Abstract
Endogen S-nitrosothiols, inkludert S-nitrosoglutathione (GSNO), megle nitrogenoksid (NO) -baserte signale , betennelsesreaksjoner, og glatt muskelfunksjon. Reduserte nivåer GSNO har vært implisert i en rekke sykdommer i luftveiene, og inhibering av GSNO reduktase, (GSNOR) det primære enzymet som metaboliserer GSNO, representerer en ny tilnærming til behandling av inflammatoriske lungesykdommer. Nylig, en sammenheng mellom lav GSNOR uttrykk og menneskelig lungekreft ble foreslått delvis basert på immunhistokjemisk farging ved hjelp av en polyklonale GSNOR antistoff. GSNOR er en isozym av alkoholdehydrogenase (ADH) familien, og vi vise at antistoffet anvendt i disse studiene krysse reagerer i det vesentlige med andre ADH proteiner, og kan ikke være en passende reagens. Vi evaluerte humane lungekreft vev matriser ved hjelp av monoklonale antistoffer som meget spesifikke for human GSNOR med minimal kryssreaktivitet til andre ADH proteiner. Vi bekreftet tilstedeværelsen av GSNOR i ≥85% av prøvene som ble undersøkt, og omfattende analyse av disse prøvene viste ingen forskjell i GSNOR protein uttrykk mellom kreft og normal lunge vev. I tillegg ble GSNOR og andre ADH mRNA nivåer vurderes kvantitativt i lunge kreft cDNA arrays av qPCR. I samsvar med våre immunhistokjemiske funn, ble GSNOR mRNA nivåer ikke endret seg på lungekreft vev, men uttrykket nivåer av andre ADH gener ble redusert. ADH IB mRNA-nivåer ble redusert (mer enn 10 ganger) i 65% av lungekreft cDNA-prøver. Vi konkluderer med at de tidligere rapporterte resultater viste feil sammenslutning av GSNOR og menneskelige kreftrisiko lunge, og en nedgang i ADH IB, snarere enn GSNOR, korrelerer med menneskelig lungekreft
Citation. Mutka SC, Grønn LH, Verderber EL, Richards JP, looker DL, Chlipala EA, et al. (2012) ADH IB Expression, men ikke ADH III, er redusert i Human lungekreft. PLoS ONE 7 (12): e52995. doi: 10,1371 /journal.pone.0052995
Redaktør: Klaus Roemer, Universitetet i Saarland Medical School, Tyskland
mottatt: 23. oktober 2012; Godkjent: 27 november 2012; Publisert: 28.12.2012
Copyright: © 2012 Mutka et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. N30 Pharmaceuticals , Inc er et privateid selskap. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. Alle forfatterne unntatt Elizabeth Chlipala er eller var ansatt i N30 Pharmaceuticals, Funder av dette studere. Elizabeth Chlipala (Premier Laboratory) ble betalt for å utføre immunhistokjemi arbeidet rapportert i dette manuskriptet. N30 Pharma er å utvikle en ny klasse av sykdomsmodifiserende behandling som bevarer intracellulær GSNO (Snitrosoglutathione), en viktig regulator av organ reparasjon, fornyelse og helbredelse. Det er ingen ytterligere patenter, produkter under utvikling eller markedsført produkter som er relevante for denne utredningen å erklære. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer, som beskrevet på nettet i veiledningen for forfatterne.
