Abstract
Bakgrunn
humant papilloma virus (HPV ) forbundet hode og nakke kreft (HNCs) har generert betydelig mengde forskning interesse i nyere tid. På grunn av høy forekomst av HNCs og mangel på tilstrekkelige data om høyrisiko HPV (hr-HPV) infeksjon fra Nord-Øst-regionen i India, ble denne studien unnfanget for å etterforske hr-HPV-infeksjon, dets typer og sin tilknytning til livsstilsvaner slik som tobakk, alkohol osv
Metoder
En total av hundre og seks primære HNC tumorbiopsiprøver ble samlet inn. Disse prøvene ble analysert for hr-HPV DNA (13 HPV-typer) med hybrid fangst 2 (HC2) assay og genotyping ble gjort ved E6 nestet multipleks PCR (NMPCR).
Resultater
Tilstedeværelsen av h-HPV ble bekreftet på 31,13% (n = 33) og 24,52% (n = 26) av HNC pasienter ved nestet PCR multipleks (NMPCR) og HC2 assay respektivt. Blant hr-HPV positive tilfeller av tretten HR-HPV-typer analysert, bare to utbredte genotyper, HPV-16 (81,81%), etterfulgt av HPV-18 (18,18%) ble funnet. Signifikant sammenheng ble observert mellom hr-HPV infeksjon med alkoholforbruk (p 0,001) og tobakk tygging (p = 0,02) i HNC tilfeller. Sammenlignet med HPV-18-infeksjon HPV-16 ble funnet å være signifikant assosiert med tobakk tygging (p = 0,02) vane.
Konklusjoner
Vår studie viste at tobakk tygging og alkoholforbruk kan handle som risikofaktorer for hr-HPV-infeksjon i HNCs fra Nordøst-regionen i India. Dette var den første studien fra Nord-Øst India som også vurdert den kliniske anvendelsen av HC2 analysen i HNC pasientprøver. Vi foreslår at alkohol, tobakk og HR- HPV-infeksjon virker synergistisk eller utfyller hverandre i prosessen med HNC utvikling og progresjon i denne studien befolkningen
Citation. Kumar R, Rai AK, Das D, Das R , Kumar RS, Sarma A, et al. (2015) Alkohol og tobakk øker risikoen for høy risiko HPV infeksjon i hode- og halskreft pasienter: Studie fra Nordøst-regionen i India. PLoS ONE 10 (10): e0140700. doi: 10,1371 /journal.pone.0140700
Redaktør: Jeffrey S. Chang, National Health Research Institutes, TAIWAN
mottatt: May 24, 2015; Godkjent: 28 september 2015; Publisert: 16 oktober 2015
Copyright: © 2015 Kumar et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er innenfor papir
Finansiering:. Støtte ble gitt av Institutt for bioteknologi, Ministry of Science and Technology, India (Grant No. BT /04 /NE /TBP /2010 og Grant No. BT /med /NE-SFC /2009) mottatt av AR og AKR, henholdsvis [https://www.dbtindia.nic.in/]
konkurrerende interesser:.. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
hode- og halskreft (HNC) forekomst utgjør ca. 25-30% av alle krefttilfeller i India [1]. HNC er en multifaktoriell og multifasisk sykdom som rammer anatomiske områder som leppe, munnhule, nese og bihuler, nasopharynx, orofarynx, munnhulen, hypopharynx, strupehode osv [2]. De avgjørende risikofaktorer er tobakk, alkohol, mutter tygging, endre seksuell atferd etc. som er ansvarlig for de fleste av HNC byrde. I HNC pasienter på 50 år og over alder, assosiasjoner med de ovennevnte