Abstract
Bakgrunn
Microseminoprotein-beta (MSMB) regulerer apoptose og ved hjelp av genom-wide forening studerer rs10993994 enkeltnukleotidpolymorfi i
MSMB
arrangøren har vært knyttet til økt risiko for å utvikle prostatakreft. Promoteren Plasseringen av risiko allel, og dens evne til å redusere promoteraktivitet, antydet at rs10993994 risiko allel kan resultere i senket MSMB i godartet vev som fører til økt risiko for prostatakreft.
metodikk /Principal Funn
MSMB ekspresjon i godartet og ondartet prostatavevet ble undersøkt ved hjelp av immunhistokjemi og sammenlignet med den rs10993994 genotype. Urin MSMB Konsentrasjoner ble bestemt ved hjelp av ELISA og korreleres med urin PSA, tilstedeværelse eller fravær av kreft, rs10993994 genotype og alder av utbruddet. MSMB nivåer i prostatavevet og urin ble sterkt redusert med tumorgenesen. Urin MSMB var bedre enn urin PSA ved å skille menn med prostatakreft på alle Gleason karakterer. Den høye risikoen allelet ble forbundet med heterogenitet av MSMB farging og tap av MSMB i begge vev og urin ved benign prostata.
Konklusjoner
Disse data viser at noen høy risiko alleler ble oppdaget ved bruk av genom-wide assosiasjonsstudier produsere fenotypiske effekter med potensiell klinisk nytte. Vi gir den første koblingen mellom en lav pene polymorfisme for prostatakreft og en potensiell test i menneskelig vev og kroppsvæsker. Det er potensial for å utvikle vev og urin MSMB for en biomarkør for prostatakreft risiko, diagnose og sykdom overvåking
Citation. Whitaker HC, Kote-Jarai Z, Ross-Adams H, Warren AY, Burge J, George A, et al. (2010) Den rs10993994 Risk allelet for Prostate Cancer Resultater i klinisk relevante endringer i Microseminoprotein-Beta Expression i Tissue og urin. PLoS ONE 5 (10): e13363. doi: 10,1371 /journal.pone.0013363
Redaktør: Andrew Vickers, Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, USA
mottatt: 30 juni 2010; Godkjent: 01.09.2010; Publisert: 13 oktober 2010
Copyright: © 2010 Whitaker et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Forfatterne ønsker å takke støtte fra The University of Cambridge, Cancer Research UK (tilskuddskoder C522 /A8072 og C5047 /A8385), institutt for kreftforskning, The Everyman Campaign, EUs FP7 Promark arbeidspakke og Hutchison Whampoa Limited og prostata Cancer Research Foundation. Forfatterne ønsker å takke støtte fra National Institute for Health Research som finansierer Cambridge Bio-medisinsk forskningssenter, Cambridge, Storbritannia, Bio-medisinsk forskningssenter ved Institutt for kreftforskning og konge Marsden NHS Foundation Trust og Biomedical Research Centre på Central Manchester Foundation Trust. Forfatterne ønsker også å anerkjenne støtte fra National Cancer Research prostatakreft: Mekanismer av progresjon og behandling (spørsmål) samarbeids (tilskudd kode G0500966 /75466) som har finansiert vev og urinsamlinger i Cambridge. Forfatterne ønsker også å erkjenne støtte fra Kreft Råd Victoria og South Australia, Prostate Cancer Foundation of Australia, den viktorianske Cancer Agency, Jack og Judy Baker for deres støtte på Northshore University Health System og The Ronald og Rita McAulay Foundation som støtter IMPACT studien samlingen. Douglas Easton er et Principal Stipendiat of Cancer Research UK. Hans Lilja er finansiert av National Cancer Institute [tilskudds tall R33-CA127768-02]; Svenske Cancer Society [3455]; og svenske Vetenskapsrådet (medisin) [20095]. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. Dr. Hans Lilja har patenter for gratis PSA og HK2 analyser. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer, som beskrevet på nettet i veiledningen for forfatterne.