Innledning
S-nitrosoglutathione (GSNO) er en endogent nitrogenoksiddonor som fungerer som et depot for nitrogenoksid (NO) i kroppen og spiller en viktig rolle i å kommunisere NO mediert signaliseringsfunksjoner. Reduserte nivåer av GSNO har vært koblet til en rekke sykdommer og restaureringen har blitt foreslått som en terapeutisk tilnærming til cystisk fibrose [1] og astma [2], [3]. Oksidoreduktasen, S-nitrosoglutathione reduktase (GSNOR), er den primære enzym som er involvert i nedbrytningen av intracellulær GSNO, og dens farmakologisk hemning tilveiebringer en terapeutisk mekanisme for preservering av intracellulære GSNO nivåer. Høypotente GSNOR inhibitorer er for tiden under klinisk utvikling [4] -. [7]
GSNOR, også kjent som alkoholdehydrogenase klasse III enzym (ADH III) og formaldehyd dehydrogenase, er evolusjonært den eldste medlem av ADH proteinfamilie, og alle andre ADHS er antatt å stamme fra GSNOR ved genduplikasjon [8], [9]. Hos mennesker, de ADH isozymene er homolog og møt opp til 60% aminosyresekvens identitet. De er også svært konservert mellom arter. Denne høye aminosyresekvens identitet skaper utfordringer i å utvikle spesifikke antistoffer mot GSNOR. Polyklonale antistoffer er blitt anvendt i flere publikasjoner [3], [10] – [13], og den eneste kommersielt tilgjengelige antistoffer for GSNOR er polyklonalt. For eksempel, Marozkina og kolleger brukte kommersielt tilgjengelige polyklonale antistoffer mot human GSNOR å antyde at redusert GSNOR aktivitet fra et terapeutisk GSNOR inhibitor kunne forlate lungen utsatt for onkogene effekter fra nitrosative spenning [12]. Vi viser at disse polyklonale antistoffer ikke har tilstrekkelig spesifisitet til å konkludere med at signalet observert skyldes GSNOR fremfor andre ADH isoenzymer. Vi har utviklet flere svært spesifikke monoklonale antistoffer mot humant GSNOR og brukt disse antistoffene å screene matriser av ulike kreft og normal lunge vevsprøver. I tillegg til immunhistokjemi, vi målt kvantitativt mRNA-nivåer av GSNOR og andre ADH isozymer. Vi viser at de tidligere rapporterte signal observert av Marozkina et al. var mer sannsynlig ADH IB og ikke GSNOR. Monoklonale antistoffer mot GSNOR gi en mer hensiktsmessig verktøy for å karakter GSNOR protein uttrykk.
Materialer og metoder
Antistoffer og rensede proteiner
ADH IA protein ble kjøpt fra Abnova (Taipei City , Taiwan, # H00000124-Q01), men noen degradering ble notert i dette preparatet. Andre proteiner som brukes i denne studien var forberedt for oss av Emerald BioStructures (Bainbridge Island, WA) som beskrevet tidligere [14]. I korthet, GSNOR, ADH IB, ADH II og IV ADH ble uttrykt med et N-terminal 6x -histidine affinitetsmerkelapp og en Smt-fusjonssekvens som ble fjernet ved ulp-1-spaltningssetet etter Ni-affinitetskromatografi for å frembringe full-lengde rekombinante proteiner. De omtrentlige molekylvekter for ADH proteinene før og etter fjerning av His-Smt tag er: ADH IB (51 kDa, 40 kDa), ADH II (51 kDa, 40 kDa), og ADH IV (53 kDa, 41 kDa) . Den Hans-SMT-GSNOR fusjonsproteinet er ca 50 kDa. De GSNOR proteinpreparater anvendt for antistoffgenerering ble bekreftet ved Emerald BioStructures å være full lengde ved massespektrometri [4] med en molekylvekt på 39,6 kDa. Vi og andre [15] har vist at