Spørsmål Book ————————-
Followup for bedriften Spørsmål –
hva er metoder for å analysere ASAT, etter ALAT og alkalisk fosfatase Svar –
hva mener du med prinsipper som indikasjon, metoder, sammensetning eller noe annet spesifiser å svare skikkelig på spørsmålet ditt
takk
Svar Book det er to vanlige metoder for å bestemme aktiviteten til et enzym. En stopp tid
analyse og en real-time analyse. En stopp tid analysen er nettopp det, starte reaksjonen og stoppe eller lese
resultater på et gitt tidspunkt. Dette er den enkleste måten å gjøre mange analyser om gangen, men det er to
ting som må vurderes før du gjør denne formen for analysen. Først er analysen lineær. I
andre ord, i den tiden at jeg kjører analysen, er det produktet som blir produsert (eller substrat
konvertert) ved en lineær hastighet. Dersom vilkårene i prøverør er slik at reaktantene product: (substrat) er brukt opp eller produktene er å hemme enzymet, så kan du ikke bruke denne analysen.
For det andre er det sammensatte du måler stabil nok til å vente med å lese og er de betingelser som benyttes
for å stoppe enzymet, dvs. syre eller base for harde til å opprettholde strukturen i avlesnings? Vi vil
gjøre sanntid analyser. Betydning endring i absorbans (også kjent som optisk tetthet? OD) mot tid.
Fra dette diagrammet (gjort på spektrofotometer) du vil velge en region som er rimelig lineær og
bestemme DOD /min og deretter konvertere den til enheter av enzymaktivitet per ml.
alkalisk fosfatase er en gruppe isoenzymer med en felles evne til å hydrolysere organisk fosfatase esterbindinger i et alkalisk medium, generering av et organisk radikal, og et uorganisk fosfat. Deres biologiske funksjon er ukjent. Alkalisk fosfatase i serum normalt kommer fra leveren og ben og, under graviditet, fra placenta. Det er også til stede i noen tumorer (f.eks bronchogenic karsinom). Bein vekst hos barn fører til en aldersavhengig økning i normale verdier, spesielt hos spedbarn av 2 år. Deretter avtar alkalisk fosfatase aktivitet, og nådde normale voksne nivåer etter en spurt i løpet av ungdom vekst. Det er litt økt hos eldre mennesker. Under graviditet er serumnivået stiger to- til firedoblet ved niende mo og deretter gå tilbake til normalt etter 21 dager etter fødselen.
alkalisk fosfatase øker markant ved sykdommer som svekker galle dannelse (kolestase) og i mindre grad i hepatocellulær sykdom. Verdier i kolestase, enten fra intrahepatic årsaker (primær biliær cirrhose, legemiddelindusert leversykdom, levertransplantasjon avvisning) eller graft-versus-host (GVH) sykdom, vil bli tilsvarende forhøyet og mindre skilles fra ekstrahepatiske årsaker (duct obstruksjon fra striktur , stein eller svulst), alle stiger noen firedoblet. I hepatocellulær sykdom (for eksempel ulike former for hepatitt, skrumplever, infiltrerende lidelser), nivåer har en tendens til å være lavere med noe overlapping. Isolerte økninger (andre leverprøver er normale) forekommer i granulomatøs eller fokale leversykdom (f.eks abscess, neoplastisk infiltrasjon eller delvis gallegang obstruksjon). I noen ekstrahepatiske malignitet uten levermetastaser, er årsaken obskure: bronchogenic carcinoma kan produsere sin egen alkalisk fosfatase; hypernephroma i 15% av tilfellene induserer en ikke-spesifikk hepatitt som den antatte opprinnelsen av enzymet høyde. For Hodgkin lymfom, årsaken til den isolerte alkalisk fosfatase høyde er ukjent. Vanligvis en isolert alkalisk fosfatase høyde funnet i en ellers asymptomatisk voksen, spesielt hvis eldre, er ikke verdt å undersøke.
bilder Teknikker som bruker varmeinaktivering eller elektroforese kan skille bein vs. leveren utstedt alkalisk fosfatase, men ved hjelp av en annen serum enzymet gir en enklere diskriminering: 5′-nukleotidase er en gruppe fosfataser som skiller seg biokjemisk fra alkalisk fosfatase; De katalyserer hydrolysen av nukleotider (for eksempel adenosin 5′-fosfat) for å løse det uorganiske fosfat fra 5′-posisjon og er begrenset til plasmamembraner leveren cellen. Dette enzymet øker i hepatobiliære, men ikke bein, sykdommer. I praksis er det nyttig å vurdere anicteric pasienten. Verdier er lav i barndommen, øker gradvis i løpet av ungdomsårene, og platå etter fylte 50 år. 5′-nukleotidase normalt forhøyet hos noen kvinner i siste trimester av svangerskapet. På grunn av sin spesifisitet for leversykdom, 5′-nukleotidase byr på noen fordel i forhold til alkalisk fosfatase, men heller ikke kan skille obstruktiv fra leversykdom. De kan eller ikke kan stige og falle parallelt.