sentrale risikofaktorer er mer dominerende. Tobakksrøyking og alkoholrelaterte kreftfremkallende spiller viktig rolle i utviklingen av HNC sannsynligvis ved immunsuppresjon [3-6]. I ekstracellulære og intracellulære rommet, genererer sigarettrøyk partikler, gasser ekstrakter og vann oppløste stoffer. Store klassifisert mutagene og karsinogene komponenter i sigaretten er nikotin, tjære, ammoniakk, karbonmonoksid, karbondioksid, formaldehyd, akrolein, aceton, benzopyrenes, hydroxyquinone, nitrogenoksider og kadmium. Tjære og nikotin fra sigarettrøyk påvirke medfødte immunrespons og øke mottakelighet for infeksjoner [7, 8]. Alkoholforbruket er også regnet som en av risikofaktorer som kan bidra til kreftutvikling. The International Agency for Research on Cancer av Verdens helseorganisasjon har kategorisert alkohol som en gruppe 1 karsinogen [9]. Humant papillomavirus (HPV) ble fremmet første gang av Syrjanen et al (1983) som en risikofaktor spesielt for orofaryngeal og kreft i munnhulen [10]. I undergruppe av HNC tilfeller har HPV foreningen blitt anerkjent i yngre aldersgruppen ( 50 år) pasienter uten vane av tobakk og alkohol [11, 12]. HPV genomisk DNA ble påvist for det meste ved PCR basert fremgangsmåte og studier har vist at opptil 60% av HNC tilfeller være HPV-positive [13, 14]. Årsakssammenheng mellom HPV og hode- og halskreft er fortsatt motstridende på grunn av motstridende bevis [15, 16]. HPV tilknytning HNC har antatt betydning på grunn av funnene at HPV positive HNC tilfeller har god prognose i forhold til HPV-negative tilfeller [17-21]. De mulige smitteveier av HPV i HNC kan være muntlig seksuell atferd hos voksne og perinatal overføring i neonatale barn. Spesielt, munnhulen, svelget og strupehode, epitelceller er mer utsatt for HPV-infeksjon [2, 22-26]. HPV-typer er klassifisert som høy risiko (HPV-16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 og 82) og med lav risiko (HPV-26, 30, 34, 53, 66, 67, 69, 70, 73, 82, 85) på grunnlag av deres karsinogent potensial. HPV-16 og HPV-18 høyrisiko-typen har vært ansett som vesentlige bidrags genotyper i HNC [27, 28].
Hovedcellesyklus regulatorer, p53, pRB og p16 er viktige tumorsuppressorgener har sterk rolle i cellesyklusen regulatoriske sti og kreft [29]. Disse genene spiller viktig rolle i å opprettholde genomisk integritet og cellesyklus, og kontroll av apoptose [30, 31]. The High Risk HPV (hr-HPV) type 16 og 18 i hovedsak utøver sin kreftfremkallende potensial gjennom uttrykket av E6 og E7 oncoprotein. E6 onkogen aktivering fører til degradering av p53 gjennom dets interaksjon med E3 ubiquitin ligase E6AP [31, 32]. Den aktive E7 forringer retinoblastom-tumor suppressor protein (pRb) på grunn av hvilken transkripsjonsfaktoren E2F blir stimulert og resulterer i overekspresjon av p16 INK4A, en cyklin-avhengig kinase inhibitor [31, 32]. Ved å gå utenom de ovennevnte mester voktere av cellesyklus, HPV gener ta kontroll over mobil spredning som fører til ukontrollert celledeling.
