Abstract
Innledning
microRNAs (mirnas) har viktige regulatoriske funksjoner i cellulære prosesser og har vist lovende potensial som prognostiske markører for sykdom utfallet hos pasienter med kreft. Målet med denne studien var å finne miRNA uttrykk profiler i fullblod som var prognostisk for total overlevelse (OS) hos pasienter med metastatisk kolorektalcancer (mCRC) behandlet med cetuximab og irinotecan.
Metoder
fra 138 pasienter med mCRC i 3
rd behandling med cetuximab og irinotecan i en prospektiv fase II studien ble 738 forbehandling mirnas isolert og profilert fra fullblod ved bruk av TaqMan mikroRNA Array v2.0. Mutasjon status for
KRAS, BRAF, og PI3KCA
var kjent
Resultater
Etter Bonferroni justering, 6 mirnas:. (MIR-345, MIR-143, MIR-34a *, MIR-628-5p, MIR-886-3p og MIR-324-3p), ble funnet i forbindelse med kort OS. MIR-345 var den sterkeste prognostiske miRNA, vesentlig i full kohort og i ikke-
KRAS
mutant befolkningen. MIR-345, som en kontinuerlig variabel i hele kullet, resulterte i en hazard ratio (HR) på 2,38 per IQR (CI 95%: 01.08 til 03.01,
P
verdi = 2.86e-07, Bonferroni justert, univariable analyse) og en HR = 1,75 per IQR (CI 95%: 1,24 til 2,48,
P
-Wald = 1.45e-03) i multivariabel analyse justert for kjønn, alder, KRAS, PI3KCA og funksjonsstatus. MIR-345 var prognostisk i progresjonsfri overlevelse (PFS) med en HR = 1,63 per IQR (CI 95%: 1,25 til 2,114,
P
-Wald = 2.92e-4) i multivariabel analyse. I tillegg ble høy Mir-345 uttrykk forbundet med manglende respons på behandling med cetuximab og irinotecan.
Konklusjon
Vi identifiserte MIR-345 i fullblod som en potensiell biomarkør for klinisk utfall. MiR-345 var en enkelt prognostisk biomarkør for både OS og PFS hos alle pasienter og også i ikke-
KRAS
mutant befolkningen
Citation. Schou JV, Rossi S, Jensen BV, Nielsen DL, Pfeiffer P, Høgdall E, et al. (2014) MIR-345 i metastatisk kolorektalcancer: en ikke-invasiv biomarkør for klinisk utfall i ikke-KRAS Mutant pasienter behandlet med 3
rd linje Cetuximab og Irinotecan. PLoS ONE 9 (6): e99886. doi: 10,1371 /journal.pone.0099886
Redaktør: Pierre Busson, Gustave Roussy, Frankrike
mottatt: 03.02.2014; Godkjent: 20 mai 2014; Publisert: 18 juni 2014
Copyright: © 2014 Schou et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet med tilskudd fra Forskningsrådet ved Herlev Hospital, den danske innenriksdepartementet og Helse, Merck-Serono Danmark /Sverige, og EU syvende rammeprogram [FP7 /2007-2013] under tilskuddsavtalen no 222916 (gitt til MK). ST er en erfaren klinisk etterforsker av fondet for Scientific Research Flandern og blir støttet av belgiske Nasjonal kreftplan. ST og SR er også støttet av stiftelsen Fournier-Majoie, FFMI, Belgia. MD støttes delvis av den sveitsiske National Science Foundation (SNF, https://www.snf.ch/E/; Grant No. 320030_135421); Krebsforschung Schweiz (KFS, https://www.krebsforschung.ch/; Grant No. 02697-08-2010); og ved Fondation Medic. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. MK ansatt ved AROS Applied Biotechnology. Selskapet har ikke noen økonomisk interesse og patenter som er involvert i denne publikasjonen. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til PLoS ONE politikk på deling av data og materialer.
Innledning
Tykktarmskreft (CRC) er den 3
rd vanligste kreftformen i verden. Tjue prosent av pasientene med diagnosen CRC har metastatisk sykdom og ytterligere 30-35% vil utvikle metastaser senere i løpet av sykdommen [1], [2].
cetuximab en IgG1 monoklonalt antistoff rettet mot epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR), har vist effekt i kombinasjon med kjemoterapi hos pasienter med metastatisk kolorektalcancer (mCRC), men ikke hos pasienter med
KRAS
mutasjoner, [3], [4] som blir sett i omtrent 40% av pasientene med CRC. Men bare en undergruppe av pasienter med
KRAS
villtype (wt) vil dra nytte av cetuximab. Dermed er det et stort behov for å identifisere nye biomarkører for behandling respons på cetuximab i undergruppen av pasienter med mCRC og
KRAS
.
