Abstract
Adrenomedullin (AM) er en 52-aminosyre peptid opprinnelig isolert fra menneskelig feokromocytom. AM er uttrykt i en rekke ondartede vev og kreftcellelinjer og ble vist å være et mitogen faktor stand til å stimulere veksten av en rekke kreftcelletyper. I tillegg er AM en overlevelsesfaktor for visse kreftceller. Noen data tyder på at AM kan være involvert i utviklingen kreft metastasering via angiogenese og celle migrasjon og invasjon kontroll. Transient receptor potential kanal TRPV2 er kjent for å fremme i prostatakreft cellemigrasjon og invasiv fenotype og er korrelert med scenen og karakteren av blærekreft. I dette arbeidet viser vi at AM induserer prostata og urothelial kreft celle migrasjon og invasjon gjennom TRPV2 trans til plasmamembranen og den påfølgende økningen i hvilekalsiumnivå
Citation. Oulidi A, Bokhobza A, Gkika D, Vanden Abeele F, Lehen’kyi V, Ouafik L, et al. (2013) TRPV2 formidler Adrenomedullin Stimulering av prostata og urothelial kreft celle adhesjon, migrasjon og invasjon. PLoS ONE 8 (5): e64885. doi: 10,1371 /journal.pone.0064885
Redaktør: Natasha Kyprianou, University of Kentucky College of Medicine, USA
mottatt: 21 januar 2013; Godkjent: 19 april 2013; Publisert: 31. mai 2013
Copyright: © 2013 Oulidi et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet med tilskudd fra Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM), Ligue Nationale Contre le Cancer, Region Nord Pas de Calais og Université Catholique de Lille. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Adrenomedullin (AM) er et 52 aminosyre-peptid opprinnelig isolert fra et humant pheochromocytoma [1] som bærer multifaktorielle regulatoriske egenskaper som strekker seg fra inducing vasodilatasjon til modulering av cellevekst [2]. Funksjonene til AM formidles gjennom spesifikke reseptorer som omfatter kalsitonin reseptor-like receptor (CLR) og en reseptor aktivitet modifiserende protein (RAMP); når co-uttrykkes med RAMP2 eller RAMP3, CLR fungerer som en spesifikk AM reseptor [3]. AM og dets reseptorer er sterkt uttrykt i forskjellige kreftcellelinjer, og i kreft i bukspyttkjertel, lunge, nyre, bryst, eggstokk og prostata. En rekke studier har implisert AM (utskilte endogent eller eksogent administrert) på tumorvekst, metastase progresjon og via effekt på angiogenese, celleproliferasjon, apoptose og migrasjon [4] – [6]. Men molekylære mekanismene bak disse effektene av AM på kreftcellevekst og metastase forbli motstridende og dårlig forstått.
Cell migrasjon spiller en sentral rolle i kreft invasjon og metastasering. Mange av komponentene i cellemigrering maskiner er regulert av intracellulært kalsium (Ca
2 +) konsentrasjon [7]. En vesentlig del av det intracellulære Ca
2 + signal genereres av den transmembrane tilstrømningen av ekstracellulær Ca
2+ hovedsakelig forekommer gjennom kationiske kanaler med karakteristiske Ca
2+ selektivitet. I ikke-eksiterbare celler, er Ca
2+ adgang levert av ionekanaler som aktiveres av ulike kjemiske og fysikalske stimuli. Noen av disse Ca
2 + oppføring kanaler er medlemmer av «transient receptor potential» (TRP) familie av kationiske kanaler [8]. TRP-kanaler har blitt rapportert å være involvert i karsinogenese [9] – [11], og blant dem TRPV2 kanal, har vist seg å være spesielt implisert i progresjon av prostata og blærekreft til mer aggressiv fenotype. Faktisk har nyere studier fra vårt laboratorium vist viser at TRPV2 er uttrykt i de mer aggressive prostata kreft celler og stimulerer migrasjon og invasiv fenotype av disse cellene [12], [13]. Interessant er TRPV2 uttrykk i blæren også vist seg å korrelere med karakteren og stadium av kreft [14], men ingenting er kjent om dens potensielle rolle i blærekreft celle migrasjon /invasjon.
