Abstract
Mål
Biomarkører i stand til å skille de pasienter som er sannsynlig til å reagere på visse kjemoterapeutiske midler kan forbedre den kliniske effektiviteten. De sulfatases (SULFs) spiller en avgjørende rolle i patogenesen av en rekke humane krefttyper. Her har vi fokusert vår undersøkelse på den prognostiske og prediktive effekten av
SULF2
metylering i magekreft.
Metoder
Arrangøren CpG island metylering av
SULF2
ble analysert i 100 magekreft prøver.
in vitro
følsomhet for cisplatin, docetaxel, gemcitabin, irinotecan og pemetrexed ble bestemt av histoculture narkotika respons analyse (HDRA). I tillegg 56 mage kreftpasienter behandlet med en modifisert FOLFOX regime (annenhver uke oksaliplatin pluss 5-FU og folinsyre) ble retrospektivt analysert for å ytterligere evaluere den prognostiske og prediktive effekten av
SULF2
metylering i magekreft.
Resultater
denaturert
SULF2 product: (
SULF2M
) ble påvist i 28 pasienter, mens de resterende 72 pasientene viste unmethylated
SULF2 plakater (
SULF2U
, metylering rate: 28%). Prøver med
SULF2U
var mer følsomme for cisplatin enn de med
SULF2M plakater (hemming rate: 48.80% vs. 38,15%,
P
= 0,02), mens prøver med
SULF2M
var mer følsomme for irinotecan enn
SULF2U plakater (hemming rate: 53.61% vs. 40,92%,
P
= 0,01). Det var ingen sammenheng mellom
SULF2
metylering og
in vitro
følsomhet for docetaxel, gemcitabin og pemetrexed.
SULF2
metylering ble funnet å ha en signifikant sammenheng med cisplatin effekt (
SULF2M
: 57,14%,
SULF2U
: 80,56%,
P
= 0,02 ) og irinotecan effekt (
SULF2M
: 89,29%,
SULF2U
: 62,50%,
P
= 0,01). Blant de 56 pasientene som fikk den modifiserte FOLFOX regime, ble det observert en signifikant sammenheng mellom overlevelse og
SULF2
metylering status (
SULF2M:
309 dager, 95% KI = 236 til 382 dager;
SULF2U:
481 dager, 95% KI = 418 til 490 dager,
P
= 0,02). Multivariat analyse viste at
SULF2
metylering var en uavhengig prognostisk faktor for total overlevelse i magekreftpasienter som behandles med platinabasert kjemoterapi.
Konklusjon
SULF2
metylering er negativt assosiert med cisplatin følsomhet
in vitro
.
SULF2
metylering kan være en roman prognostisk biomarkør for mage kreftpasienter som behandles med platinabasert kjemoterapi
Citation. Shen J, Wei J, Wang H, Yang Y, Yue G, Wang L , et al. (2013)
SULF2
Metylering er assosiert med
In Vitro
Cisplatin Følsomhet og Klinisk effekt for magekreft pasienter behandlet med en modifisert FOLFOX Regime. PLoS ONE 8 (10): e75564. doi: 10,1371 /journal.pone.0075564
Redaktør: Zhengdong Zhang, Nanjing Medical University, Kina
mottatt: 12. juni 2013, Akseptert: 14. august 2013, Publisert: 04.10.2013
Copyright: © 2013 Shen et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble finansiert med tilskudd fra Natural Science Foundation National of China (Grant nr 81220108023 og 81172094) og Top Seks Talenter Prosjekt i Jiangsu-provinsen (Grant No. 2011ws005). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Magekreft kreft~~POS=HEADCOMP er en av de hyppigste årsakene til kreft-relaterte dødsfall på verdensbasis [1], [2]. Multimodale behandlingsprotokoller, hovedsakelig basert på platina og 5-fluoruracil (5-FU), har blitt vist å forlenge overlevelsen pasient; imidlertid, med alle kombinasjoner av kjemoterapeutiske midler, er responsraten bare tilnærmet 30% -50% [3], [4]. I et forsøk på å forbedre den kliniske effektivitet, er det viktig og nødvendig å identifisere biomarkører som kan diskriminere pasienter som sannsynligvis vil reagere på visse kjemoterapeutika [4] -. [9] Hotell
