Abstract
Myelomatose (MM) er en klonal sykdom i plasmaceller som fortsatt uhelbredelig tross for bruk av flere nye behandlingsformer. I denne studien ønsket vi å avgrense virkningen av slangegift hentet fra
Walterinnesia aegyptia plakater (WEV) alene eller i kombinasjon med silikananopartikler (WEV + NP) på primær MM celler isolert fra pasienter diagnostisert med MM i tillegg som på to MM cellelinjer, U266 og RPMI 8226. The IC
50 verdier av WEV og WEV + NP som i vesentlig grad redusert cellelevedyktighet MM uten å påvirke levedyktigheten av normale perifere mononukleære celler (PBMC) ble bestemt til å være 25 ng /ml og 10 ng /ml, henholdsvis. Selv om begge WEV (25 ng /ml) og WEV + NP (10 ng /ml) reduserte CD54 overflate-ekspresjon uten å påvirke ekspresjonen av CXCR4 (CXCL12 reseptor) på MM-celler, er de betydelig redusert evne til CXC kjemokin ligand 12 (CXCL12 ) for å indusere aktin cytoskjelettet omleiring og etterfølgende reduksjon i kjemotaksis. Det har blitt fastslått at bindingen av CXCL12 til sin reseptor CXCR4 aktiverer flere intracellulære signaltransduksjonsveier som regulerer MM celle chemotaxis, adhesjon, og proliferasjonen. Vi fant ut at WEV og WEV + NP tydelig redusert CXCL12 /CXCR4-mediert aktivering av AKT, ERK, NFkB og Rho-A ved hjelp av western blot analyse; avskaffet CXCL12-mediert spredning av MM celler ved hjelp av CFSE analysen; og induserte apoptose i MM celle som bestemmes av PI /annexin V dobbel farging etterfulgt av strømningscytometri-analyse. Overvåking av ekspresjon av B-celle-CCL /Lymphoma 2 (Bcl-2) familiemedlemmer og deres rolle i apoptoseinduksjon etter behandling med WEV eller WEV + NP viste at kombinasjonen av WEV med NP robust redusert ekspresjon av anti-apoptotiske effektorer BCL-2, Bcl
XL og Mcl-1; omvendt økt uttrykk av de pro-apoptotiske effektorer Bak, Bax og Bim; og endret mitokondriemembranpotensialet i MM celler. Til sammen våre data indikerer de biologiske effektene av WEV og WEV + NP og de underliggende mekanismene mot myelom kreftceller
Citation. Badr G, Al-Sadoon MK, Abdel-Maksoud MA, Rabah DM, El- Toni AM (2012) Cellular og molekylære mekanismer ligger til grunn for anti-tumor Aktiviteter som utøves av
Walterinnesia aegyptia
Venom Kombinert med silikananopartikler mot multippelt myelom Kreftcelletyper. PLoS ONE 7 (12): e51661. doi: 10,1371 /journal.pone.0051661
Redaktør: Jin Q. Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center Research Institute, USA
mottatt: 18. august 2012; Godkjent: 06.11.2012; Publisert: 10.12.2012
Copyright: © 2012 Badr et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av National Plan for Science and Technology (https://npst.ksu.edu.sa/index.php?module=news page=details_en id=40) finansiert av King Abdulaziz City for Science and Technology (http : //www.kacst.edu.sa/en/Pages/default.aspx) gjennom prosjektnummer 10-BIO969-02. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. Alle forfatterne har lest og akseptert innholdet i manuskriptet og godkjent innlevering. Forfatterne erklærer ingen interessekonflikter, sier at manuskriptet ikke er publisert eller innsendt andre steder.
