Abstract
Bakgrunn
Anti-EGFR antistoffbasert behandling er en viktig terapeutisk strategi for avansert kolorektalcancer (CRC); til tross for dette har flere mutasjoner-inkludert
KRAS
,
BRAF
, og
PIK3CA
mutasjoner, og
HER2
forsterkning-er knyttet til mekanismene bak utvikling av resistens overfor anti-EGFR-terapi. Målet med vår studie var å undersøke frekvenser og kliniske implikasjoner av disse genetiske endringer i avansert CRC.
Metoder
KRAS
,
BRAF
, og
PIK3CA
mutasjoner ble bestemt ved Cobas sanntids-polymerase kjedereaksjon (PCR) i 191 avanserte CRC pasienter med fjernmetastaser. Mikro ustabilitet (MSI) status ble bestemt av en fragmentering analyse og
HER2
forsterkning ble vurdert av sølv in situ hybridisering. I tillegg
KRAS
mutasjoner ble undersøkt ved Sanger-sekvenseringsmetode i 97 av 191 CRC tilfeller.
Resultater
Mutasjoner i
KRAS
,
BRAF
, og
PIK3CA
ble funnet i 104 (54,5%), 6 (3,1%), og 25 (13,1%) tilfeller av avansert CRC, henholdsvis. MSI-høy status og
ble observert HER2
forsterkning i 3 (1,6%) og 16 (8,4%) tilfeller, henholdsvis.
PIK3CA
mutasjoner ble oftere funnet i
KRAS
mutant type (18,3%) enn
KRAS
villtype (6,9%) (
P
= 0,020 ). I kontrast,
HER2
presiseringer og
BRAF
mutasjoner ble assosiert med
KRAS
villtype med borderline betydning (
P
= 0,052 og 0,094, henholdsvis) . I kombinert analyser med
KRAS
,
BRAF Hotell og
HER2
status,
BRAF
mutasjoner eller
HER2
presiseringer var assosiert med verste prognosen i villtypen
KRAS
gruppe (
P
= 0,004). Når man sammenligner effekten av deteksjonsmetoder, resultatene av Real Time PCR-analyse viste 56 av 97 (57,7%) CRC tilfeller med
KRAS
mutasjoner, mens Sanger-sekvensering avslørt 49 tilfeller (50,5%).
Konklusjoner
KRAS
mutasjoner ble funnet i 54,5% av avanserte CRC pasienter. Våre resultater støtte som undergruppering ved hjelp av
PIK3CA Hotell og
BRAF
mutasjon eller
HER2
forsterkning status, i tillegg til
KRAS
mutasjonsstatus, er nyttig for å håndtere avanserte CRC pasienter
Citation:. Nam SK, Yun S, Koh J, Kwak Y, Seo AN, Park KU, et al. (2016)
BRAF
,
PIK3CA
, og
HER2
onkogene Endringer Ifølge
KRAS
Mutation Status i avansert kolorektal kreft med fjernmetastaser. PLoS ONE 11 (3): e0151865. doi: 10,1371 /journal.pone.0151865
Redaktør: Wayne A. Phillips, Peter MacCallum Cancer Centre, AUSTRALIA
mottatt: 03.12.2015; Godkjent: 04.03.2016; Publisert: 18 mars 2016
Copyright: © 2016 Nam et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. All relevant data er innenfor saksdokumenter filene
Finansiering:. Denne forskningen ble støttet av en bevilgning av Korea Health Technology R D Prosjekt gjennom Korea Health Industry Development Institute (KHIDI), finansiert av Helsedepartementet Velferd, Republikken Korea (tilskudd nummer: HI14C1813, https://www.khidi.or.kr/eps). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
tykktarms~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP (CRC) er den tredje vanligste kreftformen og forekomsten av CRC er fortsatt økende over hele verden hvert år. Til tross for tidlig oppdagelse og terapeutiske fremskritt, regionale eller fjernt metastaserende sykdom står for nesten 50% av nydiagnostiserte CRC pasienter og de generelle overlevelse av avanserte CRC pasienter fortsatt ikke tilfredsstillende. Den nylige identifikasjonen av molekylær genetikk har gjort betydelige fremskritt i behandling av pasienter med avansert CRC. Utviklingen av målrettet terapi rettet mot spesifikke mutasjoner slik som de i
epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR)
tyrosin kinase genet har blitt bedre behandlingseffekt og klinisk utfall i avanserte CRC pasienter [1-4]. Men CRC er molekylært heterogene svulster som havn ulike genet endringer inkludert mutasjoner i
KRAS
,
BRAF
, og
PIK3CA
, samt
HER2
forsterkning; mange pasienter med disse mutasjonene derfor oppleve motstand mot anti-EGFR narkotika og utviser dårlig prognose [2,3,5,6]. Derfor er det viktig å utforske den molekylære mekanismen bak den respons og motstand mot anti-EGFR behandling i avansert CRC.