heparansulfat proteoglykaner (HSPGs ) er ko-reseptorene for heparin-bindende vekstfaktorer og cytokiner fordelt på celleoverflaten og i den ekstracellulære matriks. To isoformer av de ekstracellulære heparansulfat 6-O-endosulfatases (SULFs), SULF1 og SULF2, har blitt oppdaget hos pattedyr. Begge proteiner er utskilt til celleoverflaten for å modulere sulfatering av HSPGs [10]. Selv om tidligere rapporter har utvetydig understreker hvor viktig det SULFs spille i patogenesen av en rekke humane kreftformer, har meninger om hvilken rolle SULFs i kreftutvikling vært litt polarisert. Flere bevis viser at SULFs er negative regulatorer av tumorcellevekst, og at overekspresjon av SULFs i tumorceller hemmer cellevekst etter dereguleringen av flere faktorer, blant annet FGF-2, HB-EGF og HGF [11] – [13]. Andre studier holder den oppfatning at SULFs er positive regulatorer av oncogenetic signalveier, inkludert Wnt, BMP, pinnsvin og GDNF [14] – [16], og økt uttrykk av SULFs er utbredt i ulike kreftformer, blant annet mage, hepatocellulær, bukspyttkjertel og bryst kreft, ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) og hode og hals svulster [10], [13], [17] – [20]. Høy ekspresjon av SULF2 har vært knyttet til dårlig overlevelse hos pasienter med leverkreft og NSCLC [18], [20]. Den tilgjengelige bevis på metylering status og uttrykk nivåer av
SULFs
i magekreft, men er ikke avgjørende, og den prognostiske eller prediktiv verdi på
SULFs
for kjemosensitivitet prediksjon er fortsatt ukjent.
i denne studien har vi analysert arrangøren CpG island metylering av
SULF2
, genet som koder for SULF2 endosulfatase, og sin tilknytning til
in vitro
følsomhet for cisplatin, docetaxel , gemcitabin, irinotecan, og pemetrexed i 100 menneskelige magekreft prøver. For å oppnå dette, utførte vi en serie med
in vitro
sensitivitetstester på fersk fjernet mage tumorvev og evaluert mulig bruk av
SULF2
metylering status for å forutsi kjemoterapeutiske effekten av der agenter. Så, vi retrospektivt analysert
SULF2
metylering i en kohort av 56 mage kreftpasienter som behandles med en modifisert FOLFOX diett og konkluderte med at
SULF2U
fungerer som en uavhengig prognostisk biomarkør i magekreftpasienter som behandles med en modifisert FOLFOX diett.
Materialer og metoder
Etikk erklæringen
All forskning som omfatter mennesker deltakere har blitt godkjent av human forskning Protective Committee of Drum Tower Hospital Affiliated til Medical School Nanjing University og skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle pasienter.
pasienter og vevsprøver
de inkluderte pasientene var de som gjennom den gastrektomi ved Institutt for generell kirurgi av Drum Tower Hospital, Nanjing, Kina i perioden fra august 2010 til oktober 2011. kriteriene for registrering i studien omfattet følgende parametre: (1) alder 18 år; (2) histologisk bekreftet adenokarsinom i ventrikkel, mucinous eller signetring celle adenokarsinom; (3) andre enn magekreft ingen tidligere eller samtidig kreftformer; (4) ingen tidligere historie med kjemoterapi eller strålebehandling, enten adjuvant eller palliativ; og (5) tilstrekkelig funksjon av alle viktige organer. Vevsprøver ble ekstrahert fra 100 nylig fjernet mage svulster. Hver tumorvevet ble delt i to deler: (1) en del ble holdt på 4 ° C Hanks «balanserte saltløsning med 1% penicillin /streptomycin etter samling, og deretter sendes til laboratoriet løpet av 15 minutter i 4 ° C, i
in vitro
evaluering av kjemosensitivitet av histoculture narkotika respons analyse (HDRA) [21], [22]; (2) den resterende delen ble gjort i formalinfiksert parafin-embedded (FFPE) tumorvev for patologisk observasjon og metylering deteksjon. Vi retrospektivt anmeldt pasientenes journaler og kirurgi rapporter for å identifisere kliniske og histopatologiske data, inkludert sex, histologi, tumorlokalisering, scene, histologisk grad og lymfeknutemetastase. Svulster ble klassifisert i henhold til International Union Against Cancer (UICC) TNM klassifisering. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle pasienter og protokoller for denne studien ble godkjent av Human Forskning Protective komiteen av Drum Tower Hospital.