Innledning
hematologisk kreftsykdom er en av de mest utbredte typer kreft hos mennesker over hele verden og forårsake høy dødelighet priser. Som den nest mest utbredte hematologisk kreft [1], multippelt myelom (MM) er en malignitet av plasmaceller som rammer om lag 20 000 og dreper omtrent 10.000 mennesker i USA hvert år [2]. Kjemokiner er en stor familie av lav molekylvekt (8-10 kDa) cytokin-lignende proteiner som oppviser kjemotiltrekkende egenskaper til G-protein-koblede syv-transmembran-reseptorer i leukocytter [3]. Flere studier har vist den viktige rollen av kjemokiner og deres reseptorer i patogenesen av MM-celler [4]. Kjemokinreseptorer ble vist å bli uttrykt på kreftceller og til å opptre i løpet av alle stadier av tumorprogresjon, inkludert neoplastisk transformasjon, kjemotaksis og invasjon, angiogenese, klonal ekspansjon og vekst [5]. MM-celler uttrykker variable nivåer av kjemokin reseptorer [6]. Av de tallrike uttrykt kjemokinreseptorer, er CXCR4 de høyest uttrykt i MM og mange andre kreftceller [7]. Den CXCR4 ligand, CXCL12, er sterkt uttrykt i lunge, lever, benmarg og lymfeknuter, som er alle vanlige metastatisk destinasjoner for mange typer kreft. Videre har oppregulering av CXCR4 ofte blitt observert i en rekke kreftformer, inkludert colon-karsinom, lymfom, bryst cancer, glioblastom, leukemi, prostatakreft, kreft i bukspyttkjertelen MM og [6]. I tillegg har flere studier vist at CXCR4 er også den mest tallrike og funksjonelle av kjemokinreseptorer uttrykt av MM celler, og derfor kan spille en viktig rolle i sykdom patogenesen. Nyere data indikerer involveringen av CXCL12 /CXCR4 i opprettholdelse og overlevelse av MM-celler både in vivo og in vitro modeller [8]. Likevel, som følge av stimulering av CXCR4 med CXCL12 i MM celler, aktivering av nedstrøms signalveier er fortsatt uklar og forståelsen av slike signalveier er et viktig mål for molekyl MM behandling [9]. Nukleær faktor-kB (NF-kB) og AKT er involvert i to store celleoverlevelsesreaksjonsveier som ofte konstitutivt aktivert i kreftceller og bidrar vesentlig til chemoresistance av kreftceller [10]. Imidlertid hemming av ERK-fosforylering (en annen viktig celleoverlevelsesreaksjonsveien) bidrar til Dihydroartemisinin-indusert apoptose i leverkreft [11]. Vårt nylige data viste at thymoquinone (naturlig planteekstrakt) induserer MM cellevekstarrest ved lertid CXCL12-mediert signalisering og kjemotaksis, så vel som ved å øke CD95 ekspresjonsnivåer og mottakelighet av MM-celler til Fas-mediert apoptose [12]. Flere rapporter har klarlagt at unnlatelse av å gjennomgå apoptose er involvert i tumorutvikling og motstand mot kreft terapi [13]. Derfor kan det hende at induksjon av apoptose i MM-celler fører til deres regresjon og forbedret sykdomsprognosen [14]. Således, midler som er i stand til å indusere apoptose kan være nyttige kjemoterapeutiske midler mot MM. I de fleste tumorceller forekommer apoptose via to forskjellige signalveier: den ytre og indre apoptose veier. Den indre vei er relatert til endringer i mitokondriemembranpotensialet (ΔΨm) [15], og derfor, mitokondriell membranpotensialmålinger kan bli brukt til å diskriminere mellom celler som har apoptosed og overlevende celler. Men Bcl-2 familien av proteiner består av fremtredende regulatorer av apoptose signale som ofte underslått i mange kreftformer, blant annet lungekreft, lymfom, brystkreft og MM [16]. Medlemmer av denne familie proteiner kan deles inn døds antagonister, slik som Bcl-2 og død agonister, slik som Bak og Bax [17]. Av Bcl-2-familien, er Bcl-2-en prototypisk anti-apoptotiske protein som ofte overuttrykt i flere typer humane cancere [18]. Bcl-2 overekspresjon har vært implisert i kreft chemoresistance, mens høye nivåer av pro-apoptotiske proteiner, slik som Bax, fremme apoptose og sensibilisere tumorceller til en rekke anti-cancer-terapier.