I løpet av de siste årene har det vært en raskt voksende interesse microRNAs (mirnas) som potensielle nye biomarkører i pasienter med kreft. Mirnas er små endogene ikke-kodende RNA med 19-22 nukleotider regulere genekspresjon på posttranskripsjonelt nivå. Hittil har mer enn 2000 menneske miRNA sekvenser er identifisert, og antallet er økende [5]. Mirnas har viktige regulatoriske funksjoner i grunnleggende cellulære prosesser og fungere som onkogener og tumor-suppressor gener [6]. Mirnas er involvert i kreft predisposisjon, utvikling og progresjon gjennom genet deregulering og /eller enkeltnukleotidpolymorfi. Mirnas i en kreft innstilling kan klassifiseres på grunnlag av deres hovedfunksjoner:. Oncomir, metastamir, apoptomir, hypoxamir og angiomir
Sirkulasjons mirnas lett kan samles og
virker veldig stabilt under tøffe forhold, lang lagringstid og etter flere fryse-tine sykluser.
[7]
,
[8]
I tillegg, etter en blodprøve er mer praktisk og mindre invasiv for pasienter enn en biopsi.
Foruten å ha en diagnostisk potensial, [9], [10], [11] visse mirnas har vist seg å være prognostisk. Serum MIR-141 ble foreslått som en prognostisk biomarkør for pasienter med CRC [12] og serum MIR-21 som en diagnostisk og prognostisk biomarkør i CRC. [13]
Formålet med den foreliggende potensielle biomarkør studien var å vurdere om profiler av
miRNA i fullblod var prognostisk for total overlevelse og klinisk utfall hos pasienter med mCRC før
rd 3 behandling med cetuximab og irinotecan.
Metoder
pasienter og behandling
i en prospektiv fase II studie utformet for å evaluere effekten av cetuximab og irinotecan som 3
rd behandling hos pasienter med mCRC, forbehandling fullblods miRNA uttrykk ble målt i 143 pasienter. Alle pasientene var resistente mot 5-FU, oksaliplatin og irinotekan og behandlet med irinotecan (180 mg /m
2) og cetuximab (500 mg /m
2) annenhver uke [14]. Pasientene ble inkludert fra tre danske sykehus fra oktober 2006 til oktober 2008, og behandlet til sykdomsprogresjon og fulgt inntil død eller 1. september 2012.
Etikk erklæringen
Alle pasienter gitt skriftlig informert samtykke, og studien ble godkjent av Regional etisk komité i henhold til den danske nasjonalkomiteen på helsefaglig forskningsetikk (VEK ref. KA-20060094, www.cvk.sum.dk).
KRAS
,
BRAF Hotell og
PI3KCA
Mutation Status
Fra alle pasienter, ble formalinfiksert parafin innebygd (FFPE) vevsblokker representerer svulsten valgt. De FFPE- vev ble kuttet i 3-4 mikrometer seksjoner og farget med hematoxylin og eosin (H E) for å vurdere og bekrefte svulstvev i den valgte vevsblokk. I korte trekk tre vevssnitt ble behandlet en gang med xylen, etterfulgt med en vask i etanol. Pelleten ble re-suspendert i ATL (vev lysisbuffer) buffer og behandlet med proteinase-K over natten ved 56 ° C. Etter inaktivering av proteinase-K ved oppvarming av DNA ble ekstrahert ved hjelp av QIAamp DNA Mini Kit.
KRAS
mutasjoner i kodon 12 og 13 ble analysert ved hjelp av TheraScreen
KRAS
mutasjon kit (DxS Ltd, Manchester, Storbritannia) som identifiserer syv somatisk
KRAS
mutasjoner. Pasientene ble klassifisert i henhold til hvorvidt en mutasjon var til stede (
KRAS
mutant, mt) eller ikke (
KRAS
villtype, vekt). [15], [16] V600
BRAF
mutasjon analyser med en følsomhet på 5% ble utført av pyrosekvensering (Pyromark Q24) ved hjelp av primere som beskrevet av Richman et al [17].