I dette arbeidet vi undersøkt involvering av TRPV2 i effekten av AM på flertrinnsprosess invasjon i to svært invasive cellelinjer: PCA (prostatakreft) celler PC-3 og UC (urothelial karsinom) celler T24 /83. Våre data indikerer at AM kan øke adhesjon, migrasjon og invasjon gjennom fokal adhesjonskinase (FAK) og integrin β1 aktivering og stimulering av TRPV2 translokasjon til plasmamembranen. Dermed våre resultater gir ny innsikt i rollen som AM og TRPV2 i prostata og blære maligniteter.
Materialer og metoder
Cell Culture
Den menneskelige PCa cellelinje PC- 3 ble oppnådd fra ATCC og holdt i kultur i RPMI 1640 (Life Technologies) supplementert med 10% FCS og 5 mM L-glutamin (Sigma). Den urothelial kreftcellelinje T24 /83 ble innhentet fra ECACC og vedlikeholdes i kultur i McCoys 5A Glutamax® (Life Technologies) supplert med 10% FCS.
Reverse Transcription-PCR
Totalt mRNA ble isolert fra celler som tidligere beskrevet [12]. DNA amplifikasjonsbetingelser inkludert et innledende denatureringstrinn av 7 minutter ved 95 ° C; 35 sykluser på 30 sek ved 95 ° C, 30 sek ved 60 ° C og 30 sek ved 72 ° C; og til slutt 7 min ved 72 ° C. Grunning sekvenser og størrelser av fragmenter var for RAMP2: forover 5′-CTCAGCCTCTTCCCACCAC-3 «, revers 5′-TTCCAGCAAAATTGGACAGC-3′, 84 bp; for RAMP3 5»-ATCTCGGTGCAGTTGGTGA-3 «og 5′- AAGGTGGACGTCTGGAAGTG-3′, 77 bp; for CLR 5»-CATGGACAAATTATACCCAGTGT-3 «og 5′-TCCAATTATGGTCAGGTAAAACAA3′, 86 bp; for Actin 5»-CAGAGCAAGAGAGGCATCCT-3 «og 5′-GTTGAAGGTCTCAAACATGATC-3», 209 bp.
Små interfering RNA Transfeksjon
PC-3 og T24 /83 celler ble transfektert med 50 nM small interfering RNA (siRNA) mot TRPV2 (siTRPV2 sekvens: 5′-UAAGAGUCAACCUCAACUAdT-3 «, syntetisert av Eurogentec). hjelp HiPerFect transfeksjon reagens (Qiagen) etter produsentens anvisninger
celleadhesjonsanalyse
cellene ble høstet og sådd ut ved 3 * 10
4 og 1.5 * 10
4 celler /brønn for henholdsvis PC3 og T24 /83 i basal medium supplementert eller ikke med AM (200 nM) på fibronektin (10 ug /ml) pre-belagte 96-brønners plater. Etter 45 min inkubasjon ved 37 ° C ble overholdt cellene fiksert i 15 minutter i metanolbad og farget med Hoechst (5 mg /ml i PBS), bilder ble tatt på et Leica DMIRE2 mikroskop (x 5) og cellene telles ved bruk av NIH Image analyse programvare (ImageJ).
Cell migrasjon og invasjon analysen
Cell migrasjon og invasjon ble bestemt av transwell analysen. I korthet Cellene ble sådd på toppen av Transwell cellekulturinnsatser med 8 um porestørrelse (Falcon) ved en tetthet på 60 000 per brønn for PC-3 og 30 000 for T24 /83 (24-brønners format) i serumfritt kulturmedium. Etter 1 time ble molekyl av interesse ble lagt på begge sider av Transwell filteret. For invasjonen analysen ble det øvre kammeret belagt med 50 ug Matrigel (BD Biosciences) for å danne en matrise barriere. Det nedre kammer er fylt med medium inneholdende 10% FCS som kjemotiltrekkende. Etter 8 timer for migrering analysen og 24 timer for invasjon, ble ikke-migrerende celler fjernes fra den øvre filter ved skraping, mens celler som hadde migrert gjennom filterporene til den nedre flate av innskuddene ble fiksert i 4% paraformaldehyd i PBS og farget med Hoechst (5 mg /ml i PBS) og telles ved hjelp av en Leica DMIRB mikroskop (× 200).
