Abstract
Vi har tidligere definert makrofager høstet fra bukhulen til hårløse mus med subkutane menneskelige pankreastumorer som » tumor-utdannede-makrofager «(Edu) og makrofager høstet fra mus uten svulster som» naive-makrofager «(naive), og viste at Edu-makrofager fremmet tumorvekst og metastasering. I denne studien ble utdan- og naiv-makrofager i forhold til deres evne til å forbedre bukspyttkjertelen kreft på cellenivå in vitro og in vivo. Den hemmende effekten av zoledronsyre (A) på Edu-makrofag-forbedret metastase ble også bestemt. XPA1 menneskelige kreft i bukspyttkjertelen celler i Gelfoam co-kultivert med Edu-makrofager proliferated i større grad enn XPA1 celler dyrket med Naive-makrofager (
P
= 0,014). XPA1 celler utsatt for kondisjonert medium høstet fra Edu kultur betydelig økt spredning (
P
= 0,016) og hadde mer migrasjon stimulering kapasitet (
P
0,001) sammenlignet med dyrkede kreftceller behandlet med kondisjonert medium fra naive. Den mitotiske indeks over XPA1 cellene, uttrykker GFP i kjernen og RFP i cytoplasma, betydelig økt in vivo i nærvær av utdan- forhold til Naive-makrofager (
P
= 0,001). Zoledronsyre (ZA) drept både Edu og naiv in vitro. Edu fremmet tumorvekst og metastase i en ortotopisk musemodell av den XPA1 human bukspyttkjertelkreft cellelinje. ZA redusert primær tumorvekst (
P
= 0,006) og forhindret metastase (
P
= 0,025) fremmet av Edu-makrofager. Disse resultatene indikerer at ZA inhiberer forbedret primær tumorvekst og metastasering av human kreft i bukspyttkjertelen indusert av edu- makrofager
relasjon:. Hiroshima Y, Maawy A, Hassanein MK, Menen R, Momiyama M, Murakami T, et al . (2014) The Tumor-Utdannet-macrophage Økning for malignitet of Human Bukspyttkjertelkreft hindres av zoledronsyre. PLoS ONE 9 (8): e103382. doi: 10,1371 /journal.pone.0103382
Redaktør: Keping Xie, The University of Texas MD Anderson Cancer Center, USA
mottatt: May 17, 2014; Godkjent: 01.07.2014; Publisert: 12. august 2014
Copyright: © 2014 Hiroshima et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. Den forfatterne bekrefter at alle data som underbygger funnene er fullt tilgjengelig uten restriksjoner. Alle relevante data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. Denne studien ble støttet delvis av National Cancer Institute stipend CA132971 og JSP KAKENHI Grant Tall 26830081 til Y.H., 26462070 til DVS. og 24592009 til K.T. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. Yukihiko Hiroshima, Shinji Miwa, Mako Yamamoto, Shuya Yano er filialer av kreft Inc. Mohamed K. Hassanein, Rhiana Menen, Masashi Momiyama, Fuminari Uehara og Takashi Chishima var tidligere agenter av kreftbekjempende Inc. Robert M. Hoffman er en ikke-lønnet agent av kreftbekjempende Inc. anticancer Inc. markedsfører dyremodeller av kreft. Det er ingen andre konkurrerende interesser. Det finnes ingen patenter, produkter under utvikling eller markedsført produkter å erklære. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer, som beskrevet på nettet i veiledningen for forfatterne.
Innledning
svulstens mikromiljø (TME) spiller en viktig rolle i å bestemme tumor atferd. Vi har tidligere vist at stromale celler er nødvendige for metastasering til å oppstå [1]. En annen indikasjon på rollen til TME å påvirke tumor oppførsel er ortotopisk implantering i musemodeller av intakt tumorvevet, inkludert hele tumoren stroma, noe som resulterer i et mye høyere metastatisk hastighet i forhold til ortotopisk injeksjon av kreftceller alene, hvor metastase er sjelden [2], [3].
tumorassosierte makrofager er blitt vist å korrelere med dårlig prognose i flere studier [4], [5]. Makrofager kan fremme tumorprogresjon ved kronisk betennelse, matrix ombygging, fremming av tumorcelle invasjon, intravasation, angiogenese, og seeding i fjerne områder [6]. Karcelleadhesjonsmolekyl-1 (VCAM-1) fremmer lungemetastaser ved brystkreft med tethering kreftceller til lungemetastaseassosierte makrofager [7], [8].
