Abstract
proteasome er en viktig regulator av cellulær protein homeostase og er en klinisk validert kreft mål. Den immunoproteasome, en undertype av proteasome uttrykt hovedsakelig i hematopoetiske celler, ble først anerkjent for sin rolle i antigen presentasjon i løpet av immunresponsen. Nylig har immunoproteasome vært innblandet i flere sykdomstilstander, inkludert kreft og autoimmune sykdommer, men mange av de faktorene som bidrar til disse patologiske prosesser forblir ukjent. Spesielt kodon 60 polymorfisme av
PSMB9
genet som koder for β1i immunoproteasome katalytiske subenhet har blitt undersøkt i forbindelse med en rekke sykdommer. Til tross for dette, har tidligere studier så langt rapportert inkonsistente funn om effekten av denne polymorfisme på proteasome aktivitet. Derfor setter vi ut for å undersøke virkningen av
PSMB9
kodon 60 polymorfisme på uttrykk og aktivitet av β1i immunoproteasome subenheten i et panel av humane kreftcellelinjer. Den β1i-selektive fluorogent substrat acetyl-Pro-Ala-Leu-7-amino-4-metylkumarin ble anvendt for spesifikt å måle β1i katalytisk aktivitet. Våre resultater tyder på at kodon 60 Arg /His polymorfi, ikke signifikant påvirker ekspresjon og aktivitet av β1i blant de cellelinjene som ble testet. I tillegg har vi også undersøkt uttrykk for β1i i kliniske prøver fra tykktarm og bukspyttkjertel kreftpasienter. Våre immunhistokjemiske analyser viste at ~70% av kliniske tykktarmskreft prøver og ~53% av kreft i bukspyttkjertelen prøvene har påviselig β1i uttrykk. Tatt sammen, våre resultater indikerer at β1i subenhet av immunoproteasome blir ofte uttrykt i tykktarm og bukspyttkjertel kreft, men at kodon 60 genetiske varianter av β1i viser tilsvarende katalytiske aktiviteter og er neppe til å bidra til den betydelige inter-celle-linje og inter- individuelle variabilities i immunoproteasome aktivitet
Citation:. Park JE, Ao L, Miller Z, Kim K, Wu Y, Jang ER, et al. (2013)
PSMB9
kodon 60 Polymorfisme har ingen innvirkning på aktiviteten i Immunoproteasome Catalytic subenheten B1i Uttrykt i flere typer Solid kreft. PLoS ONE 8 (9): e73732. doi: 10,1371 /journal.pone.0073732
Redaktør: Wael El-Rifai, Vanderbilt University Medical Center, USA
mottatt: Mai 10, 2013; Godkjent: 20 juli 2013; Publisert: 09.09.2013
Copyright: © 2013 Park et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet av National Cancer Institute tilskudd, R15CA156601 og R01CA128903 og Kentucky Lung Cancer Research Program. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
proteasome er ansvarlig for degradering av målrettede proteiner og er en sentral aktør i vedlikehold av mobilnettet protein homeostase og regulering av cellulære prosesser som er viktige i kreftutvikling og progresjon [1], [2]. Den immunoproteasome, en alternativ form for proteosomet, er funnet i celler av hematopoietisk opprinnelse, men dets ekspresjon kan også induseres under inflammatoriske og spenningsforholdene i andre celletyper [3]. Den immunoproteasome dannes når de tre typene katalytisk subenhet funnet i det konstituerende proteasome, β1 (Y,
PSMB6
), β2 (Z,
PSMB7
) og β5 (X,
PSMB5
), er erstattet av tre homologe immun-subenheter: β1i (lMP2,
PSMB9
), β2i (MECL-en,
PSMB10
) og β5i (LMP7,
PSMB8
). I forhold til den konstitutive proteosomet er immunoproteasome funnet å ha ubetydelig endrede proteolytiske spesifisiteter som er i stand til å produsere peptider mer egnet for binding til hovedhistokompatibilitetskompleks I-molekyler således til rette for antigenpresentasjon [4]. Men nyere studier indikerer at immunoproteasome kan ha viktige funksjoner utover den adaptive immunrespons. For eksempel er det immunoproteasome funnet å bli uttrykt i ikke-inflammed, immun-previleged vev (f.eks retina og hjerne [5], [6]), og i sammenheng med en rekke sykdomstilstander (for eksempel kreft, neurodegenerative sykdommer, autoimmune sykdommer, [3], [7] og referanser deri). Til tross for disse observasjonene, er den biologiske betydningen av immunoproteasome i slike sykdomstilstander ikke fullt ut forstått.
