCR Kit, Qiagen, No.978703) og sekvensering av målet sekvens ved syntese analyse (Pyromark gull Q24 reagenser, Qiagen; No.970802). Denne analysen forsterker en region av LINE-1 element. PCR-betingelsene var 45 sykluser med 95 ° C i 20 s, 50 ° C i 20 s, 72 ° C i 20 sekunder, etterfulgt av 72 ° C i 5 minutter. De LINE-1 metylering resultater ble oppnådd på en kontinuerlig skala fra 1-100 ved bruk av pyrosekvensering analysen.
Utfall målinger
Utviklingen av postoperative kreft tilbakefall og sykdomsfri overlevelse (DFS) ble brukt som viktige endepunkter for å sikre at årsaks slutninger om observerte utfallet ble i hovedsak tilskrives kreft. Utviklingen av et nytt lokalt tilbakefall eller fjernt metastatiske lesjoner etter operasjonen ble ansett som postoperative tilbakefall. Mens beregning DFS resultater, ble tilfeller av postoperativ mortalitet som har skjedd i løpet av 30 dager utelukket. Personer som døde av andre enn CRC årsaker ble også ekskludert fra resultatet analyse. Med hensyn til behandlingsresultatet for FOLFOX regime, ble DFS definert som tiden gått fra initiering av FOLFOX kjemoterapi til gjentakelse.
Statistical Analysis
Dataene ble analysert ved hjelp av statistikkprogrammet samfunnsvitenskap, versjon 17.0 (SPSS. Inc., Chicago, IL). Student t-test, Pearson chi-kvadrat test, Fishers eksakte test, og Kruskal-Wallis test ble brukt for å sammenligne demografiske og clinicopathological funksjoner mellom gruppene i henhold til deres ulike utfallet målinger. Alle variablene ble ytterligere dikotomisert for å generere ujusterte odds ratio i univariate analysen som ble utført senere. Multippel logistisk regresjonsanalyse ble utført for å identifisere variabler som var signifikant relatert til sannsynligheten for svulst tilbakefall eller kreft-spesifikke overlevelse. Regresjonsmodeller ble kontrollert for effekten av konfunderende variabler. Resultater av logistisk regresjonsanalyse ble rapportert som justert odds ratio (OR) med 95% konfidensintervall (KI). Den sammenlignende evaluering av langsiktige resultater ble utført ved å analysere overlevelseskurver ved hjelp av Kaplan-Meier metoden. Kurver for DFS ble sammenlignet med Log-rank test. Alle testene av betydning to tailed, og
P
-verdier 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.
Resultater
Clinicopathological kjennetegn ved pasientpopulasjonen
Gjennomsnittlig alder ved kirurgi for disse 129 pasientene var 61,6 år (range, 30-87 år ), og 81 pasienter var menn (62,8%). Clinicopathological funksjoner er beskrevet i tabell 1. Alle pasientene ble behandlet med FOLFOX adjuvant kjemoterapi. Median oppfølgingstid var 24 måneder (IQR: 16,9 til 36). Tumorresidiv ble rapportert av 48 pasienter, mens 34 pasienter døde i løpet av oppfølgingsperioden.
LINE-en metylering analyse
Selv om LINE-en metylering nivåer i de 129 colonic svulster (fig 2) ble utbredt (range, 37,4 til 77,9 på en 0-100 skala), har de fortsatt viste normalfordeling (Kolmogorov-Smirnov test;
P
0,05). Gjennomsnittlig LINE-en metylering nivå i stigende, tverrgående, synkende, sigmoid tykktarm og endetarm, var 66,41 ± 5,23%, 60,71 ± 7,26%, 61,53 ± 10,45%, 63,32 ± 6,34%, 61,33 ± 8,05%, henholdsvis. Metylering nivået var signifikant høyere i stigende kolon forhold til andre nettsteder. (
p
= 0,042) Gjennomsnittlig LINE-en metylering nivå i overlevelse gruppen var 63,8 ± 6,6% versus 61,9 ± 8,2% i dødelighet gruppe (
p
= 0,164). Med hensyn til postoperativ tumorresidiv var gjennomsnittlig LINE-en metylering nivået var signifikant lavere i tilbakefall gruppen sammenlignet med ikke-gjentakelse gruppen (61,7 ± 7,4% vs. 64,3 ± 6,7%;
p
= 0,041) . Fordi det ikke er universelt akseptert terskel for å definere om LINE metylering nivå er optimal eller unormal, vi delt nivåene av metylering i to grupper ved hjelp av en mottaker som opererer karakteristikk (ROC) analyse med balansert sensitivitet og spesifisitet. verdi cutoff var 70,15% som området under kurven (AUC) var 0,593.