Innledning
Microseminoprotein-beta (MSMB) er nest vanligste protein som finnes i sæd etter prostataspesifikt antigen (PSA) [1]. I motsetning til PSA, blir MSMB ikke direkte regulert av androgener og dets nivå er ikke påvirket av hormonmanipulasjon [2], [3], [4]. Prostata spesifisitet MSMB ekspresjon ble først demonstrert i gnagere [5], [6], og som støttes ved utvikling av en prostata musemodell som brukes
msmb
promoter /enhancer region for å målrette mot prostata spesifikt uttrykk [7], [8]. Men studier hos mennesker antyder MSMB kan uttrykkes i en rekke sekretoriske og slimhinnevevet, om enn ved mye lavere nivåer enn i prostata [9], [10], [11], [12], [13], [14].
To genom vide assosiasjonsstudier (GWAS) har identifisert en tag liten nucleotide polymorphism (SNP), rs10993994, på 10Q som er sterkt assosiert med økt risiko for å utvikle prostatakreft [15], [16]. Denne SNP er i 5 «UTR av
MSMB
. Risikoen allelet er vanlig, med en frekvens på ~30-40% i europeere og 70-80% hos menn av afrikansk herkomst, og overfører en økt risiko for prostatakreft 1,3 (per allel odds ratio). Denne foreningen er observert i både europeere og afrikansk-amerikanere og ser ut til å være uavhengig av alder av diagnose og tumor grad [17]. Fin skala kartlegging har ikke identifisert noen andre uavhengig forbundet varianter i regionen. Videre er en nyere studie cellelinjer vist at risikoen allelet (T) en signifikant reduksjon i aktiviteten promoteren av genet til 13% av den i den lave risiko allelet (C) [18]. Ettersom dette SNP ligger innenfor
MSMB
proksimale promoter regionen redusert promoter aktivitet er foreslått å skje via endrede transkripsjonsfaktorbindingsseter som CREB [19]. Disse dataene antyder sterkt at den rs10993994 T allelet er årsaksmessig forbundet med prostata kreftrisiko, og at denne assosiasjonen kan være mediert gjennom redusert uttrykk for MSMB protein i godartet prostatavevet. Det har blitt rapportert at
MSMB
mRNA i cellelinjene ble redusert i celler homozygote for risikoen allele, noe som antyder en hypotese hvorved redusert MSMB ekspresjon i individer med risiko rs10993994 allelet kan føre til redusert regulering av cellevekst og en økt risiko for tumorgenesen [19].
Flere grupper har undersøkt MSMB ekspresjon i prostata cancer, og alle har funnet høyere nivåer av MSMB i benign og normalt vev eller serum sammenlignet med materiale fra tumorer [2], [ ,,,0],3], [4], [12], [20], [21], [22], [23]. Til dags dato ingen studier har blitt gjennomført i urinen. Høye nivåer av MSMB i benign vev er i overensstemmelse med hypotesen om at MSMB binder seg til celleoverflatereseptorer og regulerer prostata vekst ved å regulere apoptose muligens via MAP-kinase /AKT signalering [24], [25], [26].
Prostatakreft er den vanligste solide mannlige kreft i Storbritannia. I dag er den beste diagnostiske verktøy er serum PSA mens urin PCA3 mRNA er også brukt som et nyttig diagnostisk test spesielt for menn med hevet PSA og en innledende negativ biopsi [27]. Imidlertid er behovet for en digital rektal eksamen før testing utelukker dets anvendelse som et screening-verktøy. Urin Ptil har blitt rapportert som et potensielt nyttig diagnostisk verktøy hos menn med serum PSA 2,5-10 ng /ml og er av spesiell interesse for screening og overvåking sykdom som det er mer akseptabelt for pasientene. [28].
Vi har brukt immunhistokjemiske studier av MSMB i godartet prostatavevet til å demonstrere en sammenheng mellom MSMB protein uttrykk og rs10993994 genotype. Vi har utviklet en urin ELISA-analyse for å undersøke sammenhengen mellom urin Ptil, MSMB nivåer og MSMB genotype for å finne ut om dette har potensial for klinisk bruk som en screening eller diagnostisk verktøy.
