Abstract
Spontan kreft er vanlige sykdommer hos hunder. Blant disse er noen ondartede kreftformer som oral melanom, osteosarkom, hemangiosarcoma, og mastcelletumor ofte gjenkjent som kliniske problemer fordi, til tross for deres høye frekvenser, nåværende behandlinger for disse kreftformer kan ikke alltid oppnå tilfredsstillende resultater. Fraværet av effektive systemiske behandlinger mot disse kreftformer fører forskerne å undersøke nye terapeutiske modaliteter, inkludert immunterapi. Programmert død 1 (PD-1) er en ko-stimulerende reseptor med immunsuppressiv funksjon. Når det binder dets ligander, PD-ligand 1 (PD-L1) eller PD-L2, PD-1 på T-celler negativt regulerer aktiverende signaler fra T-cellereseptoren, noe som resulterer i inhibering av effektor funksjon av cytotoksiske T-lymfocytter. Avvikende PD-L1 uttrykk har blitt rapportert i mange humane kreftformer og regnes som en immun flukt mekanisme for kreft. I kliniske studier, anti-PD-1 eller anti-PD-L1 antistoffer indusert tumor regresjon for flere maligniteter, inkludert avansert melanom, ikke-småcellet lungekreft og nyrecellekreft. I denne studien for å vurdere potensialet av PD-1 /PD-L1 aksen som en ny terapeutisk mål for kreft canine immunoterapi, ble immunhistokjemisk analyse av PD-L1-ekspresjon i forskjellige ondartede kreftformer av hunder utført. Her viser vi at hunden oral melanom, osteosarkom, hemangiosarcoma, mast celle tumor, mamma adenokarsinomer, og prostata adenokarsinom uttrykt PD-L1, mens noen andre typer kreft ikke. I tillegg ble PD-1 uttrykkes sterkt på tumor-infiltrerende lymfocytter oppnådd fra oral melanom, som viser at lymfocytter i denne krefttypen kan ha vært funksjonelt oppbrukt. Disse resultatene sterkt oppfordre til klinisk anvendelse av PD-1 /PD-L1-hemmere som nye terapeutiske midler mot disse kreftformene hos hunder
Citation. Maekawa N, Konnai S, Okagawa T, Nishimori A, Ikebuchi R, Izumi Y, et al. (2016) Immunhistokjemisk Analyse av PD-L1 Expression in Canine ondartet kreft og PD-1 Expression på lymfocytter i Canine Oral melanom. PLoS ONE 11 (6): e0157176. doi: 10,1371 /journal.pone.0157176
Redaktør: Hiroshi Shiku, Mie Universitetet Graduate School of Medicine, JAPAN
mottatt: 24 desember 2015; Godkjent: 25 mai 2016; Publisert: 08.06.2016
Copyright: © 2016 Maekawa et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av en Grant-in-Aid for Scientific Research (Grant Number 16K15042) og Grant-i-aid for JSP Fellows (Grant Number 15J01989) fra Japan Society for Promotion of Science (JSP). Denne forskningen er (delvis) som støttes av Plattform for Drug Discovery, informatikk, konstruksjons Life Science (Forslag nr 2157) fra Japan Direktoratet for medisinsk forskning og utvikling (AMED). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Hunder ofte utvikler spontane kreft, noe som kan føre til døden [1] eller redusere livskvaliteten til pasientene. Blant ondartet kreft, lymfom, mastcelletumor (MCT), osteosarkom (OS), bløtvevssarkom, og brystkreft er relativt hyppig [2,3] og ofte gjenkjent som dødelige sykdommer i kliniske settinger. Oral melanom og hemangiosarcoma (HSA) er også vanlige kreftformen hos hunder, og pasient hunder med disse typer kreft har vanligvis dårlig prognose [4,5]. Standarder for omsorg for hver type kreft er etablert og vellykket forbedret prognose; imidlertid behandlingsresultatene er ikke alltid tilfredsstillende på grunn av de lave til moderate responsrater eller begrenset forlengelse av overlevelsestiden.
