Abstract
En funksjonell kobling av de strukturelt urelaterte reseptorer HER2 og CXCR4 har blitt foreslått for brystkreft, men har ikke blitt evaluert for esophageal kreft. Inhiberingen av HER2 fører til en reduksjon av primær tumorvekst og metastaser i en ortotopisk modell av spiserørskreft. Kjemokinreseptoren CXCR4 har vært innblandet i metastatisk spredning av ulike svulster og korrelerer med dårlig overlevelse i esophageal carcinoma. Målet med denne studien var å undersøke en sammenheng mellom uttrykk nivåer av HER2 og CXCR4 og å vurdere involvemnent av CXCR4-uttrykk i HER2-positiv esophageal kreft. Virkningene av HER2-hemming med trastuzumab og av CXCR4-hemming med AMD3100 på primærtumorvekst, metastatisk homing, og reseptor uttrykk ble evaluert
in vitro Hotell og i en orthotopic modell av metastatisk spiserørskreft ved hjelp av MRI for bildebehandling. Den kliniske relevansen av HER2- og CXCR4-uttrykk ble undersøkt i esophageal carcinoma pasienter. En signifikant korrelasjon av HER2- og CXCR4-uttrykk i primærtumor og metastaser eksisterer i orthotopic modell. Trastuzumab og AMD3100 behandling førte til en betydelig reduksjon av primær tumorvekst, metastaser og mikrometastaser. HER2-ekspresjon ble betydelig forhøyet i henhold AMD3100 behandling i primærtumor og spesielt i metastaser. Den positive sammenhengen mellom HER2- og CXCR4-uttrykk ble validert i esophageal kreftpasienter. Korrelasjonen av CXCR4- og HER2-uttrykk og heving av HER2-uttrykk og reduksjon av metastaser gjennom CXCR4-hemming antyder en mulig funksjonell kobling og en rolle i tumorspredning i HER2-positiv esophageal carcinoma
Citation.: Gros SJ, Kurschat N, Drenckhan A, Dohrmann T, Forberich E, Effenberger K, et al. (2012) Involvering av CXCR4 kjemokinreseptoren i Metastastic HER2-positiv Esophageal Cancer. PLoS ONE 7 (10): e47287. doi: 10,1371 /journal.pone.0047287
Redaktør: Ming Tan, University of South Alabama, USA
mottatt: 10. august 2012; Akseptert: 14. september 2012; Publisert: 17 oktober 2012
Copyright: © Gros et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Arbeidet har vært støttet av tilskuddet GR 3484 /1-1 i Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. Forfatterne har følgende interesse: Robert M. Hoffman er assosiert med antikreft, Inc . Dr. Pantel er en Godtgjørelse med Roche og sakkyndig med Genentech. Det finnes ingen patenter, produkter under utvikling eller markedsført produkter å erklære. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer, som beskrevet på nettet i veiledningen for forfatterne.
Innledning
Den menneskelige epitelial vekstfaktor reseptor familie ( HER, ErbB) av reseptor-kinaser spiller en viktig rolle i tumorvekst og progresjon [1]. Blant disse reseptorene, er HER2 den sterkeste oncogen og er funnet å bli forsterket og overuttrykkes i omtrent 20% av bryst-kreft [2] I brystkreft HER2 er kjent for å være assosiert med dårlig prognose og metastaser [3], [4]. HER2-overuttrykk og forsterkning er rapportert i kreftfaren med en tendens mot høyere priser av positivitet i adenokarsinom [5] – [10] sammenlignet med plateepitelkarsinom [6], [7], [11] – [13] Hotell
En sterk samstemmighet av HER2 status i grunnskolen og metastatisk esophageal adenokarsinom med høyt nivå HER2 gen amplifisering blitt observert, noe som tyder på esophageal kreftpasienter med HER2-positiv primære svulster som kandidater for trastuzumab behandling [14]. HER2 er kjent for å øke den metastastic potensialet i murine og humane kreftcellelinjer [15] – [18]
Med trastuzumab (HERCEPTIN) et antistoff-basert terapi eksisterer som med hell brukes klinisk for målretting HER2 i. metastatisk HER2-positiv brystkreft [3], [19] – [21]. Trastuzumab programmet har også en dramatisk effekt i HER2-positiv brystkreft pasienter som adjuvant behandling [22]. Det er også bevis for en mulig reaksjon av HER2-positiv, ikke-bryst kreft (for eksempel magekreft) for å trastuzumab [23], [24].