Vårt laboratorium tidligere forhold primære og metastatisk tumorvekst etter tilsetning av enten tumor-naive-makrofager (naive) eller makrofager tidligere utsatt for kreft i bukspyttkjertelen i en musemodell, som ble kalt tumor-utdannede-makrofager (Edu) [8].
Våre tidligere resultater tyder at makrofager innflytelse svulster og svulster påvirker makrofager, og at Edu-makrofager fremme tumorprogresjon [8].
i denne studien, utdan- og naiv-makrofager ble sammenlignet for deres evne til å fremme kreft på cellenivå in vitro og in vivo. Effekten av zoledronsyre (A) for å hemme Edu-makrofag-forbedret malignitet ble også bestemt.
Materialer og metoder
cellelinje og dyrkningsforhold
XPA1 menneskelige bukspyttkjertelen kreftcellelinje ble brukt i denne studien som var en slags gave fra Dr. Anirban Maitra ved Johns Hopkins University [6] – [16]. Den XPA1 cellelinjen ble transformert til å stabilt uttrykke GFP i kjernen og RFP i cytoplasma [9], [17], [18]. Celler ble opprettholdt i RPMI 1640-medium supplert med 10% føtalt bovint serum (FBS) og 2 mM glutamin (Gibco-BRL, Life Technologies Inc., Grand Island, NY). Alle medier ble supplert med penicillin og streptomycin (Gibco-BRL). Cellene ble dyrket ved 37 ° C med 5% CO
2 [19].
Dyr
NOD /SCID mus og atymiske nakne mus (
nu /nu
), ble 4-6 uker, (Anticancer cancer~~POS=HEADCOMP Inc., San Diego, California) brukes. Transgene naken C57 /B6-GFP mus (Anticancer, Inc., San Diego, California). som uttrykker grønt fluorescerende protein (GFP) under kontroll av den kylling β-aktin-promoter og cytomegalovirus enhancer ble også brukt [20] – [23]. Mus ble oppbevart i en barriere anlegg under HEPA filtrering. Mus ble matet med Autoclaved laboratorium gnagerdiett. Alle kirurgiske prosedyrer og avbildning ble utført med dyrene bedøvet ved intramuskulær injeksjon av 0,02 ml av en oppløsning av 50% ketamin, 38% xylazin, og 12% acepromazin maleat. Alle dyrestudier ble gjennomført med en anticancer Institutional Animal Care og bruk Committee (IACUC) -protocol spesielt godkjent for denne studien og i samsvar med de prinsipper og prosedyrer som er skissert i National Institute of Health Guide for omsorg og bruk av dyr i henhold Assurance Antall A3873-1.
Subkutan tumorcelle implantasjon
Menneske XPA1 dual-farge kreft i bukspyttkjertelen celler ble høstet ved trypsinering og vasket to ganger med serumfritt medium. Celler (2 × 10
6 i 100 mL serum-frie medier) ble injisert subkutant, innen 30 min av høsting, over flankene i transgene naken C57 /B6-GFP mus eller transgen
nu /nu
mus mellom 4 og 6 ukers alder. Subkutane svulster fikk vokse i 2-4 uker før stort nok for videre eksperimenter eller påfølgende orthotopic implantasjon.
Sanntids avbildning av samspillet mellom vertsmakrofager og kreftceller i levende mus
etter ble musene bedøvet som beskrevet ovenfor, ble en bue-formet innsnitt gjort i abdominal hud, og deretter subkutant bindevev ble separert for å frigjøre klaffen huden uten å skade den epigastriske cranialis arterie og vene [24]. Huden-klaff ble spredt og festet på en flat stand. XPA1-GFP-RFP-celler (1 x 10
6 i 100 ul medium) ble drysset over overflaten av huden-klaff fra mus (Fig. 1A) [25]. Tjuefire timer senere, den indre overflaten av huden-klaff ble observert direkte med den FV1000 konfokalt mikroskop (Olympus, Tokyo, Japan) med eksitasjon fra halvlederlasere ved 473 nm for GFP og 559 nm for eksitasjon RFP. Fluorescens bilder ble oppnådd ved å bruke 20 × /1,0 XLUMPLFLN mål [26]. Antallet fagocytterte og mitotiske kreft celler ble tellet, og det midlere antall ble beregnet fra fem synsfelt ved 20 x forstørrelse.