HDRA
HDRA prosedyrer ble utført som tidligere rapportert av Furukawa og kolleger [21], [22]. Kort sagt ble de friske tumorvev ble vasket to ganger med Hanks «balanserte saltløsning og hakket opp i små biter på ca. 10 mg i vekt og 0,5 mm i diameter, som så ble plassert på klare for kollagen (Health Design, Rochester, NY) flater i 24 -vel mikro. Optimale konsentrasjoner av legemidler som brukes til å skille
in vitro
følsomhet og resistens var 20 ug /ml for cisplatin [23], 100 ug /ml for docetaxel [22], 50 ug /ml for gemcitabin [23], 20 ug /ml for irinotecan [23], og 400 ug /ml for pemetrexed [5], i henhold til sine topp-plasmakonsentrasjon hos pasienter. Cisplatin, docetaxel, og irinotecan ble hentet fra Jiangsu Hengrui Medicine Company (Jiangsu, Kina), mens pemetrexed og gemcitabin ble hentet fra Eli Lilly and Company (Shanghai, Kina). 8 parallelle kulturbrønnene ble brukt for hver medikamentkonsentrasjon, samt for kontroll. Platene ble inkubert i 7 dager ved 37 ° C i nærvær av stoffer som er oppløst i RPMI 1640 medium inneholdende 20% føtalt kalveserum og etterlatt i en fuktig atmosfære inneholdende 95% luft-5% CO
2. Etter histoculture, 100 ul av type I kollagenase (0,1 mg /ml, Sigma, Shanghai, Kina) og 100 ul av 3- (4,5-dimetyl-2-thiazotyl) -2,5-difenyl-2H-tetrazolium-bromid ( MTT) oppløsning (5 mg /ml, Sigma, Shanghai) ble tilsatt til hver kulturbrønn og inkubert i ytterligere 16 timer. Etter ekstraksjon med dimetylsulfoksyd, ble absorbansen av oppløsningen i hver brønn avlest ved 540 nm.
Evaluering av Sensitivitet overfor anti-kreftmidler i HDRA
Absorbansen per gram av dyrkede tumorvevet ble beregnet fra den gjennomsnittlige absorbans av vev fra 8 parallelle kulturbrønnene, og tumorvevet vekt ble bestemt før kulturen. Hemmingshastigheten av hvert anti-cancer midlet ble beregnet ved å bruke følgende formel: Inhibering rate (%) = (1-T /C) x 100, hvor T er den midlere absorbans av behandlede tumor /vekt og C er den midlere absorbans av kontroll svulst /vekt. De lodde hemming benyttet for å skille den følsomme og resistente tilfeller ble vedtatt på 30%, 40%, 50% og 60% for hvert legemiddel testes.
in vitro
effektiv rente ble også estimert basert på cut-off hemming sats som følger:. Effektiv rente (%) = antall sensitive saker /totalt antall tilfeller
Pasient Kjemoterapi
av alle pasienter, 56 med Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) performance status (PS) ≤2 mottatt en modifisert FOLFOX (en kombinasjon av 5-FU og platina) kjemoterapi etter reseksjon av primære svulster som følger: oksaliplatin 85 mgm
-2 pluss folinsyre 200 mgm
-2 som en 2 timers infusjon på dag 1, etterfulgt av en 22 timers infusjon av 5-FU 2000 mgm
-2 på dag 1 og 2, Hver andre uke. Disse 56 pasientene ble videre fulgt opp og deres overlevelse ble beregnet fra tidspunktet for diagnosen til datoen for siste oppfølging eller død uansett årsak.
DNA Extraction og Modifikasjon
Tre 7-um snitt ble fremstilt fra primære tumorvev som inneholdt minst 80% tumorceller. Etter hematoxylin-eosin-farging, ble kreft deler microdissected og overført til et mikrosentrifugerør. DNA ble isolert rutinemessig, og deretter ble kjemisk modifisert av natriumbisulfitt å konvertere alle unmethylated cytosines å uraciler samtidig la metylcytosiner uendret [18]. Deretter ble de lagret ved -20 ° C for videre analyse.