En betydelig reduksjon av primær tumorvekst og metastatisk spredning har tidligere Det er rapportert i en ortotopisk modell av HER2-positiv esophageal adenokarsinom etter behandling med trastuzumab [25]. Det har vist seg at HER2- signalering i brystkreft forbedrer ekspresjonen av CXCR4, som er nødvendig for HER2-mediert invasjon [26]. Den chemokine CXCR4 har blitt foreslått å spille en viktig rolle i tumorceller homing til lymfeknuter og beinmarg i spiserørskreft [27]. Ekspresjon av CXCR4, korrelerte signifikant med generell og tumor-spesifikke overlevelse i esophageal carcinoma og er assosiert med dårlig prognose [27]. En korrelasjon på CXCR4 og HER2 og mulig funksjonell rolle i samspillet mellom deres veier, men har ikke blitt undersøkt for adenokarsinom i spiserøret.
Kjemokiner er en super små cytokin-lignende peptider [28], [ ,,,0],29]. Gjennom samhandling med kjemokinreseptorer, chemokiner indusere cytoskeletal omorganisering av hematopoetiske celler, øke vedheft, og direkte migrering til hjemme spesifikke organer. Kjemokin reseptorer er G-protein-koblede reseptorer CXCR4 og er en av de best karakterisert reseptorer. CXCR4 og dens ligand SDF-1α spiller en viktig rolle for å målrette brystcancermetastaser [30], [31]. Kjemokinet SDF-1α frigjøres i store mengder ved organer som lunge, ben og lever. Tiltrekningen av SDF-1α og CXCR4 forårsaker brystkreft celler til å migrere inn i disse organene, hvor de sprer og skjema metastastes [30], [31].
Som metastaser er fortsatt den ledende årsaken til tumorrelaterte dødsfall og sykelighet er det viktig å videre forstå de komplekse patofysiologiske trasé og prosesser som fører til metastatisk spredning. Metastatiske veier av ondartet svulst sykdom er sammensatte og fortsatt dårlig forstått [32] – [36]
Formålet med denne studien var å undersøke effekten av enkelt og kombinert hemming av HER2 og CXCR4 receptor veier, og til. undersøke HER2- og CXCR4-uttrykk nivåene ved hemming for å bestemme en mulig involvering av CXCR4-uttrykk i HER2-positiv esophageal kreft. Videre var målet å undersøke nærmere rollen som CXCR4 og HER2 i primærtumorvekst og i homing av metastaser. I tillegg til å bestemme betydningen av tilstedeværelsen av HER2 og CXCR4 i en representativ kollektiv pasient, ble et høyt metastatisk modell av spiserørskreft anvendt for evaluering.
Materialer og metoder
Cell Line, celleproliferasjon, og cellemigrasjon
in vitro
human cellelinje OE19 (European Innsamling av cellekulturer (ECACC), Health Protection Agency, Wiltshire, UK) ble dyrket i RPMI1560 medium (Biochrome KG, Berlin , Tyskland) som tidligere beskrevet [25].
Celleproliferasjon ble målt ved hjelp av LDH Cytotoksisitet Kit (PromoKine, Heidelberg, Tyskland). 50000 OE19 celler ble sådd i en 24-brønns plate og dyrket over natten. AMD3100 (Sigma-Aldrich, München, Tyskland) ble supplert til kultur medium og celle vitalitet ble analysert etter 48 timer.