Materialer og metoder
Etikk Uttalelse
Full etisk godkjenning ble innhentet for alle menneskelige prøvekolleksjoner fra enten West Midlands Multi-Centre forskningsetiske komité eller Trent Multi-Centre forskningsetiske komité. Alle prøver ble innhentet skriftlig samtykke og analysert anonymt.
Pasient kohorter
Tissue, ble blod- og urinprøver fra pasienter med diagnosen prostatakreft hentet fra Addenbrooke Hospital, Cambridge, UK (radikale prostatectomies samlet mellom 2001 og 2008) og The Institute of Cancer Research (biopsi og trans-urethral prostatectomies samlet 1995-2002). Normal /godartet pasienter ble rekruttert som en del av konsekvensutredningen, en studie av prostatakreft risiko hos menn med
BRCA1 /2
germline mutasjoner ved Institutt for kreftforskning (05 /MRE07 /25) [29]. Denne kohorten hadde ingen historie av prostata sykdom og inkludert menn med mutert og villtype (kontroll)
BRCA1 Hotell og
BRCA2
. Median alder, PSA og Gleason score til kohortene brukt gitt i Figur S1.
Ikke alle pasienter hadde god kvalitet vev for IHC, DNA for genotyping, serum PSA målinger og urin tilgjengelig. For å overvinne dette ble pasientene delt inn i tre kohorter å svare på konkrete spørsmål. 168 pasienter med god kvalitet vev ble anvendt for IHC studien er vist i Figur 1. Prøver fra 133 av pasientene ble gjort om til en vev microarray (TMA) som inneholder flere kjerner fra normal- /benigne regioner ( 3), prostata intra-epitelial neoplasi (PIN), og minst to distinkte områder av tumoren for hver pasient. De resterende tilfellene var en del av en ekstra TMA av unge utbruddet prostatakreftpasienter (definert som diagnostisert på ≤60 år) fra Storbritannia Genetic Prostate Cancer Study. Dette TMA inkluderte flere normale /godartede og svulst regioner for 35 pasienter. n = angir antall hendelser snarere enn antall kjerner undersøkt dvs. hvor heterogen sykdomslære ble funnet begge regioner ble scoret uavhengig av hverandre.
MSMB immunhistokjemi ble utført på TMA bruker en BondMax Autostainer. For alle deler kjerner er vist i blått og MSMB flekker i brunt. (A) MSMB var ikke til stede i urothelium (venstre panel), svart pil – urothelium, hvit pil – prostata, sædvæske (sentral panel), svart pil – sædvæske, hvit pil – prostata, blære (høyre panel), svart pil – fettceller, hvit pil – blære muskularis propria. (B) MSMB flekker i prostata er spesifikk for godartet kjertler (hvite piler) og ikke prostata kreftceller (Gleason 3) (svarte piler). MSMB også unnlatt å farge atrofisk godartede kjertler. Eksempler på farge kriterier (ingen /svake, moderate og sterke) brukes på immunhistokjemi. Resultater av flekker var svært viktig som beregnes ved hjelp av en Kruskal-Wallis test. n representerer antall patologiske hendelser scoret.
Bare 145 pasienter hadde DNA som kan brukes for genotyping som vist i figur 2B. Komplett radikal prostata seksjoner eller svært store deler vev var tilgjengelig fra 32 pasienter fra Addenbrookes kohorten.
(A) Et eksempel på mega-blokk farging av store prostata seksjoner som viser homogen (venstre panel) eller heterogen (høyre panel ) farging. MSMB immunhistokjemi ble scoret som før så sterk, moderat, svak eller tapt for hver pasient og stratifisert etter genotype; T – høy risiko, C- lav risiko. p-verdier ble beregnet ved hjelp av en Kruskal-Wallis test. n representerer antall patologiske hendelser scoret.
For MSMB ELISA vist i Figur 3 89 menn med prostatakreft som hadde vev, DNA og en urinprøve ble brukt. Den normale /godartede pasienter ble rekruttert som en del av konsekvensutredningen, en studie av prostatakreft risiko hos menn med
BRCA1 /2
germline mutasjoner (n = 215). Alle urinprøver ble tatt før en hvilken som helst digital rektal undersøkelse, alikvoteres og fryses umiddelbart ved -80 ° C. Der det er tilgjengelig alder, Ptil og Gleason score på diagnose ble bestemt for hver pasient.