PIK3CA
mutasjoner ble oppdaget ved hjelp av TheraScreen
PI3KCA
mutasjon kit (DXS diagnostikk), testing for fire somatiske mutasjoner i ekson 9 og i ekson 20 av
PI3KCA
onkogen ( p.H104R, p.E542K, p.E545K /D). Den mutasjoner p.H104R, p.E542K, p.E545K ble oppdaget med en følsomhet på 1% og p.E545D ble oppdaget med en følsomhet på 2%.
Utvinning av RNA fra PAXgene Blood RNA Tubes
Forbehandling blod~~POS=TRUNC prøvene~~POS=HEADCOMP ble samlet opp i PAXgene Blood RNA rør (Qiagen) og lagret ved -80 ° C i henhold til produsentens anbefalinger. Små RNA ble ekstrahert fra PAXgene Blood RNA rør i to fraksjoner. [18] Disse rørene ble behandlet på BiorobotMDx (Qiagen, Hilden, Tyskland) ved hjelp av en tilpasset protokoll som binder store RNA og redder gjennomkjøring fra RNA bindingsplate . Bindingen tilstand i oppkjøringen gjennom ble senere endret slik at miRNA å bli renset på en RNeasy-96 plate. Konsentrasjonen av de små RNA-fraksjonene ble undersøkt ved absorbans spektrometri på en DTX 880 (Beckman Coulter).
Mirna Expression in Whole Blood
miRNA profilering ble utført på TaqMan Array Menneskelig mikroRNA kort A og B v2.0 (Applied Biosystems) ved hjelp av produserer reagenser og instruksjoner. RNA ble transkribert til cDNA i to multipleks reaksjoner som hver inneholder 3 mL av den lille RNA forberedelse og enten Megaplex RT Primer et basseng eller Pool B basseng og ved hjelp av TaqMan mikroRNA Reverse Transcription Kit i et totalt volum på 14 pl. Før lasting av oppstillingene en 12 syklus preamplification Reaksjonen ble utført ved bruk av 2,5 ul cDNA i en 25 pl reaksjon. Hver av arrays var lastet med 800 mL Universal PCR MasterMix analysen inneholder 1/40 av preamplification reaksjon og kjøre på 7900 HT Fast Real-Time PCR System.
Mirna Expression Analysis
Kvalitet vurdering.
Prøver med en absorbans under 1,8 ble forkastet og verdier med deteksjon bety periode større enn 29,5 ble ansett som manglende verdier. Vi beregnet, for å vurdere datakvalitet, antall detekterte mirnas per sample (fig S1 i fil S1), og den gjennomsnittlige mirnas uttrykket per prøve (figur S2 i fil S1). Intern kontroll ble analysert for å vurdere reproduserbarhet
Normalisering og filtrering
Data ble normalisert ved hjelp av den globale middeltemperaturen Normalisering [19] og endringer i uttrykket ble beregnet ved hjelp av to
.. – ΔCt metode. Data ble standardisert før analyse. [20] Bare de 138 prøvene med minst 51% uttrykt mirnas ble beholdt. Mirnas med mer enn 21% (cutoff er estimert nivå hvor prosentandelen av gjenværende mirnas når et platå) prosent manglende verdier ble kassert: 402 ut av 768 ble beholdt (372 mirnas: bare en del av dem CRC spesifikke og 30 kontroll prober .: gjentak av U6, RNU24, RNU43, RNU44, RNU48 og RNU6B)
Siden prøvene kom fra tre forskjellige sykehus, utførte vi Principal Component Analysis å sjekke for skjevhet ved sykehuset. Figur S3 i filen S1 viser noen forskjeller ved sentrum. Data ble justert ved sentrum hjelp av batch-korreksjon algoritme kamp, [21] fra Bioconductor bibliotek sva, [22] se Figur S4 i filen S1.