β1i subenhet av immunoproteasome er kodet av
PSMB9
genet ligger på kromosom 6. Dette genet havner en vanlig forekommende genetisk R /H polymorphism ved kodon 60 (p.60R H; c.179G A; rs17587) med H allelfrekvenser på 1,1% til 34%, varierende på tvers av etniske grupper ([8] og referanser deri) . Flere undersøkelser har rapportert mulige sammenhenger mellom kodon 60
PSMB9
polymorfisme status og økt mottakelighet for forskjellige sykdommer, slik som insulinavhengig diabetes mellitus, reumatoid artritt og multippel sklerose [8] – [16]. Det er imidlertid vanskelig å tyde fra tidligere studier hvorvidt de observerte assosiasjoner er direkte relatert til den forandrede aktiviteten til β1i underenheten som et resultat av R /H aminosyre-variant. Dette er delvis på grunn av inter-avhengige natur proteasominhiberingens subenheter og mangel på egnede molekylære prober. En tidligere undersøkelse av Mishto et al. [17] undersøkte nærmere på virkningen av denne polymorfisme på proteasome aktivitet i alderen hjernen ved hjelp av det fluorogene peptid underlaget N-Succinyl-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC (Suc-LLVY-AMC). Resultatene fra denne studien antydet at H allel resulterer i en redusert proteasome aktivitet i alderen hjernen [17]. Imidlertid, siden Suc-LLVY-AMC blir konvensjonelt anvendt til å måle den totale chymotrypsin-lignende (CT-L) proteolytisk aktivitet av proteosomet og således kan hydrolyseres av flere underenheter av både immunoproteasome og den konstitutive proteasomet, denne reduksjonen i hydrolyse av Suc-LLVY-AMC kan ikke nødvendigvis indikerer endringer i β1i funksjon. Videre en senere studie av den samme gruppen ved hjelp av rekombinante peptider som etterligner endogene substrater indikerte ingen forskjeller i underlaget hydrolyse profiler mellom kodon 60 genotyper [18].
Mye av avviket angående den funksjonelle virkningen av PSMB9 kodon 60 polymorfisme oppstår fra mangelen på et verktøy for spesifikt å observere funksjon av β1i subenheten. I denne forbindelse, Lin et al. [19] og Blackburn et al. [20] har nylig rapportert om utvikling og anvendelse av det fluorogene substrat acetyl-Pro-Ala-Leu-7-amino-4-metylkumarin (Ac-PAL-AMC) som hydrolyseres selektivt ved β1i. Denne romanen verktøyet har gjort det mulig å vurdere direkte funksjonelle effekten av
PSMB9
kodon 60 polymorfisme på β1i subenheten. I vår nåværende studie undersøkte vi uttrykket av β1i i kliniske tykktarm og kreft i bukspyttkjertelen vev så vel som i etablerte menneskekreftcellelinjer. Ved hjelp av β1i-selektive fluorogent substrat Ac-PAL-AMC, vurderte vi også den katalytiske aktiviteten til β1i i flere cancercellelinjer som bærer forskjellige genotyper ved kodon 60. Resultatene indikerte at β1i ofte uttrykt i tykktarm og bukspyttkjertel kreft, men kodonet 60
PSMB9
polymorfisme har ingen vesentlig innvirkning på den katalytiske aktiviteten til β1i uttrykt i flere typer kreft cellelinjer.