Urin MSMB og PSA-konsentrasjonen ble bestemt og normalisert til kreatinin. (A) Urin MSMB ble bestemt ved hjelp av ELISA for normal /godartet pasientmateriale og en mindre kohort med en prostata kreftdiagnose. Det samme kohort ble også testet for urin PSA og serum PSA-verdier sorterte. ROC kurver ble generert; AUC = areal under kurven, blir konfidensintervall gitt i parentes og p-verdiene er gitt ved 95% konfidensnivå. Forskjellen mellom urin MSMB og PSA ROC kurver p = 0,0021. Forskjellen mellom urin MSMB og Svulsten kohorten ble ytterligere stratifisert ved Gleason sum score (B). Urin MSMB og PSA fra lave Gleason prøver (6 og 7) ble sammenlignet med høy Gleason (8 og 9) prøver og ROC-kurver generert og vist som før. Urin ble også MSMB stratifisert i henhold til den rs10993994 risiko allelet (C). n = antall individer undersøkt i hver gruppe.
Genotyping
Genotyping ble gjennomført som tidligere beskrevet [15]. DNA ble ekstrahert fra fullblod for serie 2 og 3, enten kommersielt ved GeneProbe eller med Qia-amp® DNA Mini Kit (Qiagen) i henhold til produsentens instruksjoner. Genotyping av prøver ble utført ved 5’exonuclease assay (Taqman ™) ved anvendelse av ABI Prism 7900HT sekvens deteksjonssystem i henhold til produsentens instruksjoner. Primere og prober ble levert direkte fra Applied Biosystems som Analyser-By-Design ™.
Immunohistochemistry
Alle immunhistokjemi (IHC) ble utført ved hjelp av en Bondmax automatisert Stainer og anti-MSMB antistoff (Abcam) (1:400) på vev fra serie 1 og 2. For fler normal /svulst rekke en 48 kjerne TMA fra Stretton Scientific ble benyttet. Kjerner ble kontra med hematoksylin og lysbilder avbildes ved hjelp av en skanner system Aperio. Patologi ble bekreftet av en spesialist uro-patologen (AW) før scoring av en hvilken som helst immunhistokjemisk farging. Skåring ble utført av to observatører, en av disse var en uro-patologen (AW), og en enighet oppnådd. Sekvensiell hematoksylin og eosin farget snitt ble anvendt for å bekrefte patologi. Farging ble gradert som; «None» – ingen farging, «svak» – ikke alle epitelceller farget og blek flekker, «moderat» – de fleste eller alle epitelceller farget moderat, «sterk» – alle epitelceller farget sterkt (figur 1B). Der deler inneholdt heterogen flekker en generell enighet ble oppnådd basert på de relative andeler av de ulike score. Hvor heterogen patologi eksistert innenfor kjerner f.eks benigne og tumor regioner side-ved-side, ble hver region scoret som en egen hendelse. n = angir antall hendelser snarere enn antall kjerner undersøkt
PSA og MSMB målinger
Serum og urin PSA (Free Total). kreatinin analysene ble utført av NIHR Cambridge Biomedical Research Centre Kjerne biokjemi Analyselaboratoriet, Addenbrookes Hospital bruker ProStratus Free /Total PSA DELFIA kit (Perkin Elmer Life Analytical Sciences) og Dimension RXL analysator (Siemens Healthcare). For MSMB ELISA alle prosedyrer ble utført med risting ved romtemperatur. Brønnene ble vasket mellom hvert trinn tre ganger med 0,05% PBS-Tween og en BioTek Elx50 platewasher. Nittiseks-brønners plater (Fisher Scientific) ble belagt over natten ved 4 ° C i mus anti-PSP94 antistoff (1:1000, Abcam) fortynnet i PBS. Brønner ble blokkert med 1% BSA (Sigma) i 1 time før 50 ul prøve eller standard ble tilsatt til hver brønn i duplikat og inkubert i ytterligere 2 timer. Seriefortynninger (25 til 0,78 ug /ul) av