The North Eastern (NE)-regionen i India har høy aldersjustert insidensrate (AAR) per 1, 00000 personer for HNCs i India [33]. Blant alle befolkningsbaserte kreftregistre (PBCR) ble Kamrup Bydel (KUD) av NE-regionen i India rangert andre (AAR-156,3) hos kvinner og fjerde (AAR-185,2) hos menn for alle kreftformer forekomst. Den AAR for ledende HNC områder i KUD PBCR er som følger: tungen 9,4 (hann), 3,2 (hunn); munn 7,7 (hann), 7,6 (kvinner); hypo svelget 7,7 (hann) og 7,6 (kvinner); Strupehodet 8,2 (hann). Tobakk relatert kreft (TRC) utgjorde 40%, men 50% hos menn, mens hos kvinner var det 30%, men 40% av alle HNC tilfeller i KUD PBCR [33]. Befolkningen i NE region representerer unike etnisitet, særpreget livsstil og matvaner som kan spille viktig rolle i det komplekse samspillet mellom miljømessige og genetiske faktorer som kan være forbundet med høy forekomst av HNC i denne regionen. Det er mangel på tilstrekkelige data om hr-HPV status i HNC tilfeller av NE India. Målet med denne studien var å kartlegge forekomsten av HR-HPV-infeksjon og deres tilknytning Betal pund tygging, røyking, tobakk, alkohol og klinisk-patologisk karakteristikk av pasienter. I den foreliggende undersøkelse ble E6 nestet PCR multipleks metode anvendes for sensitiv og typespesifikk påvisning av HPV-infeksjoner basert på amplifikasjon av det virale E6 /E7 onkogen som tidligere beskrevet [28, 34]. Hybrid Capture 2 (HC2) test, som er FDA-USA godkjent og WHO anbefalt for påvisning av HPV i kliniske prøver av cervikal intraepitelial lesjoner (CINS) er anvendt for første gang for hr-HPV deteksjon i HNC eksemplarer av NE India .
Materialer og metoder
Pasient Kjennetegn
totalt 106 HNC pasienter ble inkludert i studien (mann 73; kvinnelig 33). Tumor vevsprøver ble oppnådd fra hodet og nakke onkologi kirurgi enhet av Dr. Bhubaneswar Borooah Cancer Institute (BBCi), Regional Cancer Center, Gauhati, India. De histopathologically bekreftet HNC tilfeller ble registrert i perioden oktober 2011 til september, ble 2013. demografi og livsstil samlet ved hjelp av en pre-designet spørreskjema gjennom personlig intervju. De innsamlede om demografiske variabler informasjon inkludert alder, kjønn, etnisitet, utdanning, sosioøkonomisk status, livsstil faktorer av alkohol, røyking, betelnøtter tygging og andre matvaner. Den amerikanske Joint Committee on Krepsens TNM staging ble brukt for iscenesettelse og diagnose. Pasientene ble informert om studien og skriftlig samtykke ble innhentet før innsamling av prøvene. Denne studien ble godkjent av institusjonelle etiske komité av Dr. Bhubaneswar Borooah Cancer Institute (BBCi), Gauhati, Assam (India).
Genomisk DNA isolert fra svulstvev
Tissue biopsiprøver ble samlet inn i 1 ml volum av fosfatbufret saltvann (PBS) og genomisk DNA ble ekstrahert fra den homogeniserte vev ved hjelp av QIAamp DNA mini-kit (Qiagen, Tyskland) ved å følge produsentens instruksjoner. Mengden og kvaliteten på det isolerte genomisk DNA ble bekreftet av henholdsvis Nano-spektrofotometer (Bio-fotometer, Eppendorf, Tyskland) og agarosegelelektroforese.
Høy -risk HPV DNA deteksjon av Hybrid Capture 2 (HC2) analyse
Genomisk DNA isoleres fra biopsiprøver fra pasientene ble suspendert i prøven transportmediet (STM) (Qiagen, Tyskland) og tilstedeværelsen av HPV ble påvist ved HC2 høyrisiko HPV DNA test
™ kit (Qiagen, Tyskland) i henhold til produsentens instruksjoner. I pasient STM prøvene, ble kjemiluminescerende påvisning av de 13 mest vanlige h-HPV-typer (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, og 68) utføres ved hjelp av automatisert DML 2000 Luminometer system (Digene, USA). Lyssignaler ble målt som relative lysenheter (RLU) med lysintensiteten som indikerer nærvær eller fravær av mål-DNA i de testede prøven. Gjennomsnittlig RLU verdi for høy risiko HPV kalibrator av positive kontrollprøver ble ansett som positivt cutoff (CO) verdi. Pasienter prøven med RLU /CO belåningsgrad ≥ 1 med høyrisiko HPV sonde ble betraktet som «positive» for noen av hr-HPV-typene (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59 og 68). Fraværet av h-HPV-DNA under påvisningsgrensen er angitt i prøven med RLU /CO 1. Når RLU = CO det confers nærvær av omtrent 5000 viruskopier i prøven. To bekreftede tilfeller av livmorhalskreft med hr-HPV positivitet ble også brukt i hver testkjøring og bærer DNA som negativ kontroll [35, 36]. Testrapportene ble generert i henhold til formatet på Hybrid Capture
TM programvare ver. 2,0. Alle prøvene ble testet to ganger, og prøver med HR- HPV positivt utfall i begge testkjøring ble bare scoret som HR- HPV positive.