immunterapi har potensial som nye behandlingstilbud for kreft. Blant disse immun sjekkpunkt-inhibitorer som for eksempel anti-programmert død 1 (PD-1) og anti-PD-1 ligand (PD-L1) antistoffer viste lovende effekter på flere ondartede sykdommer hos mennesker [6,7]. Immun sjekkpunkt molekyl PD-1 er en CD28-familien reseptoren, som undertrykker immunresponser. PD-1 på T-celler som regulerer negativt T-celle-reseptor-signalisering og hindrer induksjon av cytokiner så som interferon-gamma (IFN-γ), interleukin 2, og tumornekrosefaktor alfa, så vel som celleproliferasjon, slik at vedlikehold av perifer toleranse eller persistens av visse patogener i verts [8]. To ligander for PD-1 har blitt rapportert: PD-ligand 1 (PD-L1) og PD-L2. PD-L2 ekspresjon er begrenset til visse typer av celler eller vev, for eksempel makrofager og dendrittiske celler, mens PD-L1 ekspresjon kan bli indusert i en rekke forskjellige celletyper, inkludert ikke-hematopoetiske celler. PD-L1 uttrykk er ikke funnet i de fleste normale vev; imidlertid, er dens ekspresjon rapportert i forskjellige tumorceller [9,10], og således er ansett som en av de immun unnvikelse mekanismer for kreft. I nyrecellekarsinom, magekreft og andre kreftpasienter, er PD-L1 uttrykk er kjent for å være assosiert med dårlig prognose [10-12], noe som indikerer at PD-L1 kan være en viktig regulator av immunsystemet når den kjemper mot kreft . Antistoff legemidler som er rettet mot denne veien forstyrre bindingen av PD-L1 til PD-1 og kan forbedre spesifikke immunresponser mot kreftceller [13,14], senere resulterer i tilbakegang av kreft [15]. En rekke kliniske forsøk har vist at objektive responser kan oppnås med anti-PD-1 eller anti-PD-L1-antistoffer hos pasienter med maligne kreftformer, inkludert høy melanom, ikke-småcellet lungekarsinom, og nyrecellekarsinom [6, 7], og samler bevis viser mulighetene for immun sjekkpunkt hemmere i kreftbehandling.
det er imidlertid bare noen få rapporter om PD-1 /PD-L1 aksen i hunder, og sin tilknytning til sykdommer gjenstår å belyses. Tidligere har vi rapportert at PD-L1 er uttrykt i hund melanom, MCT, og nyrecellekarsinom og at PD-L1 blokade av et anti-PD-L1 antistoff øker IFN-γ produksjon av tumor-infiltrerende celler [16]. Disse resultatene tyder på at anti-PD-L1-antistoffer kan ha terapeutiske effekter på kreftformer hos hunder. I denne studien å vurdere hvilke krefttyper kan være målrettet, PD-L1 uttrykk i hunde ondartet kreft ble videre undersøkt. Her viser vi at hunden oral melanom, OS, HSA, MCT, brystadenokarsinom, og prostata adenokarsinom uttrykke PD-L1, noe som tyder på at PD-1 /PD-L1 aksen kunne anvendes som et immunsvik mekanisme i disse kreftformene. Til støtte for denne hypotesen, ble PD-1 uttrykk oppregulert på tumor infiltrerende lymfocytter innhentet fra oral melanom og leversvulster. Minst, terapeutiske potensialer av PD-1 /PD-L1-stopper i oral melanom og andre PD-L1-positive kreft fortjener nærmere undersøkelse.
Materialer og metoder
Canine prøver
Animal bruk i hele denne studien ble godkjent av Institutional Animal Care og bruk Committee (serienummeret til godkjenning var # 15-0149), Hokkaido University. Ingen dyr ble ofret for formålet med denne studien. Kliniske prøver av hunde tumorvev ble kirurgisk skåret ved Veterinær Teaching Hospital, Graduate School of Veterinary Medicine, Hokkaido University og ved Veterinær sykehus i Sapporo by i 2014-2015. Ved bruk av denne studien, ble informert samtykke oppnådd fra alle eiere av hundene. Perifere blodprøver av klinisk friske hunder ble samlet fra beagler i en alder av 12-15 år holdt på Experimental Animal Facility, Graduate School of Veterinary Medicine, Hokkaido University.