(A) Reaksjonsskjema for bildedannelse interaksjoner mellom vertsmakrofager og cancerceller i levende mus. GFP naken mus med dual-color XPA1 subkutane svulster var kilden til Edu-makrofager. GFP naken mus uten svulster var kilden til Naive-makrofag. En hud-klaff ble spredt og festet på en flat stand. XPA1-GFP-RFP-celler (1 x 10
6 i 100 ul medium) ble drysset over overflaten av huden-klaff fra mus. Tjuefire timer senere, den indre overflaten av huden-klaff ble observert direkte med den FV1000 konfokalt mikroskop (Olympus). Skala barer: 10 mm. GFP vertsmakrofager og dual-farge XPA1 kreftceller ble observert i naive-makrofag-mus (B) og edu-makrofag-mus (C). Fagocytterte kreftceller (hvite pilspisser) og mitotiske kreftceller (gule pilspisser) ble detektert i begge grupper. Middelverdiene for phagocytosized og mitotiske kreftceller ble beregnet ut fra fire felt med en 20 x forstørrelse objektiv (D og E). Mitose betydelig økt i kreftceller i mus med Edu-makrofager i forhold til kreftceller i mus med Naive-makrofager (
P
= 0,001). Mer fagocytose av kreftceller tendens til å bli detektert i mus med Naive-makrofager, (
P
= 0,061). Skala barer. 20 mikrometer
Macrophage høst
Transgene naken C57 /B6-GFP mus med dual-color XPA1-GFP-RFP subkutane svulster var kilden for Edu-makrofager . Transgene naken C57 /B6-GFP mus uten svulster var kilden for Naive-makrofager. Etter ble musene bedøvet som beskrevet ovenfor, ble 6 ml RPMI injiseres intraperitoneal plass for hver mus ved anvendelse av en 10 ml sprøyte, og musene ble forsiktig omrørt i 5 minutter. Sprøyten ble deretter inn igjen og alle RPMI-medium ble fjernet og plassert i en petriskål av plast. Rettene ble deretter inkubert ved 37 ° C i 4 timer. RPMI-medium ble deretter fjernet, og hver plate ble vasket 10-15 ganger med 10 ml PBS, eller inntil alle røde blodceller, fibroblaster, og andre cellerester ble fjernet. Platene ble visualisert under en IX71 fluorescens mikroskop (Olympus, Tokyo, Japan) for å bekrefte tilstedeværelsen av GFP-uttrykkende makrofager. Makrofager ble skrapet fra Petri-skålen ved hjelp av en gummislikkepott, oppsamlet med en vask med 10 ml PBS og sentrifugert ved 850 rpm i 10 minutter. PBS ble deretter fjernet og makrofager ble resuspendert i RPMI.
Proliferation analyse ved bruk av 3D-kultur
Naïve- eller edu- makrofager ble ko-dyrket med to-farge XPA1-GFP-RFP kreftceller, men de ble skilt fra hverandre ved hjelp av Gelfoam (Pharmacia hvite firkanten: Edu, hvit trekant: kontrollgruppen. *
P
0,05, **
P
0,01 (vs. kontrollgruppen). (E) Såret områder ble målt i 72 timer etter å skrape den monolag av kreftceller og behandling med det kondisjonerte medium fra hver type av makrofager. (F) Edu-makrofag-kondisjonert medium-behandlede celler dekket en betydelig større sår området enn andre grupper på hver gang punkt. Diagrammer er plott av sårede områder i hver gruppe målt med ImageJ av tre tilfeldige områder i 3 dager. Data fra tre gjentatte eksperimenter er presentert som gjennomsnitt ± SD (n = 5). *
P
0,05, **
P
. 0,01 (vs. kontrollgruppen)
MTS spredning analysen
XPA1 -GFP-RFP celler i eksponentiell vekstfase ble trypsinisert for å gi en cellesuspensjon og sådd ut på 96-brønners plater (1 x 10
4 celler /brønn) i tre eksemplarer. Kondisjonert medium ble høstet fra hver type av makrofager dyrket i RPMI 1640 med 10% FBS i 72 timer. Dyrkningsmediet ble fjernet fra brønnene med XPAI-GFP-RFP-celler, og det kondisjonerte medium ble tilsatt etter at cellene ble tillatt å holde seg i 24 timer. Etter at platene ble inkubert ved 37 ° C i 5% CO
2, ble MTS-målingen ble utført ved forskjellige tidspunkter (0-72 h) ved hjelp av Cell Titer 96 assay (Promega, Madison, WI, USA) ifølge produsentens instruksjoner.