Statistical Analysis
Data ble analysert med R versjon 3.0.1. Mann-Whitney (hvis to grupper) eller Kruskal-Wallis (hvis mer enn 2 grupper) tester etterfulgt av
P
-verdier justering av Benjamini Hochberg metode (FDR 5%) ble utført for å bestemme forskjellig uttrykt mirnas mellom klasser av prøver (
KRAS, BRAF, PI3KCA
, dobbel vekt, klinisk nytte, performance status)
Univariable og. multivariabel overlevelse analyser ble utført ved hjelp av den proporsjonale farer Cox regresjon (pakken «overleve» i R). Vi rapporterte single-test og Bonferroni justert
P
-verdier basert på antall mirnas testet i univariable total overlevelse (OS) og progresjonsfri overlevelse (PFS) regresjonsmodeller. En bootstrap prosedyre (150 skostropper som standard for denne prosedyren) fra regresjon modellering strategien ble utført for å validere de monterte mirnas basert Cox levetidsmodeller (R bibliotek rms), ble konkordans sannsynligheter beregnet ved utarbeidelse av standardfeil (blant annet tilgjengelig statistikk) mellom re-samplet tilpassede modellen og den opprinnelige modellen på hvert bootstrap trinn. Den konkordans tiltaket representerer en sannsynlighet, den måler hvor godt vår modell skiller mellom ulike reaksjoner, hvor C = 0,5 impliserte ingen prediktiv evne. . I vårt tilfelle, C 0,5 betyr at det spesifikke mirnas er en god prediktor
multivariabel overlevelsesanalyse ble utført med følgende variabler: mirnas (som kontinuerlige variabler), kjønn,
KRAS
,
PI3KCA Hotell og alder (dikotomisert ved median = 63 år).
BRAF
ble ekskludert fra multivariabel analyse på grunn av det lave antallet muterte pasienter med hendelser (n = 2). Uttrykk for den kontinuerlige mirnas ble dikotomisert til Høy og Lav risiko ved medianen av uttrykket verdier for visualisering i Kaplan-Meier plott. ble rapportert Kaplan-Meier-tall for hver utstyrt overlevelse modell med i det minste en statistisk signifikant miRNA. Kaplan-Meier-tallene viser også Hazard ratio (HR), tillit intervaller (KI) og ujusterte Wald
P
-verdier fra Cox regresjonsmodeller for spesifikke parvise sammenligninger av interesse. Hazard ratio av kontinuerlige variabler er presentert i indre kvartilområdet (IQR) enheter.
Target og Pathway Analysis
For å identifisere molekylære stier potensielt endret av uttrykket av ett eller flere mirnas, vi brukte Diana -mirPath programvare, [23] en web-basert beregningsverktøy. Programvaren utfører en berikelse analyse av målgener av flere mirnas ved å sammenligne dem til alle KEGG veier.
Databasene som ble brukt var TarBase (www.microrna.gr/tarbase) eller mikrotiterplater-CDS (www.microrna. gr /mikrotiterplater-CDS).
Resultater
Kliniske Kjennetegn og mutasjonsstatus og pasient
Etter kvalitetsvurdering, prøver fra fem pasienter ble forkastet. Baseline kliniske egenskaper og fordeling av
KRAS, BRAF, etter og
PI3KCA
mutasjonsstatus av de resterende 138 pasienter med mCRC inkludert i den nåværende biomarkør studien er gitt i tabell 1. Alle pasienter ble behandlet uten kunnskap om deres mutasjonsstatus.
MIR-345 Var Prognostic for total overlevelse
Ett hundre og tretti to (95%) av pasientene var døde ved oppfølging (i september 2012). Median total overlevelse av pasientene var 10,6 måneder (95% KI: 2.1-38.2 måneder). Det ble ikke observert forskjell i OS mellom de 3 sentrene
Etter å ha justert med Bonferroni metoden, fant vi seks prognostiske mirnas:. høyt uttrykk av MIR-345, MIR-143, MIR-34a *, MIR-628- 5p, MIR-886-3p og lavt uttrykk av MIR-324-3p var assosiert med kort OS (tabell 2). Kaplan-Meier-plott for de seks prognostiske mirnas er vist i Figur 1.
Pasientene ble dikotomisert ved median uttrykket valuta for MIR-345. Lav miRNA uttrykket (rød) og høy miRNA uttrykket (blå).
P
-verdi refererer til Wald test
En fullstendig liste over mirnas prognostisk for OS før Bonferronikorreksjon er gitt i tabell S1 i filen S1, -. En totalt 64 mirnas av 372 ble prognostisk, 50 med høyere uttrykk forbundet med dårligere prognose og 14 med lavere ekspresjon forbundet til dårligere prognose, ingen av kontrollene (U6, RNU24, RNU43, RNU44, RNU48 og RNU6B) ble prognostisk. A Volcano plot, viser Z poengsum som beregnes ved Cox regresjonsanalyse og en ujustert p-verdi, er vist i figur S5 i filen S1
multivariabel overlevelsesanalyse ble utført med følgende variabler:. MIR-345, speil 143, MIR-34a *, MIR-628-5p, MIR-886-3p, MIR-324-3p, kjønn,
KRAS, PI3KCA Hotell og alder (dikotomisert ved median = 63 år). Resultatene er rapportert i tabell 3.