Univariat analyse av LINE-en metylering nivå
Vi undersøkte LINE-1 metylering nivåer i de ulike gruppene kategorisert etter de variablene som er oppført i tabell 1. for en bedre sammenligning, alder ble dikotomisert i to grupper, med en cut-point verdi på 65 år. Som vist i tabell 2, i univariat analyse som omfatter ni variabler, ble LINE-1 metylering nivåene vist seg å være vesentlig forskjellig mellom gruppen i alderen 65 år og oppover, og aldersgruppen under 65 år (64,6% versus 61,7%, henholdsvis;
p
= 0,019).
univariat og multivariat analyse av utfallet målinger
Tabell 3 viser resultatene av den univariate og multivariate analyser med hensyn til utfallet målinger av post-terapeutisk tilbakefall. De histologiske karakterene ble delt inn i to grupper, en som omfatter godt differensiert (WD) og moderat differensiert (MD) prøver, og de andre som utgjør dårlig differensiert (PD) prøver. Med hensyn til et begrenset antall T1 tilfeller ble T-stadier dikotomisert inn i «T1 + T2» og «T3 + T4» grupperinger. De LINE-1 metylering nivåer ble dikotomisert til «lav» versus «høy» grupper i henhold til en grenseverdi på 70,15% generert av vår forrige ROC analyse. Deretter ble logistisk regresjon anvendt med fremover utvalg. LINE-en metylering syntes å være den eneste uavhengige prognostiske faktoren for onkologisk utfallet av post-terapeutisk tumorresidiv (Justert OR = 14,1,
p
= 0,012).
Survival analyse
oppfølgingsdata var tilgjengelig for alle de 129 deltakerne. Median overlevelse perioden var 25 (IQR: 19-40) måneder for pasienter som overlevde, 19,1 (IQR: 12.9-26.7) måneder for pasienter som døde, og 24 (IQR: 16,9 til 36) måneder for den totale kohorten. For å vurdere prognostiske implikasjoner av LINE-en metylering, fokuserte vi på postoperativ tilbakefall og DFS etter å ha tatt hensyn til resultatene av multivariat analyse. Kaplan-Meier metoden viste at flere tilfeller av postoperativ tilbakefall og en kortere gjennomsnittlig DFS ble registrert i lav LINE-en metylering gruppe (fig 3,
p
= 0,010).
Kurvene som viser effekter på postoperativ tilbakefall av LINE-en metylering da delt inn i pasienter med «lav» versus «høy» metylering.
Influence of LINE-en metylering nivå på DFS i pasienter med post-terapeutisk tilbakefall
Basert på bevis om kortere gjennomsnittlig DFS i lav LINE-en metylering gruppe, hypotese vi at det er noen sammenheng mellom LINE-en metylering nivå og DFS i tilbakefall gruppen. For å detektere terskelen til DFS forårsaker betydelige forskjeller i LINE-en metylering nivåer, innførte vi fire empiriske terskler av DFS (3, 6, 9 og 12 måneder) og dikotomisert alle tilbakefall pasienter til «tidlig tilbakefall» (DFS kortere enn eller lik terskelen) og «sen recurrence2010043 (DFS lengre enn terskel) grupper. Når terskelen til DFS er seks måneder, tidlig tilbakefall gruppen viste seg å ha en betydelig lavere gjennomsnittlig LINE-en metylering nivå (tabell 4).