Ca
2 + Målinger ved hjelp av Fura-2 AM
Før fluorescensmålinger, ble cellene trypsinert og sådd ut på glass slips. Mediet ble skiftet hver 48 timer. Celler ble brukt 3 dager etter trypsinering. Dyrkningsmediet ble erstattet med en HBSS oppløsning inneholdende 142 mmol /l NaCl, 5,6 mmol /L KCI, 1 mmol /liter MgCI2, 2 mmol /l CaCl2, 0,34 mmol /L Na2HPO4, 0,44 mmol /l KH2PO4, 10 mmol /l HEPES, og 5,6 mmol /l glukose. Osmolariteten og pH-verdien i denne oppløsning ble justert til 310 mOsm /l og 7,4, respektivt. Fargestoff lasting ble oppnådd ved å overføre cellene til en standard HBSS oppløsning inneholdende 1 mmol /l Fura-2-acetoksymetylester (Calbiochem) lastet (45 min) i 40 min ved 37 ° C. Deretter ble cellene vasket tre ganger med det samme farvestoff-fri oppløsning. Dekkglass ble deretter overført til en perfusjon kammer på et Olympus IX70 mikroskop utstyrt for fluorescens. Fluorescens var alternativt spent ved 340 og 380 nm med en monokromator og ble tatt til fange etter filtrering gjennom en lang-pass filter (510 nm) ved en MicroMax 5 MHz CCD-kamera (Princeton Instruments, Evry, Frankrike). Oppkjøp og analyse ble utført med Metafluor 7.7.4.0 programvare (Universal Imaging Corp., West Chester, PA). Den intracellulære kalsiumkonsentrasjonen ble avledet fra forholdet mellom fluorescensstyrkene for hver av de eksitasjonsbølgelengdene (F340 /F380) og fra ligning av Grynkiewicz. Cellene ble kontinuerlig perfundert med HBSS oppløsning via et hel-kammer perfusjon system og kjemikalier ble tilsatt via perfusjonssystemet. Strømningshastigheten for hele kammeret perfusjon systemet ble satt til 1 ml /min og kammervolumet var 500 ul. Alle opptakene ble gjort ved 37 ° C.
Biotinylation og Vest-blotting
Forsøkene ble utført som beskrevet tidligere [15]. Antistoffer som ble brukt var kanin polyklonale anti-VRL-en (for TRPV2, 1/200, Santa Cruz), anti-FAK (1/500, Abcam), anti-FAK fosfor Y397 (1/1000, Abcam), anti-integrin beta en fosfo T788 + T789 (1/1000, Abcam), og anti-integrin-beta-1 (1/200, Santa Cruz), og muse-monoklonalt anti-beta-aktin (1/2000, Sigma-Aldrich).
data Analysis
Resultatene ble uttrykt som gjennomsnitt ± SE. Tomter ble produsert ved hjelp av Excel. Hvert eksperiment ble gjentatt minst 3 ganger. n angir antall celler per eksperiment. N angir antall eksperimenter utført. Tyrkia-Kramer test ble brukt for statistisk sammenligning mellom midler og forskjeller, og P . 0,05 ble betraktet som signifikant
Resultater
Adrenomedullin Øker PC-3 og T24 /83 celle adhesjon, migrasjon og Invasion
Vi først sjekkes av RT-PCR uttrykk for AM reseptorer i prostata og uroteliale kreft cellelinjer PC3 og T24 /83. Som vist i figur 1A, PC-3 uttrykker de to AM-reseptorer, CLR /RAMP2 og CLR /RAMP3, mens T24 /83 uttrykker bare CLR /RAMP3.
(A) RT-PCR-eksperiment som viser RAMP2, RAMP3 og CLR uttrykk i PC-3 og T24 /83 celler. (B) PC-3 (venstre panel) og T24 /83 (høyre panel) celleadhesjon ble undersøkt ved såing av 3 * 10
4 og 1.5 * 10
henholdsvis 4 celler per brønn i 96-brønners plater pre- belagt med fibronektin, og inkubert i 45 minutter med eller uten AM (200 nM) (N = 3, * P 0,05 sammenlignet med kontrollceller). β1 inte fosforylering ble studert av western-blotting på totale proteiner hentet fra PC-3 og T24 /83 celler seeded på fibronectin belagte plater og behandlet med eller uten AM. (C) PC-3 og T24 /83 cellemigrering ble studert ved Transwell-analyse etter 8 timer fra behandlingen (N = 3, * P 0,05 sammenlignet med kontrollceller). FAKfosforylering ble studert av western-blotting på totale proteiner hentet fra PC-3 og T24 /83 celler behandlet med eller uten AM. (D) For invasjon assay, transwell-membran ble forhåndsbelagt med 50 ug Matrigel, og PC-3 og T24 /83-celler ble la for å invadere i 24 timer (N = 3, * P 0,05 sammenlignet med kontrollceller).