GSNOR, enten renset fra humane eller cellelysater, gående vandrer litt raskere enn dens forutsagte molekylvekt på SDS-PAGE. En polyklonale antistoff ble generert fra serum hos rotter immunisert med renset, rekombinant, full lengde human GSNOR protein på Biomodels (Watertown, MA) for N30 Pharmaceuticals. Tre forskjellige monoklonale antistoffer mot humant GSNOR (N30-C3 rotte anti-GSNOR, N30-F6 mus anti-GSNOR, og N30-G11 mus anti-GSNOR) ble generert ved immunisering av mus eller rotter med renset, rekombinant, full lengde human GSNOR protein på ProMab Bioteknologi (Richmond, CA) for N30 Pharmaceuticals. Serum titer ble evaluert ved ELISA før utvalget for hybridisering. Hybridom fusjon med myelomceller (ProMab Biotechnologies, Richmond, CA) ble utført med splenocytter fra mus eller rotte med den beste titer. Supernatanter fra hybridoma-brønnene ble screenet ved hjelp av ELISA for positiv reaktivitet for GSNOR. Supernatanter ble også undersøkt med ELISA for negativ reaktivitet for ADH IB, ADH II og ADH IV. Supernatant fra 10 kloner ble deretter screenet ved N30 Pharmaceuticals ved western blot for spesifisitet for GSNOR isoenzym og minimale ikke-spesifikk proteinbinding. To av de 10 kloner for både mus og rotter ble valgt ut og deretter subklonet ved ProMab ved begrensende fortynning. For de monoklonale antistoffer fra mus, ble en tilførsel av antistoff fremstilt ved ascites produksjon på 10 mus, og antistoffet ble høstet og renset ved kromatografi IgG. For rotte monoklonalt antistoff, ble antistoff produsert in vitro ved hjelp av cellekultur og renset IgG. Kanin polyklonale anti-GSNOR ble kjøpt fra Proteintech (Chicago, IL, # 11051-1-AP).
GSNOR immunoblotting
Renset ADH proteiner (22,5 ng /brønn) ble analysert ved SDS PAGE og immunblotting ved bruk av polyklonalt antistoff (Proteintech; 1:50 fortynning til endelig konsentrasjon på 1,4 ug /ml) eller monoklonale antistoffer (rotte-anti-GSNOR N30-C3, 2,4 ug /mL, mus anti-GSNOR N30-F6 og N30- G11 10 ng /ml). HRP konjugerte sekundære antistoffer (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) ble brukt for deteksjon.
GSNOR immunhistokjemi
Immunhistokjemisk analyse for GSNOR ble utført ved hjelp av formalinfiksert, parafin forankret menneskelig lungevev mikromatriser (Folio Bioscience, Columbus, OH; # ARY-HH0178, # ARY-HH0176). Lysbilder ble deparaffinized i xylen og rehydrert til vann gjennom en serie av alkohol gradienter. Objektglassene ble forbehandlet i en 95 ° C-citrat pH 6,1 antigenisk henting løsning (Dako, Carpinteria, CA). Etter at skinnene for å avkjøles til romtemperatur, ble en 3,0% hydrogenperoksid løsning (EMD Chemicals, Gibbstown, NJ) tilsatt for å stanse endogen peroksidaseaktivitet. Objektglassene ble preinkubert med serumfritt Protein Block (Dako) etterfulgt av inkubasjon med et GSNOR antistoff eller den passende ikke-spesifikk immunoglobulin kontroll: rotte-IgG-kontroll (ABD Serotec, Raleigh, NC), mus IgG2b (Dako), eller kanin Ig-fraksjonen (Dako). Presentasjoner merket med N30-C3-antistoff ble deretter inkubert med kanin-anti-rotte-immunoglobulin (Dako), og alle objektglass ble deretter merket med et geit anti kanin eller anti mus polymer (Dako). DAB + (Dako) ble brukt for deteksjon og lysbilder ble teller farget med hematoksylin (Dako).