E6 nestet multipleks PCR (NMPCR) for HPV genotyping
prøvene testet positivt for h-HPV DNA i HC2 analysen ble videre analysert for HPV genotyping. Den nestet E6 PCR reaksjon 1
st runde ble gjort i 20 mL volumet med 25-100 ng genomisk DNA, 1X Maxima Hot Start-PCR buffer, 1.5-2.0 mM MgCl
2 (Thermo Scientific, USA), 250 nM av hver primere (Metabion, Tyskland), 250 pM av hver dNTP, og 0,5 U Maxima Hot start-Taq DNA-polymerase (Thermo Scientific, USA). Den termiske sykling betingelse for en
strikkede omg på E6 PCR var som: Denaturation- 95 ° C 5 min, 38 amplifiseringscykluser med Denaturation- 95 ° C 30 sek, Annealing- 55 ° C 45 sek, Extension- 72 ° C 90 sek, og endelig Extension- 72 ° C i 7 min. 1
st rund E6 PCR-produkt (630bp) ble anvendt som en mal (1 ul) for 2
nd runde med nestede reaksjon for HPV genotyping ved hjelp av multipleks sett av HPV-typespesifikke primere. Reaksjonsvolumet og bestanddelene var de samme som nevnt ovenfor. De 2
nd runde nestet PCR betingelse for HPV genotyping var lik en
st rundt med endringer bare i Annealing- 55 ° C 40 sek og Extension-72 ° C 45 sek [34]. Alle PCR-produktene ble synliggjort på 2% agarose-gel (Amresco, USA) farget med etidiumbromid (Amresco, USA) i Gel Doc XR
™ system (Bio-Rad, USA). HR-HPV positive livmorhals plateepitelkarsinom prøvene DNA ble brukt som positiv kontroll i hver PCR-kjøring. Primersekvensene er beskrevet i tabell 1.
Statistical Analysis
Dataene ble vist som gjennomsnitt ± SD eller i frekvenser (%). Den χ² test og Fisher eksakt test ble benyttet for å identifisere sammenhengen mellom klinisk-patologiske egenskaper og hr-HPV status. Univariat analyse ble gjort ved å beregne odds ratio (ORS) sammen med 95% konfidensintervall (CIS) og P ≤ 0,05 ble ansett for å være signifikansnivået. Epi-info versjon 6 programvare ble benyttet for den statistiske analysen
Resultater
Kjennetegn på pasient
I studiepopulasjonen (n = 106), 68,86% av pasientene ( n = 73) var menn og 31,13% var (n = 33) kvinner. Pasientenes alder varierte fra 25 til 80 år (gjennomsnitt = 53,41 år). Mer enn tre fjerdedeler (80,18%) av pasientene var fra landsbygda, resten (19,56%) var fra semi urbane og urbane områder. Non-vegetarianer kosttilskudd vane ble rapportert av 92% av pasientene (tabell 2). Studiepopulasjonen ble gruppert i en av «h-HPV-positive» (n = 33) eller «HPV-negative «(n = 73) basert på tilstedeværelse av hr-HPV-DNA. Demografiske kjennetegn ved pasientene og deres matvaner er nevnt i tabell 2. De demografiske faktorene var ikke signifikant assosiert med hr-HPV-infeksjon (p 0,05). Ut av de 106 tilfellene de anatomiske områdene blant klinisk-patologiske karakteristika for pasienter var av munnhulen 81,13% (n = 86), oropharynx 4,71% (n = 5), hypofarynx 2,83% (n = 3), strupehode 8,49% ( n = 9) i (Tabell 3). Prosenter av pasienter diagnostisert med avansert stadium HNCs var stadium III 24,52% (n = 26), IVA- 55,66% (n = 59) og IVB 5,66% (n = 6). Plateepitelkarsinom var dominerende 85,85% (n = 91) histologisk type i denne studien befolkningen.