rekombinant PSP94 (rPSP94, R 20% variasjon i standardkurven ble ansett å ha mislyktes og gjentas. Intra- og inter-assay variasjonen var henholdsvis 8,8% og 22%. Påvirkning av proteinstabilitet ble vist å være 20% etter testing ved fryse tining 3 ganger før analysering eller inkubering av forblandet rPSP94 -3 i 4 timer ved romtemperatur før analysering. Utvinning fra forskjellige væsker ble bestemt til å være 20% ved å fortynne rPRDX-3 i enten PBS, 0,1% bovint serumalbumin (Sigma) eller 10% geiteserum (Dako Cytomation). MSMB Konsentrasjonen ble bestemt ved interpolering av verdier fra ikke-lineære regresjon av sigmoidal standardkurven. Konsentrasjonen av alle urinprøvene ble normalisert ved hjelp av kreatinin målt ved anvendelse av en kreatinin-analysesett (R 0,0001, figur 1B og Figur S1) [2], [3], [4], [12], [20], [21], [22], [23]. MSMB farging ble også konsekvent tapt i prostata intra-epithelial neoplasi (PIN) sammenlignet med godartet vev (p 0.0001) som tyder på at det kan være et tidlig, årsakssammenheng, hendelse i tumorgenesen. Farging for MSMB i benign vev varierte fra homogene, som ble mest sett med sterk farging (figur 2A, venstre panel) og variabel, uensartet farging ofte sett med svak og moderat farging (figur 2A, høyre panel).
MSMB farging i vev ble signifikant assosiert med rs10993994 genotype (p 0,0001), farging være svakeste i menn homozygot for høy risiko allel (TT) og sterkest i CC homozygote (figur 2B). Det var ingen bevis for en sammenheng mellom MSMB flekker og alder eller PSA ved diagnose i denne ondartet serie av menn (figur S3).
Vi er fast bestemt urinnivåer MSMB i 215 normale /godartede menn med ingen historie av prostata sykdom og 89 menn med prostatakreft (figur S4). I samsvar med foreningen i prostata vev var det en betydelig nedgang i urin MSMB hos menn med svulster sammenlignet med menn med ingen historie av prostata sykdom (Støtte Document 4A) (p 0,0001). Urin MSMB betydelig forbedret ved urin PSA, men ikke serum PSA, for prostatakreft diagnose i denne kohorten (forskjellen mellom urin MSMB og PSA ROC kurver 0,21, 95% KI: 0,075, 0,34, p = 0,0021) (figur 3A). Når tumor prøvene ble delt i lav (6 og 7) og høy (8 og 9) sum Gleason Stillingen urin MSMB viste høy grad av spesifisitet og sensitivitet, spesielt når sammenlignet med urin PSA (figur 3B). Det var en betydelig reduksjon i urin MSMB med høy risiko allelet sammen (TT) av den lave risiko allelet (CC) (figur 3C) (p = 0,0319), selv om dette ikke ble reflektert i en signifikant forskjell i ROC-kurver. Hevet godartet urin MSMB er usannsynlig å reflektere en økt godartet prostatavolum, så det var ingen signifikant økning i urin MSMB med alderen (Støtter Document 4B) (p = 0,543). For å demonstrere at korrelasjonen var spesifikke for rs10993994 genotype vi sammenlignet urin MSMB nivåer og BRCA1 og BRCA2 germline mutasjon status, som er kjent for prostatakreft risikofaktorer [30], [31], og fant ingen link (figur S4).
Diskusjoner
Dette er den første studien for å beskrive forholdet mellom risiko allel av tag SNP rs10993994 og MSMB nivåer i godartet og svulst prostata vev og å relatere proteinnivået med genotype og aggressivitet av prostata kreft. Den nesten fullstendig tap av MSMB i PIN (figur 1B) tyder på at redusert MSMB er en tidlig hendelse i tumorgenesen forenlig med en sammenheng mellom prostatakreft risiko og rs10993994 genotype.
