Abstract
I sporadisk kolorektal kreft (CRC),
BRAF
V600E
mutasjon er forbundet med mangelfull mismatch reparasjon (MMR) status og omvendt assosiert med å KRAS-mutasjoner. I motsetning til mangel MMR (dMMR) CRC, data om tilstedeværelse av
KRAS
onkogene mutasjoner i dyktigere MMR (pMMR) CRC og deres forhold til tumorprogresjon er knappe. Vi har derfor undersøkt MMR status i kombinasjon med
KRAS
mutasjoner i 913 kinesiske pasienter og korrelert funnene oppnådd med kliniske og patologiske funksjoner. Den MMR status ble fastsatt basert på påvisning av MLH1, MSH2, MSH6 og PMS2 uttrykk.
KRAS
mutasjon og dMMR status ble påvist i 36,9% og 7,5% av tilfellene, henholdsvis. Fire undergrupper ble bestemt av MMR og
KRAS
mutasjonsstatus:
KRAS product: (+) /pMMR (34,0%),
KRAS product: (+) /dMMR (2,9%)
KRAS product: (-) /pMMR (58,5%) og
KRAS product: (-) /dMMR (4,6%). En høyere andel av pMMR svulster med
KRAS
mutasjon var mest sannsynlig å være kvinne (49,0%), proksimale plassert (45,5%), en mucinous histologi (38,4%), og for å ha økt lymfeknutemetastase (60,3 %), sammenlignet med pMMR svulster uten
BRAF
V600E Hotell og
KRAS
mutasjoner (36,0%, 29,3%, 29,4% og 50,7%, henholdsvis, alle
P
0,01). Tvert imot, sammenlignet med de med
KRAS product: (-) /dMMR svulster, pasienter med
KRAS product: (+) /dMMR svulster viste ingen statistisk signifikante forskjeller i kjønn, tumor plassering, PT dybde av invasjonen, lymfeknutemetastase, pTNM scenen, og histologisk grad. Denne studien viste at spesifikke epidemiologiske og clinicopathologic egenskaper er forbundet med MMR status stratifisert etter
KRAS
mutasjon. Kunnskap om MMR og
KRAS
mutasjonsstatus kan forbedre molekylær patologisk iscenesettelse av CRC pasienter og metastatisk progresjon i CRC kan estimeres basert på en kombinasjon av disse biomarkører
Citation. Li W, Zhi W Zou S, Qiu T, Ling Y, Shan L, et al. (2015) Distinkte Clinicopathological Mønstre Mismatch reparasjonsstatus i tykktarmskreft stratifisert etter
KRAS
Mutasjoner. PLoS ONE 10 (6): e0128202. doi: 10,1371 /journal.pone.0128202
Academic Redaktør: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, JAPAN
mottatt: 03.02.2015; Godkjent: 24 april 2015; Publisert: 04.06.2015
Copyright: © 2015 Li et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er innenfor papir
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av et stipend fra Youth Backbone program (til Jianming Ying) of Cancer Hospital, CAMS, Beijing, Kina, Natural Basic Research program of China (973 program 2014CB542002 ), og Natural Science Foundation National of China (81401984). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
tykktarms~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP (CRC) er en heterogen sykdom utvikler seg fra ulike genetiske stier og en nøyaktig vurdering av kreft basert på kreft funksjoner vil tillate personlig kreftbehandling [1,2,3]. Foreløpig er anatomisk og patologisk iscenesettelse fortsatt den mest nøyaktige prediktor for pasientenes prognose [4]. Oppdagelsen og validering av genetiske markører som bestemmer effektiviteten av metastatisk progresjon av CRC er derfor et viktig forskningsområde, med den potensielle verdien av å definere undergruppe av pasienter med høyest eller lavest risiko for tilbakefall. En av de lovende molekylære markører undersøkt i CRC er tilstedeværelsen av tumor mikro ustabilitet (MSI) [5,6,7,8].