sårtilheling analysen
Celler ble dyrket i 24-brønners plater i 500 mL medium per brønn til samløpet ble nådd. Et sår ble laget ved å skrape cellene med 10 ul pipettespiss i PBS, etterfulgt av erstatning med kondisjonert medium ble høstet fra hver makrofag-typen dyrket i RPMI 1640 med 10% FBS i 72 timer. Kontrollgruppen mottok det samme volum av friskt kulturmedium uten serum. De sårede mono ble photomicrographed med IX71 fluorescens mikroskop på ulike tidspunkter (0-72 t) etter å ha blitt ripete. Cellemigrasjon ble vurdert ved å måle gap størrelser i flere felt ved hjelp av Image J (National Institute of Mental Health, Bethesda, MD).
Cvtotoksisitetsmålinq
Naïve- eller Edu-makrofager ble sådd på 6 -vel plater (2 × 10
5 celler /brønn). Zoledronsyre (ZA) (Novartis Pharmaceuticals Corporation, New Jersey, USA) ble tilsatt til hver brønn etter at cellene ble tillatt å holde seg i 24 timer. De endelige konsentrasjoner av ZA var som følger: 0, 10, 50 og 100 uM. Etter 48 timer ble den ZA-holdige medium fjernet og erstattet med vekstmedium i 24 timer. Etter at hver brønn var vasket 5 ganger med 3 ml PBS, ble antallet GFP-uttrykkende makrofager regnet med den IX71 fluorescens mikroskop. Gjennomsnittlig makrofag tall ble beregnet ut fra fem synsfelt på 10 x forstørrelse. Alle målinger ble utført i tre eksemplarer.
ortotopiske svulst implantasjon
En liten 6- til 10-mm tverrgående snitt ble gjort på venstresiden av musen gjennom huden og bukhinnen. Halen av pankreas ble eksponert gjennom dette innsnitt og en enkelt svulst-fragment (3-mm
3) fra en XPA1 tofarget subkutan tumor ble suturert til halen i bukspyttkjertelen ved hjelp 8-0 nylon kirurgiske suturer (Ethilon; Ethicon Inc., NJ, USA). Ved fullførelse ble returnert halen av bukspyttkjertelen til magen, og snittet ble lukket i ett lag ved hjelp av 6-0 nylon kirurgiske suturer (Ethilon) [2], [27] -. [29]
ZA behandling av XPA1 ortotopiske naken mus modell
nakne mus ble implantert med orthotopically XPA1-GFP-RFP-celler som beskrevet ovenfor. Musene ble behandlet i følgende grupper: (1) saltvann (kjøretøy /kontroll), (2) Naïve- makrofager (3) Edu-makrofager, (4) Edu-makrofager + ZA. Makrofager (1 x 10
6-celler i 200 ul PBS) ble injisert ip ukentlig som tidligere beskrevet [8]. ZA ble injisert subkutant daglig fra dag 21 etter tumor-implantering i 4 uker. Hver behandling arm involvert 8 tumorbærende mus. Ingen signifikant effekt på kroppsvekt, sykelighet eller alvorlig toksisitet ble observert i noen av behandlingsarmene. Dyr gikk laparotomi på 7 uker, og både primærsvulster og metastaser ble fotografert med OV100 variabel forstørrelse Small Animal Imaging System (Olympus, Tokyo, Japan) [24] og veid og høstet for analyse.
Databehandling og statistisk analyse
PASW Statistikk 18,0 (SPSS, Inc) ble brukt for alle statistiske analyser. Den t-test ble brukt for å sammenligne kontinuerlige variabler mellom to grupper. Analyse av varians modeller ble anvendt for å sammenligne flere grupper. En p-verdi på 0,05 ble ansett som statistisk signifikant for alle sammenligninger.