Analyse av mRNA nivåer i lungevevet
cDNA arrays laget av 23 matchet par av normal og kreft lungevev ble kjøpt fra Origene (Rockville, MD; # HLRT504, vare # 0411). Parene er inkludert lungekreft vev som dekker Trinn IA (n = 4), IB (n = 4), IIA (n = 2), IIB (n = 8), IIIA (n = 3), og IIIB (n = 2) hver forbundet med tilstøtende normalt vev. En Stage IV vevsprøve ble ikke koblet sammen med en normal prøve, og ble ikke tatt med i analysen. Genuttrykk av GSNOR (ADH III; genet navn
ADH5
), ADH IB (genet
ADHIB
), ADH II (genet
ADH4
), ADH IV (genet
ADH7
), og beta-aktin ble kvantifisert ved qPCR hjelp TaqMan primer probe sett (Applied Biosystems, Carlsbad, California): human B-Actin (Hs00357333_g1), human GSNOR (Hs00605185_m1), human ADH IB (Hs00605175_m1) , human ADH II (Hs00923466_m1), and human ADH IV (Hs00609447_m1). Kvantitativ PCR (qPCR) ble utført med en ABI 7300 RT PCR instrument (Applied Biosystems) ved hjelp av Perfecta qPCR fastmix (Quanta biovitenskap, Gaithersburg, MD) i henhold til produsentens instruksjoner. Prøvene ble underkastet en syklus ved 95 ° C i 3 minutter, etterfulgt av 40 sykluser ved 95 ° C i 15 sekunder og 60 ° C i 1 minutt. For dataanalyse, sammenlignende terskel sykkel verdier (C
t) for beta-aktin ble brukt til å normalisere laste variasjoner og beregne A C
t-verdier. ΔΔC
t-verdier ble beregnet ved å subtrahere A C
t-verdien for kontrollen (normal) vev fra A C
t-verdien for den samsvarende tumorvev. ΔΔC
t-verdiene ble konvertert til å kaste forskjeller ved hjelp av formel 2
-ΔΔCt.
Resultater
Commercial polyklonale GSNOR antistoff kryssreagerer med andre ADH proteiner
Nyere arbeider undersøke GSNOR i human lungekreft [12] anvendes immunhistokjemisk farging av humane lungekreft prøver med en kommersielt tilgjengelig polyklonalt GSNOR antistoff (se materialer og metoder). Fordi protein sekvens av GSNOR er sterkt konservert med andre ADH isozymer, bestemt vi sin spesifisitet for GSNOR sammenlignet med sin spesifisitet overfor andre ADHS. Kryssreaktivitet ble undersøkt ved immunblotting ved anvendelse av renset rekombinant human GSNOR (ADH III), ADH IA, IB ADH, ADH II, og /eller ADH IV. Som vist i figur 1 A, er en vanlig brukt kommersielt polyklonalt antistoff sterkt kryssreagerer med andre proteiner ADH, særlig ADH IB, ADH II og ADH IV. Vi testet andre kommersielt tilgjengelige polyklonale antistoffer og en in-house forberedt rotte polyklonale GSNOR antistoff og fant alle polyklonale antistoffer testet også sterkt kryss reagert med ADH proteiner (data ikke vist og figur 1B). For å løse dette problemet, ble monoklonale antistoffer spesifikke for GSNOR utviklet av immunisering av mus og rotter med renset, full lengde, rekombinant human GSNOR som beskrevet i metodene. Dette arbeidet inngår også en counter-screening skritt for å minimere kryssreaktivitet til andre ADH proteiner. Som vist i figur 2, er tre av de nye monoklonale antistoffer mot GSNOR enten sterkt redusert eller ingen kryss-reaktivitet til andre ADH proteiner. Så vidt vi vet, er dette den første papir å beskrive antistoffer med dette nivået av spesifisitet mot GSNOR.