Tumor celle migrasjon gjennom en mikroporøs membran ble vurdert basert på Boyden kammeret prinsippet. Celler ble inkubert med kulturmedium i 90 minutter, og deretter platet ut på den øverste kammeret. Kulturmedium inneholdende 500 ng /ml rekombinant humant SDF-1α (R koronale T2-vektet TSE med fett metning: TR = korteste; TE = 90 msek, flip vinkel = 90 °, antall skiver = 20, skive tykkelse = 1 mm, matrix = 448 × 448 px, FOV = 100 mm, antall eksitasjoner = 3 og rekonstruert voxel = 0,22 /0,22 /1 mm
3. Deretter ble en sagittal T2 TSE sekvens bruke fett metning ervervet i henhold til følgende parametre: TR = korteste; TE = 90 msek, flip vinkel = 90, antall skiver = 22, skive tykkelse = 1 mm, matrix = 448 × 448 px, FOV = 100 mm, NEX = 3 og rekonstruert voxel = 0,22 /0,22 /1 mm
3. Eksamenstid var ~17 min.
Bildeanalyse og volumetrisk måling
DICOM-bilder ble behandlet ved hjelp av gratis tilgjengelig programvare Osirix®. Den største tumordiameter ble målt i sekvensene som best visualiserte tumoren. Målinger ble utført hver for seg av to forskere for hver mus før og etter behandling. Videre ble tumorvolumet oppnådd ved manuell sirkling av tumoren felgen på hver skive, etterfulgt av automatisk konstruksjon av en 3D-tumor kart.
Pasient kollektiv, farging av humant vev og dataanalyse
En pasient kollektiv av 202 pasienter, som ble operert i kurativ hensikt i Kirurgisk avdeling ved University Medical Center Hamburg-Eppendorf, ble undersøkt for både HER2- og CXCR4-uttrykk av immunfarging. Denne studien ble godkjent av etisk komité av kammeret av leger ved Hamburg, Tyskland og skriftlig samtykke ble innhentet fra alle pasienter til å bruke resected prøvene. Ved histopatologisk undersøkelse reseksjonskanten var svulst gratis. Tumor scenen og karakteren ble klassifisert i henhold til tumormetastaser klassifisering av International Union Against Cancer [40]. Tumor vevsprøver som hadde vært snap-frosset i flytende nitrogen ble forankret i Optimal Cutting Temperatur Forbindelse (Tissue-Tek) og delt på 5 mm. For HER2 flekker HercepTest (DAKO, Glostrup, Danmark) ble anvendt i henhold til protokollen fra produsenten, ved hjelp av en 1:300 fortynning av det primære antistoff. Farging ble scoret av patologen (U.R.), etter en fire-trinns skala (0,1þ, med 2., 3th) i henhold til produsentens anvisninger. Snitt ble farget med anti-humant CXCR4 monoklonalt antistoff (IgG2a, clone12G5; R Sigma, Deisenhofen, Tyskland) ble brukt som en negativ kontroll. Den antistoff-reaksjon ble utviklet med alkalisk fosfatase-anti-alkalisk fosfatase (APAAP) teknikk, inkludert sekundær kanin-anti-mus polyklonalt antistoff (klon Z0259, Dako, Hamburg, Tyskland) og APAAP farging av kompleks (Dako) i kombinasjon med en ny fuksin flekk (Sena , Heidelberg, Tyskland). For visualisering ble snittene motfarget med Mayer hematoksylin-løsning (Merck). Prøvene ble vurdert immunopositive for CXCR4 når mer enn 20% av alle kreftceller i en seksjon var tydelig immunostained. Resultatene varierte ikke når et annet skjæringspunkt (e.g.5% positive tumorceller som et skjæringspunkt) ble testet. De tumorprøver ble deretter klassifisert til å ha enten fraværende i lav farging (CXCR4-negativ) dersom 20% eller færre tumorceller uttrykt CXCR4, eller moderat til sterk farging (CXCR4-positiv), hvis mer enn 20% av tumorcellene uttrykt CXCR4. Immunhistokjemisk analyse og scoring ble utført av to uavhengige etterforskere (U.R., S.G.)