Selv landskapet av MM behandling er rask endring, er denne sykdommen i stor grad uhelbredelig [19]. Flere kjemoterapeutiske midler (f.eks, vinkristin, deksametason og melfalan) er for tiden brukes til å behandle MM. Men disse legemidler har den ulempe at de øker risikoen for å utvikle sekundær hematologiske maligniteter, slik som terapi-relaterte myelodysplastiske syndromer [20]. Det er derfor et viktig behov for å ytterligere identifisere biologiske faktorer og mekanismer som er ansvarlig for MM celleoverlevelse, tumorigenese og medikamentresistens [12].
naturlige forbindelser har vært anvendt som hjelpestoffer i kombinasjon med kjemoterapi for å redusere bivirkninger og øke effektiviteten av kreftbehandling [21]. I de senere år har mange naturlige produkter har blitt evaluert for deres anvendelse i behandling av kreft [22], [23]. Slangegift er en kompleks blanding av mange stoffer med et bredt spekter av biologiske aktiviteter, inkludert toksiner, enzymer, vekstfaktorer, aktivatorer og inhibitorer. Naturlige toksiner, særlig sub-dødelige doser av slangegift, har potensial til å redusere størrelsen på solide svulster og blokkere angiogenese [24]. Vårt nylige studier har vist at anti-tumor potensialet av slangegift fra
Walterinnesia aegyptia plakater (WEV) på den humane bryst carcinom cellelinjen MDA-MB-231, så vel som dens virkning på normale mus perifert blod mononukleære celler (PBMC) [25], [26]. I tillegg har andre data indikerte at
Vipera lebetina turanica
slangegift i nanogram konsentrasjonsområdet inhiberer hormon ildfaste human prostatacancer cellevekst, og effekten er relatert til NFkB signal-mediert induksjon av apoptose [27] . Nanopartikler bærer kjemiske behandlingsformer har vist store løftet i behandling av kreftpasienter. Når lastet med anti-kreft agenter, kan nanopartikler hell øke medikamentkonsentrasjoner i kreft vev og handle på cellenivå for å forbedre anti-tumor effekt. Nanopartikler kan endocytose og /eller utsatt for fagocytose av celler, noe som resulterer i internalisering av den innkapslede medikamentet [28]. Det foreligger ingen data for effekten av slangegift i kombinasjon med nanopartikler på MM kreftceller. Derfor, i denne studien undersøkte vi effekten av
Walterinnesia aegyptia
gift (WEV), alene og i kombinasjon med silikananopartikler (WEV + NP). Vi har fokusert spesiell oppmerksomhet på de cellulære og molekylære mekanismer som ligger til grunn for den anti-tumor aktivitet som utøves på migrasjon, invasjon, proliferasjon og apoptose av primære MM-celler isolert fra MM pasienter, så vel som 2 humane MM cellelinjer (U266 og RPMI 8226).
Materialer og Metoder
Utarbeidelse av Walterinnesia aegyptia Venom
Walterinnesia aegyptia
slanger ble samlet inn fra den sentrale regionen av Saudi Arabia (Ingen spesielle tillatelser var nødvendig for de beskrevne feltstudier samt ingen spesielle tillatelser var nødvendig for disse stedene /aktiviteter fordi plasseringen ikke er privateid eller beskyttet på noen måte og feltstudier ikke involverer truet eller beskyttet arter). Slangene ble holdt i en serpentarium i zoologi Department of College of Science ved King Saud University. Slangene ble varmet daglig i ni timer ved hjelp av en 100-watts lampe, og vannet var alltid tilgjengelig. Slangene ble matet spesial avlet mus hver 10 til 14 dager. Alle dyr prosedyrer var i samsvar med standarder fastsatt i retningslinjene for omsorg og bruk av forsøksdyr av komiteen for Formålet med tilsyn av eksperimenter på dyr (CPCSEA) og National Institutes of Health (NIH) protokoll. Studien protokollen ble godkjent av dyreetikk komité i zoologi avdeling, College of Science, Kong Saud Universitet. Giften ble melket fra voksne slanger, lyofilisert og rekonstituert i 1 x fosfatbufret saltløsning (PBS) før bruk.