hr-HPV deteksjon og sin tilknytning til Demografisk og klinisk-patologiske egenskaper
høyrisiko HPV-DNA ble påvist ved nestet PCR multipleks (NMPCR) på 31,13% (n = 33) og hybrid capture på 24,52% (n = 26) av HNC pasientene. Følsomheten og negativ positiv prediktivt ble funnet å være 100% hver; spesifisitet og positiv prediktiv verdi (PPV) ble observert som 91,19% og 78,78% henholdsvis. Denne testen klassifisert 93,29% av tilfellene korrekt og området under kurven ble funnet som 89,50% (p 0,001) med 95% konfidensintervall (81,30% – 97,80%). For å bekrefte at de biologisk aktive HPV, ble p16-ekspresjon analysert i både HPV-positive og HPV-negative tilfeller, og i løpet av ekspresjon av p16 ble funnet i HPV-positive tilfeller, som er et indirekte mål for tilstedeværelse av HPV (data ikke vist). I HC2 testet i prøvene, betyr RLU-verdien var i størrelsesorden 99-3466, og den midlere positive cut off (CO) verdi for h-HPV var 347 (Qiagen, Tyskland) i henhold til instruksjonen. De Høy risiko HPV positive saker ble genotypet for HPV subtyper som bruker E6 nestet multipleks PCR. Prime detaljene som brukes for E6 nestet multipleks PCR [29] er nevnt i tabell 1. HR-HPV positive saker ble ytterligere univariant analysert for livsstilsvaner og signifikant sammenheng ble funnet mellom hr-HPV positivitet og alkoholforbruk (OR = 7,56; 95% KI 2,64 til 22,19, p. 0,001) som vist i tabell 2. alkohol som drikker prøvene har vist seg å bære t-HPV-infeksjon sammenlignet med ikke-drikkere. For å se opp for synergistisk eller komplementær effekt mellom tobakk og alkoholvaner, observerte vi signifikant sammenheng med hr-HPV positivitet (OR = 3,09;. 95% KI 1,00 til 9,65, p = 0,02), men når tilfeller av røykere og alkoholvaner ble sammen analysert og beregnet vi fant ut at det var ingen signifikant sammenheng med hr-HPV positivitet. De mutter chewers også hadde vist mer hr-HPV-infeksjon. Blant hr-HPV positive saker (n = 33), 39,40% (n = 13) av pasientene var tobakk ikke-tyggere og 60,60% (n = 20) var tobakk chewers. Ikke-røykere gruppe 69,69% (n = 23) har mer sannsynlighet for h-HPV-infeksjon i forhold til røykere 30,31% (10). Pasienter som bor i distriktene har mer hr-HPV positivitet 87,88% (n = 29) sammenlignet med semi urbane 9,09% (n = 3) og urban 3,03% (1%) innbyggerne i området. Det var ingen signifikant sammenheng finnes mellom hr-HPV infeksjon og kjønn, betel pund, tobakk chewers, røyking vane, kosttilskudd vane, alder og bosted (tabell 2).