Resultater og Diskusjon
Edu-makrofager stimulerer kreftcelle mitose in vivo
Dual-farge XPA1-GFP -RFP-celler (1 x 10
6) ble drysset over overflaten av en mus hud-klaff. Tjuefire timer senere, den indre overflaten av huden-klaff ble observert direkte med den FV1000 konfokalt mikroskop (Olympus) (Fig. 1A). GFP-uttrykke vertsmakrofager og dual-farge XPA1 kreftceller ble observert i Naive-makrofag mus (Fig. 1B) og Edu-makrofag mus (Fig. 1C). Kreft-celle mitosen var signifikant større i kreftceller i edu-makrofag-mus sammenlignet med kreftceller hos naive-makrofag-mus (
P
= 0,001) (fig. 1E). Fagocytose av kreftceller tendens til å være større i Naive-makrofag mus sammenlignet med Edu-makrofag mus (
P
= 0,061) (fig. 1 D).
Edu-makrofager stimulere spredning av kreftceller
in vitro
Naïve- eller Edu-makrofag ble dyrket med dual-farge XPA1 kreftceller skilt fra hverandre ved Gelfoam (fig. 2A). Førti-åtte timer senere, ble konfokale mikroskopi bilder oppnådd fra overflaten til 200 pm dybde hver 1 um og ble stablet langs Z-aksen (fig. 2B). Edu-makrofag-behandlede kreftceller proliferated i større grad i forhold til naive-makrofag-behandlede kreftceller (
P
= 0,014) (fig. 2C). Kondisjonert medium fra Edu-makrofager stimulert spredning av kreftceller i forhold til å kontrollere ubehandlede kreftceller (24 timer;
P
= 0,001, 48 t;
P
= 0,003, 72 timer;
P
= 0,012, henholdsvis). I motsetning til dette var det ingen signifikant forskjell mellom kondisjonert medium fra Naive-makrofager og friskt medium på proliferasjon av XPA1-celler (fig. 2D).
edu-makrofag-kondisjonert-medium-behandlede kreftceller dekket et betydelig større sårområdet enn ubehandlede kontrollceller på hver gang punkt (24 timer;
P
= 0,008, 48 t;
P
= 0,002, 72 t;
P
0,001 henholdsvis) (fig. 2E og 2F).
ZA hemmer XPA1 bukspyttkjerteltumorprogresjon indusert av Edu-makrofager
Edu-makrofager fremmet primær tumorvekst sammenlignet med kontroll og Naïve- makrofag (kontroll ;
P
= 0,026, naive;
P
= 0,03). Edu-makrofager også fremmet metastaser i forhold til kontroll og Naive-makrofager (kontroll;
P
= 0,012, naive;
P
= 0,015) (fig 3C-E.). ZA har vist seg å drepe makrofager og forebygge metastasering [30], [31]. Antallet både Naïve- og edu- makrofager ble signifikant redusert ved ZA ved hver dose in vitro (Fig. 3A og 3B). I en orthotopic musemodell for kreft i bukspyttkjertelen, ZA undertrykte betydelig Edu-makrofag, stimulert tumorvekst, og forhindret metastaser sammenlignet med mus behandlet med bare Edu-makrofager (primærtumor;
P
= 0,006, metastaser;
P
= 0,025) (fig. 3C-E).