Deretter undersøkte vi celleadhesjonen til en stor del av basalmembranen, fibronektin. Tilsetning av 200 nM AM øket både PC-3 og T24 /83-celler med 26% og 34% henholdsvis (fig. 1B). En av de store molekylære spillerne modifiserende celle-substrat adhesjon er den integrin-superfamilien av reseptorer, som består av heterodimerer av a- og p- underenhetene som gjenkjenner forskjellige ekstracellulære matriks (ECM) proteiner. Interessant er β1-integrin den mest tallrike subenheten uttrykt i PCA-celler og er i stand til å danne heterodimerer som binder til fibronektin [16], mens økt β1-integrin uttrykk korrelerer med mer invasive og metastatisk kreft i blære [17]. Aktivering av β1-integrin fører til dets fosforylering, som kan bli undersøkt ved Western blotting. Vi har derfor testet om AM kunne aktivere β1-inte ved å studere sin fosforylering på Thr-788-789 med en fosfor-spesifikt antistoff. Vi har observert at AM-behandlingen økte signifikant nivået av fosforylert β1-integrin uten å påvirke ekspresjonen av det totale protein skjemaet (fig 1B, nedre panel).
Modifikasjon av adhesjon kan fremme migrering og invasjon. To viktig malignitet-assosierte fenotyper. Så undersøkte vi effekten av AM-behandling på disse fenotypene ved hjelp av Transwell-analyser. Tilsetning av 200 nM AM øket vandring av PC-3 av 45% og T24 /83-celler med 40% (Fig. 1C). Flere studier har vist at ved inngrep med deler av ECM, integriner gruppert som fører til aktivering av fokal adhesjonskinase (FAK) av autofosforylering ved Tyr397. Aktiveringen av FAK kontrollerer celleform og motilitet [18]. Vi studerte derfor aktiviteten av FAK ved western-blotting med et spesifikt antistoff mot fosfo-Tyr397 FAK. Som vist på fig. 1C (nedre panel), og den fosforylerte FAK blitt betydelig øket ved AM behandling total FAK mens det totale FAK-ekspresjon forble uendret.
I tillegg studerte vi virkningen av AM på invasjonen potensialet av de to celle linjer av transwell-analyse hvor det transwell filteret ble belagt med Matrigel. AM behandling økt evne til celle invasjon gjennom Matrigel-belagte membran med 54% i PC-3 celler og med 61% i T24 /83 celler (Fig. 1 D).
TRPV2 som megler Adrenomedullin Promotion of Migration og Invasion på PC-3 og T24 /83 Cells
siden vi tidligere har vist at TRPV2 var involvert i PCa celle migrasjon og invasivitet [12], [13], og siden denne kanalen ble også innblandet i blæren kreftutvikling [ ,,,0],14], testet vi om TRPV2 er innblandet i økningen av celle migrasjon og invasjon av AM. Vi først sjekket TRPV2 uttrykk i de to cellelinjer og dens downrerulation av siRNA. Western-blot-analyse med TRPV2-spesifikt antistoff har vist at TRPV2 protein blir uttrykt i PC3 og T24 /83 celler, og at protein ekspresjon kan effektivt inhiberes ved celler behandling med siRNA-TRPV2 (50 nM, 48 h, fig. 2A). Stanse av TRPV2 med siRNA-TRPV2 ikke bare redusert adhesjon av PC-3 og T24 /83-celler med 35% og 29% henholdsvis, men også avskaffet stimulerende effekt på adhesjonen etter AM-behandling (200 nM). AM tillegg til celler behandlet med kontroll siRNA var i stand til å forbedre deres adhesjon til fibronektin med 29% for PC-3 og 25% for T24 /83 celler (Fig. 2B).