KRAS
mutasjoner, som vanligvis oppdages i ca 40% av CRC tilfeller , antas å være assosiert med resistens overfor anti-EGFR behandling i CRC. Evalueringen av
KRAS
mutasjoner er derfor avgjørende før bruk av anti-EGFR narkotika for å velge pasienter som kan ha nytte av anti-EGFR terapi [7,8]. Videre nyere studier tyder på at flere genmutasjoner som
BRAF
mutasjoner,
PIK3CA
mutasjoner, og
HER2
forsterkning er innblandet i motstand mot EGFR-målrettede medikamenter for CRC pasienter med villtype
KRAS product: [5,9].
BRAF
, som er medlem av RAF familie, spiller en viktig rolle i MAP kinase /ERK-signalveien [10]. Mange tidligere studier har vist at mutasjoner i
BRAF
er en biomarkør for dårlig prognose i avansert CRC. I tillegg
BRAF
mutant svulster viser dårlig respons på anti-EGFR behandling, spesielt i CRC pasienter med villtype
KRAS product: [5,11].
PIK3CA
er mutert i ulike kreft hos mennesker; i CRC, det er mutert i ca 20% av tilfellene. Foreløpig pasienter husing
PIK3CA
mutasjoner i ekson 20 og ingen mutasjoner i
KRAS
kan vise motstand mot anti-EGFR behandling. Videre
PIK3CA
mutasjoner i ekson 9 og KRAS mutasjoner tendens til å bli funnet sammen [3,12]. Til slutt,
HER2
presiseringer er til stede i et lite antall CRC, og noen studier har rapportert sammenhengen mellom
HER2
forsterkning og dårlig respons på anti-EGFR narkotika [13].
til tross for disse tidligere funn, er kunnskap om frekvenser og kliniske implikasjoner av disse genetiske endringer i koreansk pasienter fortsatt begrenset. I denne studien, vurderte vi utbredelsen av disse genetiske endringer hos pasienter med avansert CRC, og vurdert forholdet mellom disse genetiske endringer med clinicopathological faktorer og utfallet av pasientene. I tillegg, sammenlignet vi effekten av å bruke Cobas sanntids-polymerase kjedereaksjon (PCR) tester med at ved bruk av Sanger-sekvenseringstester som påvisningsfremgangsmåter for
KRAS
mutasjoner.
Materialer og Metoder
pasienter og vevsprøver
det er totalt 191 avanserte CRC pasienter med synkrone eller metachronous fjernmetastaser som gjennomgikk kirurgisk behandling ved Seoul National University Bundang Hospital mellom 2003 og 2009 ble inkludert i denne studien. Alle pasientene ble behandlet med kirurgisk fjerning av de primære CRC i den innledende diagnose og fjern metastase resesert når oppdages. Ingen av pasientene ble behandlet med preoperativ kjemoterapi eller strålebehandling. Clinicopathologic informasjon og oppfølging data ble hentet fra pasientenes journaler og patologi rapporter. Total overlevelse (OS) ble beregnet som tiden mellom tidspunktet for kirurgi og dødsdato.
histopatologi og klassifisering av svulstene ble bestemt ifølge WHO klassifisering. Bruk av medisinsk registrere data og vevsprøver for denne studien ble godkjent av Institutional Review Board of Seoul National University Bundang Hospital (referanse: B-1210 /174-301). Alle prøver og medisinske registrere data ble anonymisert før bruk i denne studien, og deltakerne ga ikke skriftlig informert samtykke. The Institutional Review Board fravikes behovet for skriftlig informert samtykke under forutsetning av anonymiserings og ingen ekstra intervensjon til deltakerne.