Diskusjoner
Viktige funn av studien
i denne studien, viste vi at LINE-1hypomethylation er assosiert med høyere postoperativ tilbakefall og en kortere DFS i stadium III tykktarmskreftpasienter, som har gjennomgått radikal kirurgi og påfølgende FOLFOX kjemoterapi. Tidligere studier har rapportert at CRC pasientenes tumorprogresjon, overlevelse, eller tilbakefall kan variere i henhold til nivået av LINE-en metylering [21,23,32]. Likevel, som disse studiene inkluderte ulike befolkningen og ulike behandlingsprosedyrer, var det tydelig heterogenitet i sine funn. Vi bare vurdert de prognostiske implikasjoner av LINE-1 metylering nivåer på en homogen befolkning bestående stadium III tykktarmskreftpasienter som hadde fått radikal reseksjon og FOLFOX adjuvant kjemoterapi. Våre resultater bekrefter de tidligere rapporterte funnene av Ahn et al. på den prognostiske påvirkning av LINE-en hypometylering på resected scenen III CRC pasienter [33]. De understreket at DNA hypomethyaltion var en mulig biomarkør for tilbakefall hos proksimale men ikke i distale CRC tilfeller. Ved å inkludere confounder justeringer, for eksempel svulst plassering (proksimale versus distal) i vår studie fant vi at lav LINE-en metylering nivåer (under 70.15) fortsatte å være en robust risikofaktor å ha omtrent åtte ganger av postoperativ tilbakefall risiko.
Forholdet mellom LINE-en metylering og det sekundære plasseringene av svulster
de to-colon konseptet er konvensjonelt brukes til å indikere diskrete molekylære funksjoner via dichotomous klassifisering av proksimale og distale colonic svulster. I tidligere studier har kromosom ustabilitet (CIN) blitt mer vanlig observert i distale CRC [34]. På den annen side mikrosatelitt ustabile (MSI) og
BRAF mutasjoner
er mer vanlig hos proksimale CRC [35-37]. Imidlertid Yamauchi et al. nylig funnet ut at frekvensene av høy CpG island methylator fenotype (CIMP), MSI-høy, og
BRAF
mutasjoner gradvis øke fra endetarmen til tykktarmen [38]. Dette funnet dypt utfordret det konvensjonelle konsept for to-kolon-modell som har vært brukt i flere tiår. I våre egne data, selv om vår sammenligning av LINE-1 metylering nivåer i høyresidig og venstresidig tykktarmskreftpasienter indikerte border statistisk signifikans, observerte vi at gjennomsnittlig metylering nivået var signifikant høyere i stigende colontumorer forhold til de i andre områder . Vi anbefaler at de stedsspesifikke confounders bør alltid vurderes mens gjennomføre undersøkelser på genetiske eller epigenetiske forandringer.
Definisjonen av hypermethylation eller hypometylering
Selv om en økende mengde bevis støtter prognostisk betydning av LINE-en metylering, en terskel å definere hvorvidt det målte metylering nivået hypermethylated eller hypomethylated har ennå ikke etablert. Saito et al. observerte den prognostiske betydningen av LINE-en metylering på ikke-småcellet lungekreft holde en høy terskel på 90% [39]. Antelo et al. definert LINE-en hypometylering hos unge CRC pasienter som bruker en grenseverdi på 65%, og uttalte at de pasientene som hadde 65% LINE-en metylering hadde dårligere total overlevelse [18]. I vår studie har vi kategorisert de LINE-1methylation nivåer i høyt og lavt nivå grupper basert på tidligere forskernes konsepter [40,41]. For å nøyaktig identifisere en optimal verdi cutoff for LINE-en metylering hos pasienter som rapporterer svulst tilbakefall etter radikal CRC kirurgi, så gjennomførte vi ROC analyse. For de kontinuerlige data oppnådd fra disse prøver, ble arealet under kurven (AUC) funnet å være 0,593, og 70,15% ble betraktet som den grenseverdi på metylering var med balansert sensitivitet og spesifisitet. Med en høyere grenseverdi og dårligere diskriminerende ytelse, vår resultatet var litt forskjellig fra det som ble rapportert i forrige undersøkelse av Baba et al [25]. I en heterogen populasjon som omfatter CRC for alle trinn, oppnås de en bedre AUC på 0,62 ved å betrakte en grenseverdi på 60%. Likevel, det er rom for forbedring diagnostisk ytelse som mer store studier må være basert på stratifisert populasjoner og ulike kreft steder.