(A) Western-blotting analyse av TRPV2 protein nivået i PC-3 og T24 /83 celler behandlet med enten siCTL eller siTRPV2 (50 nm, 48 t). Effekt av TRPV2 stanse (siTRPV2, 50 nM, 48 h) (B) på PC-3 og T24 /83 celleadhesjon til fibroncectin inkubert med eller uten AM (200 nM, 45 min) (n = 3, * P 0,05 sammenlignet med kontrollceller;
# P 0,05 sammenlignet med kontrollceller behandlet med AM); (C) på PC-3 og T24 /83 cellemigrering undersøkt ved transwell-analyse etter 8 timers inkubering med eller uten AM (N = 3 *, P 0,05 sammenlignet med kontrollceller;
# P 0,05 sammenlignet med kontrollceller behandlet med AM); (D) på PC-3 og T24 /83 celle invasjon gjennom matrigel (AM 200 nM, 24 h) (N = 3. *, P 0,05 sammenlignet med kontrollceller;
# P 0,05 sammenlignet med kontrollceller behandles med AM).
Vi neste undersøkte effekten av banke ned av TRPV2 på celle migrasjon av transwell analysen. Nedregulering av ekspresjon TRPV2 redusert ikke bare PC-3-celle migrasjon, men også T24 /83, med 55% og 60% henholdsvis. Som ble vist for vedheft, AM behandling på celler behandlet med siRNA-TRPV2 var ikke lenger i stand til å fremme migrasjon (Fig. 2C).
Til slutt, vi undersøkte invasjonen av PC-3 og T24 /83 celler gjennom Matrigel-belagte membran og som observert for den adhesjon og migrasjon, siRNA-TRPV2 induserte en reduksjon av både PC-3 og T24 /83 invasjon, med 52% og 67%. Tilsetting av AM kunne øke invasjonen av PC-3 og T24 /83 celler behandlet med siTRPV2 (Fig. 2D).
AM Induserer TRPV2 Trans på plasmamembranen via en PI3K Pathway
i lys av TRPV2 engasjement i AM effekt på cellemigrasjon, vi neste undersøkt av kalsium bildebehandling hvis AM kunne aktivere TRPV2. Akutt anvendelse av AM til PC-3 og T24 /83 ikke føre til heving av intracellulær Ca
2 + konsentrasjon ([Ca
2 +]
i) på kort tid-skala (dvs. i løpet av minutter ), som man ville forvente fra forbedret TRPV2-mediert Ca
2 + oppføring (data ikke vist). Men forlenget 45 min lang behandling av de to cellelinjer med AM-induserte en økning av den basale [Ca
2 +] i nivå (PC-3: fra kontrollverdien fra 100 nM til 140 nM i nærvær av AM; T24 /83:139 nM til 200 nM, fig. 3A). Ved å stanse all TRPV2 av siRNA (50 nM, 48 h) reduserte basal [Ca
2 +]
i (PC-3: 70 nM; T24 /83: 86 nM) tyder på at steady-state TRPV2-mediert Ca
2 + tilstrømningen bidrar til hvile cytosoliske Ca
2+ konsentrasjon. Videre TRPV2 stanse hindres også økningen av basal [Ca
2 +]
I i respons på AM-behandling (fig. 3A), i overensstemmelse med ideen om at forlenget inkubering av PC-3 og T24 /83 celler forårsaker indirekte aktivering av TRPV2 av AM via signalveien som krever litt tid til å produsere sine effekter.