Det er sterke bevis knytter rs10993994 SNP i
MSMB
promoter-regionen til en økt risiko for å utvikle prostatakreft [15], [16]. MSMB har blitt studert av et stort antall grupper som en antatt prostatakreft biomarkør fordi nivåer i vev og serum er redusert eller gått tapt med utvikling av kreft [2], [3], [4], [12], [20], [ ,,,0],21], [22], [23] (figur 1B). Vi har bekreftet disse funnene og også at MSMB er i stor grad prostata spesifikt på proteinnivået i vev (figur 1A og fig S2). Nyere bevis tyder på at når prostatakreft har utviklet rs10993994 har liten effekt på sykdomsutviklingen indikerer at noen økning i risiko påvirker godartet kjertelen og initial tumor utvikling [17]. Dette er i overensstemmelse med tapet av MSMB som vi har nevnt i PIN-kode, noe som antyder at redusert eller tapt MSMB ekspresjon i benign prostata er nødvendig for malign transformasjon. Koblingen mellom MSMB risiko allel og uttrykk i vev var svært signifikant (p 0,0001) (figur 2B). Uttalt heterogenitet ble også bemerket i vev med moderat til lav ekspresjon oftest knyttet til TT allel (Figur 2A).
Flere grupper har undersøkt MSMB nivåer i serum demonstrere prognostisk verdi etter radikal prostatektomi [3], [32 ]. I overensstemmelse med tapet av MSMB i tumorigene kjertler (figur 1B) har vi demonstrert et meget betydelig tap av MSMB i urin fra pasienter med både lav og høy Gleason grad prostatakreft ble sammenlignet med dem uten kjent prostata sykdom (figur 3A). Disse resultatene sammenlignet gunstig med urin PSA som tidligere har blitt rapportert å ha potensielle kliniske nytte hos pasienter med serum PSA på 4-10 ng /ml [28]. Urin MSMB var ikke så nøyaktig som serum PSA, dagens gullstandarden test for diagnostisering av prostatakreft (AUC på 0,97 for serum PSA og 0,77 for urin MSMB. Men våre kohorter ikke representerer den falske positive og negative sett når PSA brukes for befolkningen screening tyder på en mindre partisk kohort bør testes etablere den sanne fordel for urin MSMB for prostatakreft screening. Selv om det er kanskje overraskende at slike endringer er så lett synlig gitt potensielt lite antall tumorer kjertler innenfor en ellers godartet prostata. Men vi har vist nesten komplett prostata spesifisitet for MSMB protein som tyder på det er usannsynlig at betydelige nivåer av MSMB oppstå fra alle andre vev. det er sannsynlig at en andel av menn i vår normale /godartet studien (median alder av 53 år) vil ha en viss grad av benign prostatahyperplasi (BPH), men vi noterte ingen signifikant økning i urin MSMB med økende alder tyder på at økt prostatavolum har liten effekt på urin MSMB (figur S4).
urin~~POS=TRUNC forskjeller i MSMB med risiko allel var betydelig, men ikke tilstrekkelig diskriminerende vår relativt liten kohort. Endringer var uavhengig av andre etablerte genetiske risikofaktorer som
BRCA1 Hotell og
BRCA2
mutasjon (figur S4). Økt analyse følsomhet og testing av en representant populasjonsbasert kohort forhold til PSA er mer sannsynlig å påvise noen sanne klinisk betydning i å bruke urin MSMB å beregne risiko og diagnostisere prostatakreft. Urin er et svært akseptabelt biologisk tiltak for pasienter og våre funn tyder på at MSMB er et potensielt mål for videre undersøkelser som en urin biomarkør for prostatakreft screening og diagnose, uten behov for en digital endetarms eksamen. I motsetning til Ptil har tidligere rapporter antydet at MSMB nivåer er upåvirket av hormonbehandlede terapi ofte brukt i prostatakreft behandling, og vi må finne ut om MSMB kan være nyttig i overvåking sykdomsbyrde hos pasienter som gjennomgår ulike former for behandling [2], [3] , [4]. MSMB kan også være nyttig i å oppdage pasienter med hevet PSA men en negativ biopsi som vil dra nytte av videre etterforskning.