22.5 ng rensede rekombinante proteiner ble separert ved SDS-PAGE og immunoblot ble utført for å bestemme antistoff reaktivitet til GSNOR, ADH IA, ADH IB, ADH II, og ADH IV. Med unntak av ADH IA, ble de rensede rekombinante proteinene ble generert med et fusjonsprotein kode i løpet av kloning, og merkelappen ble spaltet av under rensing som beskrevet i avsnittet Materialer og metoder. Molekylvektene for fusjonsproteinene er omtrent 50-51 kDa, og de endelige, rensede proteiner er 39-41 kDa. Humant GSNOR gående vandrer hurtigere enn den beregnede molekylvekt. Som det fremgår av hensyn til nærvær av både 50 og 40 kDa-båndene for ADH II, fortsatt inneholder mesteparten av proteinet i dette preparat fusjonsproteinet tag. Men det rensede GSNOR protein som brukes for immunisering ble bekreftet å være full lengde, og uten ytterligere kode rekkefølge som beskrevet i avsnittet Materialer og metoder. A) Kommersielt tilgjengelig kaninpolyklonalt GSNOR antistoff (Proteintech # 11051-1-AP). B) In-house polyklonale antistoff generert ved immunisering av rotter med renset, rekombinant, full lengde human GSNOR protein på Biomodels (Watertown, MA) for N30 Pharmaceuticals.
Purified rekombinante proteinene ble separert ved SDS PAGE og immunoblot ble utført for å bestemme antistoff reaktivitet til GSNOR, ADH IB, ADH II, og ADH IV. Tre uavhengige monoklonale antistoffer ble undersøkt: A) N30-F6 mus anti-GSNOR; B) N30-G11 mus anti-GSNOR; C) N30-C3 rotte anti-GSNOR.
monoklonale GSNOR antistoffer påvise uttrykk i et bredt spekter av menneskelige lungekreft
Vi undersøkte GSNOR proteinnivået i ulike lungekreft vev ved immunhistokjemi ved hjelp av de ovenfor beskrevne tre GSNOR-spesifikke monoklonale antistoffer og sammen vevet fargemønsteret til de kommersielt tilgjengelige polyklonale antistoff som brukes i en tidligere publikasjon [12]. Vi har også sammen antistoffet signal i normalt lungevev. Ved hjelp av de fire antistoffer, farget vi fire identiske humane lungekreftmicroarray for hver inneholder menneskelig vev kjerner fra over 100 tilfeller av lungekreft på ulike stadier av utviklingen. GSNOR var sterkt påvist i normalt humant lungevev inkludert i bronkiale epitelceller, alveolære makrofager, og type 2 pneumocytes i alveolene (figur 3). GSNOR ble også påvist i en rekke av lungekreft vev, inkludert adenokarsinom, platecelle-karsinom, papillær adenokarsinom, og storcelle karsinom når vev ble farget med det monoklonale GSNOR antistoffer (Figur 4, N30-C3, N30-F6, N30-G11 ). Farging i lungekreft vev var svakere når det polyklonale antistoff ble anvendt (figur 4, 11051-1-AP). Vevssnitt ble scoret av tre anmeldere for GSNOR farging for hvert antistoff (tabell 1). Ved hjelp av de tre spesifikke monoklonale antistoffer, GSNOR protein nivåer var ikke annerledes i lungekreft eksemplarer sammenlignet med normalt vev; mens det polyklonale antistoff med demonstrert ADH kryssreaktivitet antydet at GSNOR ekspresjon var høyere i normalt lungevev.
normalt humant lungevev mikromatriser ble farget med N30-C3 monoklonalt GSNOR antistoff (1 ug /mL) fulgt av DAB deteksjon . Bronkial epitelceller, alveolære makrofager og type 2 pneumocytes i alveolene er sterkt farget.
Normal menneskelig lungekreft microarray ble farget med monoklonalt GSNOR antistoffer (N30-C3, N30-F6, N30-G11 ) eller et kommersielt tilgjengelig polyklonalt antistoff GSNOR (11051-1-AP) fulgt av DAB-deteksjon. Forskjellige humane lungekreft vev er sterkt farget av alle tre GSNOR monoklonale antistoffer, men fargingen er mindre fremtredende når den ikke-spesifikke polyklonale antistoff GSNOR anvendes.