(A) effekten av AM (200 nM, 45 min) og TRPV2 lyddemping (siTRPV2, 50 nM, 48 h ) på basal cytosolic kalsium fra PC-3 og T24-83 celler ble studert av kalsium bildebehandling. (N = 120 celler, N = 4, *, P 0,05 sammenlignet med kontrollceller;
# P 0,05 sammenlignet med kontrollceller behandlet med AM). (B) TRPV2 tilstedeværelse på plasmamembranen ble undersøkt av biotinylering på T24 /83 celler kontrollere eller enten behandlet med AM (200 nM, 45 min) eller AM og PI3K inhibitor LY294.002 (10 mm, tilsatt 5 min før AM). (C) Virkning av LY294.002 på PC-3 og T24 /83 cellemigrering undersøkt ved transwell-analyse etter 8 timers inkubering med eller uten AM (N = 3 *, P 0,05 sammenlignet med kontrollceller;
# P 0,05 sammenlignet med kontroll celler;
# P. 0,05 sammenlignet med kontrollceller behandlet med AM)
det er kjent at AM kan aktivere PI3K [19] og at PI3K kan aktivering fører til TRPV2 trans til plasma membranen [12]. Så, vi neste undersøkt om nærværet av TRPV2 ved plasmamembranen er avhengig av AM og på integriteten til PI3K-signalreaksjonsveien. For å gjøre dette, ble T24 /83 celler behandlet med enten AM (200 nM for 45 min) eller AM pluss PI3K inhibitor LY294.002 (10 mm, tilsatt 5 min før AM), og plasmamembran lokalisering ble analysert ved biotinylering. Som vist i figur 3B, økt AM TRPV2 tilstedeværelse på membranen, og denne effekten kan bli inhibert av LY294.002, noe som tyder på involvering av PI3K signalering i AM effekt på TRPV2.
Vi har derfor studert ved å transwell-analyse enten LY294.002 kunne svekke PC-3 og T24 /83 celle migrasjon. Vi har vist at LY294.002 (10 uM) hindres den stimulerende virkningen av AM på både PC-3 og T24 /83 celler, mens det ikke modifiserte basal migrering av disse cellene (fig. 3C). Videre AM-indusert migrasjon i nærvær av siTRPV2 ble ikke påvirket av den LY294.002 anvendelse både i PC-3 og T24 /83 celler som støtter spesifisiteten av PIK3 engasjement i AM effekt på TRPV2 kanal.
diskusjon
eR stimulerende aktivitet på tumorprogresjon har blitt vist på en rekke kreftformer, inkludert prostata, men ikke på blære carcinoma. Hittil har to mulige mekanismer som AM støtter tumorvekst postulert. Den første mulighet er at AM fremmer tumorvekst ved å stimulere angiogenese [5], [6]. Den andre mulig mekanisme er at AM direkte fremmer tumor proliferasjon og overlevelse. En fersk rapport viser at AM antagonist hemmet spredning og invasjonen av kreft i bukspyttkjertelen celler uttrykker AM reseptorer in vitro [20]; imidlertid ingen effekt noen gang har blitt beskrevet på prostatakreft cellemigrasjon /invasjon og ingen i det hele tatt på blære carcinoma.
I denne studien rapporterer vi for første gang at UC cellelinje T24 /83 uttrykker også en AM reseptor (CLR /RAMP3), og at AM kan øke ikke bare PCA-cellelinjen PC-3, men også den UC-cellelinjen T24 /83 invasive fenotype på samme måte, ved å stimulere celle adhesjon og migrering gjennom β1-integrin og FAK aktivering hhv.
Kalsium er en viktig faktor i prosessen med migrasjon [7]; studier fra vårt laboratorium viser at Transient Receptor Potential kanal TRPV2 er uttrykt i metastatisk PCA cellelinjer, inkludert PC-3 celler, og trpv2 transkripsjonsnivåer er 12 ganger høyere hos pasienter med metastatisk kreft (stadium M1) sammenlignet med primære solide tumorer ( stadier T2a og T2b). Basal aktivitet av denne kanal, samt indusert, fremmer PCa cellemigrering og invasive fenotype [12], [13]. Videre er TRPV2 uttrykk også øket til høyere blærekreft trinn [14]. Vi viser her at lyddemping av denne kanalen også drastisk reduserer migrasjon og invasjon av UC cellelinje T24 /83. Men det mest viktig funn er at TRPV2 modulerer AM stimulering av celle motilitet og invasjon, som vist ved fravær av AM effekt på adhesjon, migrasjon og invasjon når TRPV2 uttrykk er slått ned. AM, ved å handle på TRPV2 trans til plasma membran, økt hvilekalsiumnivået begge cellelinjer, noe som bidro til dens effekt på PC-3 og T24 /83 celle migrasjon.
Disse dataene tyder på at AM og TRPV2 korrelert uttrykk kan bidra til å skape ideelle forhold for metastatisk spredning hos pasienter med prostata eller blærekreft og kan utgjøre en potensiell prognostisk markør og en potensiell terapeutisk mål å øke forventet levealder for pasientene.