CRC er vanligvis delt inn i to kjente molekylære reaksjonsveier, inklusive det kromosomale ustabilitet (CIN) sti og mikro ustabilitet (MSI) sti. MSI er et resultat av manglende DNA-mismatch reparasjon (dMMR) [9]. En germline mutasjon i ett av MMR gener, inkludert
MLH1
,
MSH2
,
MSH6
eller
PMS2
, er årsaken til dMMR hos pasienter med Lynch syndrom, som er en arvelig sykdom som øker risikoen for utvikling av CRC [10,11]. Mangel MMR er også observert i 10% til 20% av pasienter med sporadisk CRC, hvorav de fleste dMMR svulster skyldes hypermethylation av
MLH1
genet promoter, med
MSH2 Hotell og
MSH6
regnskap for en mindre andel [5]. Sporadiske dMMR svulster, men ikke Lynch syndrom, ofte bære aktivere somatisk V600E mutasjon i ekson 15 av
BRAF
onkogen [12,13,14]. Både sporadiske og Lynch syndrom-assosiert svulster med dMMR status har forskjellige clinicopathologic funksjoner, for eksempel fortrinnsrett beliggenhet i proksimale colon, fremtredende lymfatisk infiltrere, mucinous eller signetring differensiering, og sammen med en gunstig prognose. Data fra PETACC-tre sti rapportert at vevsprøver med dMMR status er mer vanlig i stadium II sykdom enn i stadium III sykdom (22%
vs
12%,
P
0,001) og med en prosentandel på 3,5% i fase IV tumorer. Disse resultatene indikerer at dMMR svulster har en redusert sannsynlighet for å metastasere, og foreslå en mer gunstig utfall [9,15].
Ras /Raf /MEK /ERK-kinase-kaskaden er involvert i kontrollen av celleproliferasjon, celle overlevelse og invasjonen i CRC kreftceller [16].
KRAS
er mutert i 35% -40% CRC og mutasjon av
KRAS
protoonkogenet er en tidlig hendelse i utviklingen av disse kreftformene, utøve en sterk innflytelse på veksten av kolon polypper og tidlig kreft [17,18]. Robust tyder prediktiv verdi på
KRAS
mutasjon i metastatisk CRC behandlet med anti-EGFR målrettet terapi [19,20]. Men den kliniske betydningen av
KRAS
mutasjon som en prognostisk markør er kontroversielt. Noen studier rapporterte ingen sammenheng med overlevelse, mens andre foreslått at pasienter med
KRAS
muterte tumorer har dårligere utfall for noen mutasjon subtype [21,22,23,24].
Foreningen av MMR status,
KRAS Hotell og
BRAF
mutasjoner på klinisk utfall er ofte dokumentert. Men utviklingen av et mer nøyaktig anslag på klinisk utfall ved hjelp av biomarkører kombinasjoner fortsatt en verdig område av etterforskning. Videre, i motsetning til dMMR CRC, data om tilstedeværelse av
KRAS
onkogene mutasjoner i dyktigere MMR (pMMR) CRC og deres forhold til tumorprogresjon er knappe. Målet med denne studien var å evaluere den prognostiske rolle MMR status i kombinasjon med
KRAS
mutasjoner i 913 kinesiske pasienter og karakterisere de spesifiserte undergrupper med hensyn til clinicopathologic funksjoner.