I OS, MIR-345 og MIR-324-3p var de eneste to mirnas som var statistisk signifikant i både multivariabel analyse og univariable analyse. Allmenntilstand og
KRAS
var også viktige faktorer i multivariabel analyse, men
KRAS
var border viktig som en univariat faktor (HR = 1,36, KI 95%: 0,94 til 1,97).
MIR-345 som en enkelt miRNA Merke for klinisk utfall
MIR-345 var også prediktiv for PFS, HR ved IQR = 1,7, (CI 95%: 01.31 til 02.02, justert Bonferroni
P
verdi = 0,021). Foruten å være betydelig for OS i hele kullet, MIR-345 var statistisk signifikant i alle levetidsmodeller for undergrupper av pasienter med vekt på
KRAS
,
BRAF
,
PI3KCA
og dobbel vekt for kombinasjoner,
KRAS
+
BRAF Hotell og
KRAS
+
PI3KCA, etter se tabell S2-6 i filen S1. MIR-345 var prognostisk for OS i
BRAF
+
PI3KCA
wt gruppe og i trippel vekt gruppen (
BRAF
wt +
KRAS
vekt +
PI3KCA
vekt), men ikke i den i PFS-analyser. Vi sammenlignet tilgjengelig mutasjonsstatus i kombinasjon med Mir-345 uttrykk med hensyn til OS (figur 2) og PFS (figur 3).
(A) Pasientene ble dikotomisert av
KRAS
mutasjon status og MIR-345. (B) Pasientene ble dikotomisert av
BRAF
wt mutasjoner status og MIR-345. (C) Pasientene ble dikotomisert av
PI3KCA
mutasjonsstatus og MIR-345. (D) Pasientene ble dikotomisert ved å dobbelt vekt mutasjonsstatus og MIR-345.
P
-verdi refererer til Wald test.
Pasientene ble dikotomisert ved lav Mir-345 uttrykk (rød) og høy Mir-345 uttrykk (blå). (A) Pasientene ble dikotomisert ved median uttrykket valuta for MIR-345. (B) Pasientene ble dikotomisert av
KRAS
mutasjoner status og MIR-345. (C) Pasientene ble dikotomisert av
BRAF
WT mutasjoner status og MIR-345. (D) Pasientene ble dikotomisert av
PI3KCA
mutasjoner status og MIR-345. (E) Pasientene ble dikotomisert ved å dobbelt vekt mutasjonsstatus og MIR-345.
P
-verdi refererer til Wald test.
montert Cox modellene ble validert ved resampling prosedyre. Modellen monteres på MIR-345 og OS viste god samstemmighet, høyere enn alle andre analyserte mirnas i OS (figur S6 i filen S1).
Vi har også sjekket om Mir-345 uttrykk var assosiert med behandlingsrespons og klinisk nytte. Vi kan se at høyere ekspresjon var assosiert med mangel på respons (figur 4). For å analysere dette videre, begrenset vi vårt sett av pasienter til de som har en delvis respons (n = 24) og progressiv sykdom (n = 37) i beste samlede respons. Vi har sammenlignet antall pasienter med en lavere og høyere Mir-345 uttrykk ifølge medianen uttrykk for MIR-345 og fikk en signifikant sammenheng mellom Mir-345 uttrykk og effekten av behandlingen med en odds ratio på 5,37 (
P
verdi = 0,004; 95% KI: 1,56 til 20,94)
Hvis vi begrenser vår sett av pasienter til de med partiell respons (n = 24) og progressiv sykdom (n = 37), en. signifikant sammenheng mellom Mir-345 uttrykk og effekten av behandlingen ble oppnådd med en odds ratio på 5,37, (
P
verdi = 0,004 og 95% KI: 1,56 til 20,94).