Metylering Spesifikke Polymerase Chain Reaction (MSP)
MSP ble utført for å bestemme metylering status for
SULF2
hjelp av ABI Prism 7300HT Sequence Detection System (Applied Biosystems). Hver PCR-reaksjon inneholdt genomisk DNA 2 ul, SYBR grønn PCR-Mix (Takara, Japan) 10 ul, vann 7,7 pl, og grunning 0,15 ul (10 umol /l). PCR-betingelsene var 95 ° C i 10 minutter, etterfulgt av 45 sykluser ved 59 ° C i 30 s, 72 ° C i 30 s og 95 ° C i 30 sek. Primere for
SULF2
metylert PCR (Takara, Japan) var som følger: forover 5 «TAAGTGTTTTTTTTATAGCGGC 3», reversere 5’TACCGTAATTTCCGCTATC 3 «. Primere for
SULF2
unmethylated PCR (Takara, Japan) var som følger: forover 5 «GTTTATAAGTGTTTTTTTATAGTGGT3», omvendt 5’TACCATAATTTCCACTATCCCT 3 «. Hver batch av reaksjon inkludert en positiv kontroll fra metyltransferase (M.SssI) -behandlet humant genomisk DNA (fullt denaturert), en negativ kontroll fra DNA-prøvene som hadde blitt bekreftet som unmethylated og annen negativ kontroll uten DNA. Alle testene ble utført i duplikat. Resultatene ble validert for utvalgte prøver gjennom kombinert bisulfite modifikasjon og bisulfite sekvensering.
Statistical Analysis
Verdier ble uttrykt som betyr ± standardavvik. Forskjeller i hemming priser mellom gruppene ble evaluert ved hjelp av t-test. De mulige sammenslutninger av SULF2 metylering med kliniske karakteristika og
in vitro
kjemosensitivitet effekten ble analysert ved hjelp av Fishers eksakte sannsynligheten test. Alle statistiske tester var tosidig, og en P-verdi på mindre enn 0,05 ble ansett som statistisk signifikans. Statistisk analyse ble utført ved hjelp av SPSS, versjon 16.0.
Resultater
Pasientens egenskaper
Det som kjennetegner alle pasienter er vist i tabell 1. De fleste pasientene var menn (73%), og den dominerende histologi var adenokarsinom (79%). I 35 (35%) av pasientene, var svulsten plassert i den distale magen, i 38 (38%) i den proksimale magesekken, og i 27 (27%) i hele magen. Seksti-tre (63%) av pasientene hadde stadium III eller IV sykdom. Lymfeknutemetastaser var tilstede i 75 (75%) pasienter. Metylert
SULF2 product: (
SULF2M
) ble påvist i 28 pasienter, mens de resterende 72 pasientene viste unmethylated
SULF2 product: (
SULF2U
, metylering rate: 28 %). RT-PCR forsterkning kurver av
SULF2M Hotell og
SULF2U
ble vist i figur S1. Det var ingen sammenheng mellom
SULF2
metylering og noen av pasientenes egenskaper, herunder kjønn, histologi, tumorlokalisering, scene, histologisk grad og lymfeknutemetastase.
in vitro
Effekt Valuta testet Drugs
in vitro
følsomhet for cisplatin, docetaxel, gemcitabin, irinotecan og pemetrexed er testet og godkjent i alle prøvene. De gjennomsnittlige hemming satser for hver testet stoffet er oppført i tabell 2. Prøver med
SULF2U
var mer følsomme for cisplatin enn de med
SULF2M plakater (48.80% vs 38,15%,
P
= 0,02), mens prøver med
SULF2M
var mer følsomme for irinotecan enn
SULF2U plakater (53.61% vs 40,92%,
P
= 0,01, tabell 2 og figur 1). Det var ingen sammenheng mellom
SULF2
metylering og
in vitro
følsomhet for docetaxel, gemcitabin eller pemetrexed (tabell 2). Som vist i tabell 3, var det ingen sammenheng mellom inhiberingsgraden observert for anti-kreftmidler og en hvilken som helst av de kliniske egenskaper.