Flow cytometri
Å vurdere bindingsspesifisiteten av en nylig etablert anti-PD-L1 monoklonalt antistoff (mAb) [17], strømningscytometriske analyser ble utført som beskrevet tidligere [16], med noen modifikasjoner. I korte trekk, canine melanomcellelinjer, CMEC og CMM-1, som er PD-L1-negativ under normale betingelser [16], ble transfektert med pEGFP-N2-vektoren eller den pEGFP-N2-CPD-L1 vektor [16] ved hjelp Lipofectamine 2000 (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) i henhold til produsentens instruksjoner. En dag etter transfeksjon ble cellene høstet og farget med anti-PD-L1 mAb 6G7-E1 eller en isotype-matchet kontrollantistoff (rotte-IgM) (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) ved en sluttkonsentrasjon på 10 ug /ml. Etter vasking ble cellene inkubert med en allofykocyanin-konjugert anti-rotte-Ig-antistoff (Beckman Coulter, Fullerton, CA, USA). Fluorescens ble analysert av en FACSVerse flowcytometer (BD Biosciences) og FCS Express 4 programvare (De Novo Software, Glendale, CA, USA). For transfekterte celler, ble forbedret grønt fluorescerende protein (EGFP) -positive celler inngjerdet og brukes for analyse.
For å vurdere om PD-1 uttrykk er oppregulert i sammenheng med hjørnetann kreft, flowcytometrisk analyse ble utført med kryss -reactive anti-human PD-1-antistoff [18]. Perifere mononukleære blodceller (PBMC) og Tīlss fra friskt uttatt hunde tumorvev ble oppnådd som tidligere beskrevet [16]. Alle enkeltcellesuspensjoner ble fremstilt ved mekanisk metode. Celler ble farget med de optimale konsentrasjoner av FITC-konjugert anti-CD4 /PE-konjugert anti-CD8 antistoff cocktail (ABD Serotec, Oxford, UK) og biotinylert anti-human PD-1-antistoff (R 0,05 ble ansett for å være statistisk signifikant.
Resultater
Anti-PD-L1 antistoff 6G7-E1 bindes spesifikt til hunden PD-L1
anti-PD-L1 antistoffer som kan binde seg til hunden PD-L1 ble etablert tidligere [16,17]. Blant dem, viste 6G7-E1 tilstrekkelig binding som bestemmes av immunhistokjemi av formalinfiksert og parafininnebygd hund tumorsnitt. For å teste spesifisiteten av 6G7-E1 i påvisning av hunde PD-L1, vi først forsøkt Western blotting-analyse av canine PD-L1-kanin-IgG-Fc-fusjonsprotein [16] som en positiv kontroll. Imidlertid, ingen binding ble observert når 6G7-E1 ble anvendt som det primære antistoff, mens et anti-kanin-IgG-Fc-antistoff detektert spesifikt bånd (data ikke vist). På grunn av dette resultatet tyder på at 6G7-E1 gjenkjenner en bestemt konformasjon av hunde PD-L1, flowcytometrisk analyse av canine melanomcellelinjer CMEC og CMM-1 ble utført. Ingen binding ble observert med den ikke-transfekterte eller håne (EGFP only) -transfected canine melanomceller, mens 6G7-E1 var bundet til cellene transfektert med canine PD-L1-EGFP (figur 1), som indikerer spesifikk binding av 6G7-E1 til hund PD-L1.
Canine melanomcellelinjer, og CMEC CMM-1, ble transfektert med pEGFP-N2 vektor (mock) eller pEGFP-N2-CPD-L1, og antistoff-binding ble analysert ved en strømningscytometer. Det skraverte området, svart linje, og rød linje representerer resultatene for cellene med ingen behandling, mock-transfekterte celler, og CPD-L1-EGFP-transfekterte celler, respektivt. (A) Binding av isotype kontroll-antistoff til CMEC; (B) binding av 6G7-E1 til Cmec; (C) binding av isotype kontrollantistoff til CMM-1; og (d) binding av 6G7-E1 til CMM-1 er vist på histogrammene. Ingen binding av 6G7-E1 ble observert i mock-transfektert eller utransfekterte celler, mens spesifikk binding ble observert i CPD-L1-EGFP-transfekterte celler.