KRAS
,
BRAF
, og
PIK3CA
mutasjon analyser ved hjelp av real-time PCR test
tumorprøver ble samlet inn fra kirurgisk reseksjon eksemplarer av den primære CRC. Hematoxylin-Eosin (HE) beiset lysbilder ble anmeldt av en patolog (H.S.L). Tumor områder ble identifisert og dissekert mikroskopisk mer enn en 1 x 1 cm område, som besto av mer enn 60% tumorceller. En eller to 8-um tykke formalinfikserte parafininnstøpte (FFPE) tumor vevssnitt ble deparaffinized med xylen i 5 minutter ved romtemperatur (RT), dehydrert i absolutt alkohol i 5 min ved romtemperatur og fikk lufttørke fullstendig i 10 min. DNA ble isolert ved hjelp av Cobas DNA Prøve Preparation Kit (Roche, Branchburg, NJ, USA) og det samme preparatet protokollen for alle Cobas mutasjonssett ble brukt i denne studien. Konsentrasjonen av det isolerte DNA ble målt ved anvendelse av et Nanodrop UV-spektrofotometer (Thermo Fisher Scientific, Wilmington, DE, USA) og DNA ble fortynnet med DNA prøvefortynneren fra Cobas 4800 Mutation Test kit (Roche) til den optimale konsentrasjon for hvert gen (
KRAS
4 ng /mL,
BRAF
5 ng /ul og
PIK3CA
2 ng /mL). Forsterkning og påvisning ble utført med en automatisert Cobas X480 analysator instrument. The real-time PCR test kan påvise kodon 12, 13, og 61 av
KRAS
mutasjon, V600E
BRAF
mutasjon, og exon 1, 4, 7, 9, og 20 av
PIK3CA
mutasjon.
KRAS
mutasjon analyse ved hjelp Sanger-sekvenseringsmetode
tumorprøver ble samlet inn fra de samme primære CRC prøver som hadde brukt for real- time PCR tester. Alle prøvene ble microdissected manuelt og 60% av prøveområdet ble vist å inneholde tumorceller som beregnet fra H E-fargede objektglass. Sanger-sekvensering analyse av
KRAS
mutasjoner i kodon 12, 13 og 61 ble utført i 97 av de 191 FFPE vevsprøver fra CRC pasienter, slik som tidligere beskrevet [14].
HER2
analyse av dual-farge sølv in-situ hybridisering (SISH)
HER
analyse ble utført på vev array-blokker fra samme årsklasse. Konstruksjon av vev matriseblokker ble utført som tidligere beskrevet [5,15]. I korthet ble et representativt område av de 191 CRC saks prøvene ekstrahert, og to kjerner fra sentrale og perifere område som måler 2 mm i diameter for hvert tilfelle ble anvendt for vev fylte blokk konstruksjon. Bright-feltet dual-color SISH analyse ble utført ved hjelp av en automatisk SISH farging enhet (BenchMark XT, Ventana Medical Systems) i henhold til produsentens protokoller for INFORMERE HER2 DNA og informere kromosom 17 (CEP17) prober (Ventana Medical Systems). Vi tolket HER2 /CEP17 SISH signaler i henhold til den fortolkende anvisning følger med INFORMERE HER2 DNA probe for farging mage kreftceller (Ventana Medical Systems). Svulstvev ble evaluert for hot spots i positiv HER2 /CEP17 signaler ved hjelp 20X eller 40X mål. Signaler ble oppregnet i 20 ikke-overlappende svulst cellekjerner per kjerne med 60x eller 100X målsettinger. Små klynger ble definert som 6-signaler, og større klynger som 12 signaler.
HER2
genamplifisering ble definert som et HER2 /CEP17 andel på ≥ 2,0 i sentrale eller perifere området. De tvetydige tilfeller med HER2 /CEP17 forholdet mellom 1.8 og 2.2 ble gjengitt i 20 ekstra ikke-overlappende svulst cellekjerner; forholdet ble beregnet på nytt basert på disse resultatene.
mikro ustabilitet (MSI) analyse
Snittene ble fremstilt fra FFPE vevsprøver og hematoksylin og eosin-farget lysbilder ble evaluert for å identifisere representative tumorområdet og normal område i hver seksjon. Disse utvalgte områder ble microdissected. MSI-analyse ble utført som tidligere beskrevet [16,17]. I korthet ble MSI status bestemt ved å analysere fem mikro loci (BAT-26, BAT-25, D5S346, D17S250, og S2S123) ved anvendelse av DNA-sekvenseauto (ABI 3731 genetisk analysator; Applied Biosystems, Foster City, CA). I henhold til Bethesda retningslinje på MSI, ble tumorene klassifisert som MSI-H når minst to av de fem markører viste nye bånd, MSI-L når ytterligere alleler ble observert med en av de fem markører, og MSS når alle mikrosatellittmarkører undersøkt vises identiske mønstre i både tumor og normalt vev.