midtlinje er den sentrale linje i hver boks.
for ytterligere å undersøke den mulige sammenhengen mellom
SULF2
metylering og cisplatin eller irinotecan følsomhet,
in vitro
effekt frekvensen av hver legemiddelkonsentrasjon ble undersøkt sette opp ulike cut-off hemming priser (tabell 4). Fire forskjellige grenseverdier ble vedtatt: 30%, 40%, 50% og 60%. I cut-off på 30% hemming rate,
SULF2
metylering ble funnet å ha en signifikant sammenheng med cisplatin effekt (
SULF2M
: 57,14%,
SULF2U
: 80,56 %,
P
= 0,02) og irinotecan effekt (
SULF2M
: 89,29%,
SULF2U
: 62,50%,
P
= 0.01, Figur 2 og Tabell 4). I cut-off på 40%, 50% og 60% hemming rate, var det en trend at
SULF2M
prøvene viste høyere irinotecan effekt, men lavere cisplatin effekt enn
SULF2U
prøver (tabell 4).
Association of
SULF2
Metylering med klinisk respons på kjemoterapi
Blant de 56 pasientene som fikk den modifiserte FOLFOX diett, median overlevelse var 434 dager (range: 111-641 dager). En signifikant sammenheng ble observert mellom overlevelse og svulststedet (
P
= 0,01). Ingen annen forbindelse mellom kliniske karakteristika og overlevelse ble funnet (tabell 5 og figur 3).
SULF2M
ble påvist hos 19 pasienter, mens
SULF2U
ble funnet hos 37 pasienter (
SULF2
metylering rate: 34%). En signifikant sammenheng ble observert mellom overlevelse og
SULF2
metylering status. Median total overlevelse var 309 dager (95% KI = 236 til 382 dager) for pasienter med
SULF2M
, og 481 dager (95% KI = 418 til 490 dager) for de med
SULF2U
(
P =
0.02, figur 3). Ved hjelp av både univariat og multivariat Cox proporsjonal fareanalyse som tok hensyn til alder, kjønn, tumorlokalisering, scene, histologisk grad, lymfeknutemetastase og
SULF2
metylering som kovariater svulst nettstedet og
SULF2
metylering forble signifikante markører for total overlevelse i magekreftpasienter som behandles med platinabasert kjemoterapi (tabell 6).
Diskusjoner
Selv om tidligere studier har vist involvering av SULF2 i kreft patogenesen, sin valuta for kjemosensitivitet prediksjon er fortsatt uklart. Denne studien fokuserer på arrangøren CpG island metylering av
SULF2
som en potensiell biomarkør i magekreft. De viktigste funnene i denne studien viser at: (i) frekvensen av
SULF2M
i human magekreft er rundt 30%; (Ii) det første bevis for
SULF2U
er assosiert med cisplatin følsomhet i kreft; (Iii) bevis for
SULF2M
er assosiert med irinotecan følsomhet i magekreft; (Iv) en retrospektiv studie og validering for
SULF2
metylering i en kohort av 56 pasienter med magekreft, som tillater oss å oppdage at
SULF2U
er en uavhengig prognostisk biomarkør i magekreftpasienter behandles med en modifisert FOLFOX diett.
I tidligere studier av magekreft, funnene på metylering status og uttrykk nivåer av
SULFs
var mangelfulle. I en studie, bare 13 tidlig stadium bryst og mage kreft, de fleste som var stadium I, ble analysert ved semi-kvantitativ RT-PCR for
SULF1
uttrykk [24]. Det ble vist at lavt uttrykk for
SULF1
var utbredt i disse to typer kreft. I en annen studie uttrykk for både
SULF1 Hotell og
SULF2
mRNA ble bestemt ved real-time RT-PCR for en stor kohort av mage kreft vev, funn som
SULFs
ble uttrykt ved høye nivåer i magekreft, sammenlignet med normale vev. I denne studien fant vi ved å undersøke
SULF2
metylering i 100 magekreft prøver, at frekvensen av
SULF2M
var ca 30%, noe som indikerte at dominerer magekreft var
SULF2U
. Nyere studier av integrerte genomiske analyser viste at
SULF2
fungerer som en nedstrøms effektor av p53, og at aktivering av p53 kan føre til
SULF2U Hotell og oppregulering av
SULF2
. Den mulige sammenhengen mellom p53 og SULF2 i vekstfaktor signalveien foreslått en mulig rolle for SULF2 i kreftutvikling og kreftpasienters utfallet [25]. Forholdet mellom
SULF2
unmethylation og
SULF2
oppregulering må videre testes i disse prøvene. Den ulike uttrykk nivåer og metylering status for
SULF2
mellom tumor og normalt vev må også være ytterligere bekreftet.