Materialer og metoder
Study befolkningen
Pasienter med resected, histologisk påvist CRC var kvalifisert. De clinicopathological registreringer av 913 pasienter med tilsvarende parafin-embedded materialer tilgjengelig for molekylær analyse ble retrospektivt hentet fra Avdeling for patologi, Cancer Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing, Kina fra 2011 til 2013. En sentral patologi anmeldelsen ble utført. Stratifikasjonsfaktorer følger: antall metastatiske regionale lymfeknuter (N1: 1-3
vs
N2: ≥4), histologisk grad (G1-2: brønn /moderat differensiert
vs
G3: dårlig differensiert /udifferensiert), tumordiameter, PT klassifisering, histologisk subtype, tumor plassering, tumorstørrelse samt pTNM trinnet. Den pTNM iscenesettelse system av syvende utgaven AJCC stadieinndeling ble brukt. Evaluering av M scenen var i hovedsak i henhold til bekreftet patologiske resultater og /eller radiologiske data. Proksimale svulst nettstedet inkludert cecum, stigende, nedsatt flexure og tverrgående tykktarmen; distal tomt inkludert milten flexure, synkende og sigmoid kolon. Mucinous differensiering av tumoren ble definert ved tilstedeværelsen av bassenger av ekstracellulære slimstoffholdige klynger av karsinomatøs celler. Når 50% av analyserte tumor demonstrert mucinous differensiering, tumoren ble klassifisert som mucinous carcinoma. Studien ble godkjent av Institute Review Board of Cancer Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences. Hver deltaker inngått en Institutional Review Board godkjent informert samtykke i samsvar med gjeldende retningslinjer.
KRAS Hotell og
BRAF
V600E
mutasjon analyse
Vurdering av
KRAS Hotell og
BRAF
V600E mutasjonsstatus ble utført i molekylær patologi laboratorium ved Institutt for patologi, Cancer Hospital, CAMS bruk av hensiktsmessige kvalitetskontrollen. Mutasjon status ble bestemt ved hjelp av genomisk DNA ekstrahert fra macrodissected formalinfiksert, parafininnebygd svulstvev. Begge
KRAS
(kodon 12 og 13) og
BRAF
(p.V600E) mutasjonstester ble utført ved hjelp av en multiplex allel-spesifikk PCR-basert analyse (ACCB, Beijing, Kina), sammen med Stratagene Mx3000P (Agilent Technologies Inc, Santa Clara, CA), som vurderer syv forskjellige potensielle mutasjoner i
KRAS
kodon 12 og 13 (
Gly12Ala
,
Gly12Asp
,
Gly12Arg
,
Gly12Cys
,
Gly12Ser
,
Gly12Val
, og
Gly13Asp
). Verken
KRAS
eller
BRAF
V600E
muterte tumorer ble utpekt som villtype
KRAS
subtype.
DNA mismatch reparasjon proteiner uttrykk
MMR protein (MLH1, PMS2, MSH2 og MSH6) uttrykk ble utført som en rutinemessig praksis i vår patologisk avdeling. Alle prøver ble farget i en Autostainer (Autostainer Link 48, Dako, Danmark). Fire um tykke vevssnitt ble deparaffinized i xylen, rehydratisert i gradert alkohol og vasket i destillert vann. Klar til bruk primære muse monoklonale antistoffer inkludert MLH1 antistoff (ES05, Dako) og MSH2 antistoff (FE11, Dako). Klar til bruk primære kanin monoklonale antistoffer inkludert MSH6 antistoff (EP49, Dako) og PMS2 antistoff (EP51, Dako). MMR proteintap ble definert som fravær av nukleær farging i tumorceller, men positiv nukleær farging i normale colonic epithelial celler og lymfocytter. Svulster ble utpekt som dMMR status om tap av minst en MMR protein ble funnet og pMMR hvis alle proteiner var intakt.
MLH1
arrangøren metylering analyse
Alle DNA-prøver ble utsatt for sulfitt modifikasjon bruke EZ DNA Metylering Kit (Zymo Research, CA, USA) i henhold til produsentens instruksjoner. Ett pg av genomisk DNA fra hver prøve ble konvertert bisulfitt og eluert i 18μl elueringsbuffer. Metylering-spesifikk PCR (MSP) ble utført som tidligere beskrevet [25]. Primere som brukes for denne analysen var: 5′-AAT TAA TAG GAA GAG CGG ATA GC-3 «og 5» CCT CCC TAA AAC GAC TAC TAC CCG-3 «for metylert
MLH1
promoter og 5′ -TGA ATT AAT AGG AAG AGT GGA TAG T-3 «og 5» TCC CTC CCT AAA ACA ACT ACT ACC CA-3 «for unmethylated
MLH1
promoter. MSP PCR-primer spesifisitet ble bekreftet som de ikke forsterke ikke-bisulfitt-behandlede genomiske DNA-maler, og MSP produkter av flere primære svulster har blitt bekreftet ved direkte sekvensering med BigDye v3.1 (Applied Biosystems), noe som indikerer at vår MSP system er spesifikk.