ble utført Statistisk analyse på en standard PC ved hjelp av SPSS for Windows (versjon 11.5.1, SPSS Inc., Chicago, IL).. Korrelasjoner ble beregnet med krysstabeller og statistisk signifikans ble bestemt av Fishers test med en p-verdi fra tosidige tester av. 0,05
Statistiske data analyse
Statistiske data analyse av
in vivo
data ble utført med PASW Statistikk 18 (SPSS Inc., Chicago, USA) på en standard PC med en quadcore prosessor. For bestemmelse av betydning om forskjeller i tumorvekst og reseptor uttrykk, ble den ikke-parametrisk Mann-Whitney-Wilcoxon-test brukt. Fisher’s-Exact-test for grev-Data ble benyttet for bestemmelse av betydningen av metastaser. For korrelasjon av MRI tumorvolumet og tumor vekt på Pearson-koeffisient og korrelasjon av HER2- og CXCR4-uttrykket Spearman’s-rank korrelasjons-koeffisient ble benyttet.
Resultater
Målet denne studien var å undersøke en mulig interaksjon av HER2- og CXCR4-reseptorer og deres uttrykksnivåer under behandling med sine respektive inhibitorer for å fastslå en innvirkning av CXCR4-uttrykk i HER2-positiv esophageal kreft.
in vitro
spredning og migrasjon av esophageal OE19 celler
for å undersøke effekten av CXCR4- og HER2-reseptorer på cellevekst
in vitro
OE19 celler ble behandlet med AMD3100 og trastuzumab hhv. Selv om det var ventet at trastuzumab behandling fører til et cellevekstreduksjon, hadde effekten av behandling med AMD3100 ikke blitt definert. Celle migrasjon av CXCR4-positive celler men bør være påvirket av kjemotiltrekkende SDF-1α.
in vitro
celleproliferasjonsprosesser analyser viste reproduserbart en betydelig reduksjon av celleproliferasjon henhold HER2- og CXCR4 -reseptor-inhibering etter behandling med trastuzumab (p = 0,005), så vel som med AMD3100 (p = 0,02) (figur 1A). Som forventet, behandling med trastuzumab ført til en sterkere reduksjon av spredning enn behandling med AMD3100. I migrasjonsanalysen en doseavhengig effekt på cellemigrering kunne observeres etter behandling med SDF-1α (figur 1B). Chemotaxis av CXCR4-positive OE19 celler kan således bli indusert av SDF-1α (figur 1C). Resultatene ble gjengitt med flere konsentrasjoner (data ikke vist).
A Effekt av trastuzumab og ADM3100 behandling på proliferasjon (%) av OE19 celler sammenlignet med kontrollen i laktat-dehydrogenase analysen. -Reseptor-inhibering fører til redusert proliferasjon av celler. Det viser en signifikant reduksjon i celleformering i henhold HER2- og CXCR4-reseptor-inhibering etter behandling med trastuzumab (p = 0,005), så vel som med AMD3100 (p = 0,02) sammenlignet med den ubehandlede kontroll. B Mikroskopisk evaluering doseavhengig effekt av SDF-1α-stimulert cellemigrasjon på OE19 celler viser. CA relevant effekt av SDF-1α på cellemigrasjon er observert på 250 ng /ml sammenlignet med ustimulerte celler (kontroll).