Materialer og metoder
Cell Kultur og reagenser
Etablert cellelinjer som stammer fra ulike typer kreft hos mennesker (kolon, HCT-8, DLD-en, HCT-116, SW480, lunge, H23, H358, H460, H727, H1299, prostata, PC-3, DU145; bukspyttkjertel, BxPC-3, PANC-1, AsPC1, bryst, MCF-7, HS578T, MDA-MB-231) ble anskaffet fra American Type Culture Collection (ATCC) og opprettholdt under de anbefalte betingelser. De fluorogene substrater Suc-LLVY-AMC og Ac-PAL-AMC ble tilpasset syntetisert ved å følge standard peptidsyntese strategi. Proteasomhemmere UK-101 og epoxomicin ble syntetisert og renset som rapportert tidligere [21], [22]. Renset 20 S konstituerende proteasome og immunoproteasome ble kjøpt fra Boston Biochem.
Immunhistokjemisk analyse
Tissue microarrays inneholder avidentifiserte, arkiv tilfeller av human kolon og prøver bukspyttkjertelkreft vev ble oppnådd fra USA Biomaks. Bruken av avidentifiserte vev array-prøver fra en kommersiell kilde for denne studien ble ansett for å være unntatt fra Human Subject Regulering av Institutional Review Board. En streptavidin-biotin-immunoperoxidase Analysen ble utført etter at antigenet henting prosedyre (citratbuffer, pH 6) ved anvendelse av et monoklonalt antistoff mot β1i (1:100 fortynning, Enzo Life Sciences) i henhold til den tidligere rapporterte protokollen [23]. Immunreaksjon ble visualisert ved bruk av 3,3′-diaminobenzidin (DAB), og kjerner ble motfarget med hematoksylin. Spesifisiteten til immunoreaktive signaler som ble bekreftet ved å utelate enten den primære eller den sekundære antistoff. De immun vev microarray seksjoner ble analysert av en erfaren patolog (Dr. Eun Y. Lee). Intensiteten av farging ble tildelt på en skala fra 0 til 2 eller 3.
Fastsettelse av
PSMB9
Polymorphic Status ved kodon 60
PSMB9
genotyper ved kodon 60 ble opprinnelig fastsatt ved bruk av standard PCR-metoder og DNA enzymatisk fordøyelse som tidligere rapportert [24]. Amplikonet dekker hele den åpne leseramme ble deretter klonet og analysert ved hjelp av direkte sekvensering for å bekrefte at cellelinjene ikke inneholder flere genetiske variasjoner i PSMB9 genet.
Immunoblotting Analyse
En ekvivalent mengde av vevs- eller celleekstrakter ble løst i polyakrylamidgeler og overført til PVDF-membraner. Membraner ble blokkert i 5% skummet melk og undersøkt med anti-β1i (1:1000, Abcam) og anti-β-aktin (1:1000, Novus) antistoffer. Etter vasking, ble blottene inkubert med pepperrotperoksydase-konjugert sekundært antistoff. Bundede antistoffer ble detektert ved anvendelse av en forbedret kjemiluminescens-substrat (Pierce Bioteknologi). For å kunne sammenligne de relative uttrykk nivåer av β1i mellom flere cellelinjer, ble serielt utvannet H23 celleekstrakter brukt som kalibreringsstandarder og bandet intensiteter ble densitometrically kvantifisert ved hjelp av Antall Én programvare (Bio-Rad).