Blant hr-HPV positive saker (n = 33), munnhulen 72,72% (n = 24), strupehode 6,06% (n = 2), hypofarynx 6,06% (n = 2) og orofarynks 15,15% (n = 5) hadde hr-HPV-DNA (tabell 3). Det var signifikant sammenheng mellom hr-HPV infeksjon og orofaryngeal svulststedet (p = 0,01). Flertallet av hr-HPV positive tilfeller 90,90%, (30 av 33) ble presentert med avansert stadium III, IVA eller IVB sykdom. Histologisk 90,90% HR-HPV positive tilfeller var plateepitelkarsinom, 6,06% var verrucous karsinom og 3,03% var andre karsinom (adenoid cystisk karsinom, spindel celle ondartet) (Tabell 3). Det var ingen signifikant sammenheng av TNM tumor stadium, histologi klasse og morfologi med HR- HPV positivitet (p 0,05). Når HNC tilfeller ble analysert med livsstilsfaktorer, ble alkoholforbruk funnet å være signifikant assosiert med h-HPV-infeksjon (p 0,001) (tabell 2). Neste vi analysert hr-HPV-status i munnhulen kreft alene (tabell 4) og sammenlignet med røyking, tobakk, alkohol, betelnøtter bruk og fant at det var signifikant sammenheng av HR-HPV positivitet og alkoholforbruk (OR = 2,98; 95% CI. 0,95 til 9,43, p = 0,03). For å finne den synergistiske eller komplementær effekt av tobakk og alkoholvaner, fra univariat analyse ble det funnet at det er signifikant sammenheng av HR-HPV positivitet med tobakk og alkoholvaner (OR = 2,94;. 95% KI 0,95 til 8,88, p = 0,05 ) (tabell 4). Men når analysert ved røykere og alkoholvaner sammen, ble ingen signifikant sammenheng funnet med hr-HPV positivitet.
Foreningen av HPV type 16 og 18 med Demografisk og klinisk-patologiske egenskaper
Blant HR-HPV-positive tilfeller, HPV-16 var til stede i 81,81% (n = 27) og HPV-18 i 18,18% (n = 6) av tilfellene. Tobakk tyggere hadde signifikant større risiko for HPV-infeksjon 16 (p = 0,02), men ikke til HPV-18. Risikoen for HPV-16 å være positiv er 11.88 ganger mer i chewers sammenlignet med ikke-tyggere med 95% CI (1,01 til 317,2). Men røyking vane ikke viser noen betydning i forhold til ikke-røykere (eller- 0,14) med 95% konfidensintervall (0,01 til 1,28). HPV-18 positivitet ble funnet i 5 tilfeller (83,33%) av ikke-tyggere forhold til chewers. HPV-16-infeksjon hos røykere ble funnet å være høyere (p = 0,05) sammenlignet med HPV-18 (tabell 5), selv om h-HPV-DNA ble funnet å være signifikant assosiert med alkoholforbruk (tabell 2), men med henvisning til HPV – 16 alene, eller HPV type 18 alene, var det ingen slik sammenheng fant med det. Munnhulen 70,37% (n = 19), strupehode 7,41% (n = 2), hypofarynx 7,41% (n = 2) og orofarynks 14,82% (n = 4) kreftpasienter har HPV-16 som mest dominerende hr-HPV-typen mens HPV -18 ble funnet bare i munnhulen 83,33% (n = 5) og orofarynks 16,66% (n = 1). I histologisk subtype karsinomer, ble HPV-16 som finnes i 25 tilfeller (92,59%) og HPV-18 i fem tilfeller (83,34%) ble detektert. HPV-16 var dominerende i hanner 66,66% (n = 18), samt forholdsmessig høy i kvinner 33,44% (n = 9), mens HPV-18 var mer hos menn 83,33% (n = 5) sammenlignet med kvinner 16,67% ( n = 1) tilfeller. Betel pund tygging, alkoholforbruk, alder, kjønn viste ingen signifikant sammenheng med tilstedeværelse av HPV-16, 18 typer (p 0,05). (Tabell 5)
Diskusjoner