Kombinasjon av Snake Venom med silikananopartikler
silikananopartikler og deres kombinasjon med slange giften var forberedt på King Abdullah institutt for nanoteknologi ved King Saud University. Doble mesoporøse kjerne-silika nanosphere skall ble dannet rundt silika kjerner ved hjelp av et anionisk overflateaktivt middel i en prosess hvor et fast silisiumoksyd kjernen ble slått til en mesoporøst en. Først, for syntese av faste silika kjerner, 0.875 ml vandig ammoniakk ble tilsatt til en oppløsning inneholdende 18 ml etanol og 2,6 ml avionisert vann, etterfulgt av tilsetning av 1,5 ml tetraetylortosilikat (TEOS) til løsningen under kraftig røring. Den resulterende blanding ble oppvarmet ved 30 ° C i 60 minutter, og det silika bunnfall ble deretter oppsamlet ved sentrifugering og vasket tre ganger med vann. Den molare sammensetning av suspensjonen var som følger: TEOS: EtOH: NH
3: H
2o = 1:46.9:3.2:20.5
For det andre, for syntese av mesoporøs kjerne-skall. nanosfærer ved hjelp av et anionisk overflateaktivt middel, ble silika SiO
2 partikler dispergert i 15 ml H
2o ved ultralydbehandling i 10 min. For å undertrykke silika kjerne agglomerering, ble 1 g /l polyvinylpyrrolidon tilsatt under kontinuerlig omrøring i 60 min. Deretter ble 0,1 ml, 0,2933 g (1 mmol) og 1,5 ml 3-aminopropyltrimetoksysilan (APMS), N-lauroyl-sarcosin-natrium (Sar-Na) og TEOS ble tilsatt henholdsvis til reaksjonsblandingen, med påfølgende omrøring ved 50 ° C i 2 timer. Det endelige faste stoff ble gjenvunnet ved sentrifugering, vasket med avionisert vann og tørket i en ovn ved 60 ° C i 12 timer mal fjerning ble oppnådd ved varmebehandling i en luftstrøm ved 550 ° C i 6 timer. Den resulterende molare forholdet var TEOS: H
2o: APMS: Sar-Na: HCl: PVP = 1:331.6:0.08:0.14:0.06:5 × 10
-3. Deretter ble en total på 25 mg mesoporøse silikananopartikler tilsatt til en oppløsning av 50 mg /ml gift i vann. Suspensjonen ble omrørt i 2 timer; fordampning av vann ble hindret. Mesoporøse silikananopartikler ladet med gift ble utvunnet ved bruk av høyhastighetssentrifugering og tørket i en vakuumovn ved 60 ° C. Transmisjonselektronmikroskopi (TEM) analyse ble utført ved anvendelse av et JEOL JSM-2100F elektronmikroskop (Japan) drevet ved 200 kV. Nitrogen sorpsjonsisotermer ble målt til 77 K med en Quantachrome NOVA 4200 analysator (USA). Før måling ble prøvene avgasset i vakuum ved 200 ° C i minst 18 timer. Den Brunauer-Emmett-Teller (BET) metoden ble anvendt for å beregne den spesifikke overflateareal (
S
BET) ved hjelp av adsorpsjon av data ved et relativt trykk området fra 0,05 til 0,35. Bruke Barrett-Joyner-Halenda (BJH) modell, ble pore volumer og pore størrelsesfordeling avledet fra adsorpsjon grener av isotermer, og de totale pore volumer (
V
t) ble estimert fra det adsorberte mengden på en relativt trykk
P Twitter /
P
0 av 0,992.