Proteasome aktivitets~~POS=TRUNC
den katalytiske aktivitet av β1i ble bestemt ved overvåking av hydrolysehastigheten av fluorescerende 7-amino-4-methylcoumarine (AMC) fra Ac-PAL-AMC [20]. Kort sagt ble renset proteasomal preparater eller celleekstrakter inneholdende tilsvarende totalt protein mengde (10 ug) tilsatt til 96-brønners plater og justert til et sluttvolum på 50 pl ved bruk av analysebuffer (20 mM Tris /Cl, 0,5 mM EDTA, pH 8,0). Reaksjonen ble initiert ved tilsetning av Ac-PAL-AMC (100 uM) og fluorescensen av frigjort AMC ble overvåket i 90 minutter ved anvendelse av en SpectraMax M5 plateleser (Molecular Devices, eksitasjon 360 nm og emisjon 460 nm). For å verifisere at substrathydrolyse medieres av β1i, ytterligere sett av celleekstrakter eller rensede proteasomal preparater ble forbehandlet med proteasomhemmere UK101 eller epoxomicin i 1 time, hvoretter fluorescente signalene ble overvåket. I separate eksperimenter ble hydrolysen av Suc-LLVY-AMC (100 uM) overvåkes for å vurdere den generelle CT-L proteolytisk aktivitet.
Statistical Analysis
Verdier fra data ble uttrykt som middel med standardavvik. En sammenligning mellom gruppene ble utført ved hjelp av Student
t
-test og p 0,05 ble betraktet som signifikant
Resultater
Hyppig Uttrykk av β1i i Colon og kreft i bukspyttkjertelen vev.
i vurderingen uttrykk for β1i i tykktarmskreft, vi først brukt fire par tykktarmskreft og ikke-ondartede tilstøtende colonic vev fra matchende givere. Vår immunoblotting analyser indikerte at β1i nivåene ble sterkt forhøyet i alle fire kliniske tykktarm kreft vev i forhold til de sammenkoblede ikke-ondartede colonic vev (Figur 1a). For ytterligere å vurdere hyppigheten av β1i uttrykk i tykktarmskreft, utførte vi immunhistokjemiske analyser på en svulst array som inneholder 153 evaluerbare tykktarmskreft eksemplarer av alle kliniske stadier. Intensiteten av β1i farging ble evaluert på en skala fra 0 til 3, og resultatene indikerte at det meste (ca. 70%, n = 107 ut av 153 total prøvestykker) av tykktarmskreft vev var positive (fargeintensitet ≥1) for β1i farging (figur 1B). Lignende analyser ble utført ved hjelp av en svulst array som inneholder 43 evaluerbare kreft i bukspyttkjertelen eksemplarer av alle kliniske stadier. På grunn av den begrensede prøvestørrelse, ble intensiteten av β1i farging evaluert på en skala fra 0 til 2, og resultatene indikerte at omtrent 53% (n = 23 ut av 43 totalt antall prøver) med kreft i bukspyttkjertelen vev hadde positive (fargingsintensitet ≥ 1) β1i farging (figur 1C). For begge vev arrays, vurdert vi om det er noen sammenheng mellom β1i uttrykk og tilgjengelig clinicopathologic faktorer (f.eks kjønn og svulst klasse). Imidlertid gjorde resultatene avdekket ingen åpenbare assosiasjoner.
(a) Immunoblotting analyse for β1i bruker proteinlysatene fremstilt av nonmalignant (N) og kreft (T) colonic vev fra samme givere (n = 4 par) . β-aktin ble benyttet som en kontroll lasting. Bånd intensiteter for β1i og β-aktin ble densitometrically analysert og benyttet for å oppnå den relative β1i uttrykket normalisert til p-actin nivåer. (B) Immunhistokjemisk farging for β1i ved hjelp av en svulst array som inneholder 153 evaluerbare tumor kolon vevsprøver. Intensitetene av β1i positiv farging ble vurdert på en skala fra 0 til 3. Omtrent 70% (46 prøvene hadde intensiteten av klasse 1, 38 med grad 2, og 8 med klasse 3, ut fra de totale 153 vevsprøver) kolorektale vev har positive (fargeintensitet ≥1) β1i farging. (C) Immunhistokjemisk farging for β1i ved hjelp av en svulst array som inneholder 43 evaluerbare svulst i bukspyttkjertelen vevsprøver. Styrken på β1i positiv farging ble evaluert på en skala fra 0 til 2. Omtrent 53% (9 prøver med intensitet klasse 1 og 14 med klasse 2, av 43 totalt antall vevsprøver) av kreft i bukspyttkjertelen vev hadde ≥1 β1i fargeintensitet .