GSNOR mRNA-nivåer er ikke redusert i human lungekreft vev versus tilstøtende normalt vev
på grunn av faren for subjektivitet i gradering vev farging ble GSNOR og ADH mRNA nivåer vurderes kvantitativt i human lunge kreft cDNA arrays. Kommersielt tilgjengelige cDNA arrays (se materialer og metoder) ble brukt som inneholdt 23 matchet par av normal og kreft lungevev. Parene er inkludert Trinn IA (n = 4), IB (n = 4), IIA (n = 2), IIB (n = 8), IIIA (n = 3), og IIIB (n = 2) lungekreft vevene hvert sammen med tilstøtende normalt vev. GSNOR mRNA-nivåer ble kvantifisert ved hjelp av qPCR, og relative mengder av GSNOR i tumor mot tilstøtende normalt vev ble beregnet som beskrevet i tilleggsmetoder. Ingen korrelasjon ble observert mellom GSNOR mRNA uttrykk og lungekreft. I denne analysen 11 av 23 tumorprøver hadde relativ svulst /normal-ekspresjons-forhold mindre enn 1, og 12 av 23 prøver hadde ekspresjonssystemer forhold 1. Videre bevis på dramatisk redusert GSNOR uttrykk var sjelden i de testede lungekreft prøver; Bare tre av de tumorprøver ble funnet med GSNOR ekspresjon ble redusert med mer enn tre ganger (ratio 0,33; figur 5). Motsatt, når ekspresjonen av ADH IB, ADH II og ADH IV ble analysert, mer av prøvene demonstrerte større ekspresjon avtar i tumorprøvene i forhold til GSNOR. Videre observerte vi betydelige reduksjoner i ADH IB uttrykk i lungekreft vev, med 12 av 23 parene med ≥10 ganger reduksjon i ADH IB uttrykk i lungekreft prøver (relative tumor /normal uttrykk forholdet ≤0.1). Bare tre av 23 par hadde økt uttrykk av ADH IB i lungekreft prøvene i forhold til tilstøtende normalt vev (figur 5).
GSNOR (genet navn
ADH5
), ADH IB (
ADHIB
), ADH II (
ADH4
), og ADH IV (
ADH7
) mRNA nivåer ble evaluert av qPCR i menneskelige lungekreft cDNA arrays (Origene, # HLRT504, vare # 0411, Rockville, MD) og normalisert til p-aktin nivåer. Arrays inneholdt 23 matchet par av normal og kreft lungevev. Tumor ekspresjon i forhold til den samsvarende normal prøve ble beregnet ved anvendelse av ΔΔCt metode. Relative mengder mindre enn 1 representerer redusert ekspresjon i tumorprøve. Lungekreft prøver tatt Trinn IA (n = 4), IB (n = 4), IIA (n = 2), IIB (n = 8), IIIA (n = 3), og IIIB (n = 2) med hver prøve sammen med tilstøtende normalt vev. Ingen sammenheng mellom GSNOR mRNA nivåer og lungekreft ble observert, mens uttrykk av ADH IB ble sterkt redusert i lungekreftprøver.
Diskusjoner
I lungene, endogene S-nitrosothiols inkludert GSNO mekle NO-basert signalering, betennelsesreaksjoner, og glatt muskelfunksjon. Hemming av GSNOR representerer en ny tilnærming til behandling av luftveislidelser via bevare endogen GSNO, og en roman GSNOR inhibitor er nå i klinisk utvikling for behandling av astma og cystisk fibrose [4].