In vivo
spredning av primærtumor i orthotopic modell
for ytterligere å undersøke oppførselen til lokale og metastatisk esophageal tumorvekst i
vivo
OE19 celler ble implantert orthotopically inn NMRI /nu mus. Alle musene primære svulster på implantasjonsstedet som vist ved MRI to uker etter implantasjon. Kroppsvekt av musene varierte 18,5 til 26,3 g ved begynnelsen og 22,5 til 32,7 g ved avslutningen av forsøket. Midlene for bodyweights av hver terapeutisk gruppe ved begynnelsen og avslutningen av forsøket er oppsummert i tabell 1. Det ble ikke observert noen signifikant variasjon. Musene ble randomisert til to uker etter implantasjon i terapeutiske grupper. Vi har tidligere vist at tumorstørrelse to uker etter implantering var sammenlignbare mellom gruppene [37]. På tidspunktet for avslutning av forsøket ble en MR-undersøkelse utført umiddelbart før dissekere dyrene. Alle dyr nådd endepunktet av undersøkelsen uten alvorlig vekttap eller andre tegn på tumorsykdom. Vekten av tumoren ble nedtegnet og ga verdier mellom 0,01 til 3,9 g. Tumor volumetri ble utført og bekreftet resultatene svulsten vekt (tabell 1). Mens vektverdiene innenfor kontroll, trastuzumab-behandlede gruppen, og trastuzumab /AMD3100-behandlede gruppen var mer homogen, verdier varierte sterkere innenfor AMD3100-behandlede gruppen. Tumor vekter i kontrollgruppen var betydelig høyere enn i trastuzumab-behandling (p 0,0001) og trastuzumab /AMD3100 behandlede pasienter (p 0,0001) grupper. Tumor vekter i AMD3100-behandlede gruppen var betydelig høyere enn i de trastuzumab-behandling (p = 0,04) og trastuzumab /AMD3100 behandlede pasienter (p = 0,02) grupper (figur 2A). Selv om effekten av AMD3100 på den primære tumorvekten var ikke så viktig som virkningen av trastuzumab, ble en potent effekt oppnås ved AMD3100 behandling ble sammenlignet med den ubehandlede gruppen. Tumor vekter på tidspunktet for obduksjon korrelerte signifikant med volumet målt ved MRI (korrelasjonskoeffisient: 0,837, p 0,01). Representative eksempler på MRI for svulst evaluering med og uten behandling er vist i figur 2B
En Betydelige forskjeller i kreft vekter mellom kontroll og trastuzumab behandlede gruppene (p 0,00)., Kontroll og kombinasjon trastuzumab /AMD3100 behandlede gruppene (p 0,00), trastuzumab og AMD3100 behandlede gruppene (p = 0,04), og AMD og kombinasjon trastuzumab /AMD3100 behandlede gruppene (p = 0,02). Selv om effekten av AMD3100 på den primære tumorvekten var ikke så relevant som effekten av trastuzumab, ble en potent effekt oppnås ved AMD3100 behandling alene, sammenlignet med den ubehandlede gruppen. B MRI-baserte tumor volumetri bekreftet resultatene av tumorvekten. Tumor vekter på tidspunktet for obduksjon korrelerte signifikant med volumetrisk måling av MRI (korrelasjonskoeffisient: 0,837, p 0,01). C mikrometastaser i lever og lunge etter behandling med AMD3100 og trastuzumab, ble analysert ved hjelp av sanntids-PCR i henhold til nivået av humant
GAPDH
. AMD3100 og trastuzumab-behandlede mus viste en midlere delta-ct-verdi på -2 og -3 sterk reduksjon i lungemetastaser fra 75 til nesten 100%. I tillegg trastuzumab-behandlede mus hadde en sterk reduksjon i levermetastase representert ved en midlere delta-ct-verdi på -3. Den AMD3100 /trastuzumab kombinasjonsgruppen hadde en redusert sats på lunge (delta-ct -2), og lever (delta-ct -3) metastasering. D spres tumorceller ble oppdaget av cytokeratin og HER2 immunhistochemical farging. Figur 3B viser en benmargsprøve. Human celle med en sterk positivitet for HER2 er påvisbar (rød).
* På grunn av plassbegrensninger, AMD3100 ble forkortet til AMD i
2a og c
.
Metastastic potensialet esophageal kreftceller
in vivo
Ved avslutning av
in vivo
eksperiment, potensielt metastatisk vev (lunge, lever og lymfeknuter) ble samplet og histologisk undersøkt for å evaluere den metastatisk spredning av tumoren esophageal for hver behandlingsgruppe. I tillegg ble mikrometastaser i lever og lunge detektert av mRNA-ekspresjon av det humane
GAPDH-genet ved
real-time PCR-analyse av totalt RNA.