The human papilloma virus (HPV) har blitt identifisert som en etiologisk faktor i undergruppe av hode og nakke kreft spesielt orofaryngeal kreft [37]. De fleste av HPV-positive forbundet orofaryngeal karsinom pasienter ble rapportert å være yngre i alder og det meste hadde ingen historie med tobakk /alkohol bruk [38]. Noen forskningsgrupper har tatt til orde for at HPV positive og HPV-negative HNC tilfeller bør betraktes som to distinkte kliniske, patologiske enheter og behandlingsregimer må være utformet i henhold til [37-39]. Svulsten hypoksi brøk og spredning evner ble betydelig redusert i HPV-positive tumorceller etter bestråling i forhold til HPV-negative celler [40]. Det ble vist at HPV positive lokalavansert HNC pasienter har vist signifikant høyere patologisk komplett respons i forhold til HPV-negative saker som gjennomgår kjemoterapi [41]. Tallrike studier har rapportert HPV DNA deteksjon i HNSCC med varierende priser, deteksjonsteknikker inkludert in situ hybridisering og sørlige blot hybridisering (lavere følsomhet metoder) eller PCR (høy følsomhet metoder) [42]. Videre metoder som brukes for sampling og lagring også variere. Mangelen på universelt akseptabel standardisert og klinisk relevant prosedyre for HPV testing har reist bekymringer om deres søknad i rutinemessig klinisk setting. Vår studie har, for første gang vurdert anvendelsen av HC2 analysen i kliniske prøver av HNC saker fra NE India. Vi foreslår at Hybrid Capture 2 (HC2) assay, som er godkjent av Food and Drug Administration (FDA, USA), for hr-HPV testing i kliniske livmorhals prøver, kan også brukes til hr-HPV deteksjon i HNC prøver. På grunn av semi-kvantitativ natur HC2 analysen kan det ha søknad for prognostisk vurdering av hr-HPV i HNC pasienter.
Vi brukte E6 nestet multipleks PCR (NMPCR) for HPV genotyping, og funnet HPV-16 i 81,81 % (n = 27) og HPV-18 i 18,18% (n = 6) av h-HPV-positive (n = 33) tilfeller, som er 31,13% av pasientene HNC (33/106). Vår studie data støttes av tidligere studier fra India som hadde funnet HPV DNA i området fra 22% til 73% i muntlig krefttilfeller [43-45]. Blant (n = 33) HR HPV tilfeller har vi funnet (n = 27) HPV 16 hvori 70,37%, 14,82%, 7,41%, 7,41% og (n = 7) HPV-18 på 83,33%, 16,66%, 0 %, og 0% av munnhulen, munn og svelg, strupehodet og hypopharyngeal kreftpasienter hhv. Vår studie viser høyere HPV-16, 18 infeksjonsrate sammenlignet med tidligere studier fra India [43-46]. Vi fant ut at orofaryngeal kreft området sammenlignet med andre kreft områder har vist betydelig risiko for høyrisiko HPV-infeksjon. Våre data er støttet av tidligere studie, hvor det ble funnet å ha sammenslutning av orofaryngeal kreft med høy risiko HPV-infeksjon [47]. Epidemiology of HPV positive orofaryngeal plateepitelkarsinom (OPSCC) er forskjellig fra HPV negative og er preget av yngre alder og sterkt knyttet til seksuell atferd. HPV assosiert orofaryngeal kreft (HPV-OPC) er økende i insidens og har distinkte kliniske, patologiske, molekylære og epidemiologiske funksjoner [38]. Forskjellen i våre observasjoner med andre studier kan tilskrives ulike metoder, etnisk variasjon, svulst områder osv [48]. Våre data viser at mutter tygge, kan røyking ikke har signifikant sammenheng med hr-HPV-infeksjon. HR-HPV positivitet i HNC tilfeller var lite som kan forvirre rolle betel nut, røyking som risikofaktorer for HPV-infeksjon. Det ble demonstrert av Ang et al (2010) at HPV positive orofaryngeal kreft progresjon ikke kan være sterkt assosiert med tobakk-røyking [47]. Men andre studier har vist tobakk forbindelse med HPV-infeksjon [49].
Vi observerte i våre data at tobakk chewers har betydelig høyere hr-HPV-infeksjon, posing tobakk tygge som en risikofaktor for HR- HPV-infeksjon. Konsentrasjonen av nikotin og dens eksponering varighet til cellen kan endre de antigen-mediert signalveier [50]. Endring i de antigen-mediert signaliseringshendelser i immuncellene kan være den mekanismen som nikotin eller andre bestanddeler i sigarett hemme responsen til cellen for bakteriell /viral infeksjon [50]. Vi foreslår at tobakk forbundet karsinogener kan indusere endringer i genetiske hendelser som kan føre til molekylære endringer, slik at den enkelte utsatt for h-HPV-infeksjon.