med hensyn til effekten av reaksjonstiden på samspillet mellom silikananopartikler og slangegift, variasjon i syntese reaksjons~~POS=TRUNC for faste silika kjerner resulterte i dannelsen av dobbelt mesoporøse kjerne-skallsilikakuler, som vist i figur S 1. Ved både 1 og 6 timer reaksjonstider ble observert, homogene mesoporøse silika skjell. Imidlertid, ved en 1 time reaksjonstid, silisiumdioksyd-kjerner viste seg å være helt tett. At reaksjonstiden utvides opp til 6 timer resulterte i klare og uttale og radielt orienterte mesoporer som er forankret inne i kjernen og utvidet fra kjernesenteret opp til skallet, som vist i figur S 1B. Nedbrytning av kjerne kontrast med økende reaksjonstid fra 1 til 6 timer antydet forankringen av flere mesoporer og tap av kjernen tetthet, som også er indikert av den høyt porevolum. Men den skalltykkelse på omtrent 50 nm ikke endres vesentlig ved å justere reaksjonstiden. Analyse av partikkelstørrelsesfordelingen vist at begge prøver viste partikkelstørrelse omtrent 300 nm. Imidlertid 6 timer reaksjon prøven besatt en smalere fordeling enn 1 time prøven, som vist i figur 2. Fra S N
2 adsorpsjon-desorpsjon isotermen vist i figur S 3, isotermene til forskjellige overflateaktive reaksjonstider oppviste type IV isotermen karakteristisk for mesoporøse materialer med totale porevolumer av 0,342 og 0,416 cc.g
-1 ved 1 og 6 timer, reaksjonstider, henholdsvis. Observasjonen av en trekantet hysteresesløyfe mellom adsorpsjons- og desorpsjonstrinnene grener kunne tilskrives sameksistens av heksagonale og lamellære faser. BET-overflate områder var 304,08 og 440,73 m
2 /g på 1 og 6 h reaksjonstid, henholdsvis. Det er klart at de teksturelle egenskaper ved de mesoporøse kjerne-skallkonstruksjoner ble forbedret med økende reaksjonstid.
Celler og reagenser
humane cellelinjer MM RPMI8226 og U266 ble oppnådd fra the American Type Culture Collection (ATCC) (Rockville, MD). Disse MM cellene ble rutinemessig opprettholdt i R-10 kulturmedium (RPMI 1640 inneholdende 10% føtalt kalveserum og 1% L-glutamat), og kulturene ble etablert ved 5 x 10
5 levedyktige celler /ml. Maksimale celletettheten ble etablert ved 1-2 x 10
6 celle /ml. Cellekulturer var fri for
Mycoplasma
, som vurdert ved hjelp av en enzymbundet immunosorbent analyse (ELISA) kit (Boehringer, Mannheim, Tyskland).
Benmargs (BM) aspirer Prøver fra 70 pasienter med MM ble hentet fra Sør-Egypt Cancer Institute og Assiut Universitetssykehuset i Assiut University i Egypt. Benmarg mononukleære celler ble isolert ved hjelp av Ficoll-Hypaque-tetthetsgradient-sentrifugering (Pharmacia LKB Biotechnology, Uppsala, Sverige) fra heparinisert BM aspireres trekkes fra MM pasienter. Plasmaceller ble ytterligere renset fra BM mononukleære celler ved positiv utvelgelse med anti-CD138 antistoff-belagte immunomagnetiske perler i henhold til produsentens instruksjoner (MACS, Miltenyi Biotech). MACS rensing gående resulterte i mer enn 95% renhet i det primære MM cellepopulasjon (ved overvåking av celleoverflate-ekspresjon av CD38 og CD45) og en levedyktighet . 90% (ved trypan blå eksklusjon metode)
PBMC fra friske donorer ble renset ved anvendelse av en standard Ficoll-Paque-gradient sentrifugeringsmetoden i henhold til produsentens instruksjoner (Amersham Pharmacia, Uppsala, Sverige). I korthet ble heparinisert blod fortynnet 1:01 i fosfatbufret saltvann (PBS), ble forsiktig lagt over Ficoll-Paque-gradient, og sentrifugert i 20 minutter ved 1.020 x
g
. Cellen grensesnittlaget ble forsiktig innhøstet, og cellene ble vasket to ganger i PBS og resuspendert i RPMI 1640.