Statistisk analyse
Det primære målet med denne studien var å identifisere distinkte clinicopathologic funksjoner knyttet til MMR status og
KRAS
mutasjon. Logistisk regresjon modeller ble brukt til å oppdage sammenslutninger av disse egenskapene til hver av de
KRAS
mutasjoner og MMR status. Kruskal-Wallis og χ
2 (eller Fishers eksakte) tester ble brukt for å sammenligne kontinuerlige og kategoriske variabler, henholdsvis. Univariate logis regresjonsmodeller ble brukt til videre kategorisere og definere den endelige covariables brukes til multivariabel analyse. Statistiske tester var tosidig, og
P
verdier av 0,05 ble betraktet som signifikant. For flere sammenligninger, Bonferroni justert
P
verdier ble rapportert for forskjellene mellom
KRAS
mutasjon og MMR status (α = 0,05 /6). Statistisk signifikante kjennetegn basert på univariate modeller ble da inkludert i multivariable modeller ved hjelp av trinnvis og bakover modell utvelgelsesprosedyrer. Odds ratio med 95% konfidensintervall ble beregnet. Statistikk ble utført ved hjelp av SPSS (versjon 16.0 av SPSS, Chicago, IL, USA).
Resultater
En total av de 913 sakene ble evaluert ved immunhistokjemi (IHC) for tilstedeværelse eller fraværet av MLH1, MSH2, MSH6 og PMS2 protein uttrykk. Av de 69 tilfellene (69/913, 7,5%) med dMMR, 49 hadde et fravær av protein uttrykk for MLH1 /PMS2, 9 for MSH2 /MSH6, 5 for MSH6 og 6 for PMS2 alene. For å tydelig Lynch syndrom relaterte CRC fra sporadiske MSI kreft, utførte vi
MLH1
promoter metylering studien. Blant 49 tilfeller med et fravær av protein uttrykk for MLH1 /PMS2, 32,6% (16/49) tilfeller hadde
MLH1
promoter metylering. Av dem,
KRAS
mutasjoner i
MLH1
denaturert sporadiske MSI svulster var 25% (4/16) og mutasjonsfrekvens var mye lavere enn for generelle mutasjoner, 36,9% (337/913 ) (fig 1).
Pasient og tumor egenskaper med hensyn til MMR status ble vist i Tabell 1. gjennomsnitts~~POS=TRUNC alderen~~POS=HEADCOMP på presentasjon for dMMR svulster var 53,3 ± 12,7 år, noe som var yngre enn det av pMMR svulster (
P
= 0,003). Overall, svulster med dMMR ble oftere plassert på proksimale side av tykktarmen (72,4%
vs
18,9%,
P
0,0001) og var mer sannsynlig å bli dårlig differensiert (34,8 %
vs
18,0%,
P
0.001), sammenlignet med pMMR svulster. I tillegg ble svulster med dMMR også signifikant assosiert med mucinous histologisk subtype (63,8%
vs
32,7%,
P
0,0001) og redusert lymfeknutemetastase (39,1%
vs
54,6%,
P
= 0,01). Det var ingen statistisk signifikante forskjeller i kjønn og pT scenen.
Mutasjoner i
KRAS Hotell og
BRAF
V600E
var gjensidig eksklusiv. Det var 6 tilfeller med dMMR svulster som næret
BRAF
V600E
mutasjoner og disse sakene ble ekskludert fra analysen.
KRAS
mutasjoner i kodon 12 og 13 ble observert hos 36,9% (337/913) av alle svulster. En høyere frekvens av
KRAS
mutasjoner ble oppdaget i dMMR tumorer (27/69, 39,1%) sammenlignet med pMMR svulster (310/844, 36,7%), selv om denne forskjellen ikke statistisk signifikant. Av de 27 dMMR og
KRAS
-mutated svulster, ble 16 tilfeller definert med tap av MLH1 /PMS2, 7 med MSH2 /MSH6 og 4 med PMS2 alene.