Studier på
SULF2
metylering som kjemosensitivitet prediktor er knappe. Metylering av
SULF2
arrangøren har vært forbundet med bedre overlevelse av resected lunge adenokarsinom pasienter, og også med en marginal forbedring i overlevelse av avansert NSCLC pasienter som fikk standard kjemoterapi (hazard ratio = 0,63,
P
= 0,07) [18]. Senere studier viste at NSCLC cellelinjer med
SULF2M
var 134 ganger mer følsomme for topoisomerase inhibitor enn de med
SULF2U
. I denne studien har vi vist at mage svulster med
SULF2M
er mer følsomme for irinotecan enn de med
SULF2U
. Videre har vi demonstrert for første gang at
SULF2
metylering er også en potensiell prediktiv biomarkør for cisplatin effekt. Gastric svulster med
SULF2U
var mer følsomme for cisplatin enn de med
SULF2M
, og magekreftpasienter med
SULF2U
viste lavere dødelighet ved mottak av platina-basert kjemoterapi. Selv om flere prediktive biomarkører er identifisert for cisplatin, for eksempel ERCC1 [7], BRCA1 [4], [26], [27] og XRCC1 [28] – [30], med tanke på den relativt lave svarprosenter av brukte platina /5FU baserte neoadjuvant behandling protokollen for avanserte magekreft pasienter, er identifisering av biomarkører for å forutsi respons haster. Oppdagelsen av en roman prediktiv biomarkør som kan undersøkes ved metylering analyse er spennende og supplerende. Grunnen til at
SULF2
unmethylation øker tumor følsomhet for cisplatin kan ligge på ubiquitin konjugering enzymer (UBE). Det har blitt rapportert at
SULF2
metylering resulterer i økt uttrykk av UBE [18]. UBE lagt ubiquitin til visse lysinresidier og var involvert i DNA-reparasjon, mutagenese og celledeling. Overekspresjon av visse UBE’er, som RAD6B, kan resultere i betydelig motstand mot cisplatin [31]. Videre studier bør gjennomføres for å undersøke den molekylære mekanismen for
SULF2M
indusert cisplatin motstand.
En betydelig synergistisk effekt av cisplatin og DNA metyltransferase (DNMT) hemmere 5-aza-DC (DAC) på cellelevedyktigheten ble observert i den cisplatin-resistente AGS-cellelinje, men ikke i den cisplatin-sensitive MKN28 cellelinje [32]. Data fra analysekolonidannelse evne viste at knockdown av DNMT1 medført en økning i cisplatin følsomhet [32]. Den molekylære mekanismen er fortsatt uklart. Men forholdet mellom
SULF2
metylering og cisplatin følsomhet kan delvis forklare dette fenomenet. Behandling av magekreft med DNMT hemmere kan føre til demetylering av
SULF2 Hotell og dermed øke følsomheten for cisplatin. Derfor, i tillegg til den logiske effekt, våre data støtter også innlemmelse av en DNMT inhibitor i dagens behandlingsprotokoller i minst en undergruppe av magekreftpasienter.
Som konklusjon, gir vår studie nye bevis på at
SULF2
metylering er negativt assosiert med cisplatin følsomhet
in vitro
.
SULF2
metylering er en potensiell prognostisk biomarkør for mage kreftpasienter som behandles med platinabasert kjemoterapi.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
Den RT-PCR forsterkning kurver av SULF2M og SULF2U. Den røde kurven står for forsterkning av SULF2M, og den blå kurven står for forsterkning av SULF2U. Figur S1 A viser forsterkningskurver av prøven med SULF2M; Figur S1b viser forsterknings kurver av prøven med SULF2U
doi:. 10,1371 /journal.pone.0075564.s001 plakater (TIF)