den anti-proliferative effekt av WEV, WEV + NP NP eller alene på U266 og RPMI 8226-cellelinjer og de isolerte normale PBMC ble bestemt ved anvendelse av 3- (4,5-dimetyltiazol-2-yl) -2,5-difenyltetrazoliumbromid (MTT) opptak metode. Cellene ble sådd ut på en 10 x
6 celler /ml i 2 ml dyrkningsmedium i seks-brønns Costar-plater (Corning, Corning, NY). Cellene ble behandlet med forskjellige konsentrasjoner av WEV eller WEV + NP for 1, 2, 6, 12, 24, 36 eller 48 timer, og cytotoksisiteten ble uttrykt som den relative prosentandelen av OD-verdiene målt i kontroll ubehandlede (0), NP, WEV- og WEV + NP-behandlede celler. Morfologiske endringer ble observert etter eksponering for NP, WEV og WEV + NP bruker en fasekontrast inverse mikroskop (Olympus, Japan).
Etikk erklæringen
For slange samling fra den sentrale regionen av Saudi Arabia ingen spesifikke tillatelser var nødvendig for de beskrevne feltstudier samt ingen spesielle tillatelser var nødvendig for disse stedene /aktiviteter fordi plasseringen ikke er privateid eller beskyttet på noen måte og feltstudier ikke involverer truet eller beskyttet arter. Fordi slangene ble matet spesial avlet mus hver 10 til 14 dager, Alle dyr prosedyrer var i samsvar med standarder fastsatt i retningslinjene for omsorg og bruk av forsøksdyr av komiteen for Formålet med tilsyn av eksperimenter på dyr (CPCSEA) og National Institutes of Health (NIH) protokoll. Studien protokollen ble godkjent av dyreetikk komité i zoologi avdeling, College of Science, Kong Saud Universitet. BM aspirer prøvene ble innhentet fra pasienter identifisert med MM i Assiut universitetssykehus. Alle aspekter ved denne studien ble godkjent av Assiut universitetets etiske komité, og alle pasienter gitt et skriftlig informert samtykke i henhold til Helsinkideklarasjonen.
flowcytometrisystemer
celleoverflateantigen uttrykk ble bestemt av enkelt -parameter fluorescens-aktivert cellesorterer (FACS) analyse ved anvendelse av følgende monoklonale antistoffer (mAbs): (i) PE-konjugert anti-CCR1, anti-CCR3, anti-CCR5 (klon 45531,111), anti-CCR7 (klon 150503), anti-CCR6 (klone 53103,111), anti-CXCR3, anti-CXCR4 (klone 44717,111) og anti-CXCR5, alle kjøpt fra R og (ii) PE-konjugert anti-CD38, anti-CD44 og anti-CD138 (lgG1), FITC-konjugert anti-CD62L, anti-CD49d, anti-VLA4, anti-α4β1, anti-α4β7 og anti-CD54, og FITC- og PE-konjugert mus isotype-matchet kontroll mAbs, alle kjøpt fra BD Biosciences. En FACSCalibur flowcytometri instrument (BD-PharMingen) ble anvendt for datainnsamling og analyse. Etter levedyktig celle gating, ble 15.000 hendelser per prøve analysert. For hver markør, ble terskelen for positivitet definert utover den ikke-spesifikke binding observert i nærvær av en relevant isotype kontroll mAb.
F-aktin Polymerisering Assay
MM-celler ble dyrket i 12 timer i dyrkningsmedium supplert med eller uten NP, WEV eller WEV + NP før den F-aktin polymerisasjonsforsøk. Intracellulær F-aktin Polymeriseringen ble vurdert som tidligere beskrevet [29]. I korthet ble cellene høstet og resuspendert (4 x 10
6 /ml) i HEPES-buffret RPMI 1640 ved 37 ° C med eller uten CXCL12 (250 ng /ml). Ved de angitte tidspunkter ble cellesuspensjonen (100 pl) tilsatt til 400 ul analysebuffer inneholdende 4 x 10
-7 M FITC-merket phalloidin, 0,5 mg /ml L-α-lysofosfatidylcholin (begge fra Sigma-Aldrich) og 4,5% formaldehyd i PBS. De fikserte celler ble analysert ved hjelp av flow cytometri, og den midlere fluorescensintensitet (MFI) ble bestemt for hver prøve. Den prosentvise endringen i MFI ble beregnet for hver prøve ved hvert tidspunkt ved å bruke følgende formel: (1- (MFI før tilsetningen av CXCL12 /MFI etter tilsetning av CXCL12) x 100.