Canine ondartet kreft uttrykke PD-L1
Immunhistokjemisk analyse ble utført for å påvise PD-L1 uttrykk i ulike ondartet kreft. I alt ble 110 prøver testet, hvorav 36 oral melanom, 7 OS, 6 HSA, 3 klasse III MCT, 4 mamma adenokarsinomer, og 3 prostata adenokarsinom prøver var PD-L1 positive (figur 2 og 3, og tabell 1). Både cytoplasmatisk farging og celleoverflatefarging ble observert. Satsene for PD-L1 uttrykk var 90% (36/40) for oral melanom, 70% (7/10) for OS, 60% (6/10) for HSA, 60% (3/5) for klasse III MCT , 80% (4/5) for brystadenokarsinom, og 60% (3/5) for prostata adenokarsinom (tabell 1). De øvrige 7 typer tumorer, nemlig karsinomer, diffus stor B-celle lymfom, nasal adenokarsinom, sarkom mykt vev, histiocytisk sarkom, overgangscelle karsinom, og anal sac kjertel karsinom uttrykte ikke PD-L1, selv om den testede prøvestørrelsen ble vesentlig begrenset (5 tilfeller for hver svulst type).
Formalin-fiksert og parafininnstøpte tumorvev ble undersøkt immunohistochemically. Seksjonene ble farget med anti-PD-L1 mAb 6G7-E1. Representative positive stainings av (A, B) oral melanom, (C, D) osteosarkom, og (E, F) hemangiosarcoma er vist. Original forstørrelse: (A, C, E) 200 ×; (B, D, F) 400 ×.
Formalin-fiksert og parafininnstøpte tumorvev ble undersøkt immunohistochemically. Seksjonene ble farget med anti-PD-L1 mAb 6G7-E1. Representative positive stainings av (A, B) mastcelletumor, (C, D) brystadenokarsinom, og (E, F) prostata adenokarsinom er vist. Original forstørrelse: (A, D, E) 200 ×; (B) 400 ×; (C) 100 ×.
PD-1 er sterkt uttrykt på tumor infiltrerende lymfocytter (Tīlss) i canine oral melanom
For å vurdere uttrykket nivå PD-1 på tumorassosierte lymfocytter, ble Tīlss oppnådd fra kirurgisk utskårne kreftvev, og strømningscytometrisk analyse ble utført. Sammenlignet med perifere blod lymfocytter fra friske hunder, ble PD-1 svært uttrykt på både CD8
+ og CD4
+ Tīlss fra oral melanom (fig 4,
p
0,05). Den positive frekvensen av PD-1 uttrykk på CD8
+ eller CD4
+ Tīlss var 70,9 til 96,6% eller 80,2 til 96,8%, henholdsvis (tabell 2). I tilfelle av leversvulster, mer optimale kontrollceller var tilgjengelig; normale vev-infiltrerende lymfocytter (Nils) fra de samme individene ble brukt. Både i levercelleadenom og hepatocellulær adenokarsinom, Tīlss hadde høyere uttrykk av PD-1 enn Nils (S2 figur), noe som indikerer at oppregulering av PD-1 uttrykk kan være en felles fenotype for Tīlss.
Tīlss ble samlet inn fra kirurgisk utskårne orale melanoma vev og ekspresjonsnivået av PD-1 ble evaluert ved flow cytometri. Venstre panel, PD-1 uttrykk på CD8
+ lymfocytter. Høyre panel, PD-1 uttrykk på CD4
+ lymfocytter. Perifere mononukleære blodceller (PBMC) ble oppnådd fra friske hunder ble anvendt som kontroll (frisk kontroll, HC).
p
0,05 ble ansett som statistisk signifikant (Mann-Whitney U-test).