(A) Representative fluorescens bilder av Edu-makrofager etter ZA behandling. Skala barer: 10 mikrometer. (B) Stolpediagrammene i antall Naïve- eller edu- makrofager etter ZA behandling in vitro. Tallene for både Naïve- og Edu-makrofager behandlet med ZA ble betydelig redusert ved hver dose. ZA drepte både naiv og Edu på en doseavhengig måte. **
P
0,01 (vs. kontrollgruppen). (C) intravital avbildning av XPA1-RFP tumorbærende mus ved avslutningen av forsøket. Skala barer: 10 mm. (D) Den primære svulst vekten av Edu-makrofag-behandlede mus ble betydelig økt sammenlignet med kontroll eller naive-makrofag-behandlede mus (kontroll:
P
= 0,026; Naive:
P
= henholdsvis 0,03,). Den primære svulst vekten av Edu-makrofag + ZA-behandlede mus ble betydelig redusert sammenlignet med Edu-makrofag-behandlede mus (
P
= 0.006). *
P
0,05, **
P
0,01. (E) Den metastase vekten av Edu-makrofag-behandlede mus ble betydelig økt sammenlignet med kontroll eller Naive-makrofag-behandlede mus (kontroll;
P
= 0,012, naive;
P
= 0,015 , henholdsvis). Ingen metastaser ble påvist i Edu + ZA-behandlede mus. Det var en signifikant forskjell mellom Edu og Edu + ZA-behandlede mus (
P
= 0,025). *
P
. 0,05
I vår forrige undersøkelse, GFP-uttrykke makrofager fra GFP transgene hårløse mus med en subkutan BxPC3-RFP menneskelige bukspyttkjertelen tumor ble brukt som en kilde til edu-makrofager og i forhold til Naive-makrofager fra den transgene GFP hårløse mus uten svulster. Når utdan- eller Naive-makrofager ble så implantert i nakne mus med BxPC-3-RFP voksende orthotopically, EDU-makrofager stimulert tumorvekst og metastase i større grad enn Naive-makrofager [8].
i en annen tidligere studie, ble humane perifere-blod mononukleære celler eksponert for kondisjonert medium fra BxPC-3 menneskelige kreft i bukspyttkjertelen celler, i normale eller høye blodsukkeret. De kreft i bukspyttkjertelen celler utdannet makrofagene til å være mer invasive in vitro, noe som ble ytterligere forsterket av hyperglykemi [32].
I en annen tidligere studie, ZA reduserte makrofag-indusert invasivitet av brystkreftceller. ZA påvirkes makrofager, men ikke de kreftceller [33].
En annen tidligere undersøkelse viste at både peritoneale og bryst-tumor assosiert makrofager raskt tok opp ZA in vivo, noe som ytterligere antyder makrofager er et mål for den anti-tumor virkning av ZA [34].
i en annen tidligere undersøkelse, ZA direkte forårsaket apoptose på bukspyttkjertelen carcinoma celler og hemmet deres invasivitet og så vel som gjør kreft i bukspyttkjertelen celler mer utsatt for T-celle angrep [35].
i denne studien brukes subcellulære avbildningsteknikker vi tidligere har utviklet [36] for å direkte bilde som Edu-makrofager har redusert fagocytose evne og kan direkte simulere mitose av kreftceller, som visualisert i sanntid. I motsetning til tidligere studier, å evaluere effekten av ZA, den foreliggende rapport brukt en ortotopisk metastatisk musemodell for å demonstrere effekten av ZA på stimulering ved edu- makrofager på metastase så vel som på den primære svulsten. I den foreliggende undersøkelse, ble makrofager isolert fra bukhulen fra tumor-bærende eller kontrollmus, langt fra tumoren og administreres systemisk. Resultatene viste at svulster hadde fjernt effekt på makrofager og vice versa, og at ZA kunne systemisk hemme slike effekter.
ZA redusert edu-stimulert primær tumorvekst og metastase til omtrent kontrollverdier tyder på store ZA virkningen var på edu-makrofager, selv om en relativt liten direkte hemmende effekt på selve svulsten ved ZA kan ikke utelukkes som beskrevet i en tidligere studie [35]. ZA har tidligere blitt rapportert å ha større makrofag drepe effekt enn andre bisfosfonater og ble derfor valgt for denne studien [37].
Denne studien viste at Edu-makrofager fremme malignitet. Dette ble vist ved den stimulerende effekt av edu- makrofager mot kreft-celle mitose og påfølgende spredning, så vel som på metastasering. Som nevnt tidligere [8], kan svulster påvirke makrofager som i sin tur kan påvirke svulster. Tumorprogresjon indusert av Edu-makrofager ble hemmet av ZA, som hemmet Edu-makrofag-forbedret primær tumorvekst og forhindret metastasering. Mekanismer som Edu-makrofager stimulerer kreftcelle spredning og progresjon vil være gjenstand for en fremtidig studie.
Takk
Dedication. Dette papiret er dedikert til minne om A. R. Moossa, M.D.