Statistisk analyse
Statistiske analyser ble utført med SPSS statistikk 18 programvarepakke (Chicago, IL, USA). Sammenhengen mellom clinicopathologic parametere og genetiske forandringer ble analysert ved hjelp av Chi-kvadrat test eller Fishers eksakte test. Chi-kvadrat-testen ble utført bare hvis minst 80% av cellene har en forventet frekvens på 5 eller høyere, og ingen celle har en forventet frekvens som er mindre enn 1,0. Hvis ikke, ble Fishers eksakte test brukt. Alder ble behandlet som en kontinuerlig variabel, og sammenlignet ved hjelp av uavhengige T test på grunn av p 0,05 med Shapiro-Wilk normalitetstesten. Kaplan-Meier-overlevelseskurver ble plottet, og statistisk signifikante forskjeller i overlevelseskurver ble analysert ved hjelp av log-rank test. Multivariat overlevelsesanalyse ved hjelp av en Cox modellen ble gjennomført med mutasjonsstatus, alder og scenen på første diagnosen. Hazard ratio (HR) og 95% konfidensintervall (KI) ble evaluert. I alle tilfeller,
P
verdier mindre enn 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.
Resultater
Pasient egenskaper
clinicopathologic funksjonene pasientene er oppsummert i S1 Table. Pasienter besto av 103 menn (53,9%) og 88 kvinner (46,1%) med en median alder på 60 år (range: 28-93 år). Av de 191 tilfellene ble 49 (25,7%) svulster som ligger i høyre colon, 71 (37,2%) svulster i venstre kolon, og 71 (37,2%) svulster i endetarmen. Når det gjelder histologisk differensiering klasse, 165 (86,4%) svulster var lav karakter, og 26 (13,6%) svulster var høy klasse. Når det gjelder behandlinger, mottok 176 (92,1%) pasienter 5-fluorouracil (5-FU) -baserte adjuvant kjemoterapi med eller uten anti-EGFR-behandling (cetuximab) etter kirurgisk reseksjon; 150 (85,2%) pasienter fikk bare 5-FU basert kjemoterapi; og 26 (14,8%) pasienter fikk 5-FU med anti-EGFR narkotika.
Genetiske endringer i forbindelse med EGFR signalveien i avanserte CRC
Alle de grunnleggende data er presentert i S2 tabell. Av tumor sakene, 87 (45,5%) hadde villtype
KRAS Hotell og 104 (54,5%) hadde
KRAS
mutasjoner. Blant de svulster med
KRAS
mutasjoner, ble mutasjoner i kodon 12 eller 13 observert i 97 (93,3%), mens mutasjoner i kodon 61 ble observert i 7 (6,7%) pasienter.
BRAF
(V600E) mutasjoner ble observert i 6 (3,1%) svulster.
PIK3CA
mutasjoner ble identifisert i 25 (13,1%) svulster. De to vanligste
PIK3CA
mutasjoner ble plassert i ekson 9 (17 tilfeller, 68,0%) og exon 20 (5 tilfeller, 20,0%). Andre sjeldne mutasjoner ble plassert i eksoner 1 og 4 (2 tilfeller, 8,0%). Ett tilfelle næret en
PIK3CA
exon 4 mutasjon samt
PIK3CA
ekson 9 mutasjon. SISH analyse viste
HER2
genamplifisering i 16 (8,4%) svulster. Tre saker fra denne kohorten var MSI-H (1,6%), og de resterende 188 (98,4%) tilfeller ble klassifisert som MSS /MSI-L.
Av 104
KRAS
mutant typen CRC tilfeller, 23 (22,1%) hadde
PIK3CA
mutasjoner,
HER2
presiseringer eller
BRAF
mutasjoner (tabell 1). Atten tilfeller viste
PIK3CA
mutasjon, 4 tilfeller viste
HER2
forsterkning, hadde ett tilfelle begge
BRAF Hotell og
PIK3CA
mutasjoner, og ett tilfelle hadde både
PIK3CA
mutasjon og
HER2
forsterkning. Ut av 87
KRAS
villtype CRC,
BRAF
mutasjoner,
PIK3CA
mutasjoner, og
HER2
presiseringer ble funnet i fem (5,7%), 6 (6,9%), og 11 (12,6%) tilfeller, henholdsvis; samlet, 21 av 87
KRAS
villtype tilfeller (24,1%) hadde
BRAF
mutasjoner,
PIK3CA
mutasjoner, eller
HER2
presiseringer.
Interessant, tilstedeværelse av
PIK3CA
mutasjoner ble signifikant assosiert med tilstedeværelse av
KRAS
mutasjoner (
P
= 0,020; tabell 2). Mutasjoner i
KRAS Hotell og
BRAF
var nesten gjensidig utelukkende; imidlertid ett tilfelle næret samtidig
KRAS Hotell og
BRAF
mutasjoner.
HER2
presiseringer og
BRAF
mutasjoner tendens til å bli sett oftere i
KRAS
villtype svulster enn i
KRAS
muterte typen svulster med border statistisk signifikans (
P
= 0,052 og
P
= 0,094, henholdsvis). MSI status viste ikke noen tilknytning til disse genetiske endringer i denne kohorten.