Kvantitativ RT-PCR studier av cellelinjer har tidligere vist en sammenheng mellom rs109939994 T-allel og senket MSMB mRNA, mest sannsynlig på grunn av endret transkripsjonsfaktorbindende [19]. Demonstrasjonen av en tilsvarende sammenheng med urin MSMB og MSMB flekker i godartet prostatavevet forsterker årsakssammenheng mellom MSMB uttrykk og prostatakreft. Innenfor prostata MSMB antas å regulere apoptose via reseptorer på celleoverflaten, MAP kinase og AKT [24], [25]. Vi hypoteser som reduserte MSMB uttrykk hos menn med høy risiko allel kan redusere prostata celle apoptose og til slutt fremme mindre kontrollert prostata vekst. Tapet av en slik stor regulatorisk vei kunne fremme tumorgenesen og gi en forklaring på en økt risiko for å utvikle prostatakreft samtidig ha liten effekt på utfallet når kreften har utviklet [17].
Våre funn øke muligheten for at urin MSMB relatert til genotype kan være en nyttig biomarkør for screening for prostatakreft risiko og utvikling. Dette må utredes videre for å målrette de menn med økt risiko for økt overvåking og tidlig intervensjon og identifisere de menn med prostatakreft.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1. product: (A) Totalt 168 kreftpasienter ble studert, men ikke hver pasient hadde vev, DNA og urin tilgjengelig. Fra kullet 168 hadde vev som omfattet godartet som ble benyttet i figur 1. 145 pasienter hadde vev og DNA og ble inkludert i Figur 2. hadde 89 pasienter også en urinprøve, og kan bli brukt for ELISA er vist i figur 3. (B ) Detaljer om godartede og svulst kohorter som brukes i studien
doi:. 10,1371 /journal.pone.0013363.s001 plakater (0,73 MB EPS)
Figur S2.
MSMB er prostata spesifikt i normale og tumorvev. En fler normalt vev TMA ble farget for MSMB hjelp immunohostochemistry og en Bondmax Autostainer. Matrisen inneholdt flere kjerner fra følgende vev; hud, bryst, skjoldbruskkjertel, spiserør, nyre, blære, lunge, tykktarm, lever, ovarie, uterus og mage. Representative bilder fra testiklene (seminom tumor), er bryst og prostata vist. MSMB farging er brun, atomkjerner er blå
doi:. 10,1371 /journal.pone.0013363.s002 product: (7.19 MB EPS)
Figur S3.
korrelasjon mellom genotype og alder /PSA ved diagnose og immunhistokjemisk farging og alder /PSA ved diagnose. n = antall individer undersøkt i hver gruppe. p-verdier ble beregnet ved hjelp av en en-veis ANOVA med en Kruskal-Wallis korreksjon
doi:. 10,1371 /journal.pone.0013363.s003 plakater (1,21 MB EPS)
Figur S4. product: (A) Urin MSMB nivåer ble sammenlignet ved ELISA og en 2-tailed t-test. (B) Urin MSMB verdier ble analysert i henhold til en alder av de enkelte (år) på tidspunktet for prøvetakingen. (C) PSA målinger for godartet kohorten stratifisert i henhold til rs10993994 genotype. (D) Urin MSMB endrer ikke med BRCA mutasjoner. Godartede menn i Cohort tre ble genotypet for mutasjoner i BRCA 1 og BRCA 2, som er kjent for å gi risiko for å utvikle prostatakreft. BRCA genotype ble sammenlignet med urin MSMB. Kontroll – ingen mutasjon, BRCA 1 – mutasjon i BRCA 1, BRCA 2 -. Mutasjon i BRCA 2. For alle grafer n = antall prøver analysert og p-verdier ble beregnet ved hjelp av en en-veis ANOVA med en Kruskal-Wallis korreksjon
doi: 10,1371 /journal.pone.0013363.s004 plakater (2,03 MB EPS)
takk
Vi ønsker å takke Dr. William J. Howat og Histopatologi /ISH anlegg, Cancer Research UK Cambridge Research Institute for hjelpen med MSMB immunhistokjemi. Vi vil også gjerne takke Cancer Research UK Cambridge Research Institute Bioinformatikk Kjerne for statistisk hjelp. Vi er svært takknemlige for National Institute for Health Research Cambridge Biomedical Research Centre Kjerne biokjemi Analyselaboratoriet for å få hjelp med de biokjemiske analyser.