katalytiske aktivitet β1i i et panel av humane kreftcellelinjer Bære Different kodon 60 Polymorphic Varianter
Tidligere Blackburn et al. [20] rapporterte at Ac-PAL-AMC (figur 2A) kan anvendes som en selektiv sonde for å måle den katalytiske aktivitet av β1i. Før bruk av Ac-PAL-AMC i våre undersøkelser har vi videre fastslått at hydrolysen av Ac-PAL-AMC ble selektivt medieres av β1i hjelp av rensede preparater av immunoproteasome og konstitutiv proteasomet. Faktisk, Ac-PAL-AMC ble lett hydrolyseres ved immunoproteasome, men ikke ved den konstitutive proteasomet (figur 2B). Forbehandling med UK101, en β1i-selektiv proteasominhibitor [21], fullstendig hemmet Ac-PAL-AMC hydrolyse, ytterligere validering Ac-PAL-AMC som en β1i-selecitve sonde (figur 2B). På lignende måte ble omtrent 90% av hydrolyse av Ac-PAL-AMC hemmet i Panc-1-celleekstrakter av UK-101 før behandling (figur 2C). I motsetning til dette ble hydrolysen av Suc-LLVY-AMC bare delvis blokkert av UK101 forbehandling i PANC-1 ekstrakter, noe som tyder på at Suc-LLVY-AMC hydrolyseres av andre enn β1i proteasomer underenheter (dvs. β5 eller β5i) (figur 2C).
(a) Kjemisk struktur av Ac-PAL-AMC. (B) Ac-PAL-AMC hydrolyse over tid ved renset konstituerende proteasome (kryss), renset immunoproteasome (lukket sirkel), eller renset immunoproteasome forbehandlet med UK101 (åpen plass). En lineær økning ble sett på bare immunoproteasome-inneholdende brønner. (C) Hydrolysehastigheten av Ac-PAL-AMC eller Suc-LLVY-AMC i nærvær av Panc-1 celle-ekstrakt (10 ug). Hydrolyse av Ac-PAL-AMC ble nesten fullstendig inhibert ved UK101 forbehandling (10 uM). Hydrolyse av Suc-LLVY-AMC ble delvis hemmet av UK-101 forbehandling. Epoxomicin (EPX, 10 pM), et bredt virkende proteasominhibitor, ble anvendt som en positiv kontroll.
Etter validering av Ac-PAL-AMC som en β1i-selektive probe, vi så vurdert den β1i aktivitet i et panel av humane kreftcellelinjer. Disse cellelinjer ble screenet for deres
PSMB9
genotyper ved kodon 60 (n = 6 for de som bærer HH eller HR genotype; n = 11 for de som bærer RR genotype) og bekreftet ikke å ha noen ekstra variasjoner i
PSMB9
genet ved direkte sekvensering (tabell S1). Våre resultater viste at de katalytiske aktivitetene til β1i vurdert av hydrolysehastigheten av Ac-PAL-AMC hovedsakelig varierer mellom disse cellelinjene, men disse forskjellene ikke synes å være forbundet med kodon 60 polymorfe status (figur 3).
(a) Den katalytiske aktivitet av β1i målt ved hydrolyse av Ac-PAL-AMC i humane kreftcellelinjer med H /H eller R /H genotype (tomme søyler) og R /R genotype (fylte søyler). Variabel aktivitet ble observert blant cellelinjer. (B) Rate of Ac-PAL-AMC hydrolyse i cellelinjer med H /H eller R /H genotype (åpne sirkler) eller R /R genotype (lukkede firkanter). Hydrolysehastigheten viste ingen statistisk signifikant forskjell mellom H + og H-cellelinjer.