I kontrollgruppen omfattende metastastic spredning ble observert å lunge , lever og lymfeknuter. 20% av dyrene hadde aggressiv metastatisk spredning til alle kamre, inkludert lunge, lever og flere lymfeknuter. I motsetning til dette viste den AMD3100-behandlede gruppen færre metastaser og bare ett dyr uttrykkes sterkt aggressive metastatisk spredning til tre kamre (lunge, lever og lymfeknuter). Mens metastatisk spredning i kombinasjonsterapi gruppen ikke var betydelig lavere enn i trastuzumab-behandlede gruppen, metastase presenteres solitarily.
Når du undersøker generelle metastatisk spredning i H.E. og immunhistokjemi farging var det betydelig mindre metastatisk spredning funnet i trastuzumab-behandlede gruppen sammenlignet med kontrollgruppen (p = 0,002). Spesielt kan en betydelig reduksjon av lungemetastaser observeres sammenlignet med kontrollgruppen etter AMD3100, trastuzumab og kombinert behandling i tillegg til leveren etter trastuzumab og kombinert behandling (figur 2C). Micrometastic verdier presenteres som delta ct-verdier for kontroll og behandlede grupper.
Disseminert kreftceller i benmargen
For å bestemme tilstedeværelsen av spres tumorceller i benmargen, spres kreftceller (DTC) ble isolert fra benmarg fra mus ved tettshetsgradient og visualisert ved chromagen farging. Funn av cytokeratin-positive DTC i benmargen indikerte omfanget av tumorsykdom (figur 2D).
CXCR4 og HER2 uttrykk profilen til OE19 celler
in vivo
for det første ble OE19 cellene undersøkt for deres uttrykk for CXCR4 og HER2. Ikke bare HER2-overuttrykk, men også forsterkning av dens genet er av klinisk relevans, og dermed
Her2
-amplification status ble bekreftet. OE19 celler viste en sterk uttrykk for CXCR4- og HER2-reseptorer i farging (figur 3A) samt en forsterkning av
Her2
-Gene i fisk (figur 3B). Semiquantitive mRNA analyse viste uttrykk for
CXCR4 Hotell og
Her2
sammenlignet med MDA-MB-231 og SKBr-3 cellelinjer (figur 3C).
En CXCR4-uttrykk for OE19 celler bestemmes av fluorescens farging (IgG1-kontroll) B bekreftelse på
Her2
-amplification bestemmes av fluorescens in situ hybridisering (red:
Her2
-Gene loci, grønn henvisning
CENT- 17
-loci) C
CXCR4 Hotell og
HER-2
mRNA-uttrykk analyse av spiserørskreft cellelinje OE19 forhold til MDA-MB-231 og SKBr-3 cellelinjer og null kontroll (NC). D CXCR4 og HER2 ekspresjonsnivået analyse bestemt ved farging i primærtumor, lever, lunge og lymfeknute. Representative bilder vises fra vev av et ubehandlet dyr (forstørrelse x 100). E Intensitet HER2- og CXCR4-uttrykk ble scoret i primærtumor og metastaser. Positivitet-score av primærtumor og respektive metastaser ble matchet for å vurdere forekomsten av og korrelasjon av primærtumor uttrykk og som av sine respektive metastaser mellom terapeutiske grupper. Trastuzumab behandling førte til et fravær av metastaser, og dermed kunne ikke bli inkludert.
* På grunn av plassbegrensninger, AMD3100 ble forkortet til AMD i
Figur 3e
.
Korrelasjon av CXCR4- og HER2-uttrykk i orthotopic
in vivo
modell
for det andre primærtumor og metastatisk vev fra orthotopic modellen ble undersøkt for CXCR4- og HER2-uttrykk. CXCR4- og HER2-ekspresjon ble observert i alle tumorbærende-vev, inkludert primær tumor, lever, lunge og lymfeknutemetastaser (figur 3D). HER2-uttrykk korrelerte signifikant med CXCR4-uttrykk (korrelasjon effektiv 0,490, p 0,01).