Pathway og Target Analyse
for å identifisere molekylære stier knyttet til uttrykket av de seks mirnas prognostiske for OS (MIR-345, MIR-143, MIR-34a *, MIR-628-5p, MIR-886- 3p, MIR-324-3p), testet vi KEGG veier. Blant de statistisk signifikante, tykktarmskreft (KEGG sti hsa05210) var til stede på grunn av de antatte interaksjoner mellom disse mirnas og følgende målgener:. TCF4, APC, SMAD4, MAPK8, PIK3CG, PIK3CD, DCC, PIK3CG, PIK3CA og MAPK1
Diskusjoner
i første og senere behandlingslinjer for pasienter med mCRC tillegg av cetuximab til kjemoterapi kan være gunstig for pasienter uten mutasjoner i
KRAS Hotell og
BRAF
[24], [25], [26]. Men nyere studier som undersøker cetuximab i første linje mCRC, kunne ikke bekrefte en fordel i PFS og OS i
KRAS
wt pasienter. [27], [28]. Det er behov for mer presise biomarkører eller paneler av biomarkører. Den nåværende potensielle biomarkører studie ble utført for å identifisere prognostiske mirnas i fullblod fra pasienter med mCRC behandlet med 3
rd linje cetuximab og irinotecan.
Vår studie antyder en potensiell rolle sirkulerende mirnas å tjene som biomarkører for klinisk utfall hos pasienter med mCRC. Vi fant ut at MIR-345 var prognostisk for OS i alle våre pasienter med mCRC og i
KRAS
wt pasienter med høyt uttrykk assosiert med kortere overlevelse. Multivariabel analyse viste at MIR-345 var en sterk faktor som tilsettes prognostisk informasjon til de andre tilgjengelige clinicopathologic og mutasjons variabler. Tumor byrde er en kombinasjon av tumorstørrelse og antall metastaser. Data om tumorstørrelse var ikke tilgjengelig for oss, og derfor tumorbelastning kunne ikke tas med i multivariabel analyse. Vi gjorde imidlertid inkludere en representativ liste over kovariater som regnes som prognostiske faktorer for pasienter med mCRC behandlet med cetuximab.
MIR-345 var statistisk signifikant for alle wt undergrupper analysert. Siden alle pasienter ble behandlet med cetuximab, kan vi ikke utlede om MIR-345 var en prognostisk biomarkør (uavhengig av behandlingen pasientene fikk) eller en biomarkør forutsi følsomhet for behandling med cetuximab og irinotecan, men vi fant ut at det er høyere uttrykk ble forbundet med mangel respons på behandling. I isolert gruppe av respondere versus ikke-respondere, var en høy Mir-345 uttrykk signifikant assosiert med en 5 ganger risikoen for progressiv sykdom som beste samlede respons. Disse resultatene er nye funn og tyder på at denne miRNA er prognostisk og kan være en potensiell biomarkør for respons hos pasienter med mCRC behandlet med cetuximab og irinotecan.
Sirkulerende MIR-345 har så vidt vi vet, ikke tidligere vært beskrevet i forbindelse med CRC, men Tang og medarbeidere rapporterte at et lavt nivå av MIR-345 i CRC vev er assosiert med lymfeknutemetastaser, dårligere histologisk type og er oppregulert i de kolorektale cancercellelinjer etter behandling med 5-aza-dc [29 ]. I tillegg DNA-metylering nivåer i promoter-regionen i MIR-345 er høyere i CRC vev sammenlignet med vanlig kolon vev og tilsvarende ikke-kreftvev, noe som tyder på at dette miRNA er en metylering sensitiv tumor suppressor [29].
i vevsprøver, er MIR-345 prognostisk hos pasienter med brystkreft [30]. Selv om validering i eksterne kohorter var ikke statistisk signifikant, MIR-345 var den eneste miRNA å forbli prognostisk i en multivariabel modell, sto for viktige kliniske parametre [30].
Det er ikke kjent hvorfor det er et avvik mellom miRNA ekspresjon i vev og blod fra pasienter med CRC. Få studier har sammenlignet miRNA uttrykket i tilsvarende vev og blodprøver. Lite overlapping er sett mellom mirnas differensierende lungekreftprøver fra normale lunge vevsprøver og plasma mirnas differensierende pasienter med aggressiv kontra ikke-aggressiv lungekreft. [31] MIR-345 ble funnet redusert i CRC vev i en relativt liten studie av 26 CRC vevsprøver, hvor kun 5 pasienter hadde metastatisk sykdom. [29] En lav MIR-345 konsentrasjonen i hovedsak lokalisert CRC vev kan ikke sammenlignes med høy konsentrasjon av sirkulerende MIR-345 i metastatisk CRC. Det samme miRNA kan være tumor-relatert på forskjellige måter, avhengig av, hvis det er funnet i svulsten eller som en sirkulerende miRNA.