In Vitro kjemotakse Assays
kjemokin avhengige vandring av MM-celler ble målt ved anvendelse av en in vitro-to-kammer migrasjonsanalyse (ved bruk av Transwell plater kjøpt fra Costar, Cambridge, MA), fulgt av strømningscytometri-analyse. Alle kjemotakse analyser ble utført i pre -warmed migrasjon buffer (RPMI 1640 inneholdende 1% FCS) totalt 600 ul av migrasjon buffer alene eller supplert med CXCL12 (250 ng /ml) (R 0,05. * P 0,05, WEV behandlet vs. kontroll; # P 0,05, WEV + NP-behandlet vs. kontroll; + P 0,05, WEV + NP-behandlet vs. WEV behandlet
Resultater
WEV og WEV + NP hemme veksten av MM Cells
elektronmikroskop bilder av. doble mesoporous kjerne-skall silika nanospheres (DMCSSs) før (A) og etter (B) giften lasting vises. Disse to bildene viste et bevis for lasting av slangegift i mesoporer av DMCSSs. Venom-free DMCSSs (A) viste en klar mesoporer eller mesochannels. Imidlertid, som vist i figur 1B mesoporer av DMCSSs har blitt tilstoppet av giften molekyler og dermed mesoporer av gift-lastet DMCSS kan ikke sees tydelig på grunn av eksistensen av giften i sine kanaler. I tillegg kan molekylene gift også observeres rundt den ytre overflate av DMCSSs. Zhao
et al.
, Har rapportert at partikkelstørrelsen for nanocarriers brukes i stoffet leveringssystemer bør ligge mellom 50 og 300 nm [30]. Forfatterne beskrevet som partikkelstørrelse over 300 nm, en betydelig andel av partiklene vil bli fanget i lungene og leveren, mens for liten partikkelstørrelse som ikke vil være effektiv for medikament-last eller medikamentlevering. Basert på disse kriteriene, har DMCSSs-6h prøven blitt valgt for lasting slangegift fordi det besatt overlegne strukturelle egenskaper, overflateareal på 440 m
2 /g og totalt porevolum på 0,416 cm
3 /g, tykkere silika skall (40 nm) og akseptabel partikkelstørrelse. Videre har vi nylig preget de optimale egenskapene til silikananopartikler modell som vi pleide å levere naturlige produkter i MM cellelinje samt i normale celler [31].
elektronmikroskop bilder av doble mesoporous kjerne-skall silika nanospheres (DMCSSs) før (A) og etter (B) giften lasting. Cellelevedyktigheten ble vurdert ved anvendelse av MTT-analysen. RPMI 8226-celler (C), U266-celler (D) og normale PBMC (E) ble behandlet over natten med forskjellige konsentrasjoner (0, 1, 5, 10, 25, 50, 100 og 1000 ng /ml) av NP (åpne sirkler) , wev (grå trekanter) eller wEV + NP (stengt svarte firkanter). RPMI 8226-celler (F), U266-celler (G) og normale PBMC (H) ble behandlet med 25 ng /ml NP (åpne sirkler), 25 ng /ml WEV (grå trekanter) eller 10 ng /ml WEV + NP (stengt sorte firkanter) for forskjellige inkubasjonstider (0, 1, 2, 6, 12, 24, 36 og 48 h). De oppsamlede fra uavhengige eksperimenter data (n = 5) er vist, og resultatene er uttrykt som gjennomsnittlig prosentandel av levedyktige celler ± SEM.
Ved hjelp av disse nanopartikler modell, Vi først undersøkt muligheten av WEV og WEV + NP å indusere vekst arrest i MM celler.