Diskusjoner
Føflekkreft er en relativt vanlig type svulst, som står for 7% av alle ondartet kreft og er den hyppigste oral kreft hos hund [20]. Canine malignt melanom kan oppstå i håret huden, munnhulen, negl, matte, øye, eller mucocutaneous knutepunkt [20]. Blant disse skjemaene, er oral melanom regnes som en svært ondartet kreft, fordi det ofte fører til alvorlig lokal invasjon og metastatisk sykdom. Dessverre er oral melanom generelt motstandsdyktig mot kjemoterapi, noe som gjør det vanskelig å behandle metastatiske lesjoner, som til slutt drepe syke hunder [21]. Fraværet av effektiv systemisk behandling oppmuntrer til utvikling av nye terapeutiske modaliteter, inkludert immunterapi. Hos mennesker har immunsjekkpunkt hemmere som anti-PD-1 og anti-PD-L1 antistoffer vært brukt til behandling av avansert melanom, viser lovende efficacies, med de objektive responsrate på 28% og 18%, henholdsvis [6, 7]. I denne studien ble immunhistokjemisk analyse viste at så mye som 90% (36/40) av hunde oral melanom uttrykt PD-L1, noe som tyder på at PD-1 /PD-L1 aksen er en viktig mekanisme for immunsvik for denne form for kreft . Dette resultatet er godt i tråd med vår forrige rapport, som viste at 100% (8/8) av oral melanom uttrykt PD-L1, mens de fleste melanom fjernet fra øyet eller huden uttrykte ikke PD-L1 [16]. Dessuten, i samråd med disse resultatene, PD-1 ble sterkt uttrykt på både CD8
+ og CD4
+ Tīlss hentet fra oral melanom. Disse Tīlss virket funksjonelt utmattet fordi immundempende motiver, som undertrykker effektorfunksjoner av T-celler i human og mus, er sterkt konservert i hunde PD-1 [16]. Tatt i betraktning at hunden malignt melanom aksjer noen likhetstrekk med mennesket melanom, hemmere av PD-1 /PD-L1 aksen kan også gi terapeutiske effekter mot hund oral melanom, og hunder kan være en god dyremodell for å undersøke terapeutiske aspekter av PD-1 /PD-L1-hemmere mot melanom i kliniske studier.
OS er den vanligste bein kreft hos hunder, kjent for sine svært metastatiske egenskaper. Med amputasjon alene, MST for hunder med OS er bare 19 uker, og ca 90% av hundene utvikle metastatiske lesjoner [22,23]. Derfor har aggressiv kirurgi i kombinasjon med systemisk kjemoterapi vært en standard behandling for canine OS, og nye systemisk behandling må undersøkes. Hos mennesker er anti-PD-L1 antistoffer forventes å ha terapeutiske effekter på OS fordi ca 75% (12/16) av metastatisk OS viste PD-L1 uttrykk. I en musemodell, en anti-PD-L1-antistoff forbedret funksjon av cytotoksiske T-lymfocytter og økte overlevelse av tumorbærende mus [24]. Fordi 70% (7/10) av primære OS-i hunder ble funnet å uttrykke PD-L1, kan blokkerende antistoffer også ha en terapeutisk effekt mot valpe OS. Imidlertid kan det være viktig å merke seg at, i motsetning til dens metastatiske lesjoner, uttrykt ingen menneskelig primære OS-PD-L1 [24], mens hunden primære OS-uttrykt PD-L1 ved en høy hastighet. bør tas forskjellen i PD-L1 uttrykk i nøye overveielse når ekstrapolere funnene fra menneskelige OS studier til hjørnetann OS eller vice versa.
Hunder har en relativt høy risiko for å utvikle HSA [25], som er en ondartet kreft som stammer fra vaskulære endotelceller. Tatt i betraktning at hunden HSA er svært metastatisk, forblir adjuvant kjemoterapi viktig selv om det kan gi bare en beskjeden fordel i overlevelse ganger [26]. Fordi angiosarkom er en sjelden sykdom hos mennesker, har rapporter på PD-L1-ekspresjon i angiosarkom vært begrenset [27,28], og dens terapeutiske innblanding har ikke vært godt undersøkt. Fordi PD-L1-ekspresjon ble funnet i 60% (6/10) av hunde HSA prøvene, er det verdt å undersøke den terapeutiske potensialet av PD-1 /PD-L1-inhibitorer som nye systemiske immunterapier for hunden HSA. PD-L1-ekspresjon i HSA kan dele de samme egenskapene av dets opprinnelse vaskulære endotelceller, fordi vaskulære endotelceller uttrykker PD-L1 i respons til flere cytokiner, for eksempel IFN [29,30]. Kan det være rimelig å anta at HSA utnytter PD-1 /PD-L1 aksen som et immunsvik mekanisme fordi PD-L1 på vaskulære endotel-celler er blitt rapportert å ha negativ regulere CD8
+ T-celle-responser så som IFN- γ produksjon og cytolytisk aktivitet [30].