I den foreliggende undersøkelse h-HPV-infeksjon ble funnet å være signifikant assosiert med alkoholforbruket i HNC tilfeller. Oh et al (2014) har nylig vist at hr-HPV belastning og alkoholforbruk kan ha synergistisk effekt på hr-HPV infeksjon og dens utholdenhet i livmorhalskreft [51]. En annen fersk studie har vist at alkoholinntak var assosiert med signifikant økt risiko for HPV-infeksjon hos menn [52]. Dette støtter vår observasjon at alkoholinntak, kan fungere som en risikofaktor for HPV-infeksjon.
Etanol, en viktig bestanddel av alkoholholdige drikkevarer, oksideres til acetaldehyd ved alkohol dehydrogenase (ADH). Acetaldehyd metaboliseres til acetat av aldehyd dehydrogenase (ALDH). Dårlig munnhygiene og røyking kan endre den muntlige bakteriefloraen som kan føre til økt acetaldehyd produksjon [53]. I dyremodeller har acetaldehyd blitt bevist som kreftfremkallende og mutagene [54]. Genetiske faktorer som ADH /ALDH2 polymorfisme, mangel på ALDH2 eller lave nivåer av uttrykk for ALDH2 og alkoholdrikkevaner ble rapportert å være assosiert med høyere risiko for hode-hals-kreft [55, 56].
Alkohol kan også modifisere medfødte immunrespons på doseavhengig måte, noe som kan resultere i endrede inflammatoriske respons på infeksjon [57]. Siden immunrespons spiller stor rolle i HPV-infeksjon, kan alkoholforbruk hjelpe i å gå utenom immunresponsen for HPV-infeksjon. Systemiske immunitet komponenter som cytokin serumnivå har vist seg å være økt i vedvarende HPV-infeksjon tilfeller [58].
Vår studie gir bevis om økt sårbarhet for hr-HPV-infeksjon i tobakk chewers og drikker alkohol for det meste i munnhule kreft pasienter. Vår observasjon er godt støttet av tidligere HNC studier fra India og over hele verden [14]. Fra det totale antall tilfeller når tobakk tygging og røykevaner ble analysert med HPV, foreninger var ikke signifikant (tabell 2), som store andelen av befolkningen var HPV negative og HPV-positive tilfellene var mindre. Men når tyggevaner ble tatt sammen HPV positive tilfeller alene, ble signifikant sammenheng funnet (tabell 4) som beviser at tobakk tygging og alkoholforbruk fungere som risikofaktorer for HPV-infeksjon. Mer antall orofaryngeal kreft i vår studie kan ha brakt en bedre vurdering av alkohol og tobakk sammen med hr-HPV i disse kreftformene. Vi fokuserte primært på HR-HPV DNA deteksjon ved å bruke nyere metodikk som HC2 analyse og E6-NMPCR som er mindre brukt i HNC. Alkohol drikker og tobakk tygging /røyking er utbredt vaner i Nord-Øst indiske befolkningen. Vi føler at masse allergi gjennom screening cum bevissthet programmer om HNC risikofaktorer kan bidra til å redusere HNC forekomst i NE befolkningen i fremtiden.
Vi konkluderer ut fra vår nåværende studiedata som hr-HPV-infeksjon kan være mer utbredt i tobakk chewers, drikker alkohol og de fungerer som risikofaktorer for HPV-infeksjon i HNC tilfeller av Nordøst-India. Hybrid Capture 2 (HC2) assay på grunn av høy negativ prediktiv verdi, spesifisitet og sensitivitet kan brukes for HR- HPV deteksjon i HNC kliniske prøver.
Takk
Vi erkjenner samarbeidet av hode og nakke kreftpasienter som deltok i studien. Vi takker også Madhumita Dey og Anindita Dutta for de verdifulle forslag og redigere manuskriptet.