β1i Expression i Human Cancer Cell Lines Bære Different kodon 60 Polymorphic Varianter
Som et neste skritt , undersøkte vi hvorvidt β1i ekspresjonsnivåene påvirkes av kodonet 60 polymorfe status i de testede cancercellelinjene. For å kvantifisere β1i proteinnivåer, som viser betydelig variasjon på tvers av ulike cellelinjer, anvendte vi seriefortynnet H23 celleekstrakter som kalibreringsstandarder (figur 4). En sammenligning av cellelinjer med H-allelet til de som mangler den H-allelet viste ingen statistisk signifikante forskjeller i β1i uttrykket (figur 5A). I stedet fant vi en meget signifikant korrelasjon mellom den katalytiske aktiviteten β1i og dens uttrykk nivå (figur 5B, r
2 = 0,86, p 0,0001, er individuelle verdiene inkludert i tabell S1). Disse funnene antydet at ulike uttrykk nivåer av β1i sannsynlig står for mesteparten av variasjonen hos β1i aktivitet på tvers av ulike cellelinjer.
Et tilsvarende beløp (10 mikrogram) av celleekstrakter ble utsatt for immunblotting med et antistoff å β1i sammen med serielt utvannet H23 celleekstrakter (kalibrering standarder). Densitometriske analyser av band intensiteter ble utført for å kvantifisere relative uttrykk nivåer av β1i. Cellelinjer uttrykk høye nivåer av β1i er vist i (A) og cellelinjer med lav ekspresjon av β1i er vist i (B).
(a) β1i ekspresjon i cellelinjer med H /H eller R /H (åpen sirkel) og R /R genotyper (lukket kvadrat). β1i uttrykk viste ingen statistisk signifikant forskjell mellom H + og H-cellelinjer. (B) Korrelasjon av Ac-PAL-AMC hydrolyse med β1i ekspresjon i alle cellelinjene som ble testet. En meget signifikant korrelasjon ble observert mellom uttrykket nivåer av β1i og dets katalytiske aktivitet (R
2 = 0,86, p 0,0001).
Diskusjoner
I vår nåværende studie undersøkte vi effekten av
PSMB9
kodon 60 polymorfismer på β1i subenhet av immunoproteasome uttrykt i flere kreftcellelinjer ved hjelp av en nylig rapportert β1i aktivitet sonde, Ac-PAL-AMC. Våre resultater indikerer at kodon 60 polymorfisme har ingen stor innvirkning på uttrykket nivåer eller katalytiske aktiviteter β1i i panelet av humane kreftcellelinjer som ble testet. Disse resultatene er forskjellig fra tidligere funn som indikerte at hjernevev fra eldre individer bærer kodon 60 H allelet hadde sunket proteasome aktivitet sammenlignet med vev fra de som ikke bære kodon 60 H allel [17]. En mulig årsak til disse tilsynelatende uoverensstemmelse kan være relatert til de forskjellige substrater som brukes for å vurdere proteolytisk aktivitet. Det fluorogene substrat Suc-LLVY-AMC brukt av Mishto et al. [17] blir ofte brukt til å måle den totale chymotrypsin-lignende aktivitet av proteasomet. Men siden dette substratet kan hydrolyseres av både immunoproteasome (β1i og β5i) og den konstitutive proteasomet (β5) [25], de oppnådde resultater ved bruk av Suc-LLVY-AMC kan ikke erte ut direkte bidraget av β1i genetisk polymorfisme. Våre nåværende resultater ble oppnådd under anvendelse av den nylig rapporterte substratet Ac-PAL-AMC som blir selektivt spaltet av β1i underenheten (figur 2) [20]. Våre funn er i samsvar med den forrige rapporten at
PSMB9
kodon 60 polymorfisme hadde ingen innvirkning på nedbrytings profiler av en 28-mer peptid (Kloe 258) og en rekombinant form av IkBα, en viktig regulator av klassiske NF -κB sti og velkjent proteasome substrat [18]. Selv om vi ikke kan helt utelukke muligheten for at virkningen av kodon 60 polymorfisme kan variere avhengig av underlaget og sykdomstyper, resultatene fra denne studien og andre foreslår at kodon 60 polymorfisme ikke vil trolig bidra til interindividuell variasjon i β1i katalytiske aktivitet.