Pasient og tumor egenskaper med hensyn til både MMR og
KRAS
mutasjonsstatus ble oppsummert i tabell 2. av de 913 tilfellene hvor både MMR og
KRAS
mutasjonsstatus ble definert, 27 (2,9%) tilfeller med dMMR var
KRAS product: (+) og 42 (4,6%) var
KRAS product: (-), mens 310 (34,0%) tilfeller med pMMR var
KRAS product: (+) og 534 (58,5%) var
KRAS product: (-). Blant disse fire gruppene, ble signifikante forskjeller observert for kjønn {
KRAS product: (+) /dMMR tilfeller mer sannsynlig å være mann,
P
0,0001}, alder {
KRAS product: (+) /dMMR mer sannsynlig å ha en yngre alder ved diagnostisering av sykdom,
P
= 0,0001} klasse {
KRAS product: ( -) /dMMR mer sannsynlig å ha lavere grad sykdom,
P
= 0,002} svulst plassering {
KRAS product: (+) og
KRAS
(-) /dMMR tilfeller mer sannsynlig å bli plassert i den proksimale colon,
P
0,0001} og lymfeknutemetastase {
KRAS product: (+) /pMMR tilfeller mer sannsynlig å ha høyere pN scenen,
P
= 0.004}. Men ingen forskjeller ble registrert i PT scenen blant disse fire gruppene
Når sammenlignet med de med
KRAS
. (-) /PMMR svulster, pasienter med
KRAS
(+) /pMMR svulster var mest sannsynlig å være kvinne (49,0%
vs
36,0%; OR = 1,85; 95% CI = 1,39 til 2,46;
P
0,0001) , skal proksimale plassert (45,5%
vs
29,3%; OR = 2,00; 95% CI = 01.30 til 03.08;
P
= 0,002), for å ha en mucinous histologi (38,4%
vs
29,4%; OR = 1,50; 95% CI = 01.11 til 02.01;
P
= 0,007), og å ha økt lymfeknutemetastase (60,3%
vs
50,7 %; OR = 1,48; 95% CI = 1,11 til 1,96;
P
= 0,007) (tabell 3). Tvert imot, sammenlignet med de med
KRAS product: (-) /dMMR svulster, pasienter med
KRAS product: (+) /dMMR svulster viste ingen statistisk signifikante forskjeller i kjønn, tumor plassering, PT dybde av invasjonen, lymfeknutemetastase, pTNM scenen, og histologisk grad. Men gjennomsnittsalderen på presentasjon for
KRAS product: (+) /dMMR svulster var 51.051.051.0 presentasjon for s, n, enn for
KRAS product: (-) /dMMR tumorer (
P
= 0,001).
i analysen bruker multivariable logis regresjonsmodeller, vi anmeldt clinicopathologic egenskaper i tabell 4. Som vist multivariably, svulster med
KRAS plakater (+ ) /pMMR ble statistisk assosiert med proksimal beliggenhet, mucinous histologi og økt lymfeknutemetastase.
Diskusjoner
Definere tumor subtyper av CRC basert på sti drevne endringer har potensial til å forbedre prognostication og guide målrettet terapi. Distinkte kliniske og patologiske trekk ved CRC med ulik MMR status har lenge vært identifisert [6,26,27,28]. I denne studien viste vi molekylære og clinicopathological funksjoner i pMMR og dMMR svulster stratifisert etter
KRAS
mutasjonsstatus i en stor kohort av påfølgende kinesiske CRC pasienter. Dyktige MMR svulster som ble nonmutated for
KRAS Hotell og
BRAF
V600E
var den mest utbredte subtype og representerte 58,5% (534/913) av vår studie kohort . Sammenlignet med dette undertype, pasienter med
KRAS product: (+) /pMMR svulster var mer vanlig i proksimale colon og å ha en mucinous histologi. Viktigst, pasienter med
KRAS product: (+) /pMMR svulster viste økt lymfeknutemetastase blant fire undergrupper og kan ha dårligere overlevelse.