LINE-en metylering variasjon i CRC med og uten tilbakefall
Mange forskerne har entusiastisk fortsatte å utforske den mekanismen som LINE-en metylering er assosiert med onkologiske resultater. Hypometylering av LINE-1 resulterer i transcriptional aktivering av mulig kreftutvikling [9,16]. Et forsterket ekspresjon av LINE-1 etter hypometylering kan resultere i kromosomal ustabilitet (CIN), som er blitt betegnet som et karakteristisk fenotype i mer invasive kreftformer som har dårligere prognose [13,16]. Videre Hur et al. nylig rapportert at det har vært bevis for å bevise at LINE-en hypometylering fungerer som en viktig funksjon i CRC metastaser, særlig ved nedsatt levermetastaser [42]. Dette er i god overensstemmelse med den statistisk signifikant forskjell mellom de LINE-1 metylering nivåer av tilbakefall og ikke-tilbakefall grupper av vår studie (tabell 2). Blant de 48 tykktarmskreft tilbakefall i vår studie kohort, var det 14 tilfeller av levermetastaser. Imidlertid gjorde de LINE-1 metylering nivåer av tykktarmskreftpasienter med levermetastaser ingen signifikant forskjell i forhold til de med andre tilbakefall. I motsetning til de perspektiver av tidligere forskere har vi vist en avgjørende funn at LINE-en hypometylering har noen innflytelse på tidlig tilbakefall (DFS kortere enn 6 måneder) i kohort som til slutt opplevde tilbakefall. Disse resultatene understreker den avgjørende rollen LINE-en metylering i utviklingen av tykktarmskreft tilbakefall, spesielt tidlig tilbakefall. Derfor er det nødvendig å tenke ut hyppige og tidlig overvåkingsstrategier for å styre postoperativ oppfølging av pasienter som tilhører hypometylering gruppen.
Begrensninger
Flere begrensninger må vurderes mens tolke funnene i vår studie. Først noen innflytelsesrike faktorer av global metylering kan ikke kontrolleres. Fordi studiepopulasjonen ikke ble prospektivt rekruttert, kan visse miljøfaktorer eller pasientrelatert informasjon ikke tas opp på kirurgi. For eksempel har ioniserende stråling, røyking og fysisk aktivitet er rapportert å forårsake variasjoner i LINE-en metylering [43-45]. For å unngå å introdusere flere tilbakekallings skjevheter, gjorde vi ikke prøve å kontrollere disse potensielle confounders i vår studie. Videre på grunnlag av denne studien kan det være etisk uakseptabelt å gjennomføre en studie som randomiserer pasienter med eller uten behandling med FOLFOX adjuvant kjemoterapi. Vi foreslo at metylering status kunne brukes som en lagdeling faktor. For det andre er antall av deltagerne begrenset og ekskludert befolkningen er fortsatt betydelig. Den ekskluderte del kan ha noen innvirkning på det samlede resultatet hvis de ble også registrert. I tillegg kunne følge opp varighet forlenges for å belyse den prognostiske innvirkning på kreftspesifikk dødelighet. Til tross for disse begrensningene, var vi i stand til å vise at de clinicopathologic funksjonene var tydelig og prognoser var forskjellig for de metylering undergrupper dannet fra en homogen asiatiske befolkningen.
Konklusjon
Våre resultater tyder på at til tross for å bli behandlet med radikal kirurgi og FOLFOX adjuvant kjemoterapi, scene III tykktarmskreftpasienter med LINE-en hypometylering oppstått tidlige postoperative tilbakefall og kortere DFS.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 datasett. Detaljer om de 129 deltagerne
doi:. 10,1371 /journal.pone.0123973.s001 plakater (XLS)
Takk
Forfatterne takker Ming-Yii Hwang for å gi nyttig forslag på tidligere versjoner av dette manuskriptet.