med den bemerkelsesverdige kliniske suksesser av bortezomib og carfilzomib i behandling av multippel myelom og andre hematologiske kreftformer, er proteasome nå anerkjent som en viktig kjemoterapeutiske mål. Men uønskede toksisitet begrense den brede bruken av de tilgjengelige proteasomer målretting narkotika. For å overvinne disse begrensningene har immunoproteasome, en alternativ form for den konstitutive proteasome, blitt undersøkt som en alternativ terapeutisk mål. Slike forsøk har gitt lovende immunoproteasome målretting forbindelser med anticancer effekt og bedre toksisitetsprofilene [7], [23], [26], [27]. I å utforske immunoproteasome-målretting tilnærminger for kreftbehandling, er det viktig å vurdere immunoproteasome uttrykk på tvers av ulike krefttyper. Mens immunoproteasome er kjent for å være oppregulert i hematologiske maligniteter, uttrykk for immunoproteasome i solid kreft har ikke blitt grundig undersøkt. I denne studien rapporterer vi at β1i subenheten er ofte uttrykt i kliniske vevsprøver fra tykktarm og bukspyttkjertel kreft samt et panel av humane kreftcellelinjer avledet fra tykktarm, lunge, prostata og bryst vev. Selv om lignende funn har blitt rapportert av vår gruppe og andre [21], [23], [28], [29], vår nåværende studie gir mer robust informasjon om uttrykk for β1i i de fleste kliniske tykktarm og kreft i bukspyttkjertelen vev testet . Det bør bemerkes at nedregulering av immunoproteasome subenheter har også blitt rapportert i noen typer kreft [30] – [34], og det er mulig at uttrykket statusen for immunoproteasome kan være avhengig av sykdomstyper og deres patogene mekanismer. På den annen side bør det bemerkes at våre resultater på de frekvenser av β1i polymorfismer kreftcellelinjer avledet fra forskjellige organer er ikke nødvendigvis er representative for de blant disse krefttypene. Dette er delvis på grunn av den lille størrelsen på utvalget og eksperimentell design av vår nåværende studien. Spesielt vårt eksperimentell design som er involvert utelukkelse av flere cellelinjer som bærer flere polymorfismer i gener som koder for β1i og /eller andre immunoproteasome delenheter som β5i for å minimalisere mulige blandingsfaktorer. Våre resultater tyder på at kodon 60 polymorfismer er ikke sannsynlig å være ansvarlig for den observerte variasjonen i β1i uttrykk /aktivitet blant de testede cellelinjer. Ved ytterligere å validere våre funn, kan det være viktig å anvende et større utvalg av cancercellelinjer eller kliniske prøver avledet fra de samme organer, kanskje sammenligning av prøver med sammenlign β1i ekspresjonsnivåer. I tillegg er genetisk assosiasjon studier som undersøker den β1i polymorfisme i kodon 60 i sammenheng med kreft utvikling og progresjon også garantert.
Som konklusjon, våre resultater viser at den β1i subenhet av immunoproteasome blir ofte uttrykt i tykktarmen og bukspyttkjertelen kreft og muligens i andre typer av faste cancere. I tillegg er genetisk polymorfisme i kodon 60 ser ut til å ha noen vesentlig innvirkning på ekspresjon og katalytiske aktivitet β1i i kreftceller. Til sammen kan disse funnene gir nyttig innsikt for utvikling av immunoproteasome målretting anti-kreft agenter. I tillegg er disse resultatene utelukke kodon 60 polymorfe status som en potensiell faktor som bidrar til variabel følsomhet for immunoproteasome hemmere målretting β1i.
Hjelpemiddel Informasjon
Tabell S1.
doi: 10,1371 /journal.pone.0073732.s001 plakater (docx)