I samsvar med tidligere funn, våre data tyder på at svulster med dMMR status viser ofte dårlig differensiering, mucinous celletype, proksimale plassering og redusert lymfeknutemetastase. I tillegg til sin rolle i å identifisere unike patologiske trekk ved CRC, har dMMR status også blitt brukt som en prognostisk markør og veiledning for Fluorouracil-basert adjuvant kjemoterapi [8]. Nyere bevis indikerte at CRC kan videre klassifiseres i fem forhåndsdefinerte undergrupper ved hjelp av en biomarkør kombinasjon av
KRAS Hotell og
BRAF
V600E
mutasjoner, MMR status og
MLH1
metylering med statistisk signifikante forskjeller i clinicopathologic funksjoner og pasientoverlevelsesraten [29]. Dermed gir en biomarkør-baserte klassifikator viktig prognostisk informasjon i CRC med konsekvenser for behandlingen av pasienten. Bevis fra andre rapporter støttet ideen om at
KRAS
mutasjon og MMR status er genetiske markører som oppstår tidlig og forblir biologisk relevant gjennom alle faser av tumorprogresjon [30,31]. I tillegg
KRAS
mutasjoner er funnet i primære svulster er bevart i tilbakefall og metastaser. Derfor vurderte vi de forhåndsdefinerte tumor undergrupper med hensyn til clinicopathologic funksjoner i biomarkør kombinasjoner av
KRAS
mutasjoner og MMR status.
Mangel MMR kreft vanligvis kommer i proksimale colon [15]. Som forventet, de aller fleste av dMMR svulster i denne studien (72,4%) var fra den proksimale colon og denne fordelingen ble ikke påvirket av
KRAS
mutasjoner. Selv om de fleste av de pMMR svulster ikke var sannsynlig å bli proksimale plassert, er det interessant at når pMMR svulster stratifisert etter
KRAS
mutasjoner,
KRAS
muterte tumorer (20,9% proksimale) var mer sannsynlig å bli proksimale sammenlignet med
KRAS product: (-) /pMMR tumorer (14,7% proksimale). Tradisjonelt tykktarm kreft utvikles i proksimale tarmen skapte ofte et miljø der CIMP (CpG Island Methylator Phenotype) er mer sannsynlig å oppstå, og dette synergizes med
BRAF
mutasjon for å tillate progresjon av taggete polypper [32]. Men siste bevis antydet at
KRAS
mutasjoner kan også bli funnet i CIMP høy og CIMP lave svulster som ofte ble plassert i proksimale colon [33]. Dette indikerte at det var mer omfattende mekanismene bak plasseringen av tykktarmskreft og mutasjons profiler. Mucinous carcinoma er diagnostisert når minst 50% av tumoren omfatter sekretoriske mucin og er ofte forbundet med dMMR status og taggete adenokarsinom [34]. Dette er i tråd med våre funn at dMMR svulster viste mer mucinous differensiering enn pMMR svulster (63,8%
vs
32,7%). Men når stratifisert etter
KRAS
mutasjonsstatus, observerte vi at pMMR tumorer med mutert
KRAS
fenotype utstilt mer mucinous differensiering enn villtype
KRAS
subtype (38,4%
vs
29,4%). Dette er i stor grad fordi
KRAS
mutasjon er ikke bare knyttet til konvensjonelle adenomer, men også i forbindelse med taggete adenomer i utviklingen av tykktarmskreft [35].