MCT er den vanligste hud kreft hos hunder, står for opptil 21% av alle hjørnetann hud svulster [31]. Selv om den kliniske adferd av MCT kan variere, histologisk gradering [19] er mye brukt og ansett for å være en pålitelig prognostisk faktor MCT for hunder. Ifølge Bostock
et al
., For høyverdig eller udifferensiert MCT, er MST bare 13 uker [32] og metastatisk hastigheten er så høy som 56-96%. I denne studien ble høyverdig (Patnaik grad III) MCT analysert for PD-L1 uttrykk, og 60% (3/5) av prøvene ble positivt farget. Dette resultatet er også godt overens med vår forrige rapport, hvor 66,7% (4/6) av grad III MCT viste PD-L1 uttrykk [16]. Selv om noen cytotoksisk kjemoterapi narkotika og KIT tyrosin kinase hemmere som imatinib og toceranib har blitt brukt til å behandle MCT systemisk, immunsjekkpunkt hemmere rettet mot PD-1 /PD-L1 aksen også har potensial til å bli inkludert i behandlingen av MCT fordi Utvikling av legemiddelresistens er noen ganger observert under kjemoterapi, blant annet at med KIT-hemmere. Selv om PD-L1 ekspresjon i klasse I eller II MCT gjenstår å undersøkes, kan PD-L1 ekspresjon være knyttet til den biologiske oppførsel av MCT fordi det driver CD8
+ T-celle-undertrykkelse og muliggjør metastaser i mus cancermodeller [33 ]. Videre undersøkelser er nødvendig for å vurdere om PD-L1 uttrykk kunne brukes som en prognostisk markør for denne kompliserte og heterogen kreft.
brystkjerteltumorer er de vanligste svulster hos seksuelt intakte tisper, sto for 70% av alle krefttilfeller i denne undergruppe [34]. Blant ondartede svulster på melkekjertler, representerer brystadenokarsinom en felles histopatologi, og hunder med mamma adenokarsinomer behandles med kirurgi alene noen ganger lider av et tilbakefall og /eller metastaser. Kjemoterapi har noen fordeler for melke maligniteter; Men i mange tilfeller er det ikke er helbredende, og alternativt eller ytterligere systemiske behandlinger trenger å bli utforsket. Hos mennesker ble PD-L1-ekspresjon i tumorceller observert hos pasienter med brystkreft 34% (15/44), og dens ekspresjon ble signifikant korrelert med noen viktige prognostiske faktorer som uttrykk for hormonreseptorer [35]. Hos hunder, 80% (4/5) av de brvstadenokarsinom prøvene uttrykt PD-L1, selv om sin tilknytning til prognosen er fortsatt uklart. En ytterligere undersøkelse av forholdet mellom ekspresjonsstatus av PD-L1 og prognosen i tilfelle av canine brysttumorer skal gjennomføres, og det er verdt å i det minste vurdere det terapeutiske potensialet til PD-1 /PD-L1-inhibitorer som roman systemisk behandling mot denne kreftformen.
prostata adenokarsinom er en relativt uvanlig sykdom hos hannhunder. Selv om forekomsten er lav, prostata adenokarsinom oppstår ofte som et klinisk problem fordi lokal progresjon og metastaser er vanlig følgetilstander. På tidspunktet for diagnose, kan regionale og fjernmetastaser finnes i de fleste tilfeller, og MSTS for hunder med ingen behandling anses å være mindre enn en måned [36]. Til dags dato har ingen konsensus for standarden på omsorg er oppnådd, og konvensjonelle behandlinger som kirurgi, strålebehandling og kjemoterapi er palliativ i de fleste hunder. Hos mennesker, 50% (8/16) av kastrering resistent prostatakreft (CRPC) tilfeller ble rapportert å uttrykke PD-L1 [37]; Men ingen av de CRPC pasientene som fikk en anti-PD-1-antistoff hadde et objektiv respons i en klinisk studie [6]. Ingen respons i CRPC pasienter er muligens på grunn av fravær av PD-L1 uttrykk i tumorvev, selv om bare noen få eksempler fra de inkluderte pasientene ble undersøkt og funnet å være PD-L1-negative [6,38]. I denne studien ble PD-L1 uttrykt i 60% (3/5) av hund prostata adenokarsinom prøver, men dens terapeutiske implikasjoner forblir uklar. Videre studier av foreningen av PD-L1 uttrykk med behandlingsresultatet bør gjennomføres, og hunder kan være en kraftig dyremodell for human prostatakreft fordi hunden prostata adenokarsinom aksjer noen funksjoner med menneskelige prostata kreft i form av sin spontane forekomst, metastatisk tilbøyelighet og PD-L1 uttrykk.