gamma-glutamyltransferase (eller gamma-glutamyl transferase –GGT) er et enzym (som er tilstede i leveren, bukspyttkjertelen, og nyre) som overfører den gamma-glutamyl-gruppe fra en peptidet til et annet peptid eller til en L-aminosyre. Nivåer av GGT er forhøyet i lever og galle og bukspyttkjertel sykdommer som hindrer felles kanal, men er normalt i svangerskapet og skjelettsykdommer. GGT nivåer parallell til alkalisk fosfatase og 5′-nukleotidase i kolestatiske forhold. Fordi det ikke er fysiologisk forhøyet i svangerskapet eller barndommen, har GGT en rolle her i å oppdage hepatobiliære sykdom. Narkotika og alkohol inntak, som induserer mikrosomale enzymer, også heve GGT; alene, er det en dårlig markør for alkoholisk leversykdom. Kombinert med transaminaser, påvisning av alkoholmisbruk blir sikrere. Den ekstreme følsomhet (som er større enn alkalisk fosfatase) av dette enzym begrenser dens anvendelighet, men testen er å erstatte 5′-nukleotidase å detektere hepatobiliære sykdom som årsak til en isolert økning i alkalisk fosfatase.
transami: aspartattransaminase (AST –formerly SGOT) er til stede i hjertet, skjelettmuskulatur, hjerne og nyre samt leveren. ASAT også øke i MI, hjertesvikt, muskelskader, CNS sykdom og andre nonhepatic lidelser. Til tross for noen nonspecificity, høye nivåer indikerer levercelleskade. Verdier av 500 IU /L ( 400 U./ml) antyder akutt viral eller toksisk hepatitt. Slike høye verdier forekommer også i sterk hjertesvikt (iskemisk hepatitt) og selv med vanlige kanal steiner. Størrelsen av den høyde ikke har noen prognostisk verdi, og ikke korrelerer med graden av leverskader. AST er pålitelig og en del av rutinemessig screening for leversykdom. Serie testing gir god overvåkning: Et fall til normal indikerer bedring med mindre forbundet med sluttfasen av massive levernekrose.
alanine nase (ALT –formerly SGPT) er funnet hovedsakelig i leverceller og har derfor større spesifisitet for leversykdom, men det gir litt annen fordel. I de fleste leversykdommer, er AST økningen mindre enn den for ALT (AST /ALT forholdet mindre enn 1), bortsett fra i alkoholrelaterte leverskade hvor forholdet ofte er 2. (Grunnlaget for dette er større behov for pyridoksal 5′-fosfat som en kofaktor for ALT, dette kofaktor er mangelfull i alkoholiker, å begrense økningen av ALT.) Mange unntak begrense praktiske forholdet. Men forholdet 3 med en overdreven økning i GGT ( 2 ganger alkalisk fosfatase) er svært tankevekkende.
Melkesyre dehydrogenase: LDH, ofte inkludert i automatisert analyse, er ufølsomt som en indikator på leverskade, men er bedre som en markør for hemolyse eller MI. Det kan være ganske høy med maligniteter i leveren.
måling av fosfatase-aktivitet er basert på arbeidet til Branden og Hanson (1953) og Hofstee (1954). Den katalytiske virkning av enzymet på det første hydrolysehastigheten av o-karboksyfenyl fosfat blir bestemt. Salisylsyre, i motsetning til fosfatester, absorberer lys maksimalt ved ca. 300 nm; følgelig hydrolysehastigheten kan bestemmes ved økningen i absorbans. En enhet hydrolyserer ett mikromol o-carboxyphenyl fosfat per minutt ved 25 癈 og pH 8,8 under bestemte forhold.
Reagenser
0,1 M Tris⋅HCl, pH 8,5
0,2 M Glycine , pH 8,8
0,05 M Magnesiumklorid
3,65 mM o-Carboxyphenyl fosfat (OCPP)
Enzyme
Løs opp på en mg /ml i 0,1 M Tris-HCl, pH 8,5 (Stock løsning ). En ytterligere fortynning kan kreves etter aktivering.
Prosedyre
Aktiver enzymet ved å inkubere mg /ml 20-30 minutter i en 25 癈 vannbad.
Juster spektrofotometer til 300 nm og 25 癈
pipette i hver kyvette som følger:.
0,2 M glysin, pH 8,8 2,0 ml
3,65 mM OCPP 1,0 ml
0,05 M MgCl2 0,5 ml
Inkuber i spektrofotometer ved 25 癈 for 3-4 minutter å nå temperaturstabilisering og etablere blank rente, hvis noen. Legg 0,1 ml stamløsning og rekordøkning A300 /minutt fra innledende lineære delen av kurven.
Beregning
Danil Hammoudi.MD
https://sinoemedicalassociation.com
medisinsk informasjon for alle
Dette er for pedagogiske formål. Det er ikke ment å erstatte konsultasjon og undersøkelse av din
lege eller annet helsepersonell