En signifikant sammenheng ble funnet mellom tilstedeværelsen av lymfeknutemetastaser og pMMR svulster stratifisert etter
KRAS
mutasjonsstatus. Våre funn viste at pMMR svulster med
KRAS
mutasjon viste flere positive lymfeknuter og pTNM III-IV stadium av sykdommen enn svulster med
KRAS product: (-) /pMMR status. Dette stemmer overens med resultatene fra en mindre rapport, som viste at hyppigheten av
KRAS
mutasjoner var høyere i pMMR lymfeknute positive tumorer, sammenlignet med pMMR lymfeknute negative tumorer [36,37]. Våre resultater tyder på at flertallet av pMMR svulster trengs
KRAS
mutasjon for å kunne spre og denne aktiveringen var avgjørende for neoplastiske celler til å erverve invasiv potensial. Mutasjoner i
KRAS
onkogen fører til endringer i kodede aminosyrer som grenser til GTP bindende lommen og reduserte GTPase aktiviteten til
KRAS
protein etter guanin nukleotid aktivere protein (GAP) binding [38]. Begge
in vitro Hotell og
in vivo
eksperimentelle modeller, transfeksjon av muterte, konstitutivt aktive former for
KRAS
onkogen inn tidligere noncancerous celler kan føre til invasiv og metastatiske fenotyper. Ektopisk uttrykk for aktiv
KRAS
i murine NIH 3T3 fibroblast cellelinje resulterte i økt invasjon og erverv av metastatiske egenskaper [39]. Ved hjelp av halevenen injeksjon av transformerte celler,
in vivo
modeller ble observert av lever og lunge metastaser [40]. I tillegg til bevis innhentet fra celle og dyreforsøk, har kliniske studier også vist betydelig lymfeknutemetastase i
KRAS product: (+) /pMMR svulster [36,41]. Genuttrykk profilering avslører at genene involoving epitelial mesenchymale overgang og matrise ombygging som kan legge til rette for svulst invasjon og metastasering er oppregulert i mutante
KRAS
-pMMR svulster [42]. Derfor
KRAS
onkogen aktivering viste seg å være en viktig formidler av tumorcelle invasjon og metastasering i pMMR svulster.
Hyppigheten av
KRAS
mutasjoner i Lynch syndrom relatert CRC og sporadisk CRC er nesten det samme. Men
KRAS
mutasjoner er betydelig hyppigere i Lynch syndrom relaterte CRC enn i sporadisk MSI-H CRC [37,43]. Lynch syndrom relaterte CRC pleier å være tidlig debut og proksimale plassering. Så dette kan forklare den yngre alder og proksimale plassering observert i
KRAS
+ /MSI svulster. Til tross for disse positive funn, har vår studie noen begrensninger. Først, fordi dette er et retrospektivt studere, er det vanskelig å samle opp blod eller spytt prøve fra pasienter til å oppdage germline mutasjoner til ytterligere skille Lynch syndrom relaterte CRC fra sporadisk kreft. Så kan vi ikke beregne den nøyaktige frekvensen av
KRAS
mutasjoner i arve CRC, men det er sikkert at Lynch syndrom relaterte CRC i vår studie viste fortrinnsvis
KRAS
mutasjoner. For det andre, vi fikk ikke undersøke andre mindre vanlige mutasjoner i
KRAS
kodon 61, 117 og 146, som også bidro til den onkogene transformasjon av kreftceller.
Denne studien tyder på at spesifikke epidemiologiske og clinicopathologic egenskaper er forbundet med MMR status stratifisert etter
KRAS
mutasjon i CRC. Kunnskap om MMR og
KRAS
mutasjonsstatus kan forbedre molekylær patologisk iscenesettelse av CRC pasienter og metastatisk progresjon kan også estimeres basert på en kombinasjon av disse biomarkører. Validering av flere genetiske biomarkører vil bidra til å avgrense beslutninger for den enkelte pasient basert på tumorbiologi. Viktigere, kan dette også bidra til utviklingen av nye terapeutiske mål å hjelpe behandling av disse aggressive kreftformer.
Takk
Vi takker alle deltagerne ved Institutt for patologi for deres bidrag til dette prosjektet. Dette arbeidet ble støttet av et stipend fra Youth Backbone Program (til Jianming Ying) of Cancer Hospital, CAMS, Beijing, Kina, Natural Basic Research Program of China (973 program 2014CB542002) og Natural Science Foundation National of China (81401984).