De andre kreftformer testet i denne studien viste ingen PD-L1 uttrykk. Fraværet av PD-L1-ekspresjon i disse tumorene kan skyldes forskjeller i opprinnelsen av tumorceller, tumorsetet, og /eller immunologisk tilstand av hver kreft. Fordi utvalgsstørrelsen testet i denne studien var svært liten, bør utføres ytterligere analyser før en konklusjon på uttrykket status for PD-L1 i disse kreftformer. Nylig har de regulatoriske mekanismer for PD-L1 uttrykk hos mennesker blitt grundig undersøkt. En av mekanismen for indusering av PD-L1-ekspresjon i tumorceller er i respons på IFN-γ [9], som sannsynligvis produsert av immunceller i svulsten mikromiljøet i løpet av antitumorimmunresponser. Fordi PD-L1 ekspresjon i canine kreftcellelinjer ble indusert eller forsterket av canine IFN-γ behandling [16], er denne mekanismen også sannsynlig å være involvert i reguleringen av PD-L1 hos hunder. En annen mekanisme er assosiert med onkogene signalisering; tap av fosfatase og tensin homolog (PTEN) funksjon er blitt rapportert å oppregulere PD-L1-ekspresjon i gliomer og trippel-negative brystcancerceller [39,40]. Hos hunder ble en mutasjon og /eller tap av PTEN også rapportert i melanom, OS, HSA, og ondartede brystkjerteltumorer [41-44]. Dette kan bidra, i hvert fall delvis, til avvikende PD-L1 uttrykk i disse kreftformene hos hunder.
Så langt vi kjenner til, er dette den første rapporten fra PD-L1 uttrykk i ulike canine ondartet kreft . Ekspresjon analyse av PD-L1 har viktige implikasjoner i en klinisk anvendelse av PD-1 /PD-L1-inhibitorer hos hund, fordi, i humane kliniske forsøk med et anti-PD-1-antistoff, ble PD-L1 ekspresjon rapportert å være assosiert med den behandlingsresultat. Pasientene med PD-L1-positive tumorer hadde en objektiv responsrate på 36%, mens ingen av pasientene med PD-L1-negative tumorer hadde en objektiv respons [6]. Våre data gir grunnleggende informasjon om involvering av PD-1 /PD-L1 aksen i hjørnetann kreft immunologi og oppfordrer sterkt til utvikling av nye immunterapi å målrette PD-1 /PD-L1 veien i hunder. Fordi anti-PD-L1 antistoffer ble vist å ha terapeutisk potensial for hjørnetann kreft [16], kliniske anvendelser av anti-PD-L1 antistoffer fortjener nærmere undersøkelse.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 Fig. Representant immunhistokjemi med isotype-matchet kontroll antistoff.
Oral melanom prøven var farget med rotte-IgM isotypekontrollantistoff. Ingen farging ble observert. Original forstørrelse, 200 ×
doi:. 10,1371 /journal.pone.0157176.s001 plakater (TIF)
S2 Fig. PD-1-ekspresjon på Tīlss oppnådd fra leversvulster.
Tīlss oppnådd fra (A) levercelleadenom og (B) hepatocellulær adenokarsinom ble analysert for PD-1-ekspresjon ved strømningscytometri (rød linje). Normalt vev-infiltrerende lymfocytter (Nils) hentet fra tilstøtende sunt leveren vev av de samme personene (blå linje) ble brukt som kontroll. Svart linje, isotypekontrollantistoff for Tīlss. Skraverte området, isotypekontrollantistoff for Nils
doi:. 10,1371 /journal.pone.0157176.s002 plakater (TIF)