Høyere intensitet av HER2-uttrykk i metastaser i forhold til primærtumor
For ytterligere å vurdere relevansen av HER2 – og CXCR4 korrelasjon, en punkt-for-punkt-diagrammet er designet (figur 3E), hvor hver metastatisk tilfelle var merket, noe som viser både intensiteten av ekspresjon av metastasering (y-aksen) og intensiteten av ekspresjon av dens respektive primærtumor (x-aksen). I henhold til behandlingsgruppen forskjellige symboler ble anvendt. Det første diagram viser HER2-intensitet, den andre den CXCR4-intensitet.
Interessant nok kan en høyere ekspresjon av HER2 og CXCR4 sees i metastaser i alle terapeutiske grupper i forhold til deres respektive primære svulster. Intensiteten av HER2- uttrykk (skår 1-3) av primærsvulster og deres respektive metastaser ble anvendt i det første diagrammet på figur 3E. Diagrammet viser at intensiteten av HER2-positivitet ved immunfarging varierer mellom vev av behandlingsgruppene. Mens HER2-positivitet av primærtumor i kontrollgruppen var begrenset til lettere intensitet (skår 1), metastaser uttrykt HER2 ved alle intensiteter. Under AMD3100 behandling, men HER2 ble bare uttrykt ved sterkere intensitet (score 2 + 3) i primærtumor. Metastaser i AMD3100-behandlede gruppen uttrykker HER2 nesten utelukkende på høyeste intensitet (skår 3).
Når du søker intensitets score til CXCR4-positivitet (score 1-3) av de primære svulster og deres respektive metastaser det andre diagrammet i figur 3E, resultatet i kontrollgruppen varierte mellom lettere og middels intensitet (score 1 + 2). Selv om intensiteten av CXCR4-ekspresjonsnivåer av de primære tumorer i de behandlede gruppe AMD3100 nådde høyere ekspresjonsnivåer (skår 3), intensiteten av metastatisk CXCR4-ekspresjon gjorde bare utstrekning til middels nivåer (ballen 2).
i begge diagrammer, kan trastuzumab-behandlede gruppen ikke bli vurdert på denne måten som det var ingen metastaser. For den kombinerte behandlingsgruppen, var det bare to metastatisk tilfeller gjør evaluering statistisk ikke pålitelig.
oppregulering av HER2-uttrykk i henhold AMD3100 behandling
Hypothesising at uttrykket av CXCR4 og /eller HER2, deres respektive trasé og deres samspill er involvert i medietumorprogresjon og metastatisk homing, ble hver terapeutisk gruppe vurderes separat som til intensiteten av HER2- og CXCR4-uttrykk nivåer. Ved å bruke samme diagram (figur 3E) intensiteten av HER2- og CXCR4-ekspresjon ble sammenlignet mellom behandlingsgruppene. Sammenlignet med kontrollgruppen, er HER2-intensitetene av metastaser og primære tumorer i AMD3100-behandlede gruppe representert ved høyere score hele.
Når statistisk sammenligning av HER2 ekspresjon av primær tumor og metastaser mellom terapeutiske grupper, en vesentlig høyere HER2-ekspresjon ble observert i trastuzumab-behandlede gruppen (p = 0,003) og den AMD3100-behandlede gruppen (p = 0,003) sammenlignet med kontrollgruppen. Ved undersøkelse av CXCR4-ekspresjon, ble en betydelig høyere ekspresjon observert i trastuzumab-behandlede gruppen (p = 0,003) og en høyere ekspresjon i AMD3100-behandlede gruppen (p = 0,065) sammenlignet med kontrollgruppen. Det kombinerte terapigruppe (trastuzumab /AMD3100) verken viste betydelige HER2-uttrykk eller CXCR4-uttrykk forskjeller sammenlignet med kontrollgruppen.
Validering av CXCR4- og HER2-koekspresjon i menneskelig esophageal carcinoma
for ytterligere å validere korrelasjon av HER2 og CXCR4 som ble funnet i
in vivo
studier ble primær tumor vev av 202 pasienter undersøkes for både HER2- og CXCR4-uttrykk av immunfarging.