MIR-143 er ned-reguleres i CRC tumorprøver, sammenlignet med normalt vev . [32], [33], [34]
KRAS
kan være et mål for MIR-143 [35] og nivåer av Mir-143 uttrykk i CRC tumorprøver er en prognostisk biomarkør i
KRAS
wt pasienter, men ikke en prediktiv markør for anti-EGFR-behandling. [36] Sirkulasjons MIR-143 har blitt testet som diagnostisk markør i CRC pasienter, men er ikke signifikant deregulert i forhold til normale kontroller. [37] MIR-324- 3p har ikke blitt beskrevet i CRC, men er forskjellig uttrykt i plasma fra pasienter med brystkreft sammenlignet med friske kontroller. [38].
styrken i vårt studium var den forholdsvis store prøvestørrelse, bootstrap prosedyre (resampling validering av Cox regresjonsmodellen), og en streng statistisk tilnærming ved hjelp av bare mirnas justert i samsvar med Bonferroni korreksjon. Neste skritt vil være å validere disse betydelige mirnas i fullblod fra en annen kohort av pasienter med mCRC behandlet med cetuximab og irinotecan. I dag ingen slike prøver er tilgjengelig fra gjennomførte fase III studier.
Ingen studier har undersøkt om miRNA uttrykk i fullblod har et potensial som prognostiske eller prediktive biomarkører i pasienter med mCRC behandlet med cetuximab og irinotecan. De fleste studier som undersøker sirkulerende mirnas har brukt plasma eller serum. [39], [40] miRNA ekspresjonsprofiler i helblod oppsamlet i PAXgene RNA-rør, er blitt beskrevet hos pasienter med hematologiske sykdommer, bukspyttkjertel og lungekreft [41], [42] og har fordeler sammenlignet med miRNA i serum /plasma på grunn av høyere avkastning [43] av miRNAs og færre metodiske problemer [44]. Mirnas som finnes i perifert helblod kan stamme fra kreftceller, men også fra ikke-kreftcelle, slik som leukocytter, monocytter og trombocytter. De kan være i blodet bundet til proteiner som siden [45] og HDL [46] eller pakket i exosomes. [47] De prognostiske mirnas, som finnes i vår gruppe pasienter, kan skyldes tumorprogresjon, en inflammatorisk respons eller som en respons til organsvikt.
Nylig har Shen og medarbeidere rapporterte at EGFR var involvert i undertrykkelse av spesifikk miRNA modning som reaksjon på hypoksisk stress. [48] den foreslåtte mekanisme er at en EGFR gjennom fosforylering av AGO2, forårsaket en reduksjon på dicer /AGO2 binding [48] herved hemme modning av pre-mirnas med lang sløyfe konfigurasjon. Hemming av EGFR kan også føre til intracellulær miRNA regulering og transportere noen av de endrede mirnas inn i blodstrømmen, og dermed fungerer som en sirkulerende respons på EGFR handlinger.
Konklusjon
Vi identifiserte seks sirkulerer mirnas i fullblod som prognostiske markører for OS. MIR-345 var en enkelt biomarkør for OS hos alle pasienter og i undergrupper av pasienter med
KRAS
vekt og
KRAS + BRAF
dobbel vekt. Videre MIR-345 var signifikant assosiert med PFS og beste samlede respons og kan være en potensiell biomarkør for klinisk utfall hos pasienter med mCRC behandlet med 3
rd linje cetuximab og irinotecan.
Hjelpemiddel Informasjon
fil S1.
Inneholder følgende filer:. Figur S1, Figur S2, Figur S3, Figur S4, Tabell S1, Tabell S2, Tabell S3, Table S4, Table S5, Table S6, figur S5, figur S6
doi: 10,1371 /journal.pone.0099886.s001 product: (docx)
takk
Vi takker Nina Dahl Kjersgaard og Beata Gregersen, Herlev Hospital for utmerket teknisk assistanse. Birgitte Christiansen, Trine S. Rasmussen og sykepleiere og teknikere på Clinical Research Unit og Enhet for eksperimentell behandling ved Herlev Hospital, Odense Hospital og Aalborg sykehus blir takket for god hjelp. Danish Cancer Biobank ved Herlev Hospital takkes for håndtering av vevsprøver.