I denne studien har vi demonstrere ingen konsistente forskjeller i ekspresjonen av GSNOR når en sammenligner lungekreft vevet til normalt lungevev. Disse funnene motsier tidligere utgitt arbeid av Marozkina og kolleger [12] som rapporterte at GSNOR uttrykket ble redusert i lungekreft vev. I sin analyse, forfatterne observert at 69% av humane lungekreft biopsier viste signifikant redusert GSNOR nivåer. I sin vurdering, GSNOR nivåene var signifikant lavere i sent stadium svulster sammenlignet med tidlig stadium svulster, og de konkluderte med at redusert GSNOR aktivitet er korrelert med senere stadier av svulst vedlikehold. Det er sannsynlig at en primær uoverensstemmelse mellom vår rapport og tidligere rapporter stammer fra mangel på spesifisitet av de polyklonale antistoffer som brukes i analysen. Vi viste at det polyklonale antistoff sterkt kryss reagerer med andre, nært beslektede proteiner, inkludert ADHIB, ADH II, og ADH IV. Faktisk har vi funnet at hver polyklonalt antistoff som vi har testet lider av den samme mangel på spesifisitet, og konklusjoner om GSNOR ekspresjon og lokalisering trukket fra forsøk under anvendelse av polyklonale antistoffer har et stort potensiale for å bli misforstått. Mangel på spesifisitet i polyklonale antistoffer er ikke overraskende gitt høy sekvensidentitet mellom GSNOR og andre ADH isoenzymer. Ved utvikling av et monoklonalt antistoff til GSNOR, har vi funnet det nødvendig å motvirke-skjerm klonene mot flere andre rensede ADH proteiner for å oppnå den ønskede spesifisitet. Bruke GSNOR spesifikke monoklonale antistoffer, fant vi ingen forskjell i farging av kreft kontra normal lungevevet.
I tillegg har vi utforsket uttrykk for ikke bare GSNOR men også andre ADHS i kreftvev lunge bruke mer definitive qPCR metoder. Ingen endring i GSNOR mRNA-ekspresjon mellom normale og kreft lungevev ble observert. Motsatt, når uttrykket av ADH IB, ADH II, og ADH IV ble analysert, så vi flere og større uttrykk synker i tumorprøver. Videre observerte vi betydelige reduksjoner i ADH IB uttrykk i lungekreft vev med 12 av 23 parene med ≥10 ganger reduksjon i ADH IB uttrykk i lungekreft prøver (relative tumor /normal uttrykk forholdet ≤0.1).
At ADH IB uttrykk viser noen sammenheng med lungekreft er ikke overraskende. ADH IB er integrert i et antall veier med kjent innflytelse på lungekreft inkludert fettsyre, retinol og tyrosin metabolisme, så vel som i glykolysen og glukoneogenesen [16]. I en meta-analyse av publiserte studier som ser på forholdet mellom ADH IB i lungekreft, ble ADH IB uttrykk redusert i lungekreft i et overveldende antall prøver og analyse [16] og klart polymorfismer av ADH IB har vist sammenhenger til andre typer av kreft inkludert esophageal [17]. I motsetning til ADH IB hvor det har vært betydelig etterforskning i dens forhold til kreft, har GSNOR uttrykk nivåer nylig blitt foreslått å korrelere med leverkreft [13]. Disse studiene delvis avhengig av GSNOR knock-out mus som har betydelige fenotypiske forskjeller sammenlignet med villtype-kontroller, og nyere studier fra vårt laboratorium har vist at dette noen påståtte sammenhengen mellom genetisk sletting av GSNOR og leverkreft ikke er sett i et haplosufficient modell (GRJ og D. Colagiovanni, manuskript under utarbeidelse, N30 Pharmaceuticals).
i sammendrag, viser det seg at en reduksjon i ADH IB, snarere enn GSNOR, korrelerer med human lungekreft, og de tidligere rapporterte resultater viste feil sammenslutning av GSNOR og menneskelige risikoen for lungekreft. I ytterligere støtte for denne konklusjonen, har publisert studier av mus med homozygot genetisk sletting av GSNOR fant ingen økning i murine lungekreft i begge ubehandlede GSNOR
– /- mus eller GSNOR
– /- mus behandlet med kreftfremkallende diethylnitrosamine [1. 3]. Dermed GSNOR uttrykk og hemming ikke ut til å være forbundet med risiko for human lungekreft.
Takk
Forfatterne takker Ross Benik for teknisk assistanse med vev flekker.