Association of genetiske forandringer med clinicopathologic funksjoner
Tabell 3 demonstrerer sammenhengen mellom genetiske endringer og clinicopathologic egenskaper.
KRAS
muterte tumorer var mer sannsynlig å bli plassert i riktig kolon (
P
= 0,021). Disse svulstene var også forbundet med lavgradig histologi (
P
= 0,029).
BRAF
muterte tumorer var signifikant assosiert med T4 dybde på invasjon (
P
= 0,033). Selv om det ikke nådde statistisk signifikans,
BRAF
muterte tumorer tendens til å bli plassert i riktig kolon (
P
= 0,127) og for å ha lymfatisk invasjon (
P
= 0,097) sammenlignet med de samme funksjonene i
BRAF
villtype svulster. Svulster med
HER2
presiseringer var signifikant korrelert med en distal plassering (
P
= 0,006).
HER2
presiseringer viste også en sammenheng med yngre, men denne forskjellen var ikke statistisk signifikant (
P
= 0,081). Det var ingen andre signifikante assosiasjoner mellom
PIK3CA
mutasjoner eller MSI status med clinicopathologic faktorer.
Prognostic Betydningen av genetiske endringer
For å finne den prognostiske betydningen av disse genetiske forandringer, overlevelse-analyser ble utført ved anvendelse av Kaplan-Meier-metode for OS (figur 1). Oppfølging data fra alle 191 CRC-pasienter ble inkludert i overlevelsesanalyse. Det var 84 CRC-relaterte dødsfall, og median oppfølgingstid var 37,9 måneder (range, 0.8-104.6 måneder). Pasienter med
BRAF
mutasjoner viste en tendens til ugunstig utfall for OS, men dette resultatet var ikke statistisk signifikans (
P
= 0,081).
KRAS
mutasjoner,
PIK3CA
mutasjoner,
HER2
presiseringer, og MSI status viste ingen sammenheng med pasientenes OS (
P
= 0,993
P
= 0,538,
P
= 0,368 og
P
= 0,538, henholdsvis). Mutasjon av
KRAS
kodon 61 tendens til å bli assosiert med kortere total overlevelse, men det nådde ikke statistisk signifikans (
P
= 0,554).
Kaplan-Meier overlevelsesestimat grafer av total overlevelse (OS) i 191 avanserte CRC pasienter i henhold til
KRAS
mutasjoner status (a), plassering av
KRAS
mutasjoner i avanserte CRC pasienter (b),
BRAF
mutasjoner (c),
PIK3CA
mutasjoner (d),
HER2
presiseringer (e), og MSI status (f).
Interessant,
KRAS
villtype undergruppe med
BRAF
mutasjoner eller
HER2
presiseringer viste den verste prognosen i kombinerte analyser (
P
= 0,004; figur 2A). Ved å bruke Cox-modell, denne undergruppen var dårlig prognostisk faktor (HR, 2.055, CI, 1,093 til 3,861;
P
= 0,025) uavhengig av alder og stadium ved førstegangsdiagnose (S3 tabell). Blant 191 avanserte CRC, ble 165 pasienter ikke ble behandlet med anti-EGFR narkotika pasienter i hvem
KRAS
villtype undergruppe med
BRAF
eller
HER2
endringer viste også verste prognosen (
P
= 0,012; figur 2B). Ved å bruke Cox-modell, denne undergruppen var dårlig prognostisk faktor med border statistisk signifikans (HR, 1,984, CI, 0,963 til 4,085;
P
= 0,063; data ikke vist). Men i 26 pasienter behandlet med 5-FU med anti-EGFR narkotika,
KRAS
villtype undergruppe med
BRAF
eller
HER2
endringer ble ikke assosiert med dårlig prognose (
P
= 0,305, data ikke vist), som kan være på grunn av lite antall tilfeller. I
KRAS
villtype undergruppe,
BRAF
eller
HER2
endringer ble forbundet med høy grad av histologisk differensiering, avansert stadium, lymfatisk invasjon og perinevral invasjon, men med border statistisk betydning (S4 tabell).
Resultater av kombinert analyse i avanserte CRC pasienter med
KRAS
villtype gruppen i henhold til
BRAF
mutasjon og
HER2
forsterkning uavhengig av anti-EGFR behandling status (n = 191) (a), i hvem ble ikke behandlet med anti-EGFR narkotika (n = 165) (b).
Sammenligning av Cobas real- Time PCR og Sanger-sekvenseringsmetoder for
KRAS
mutasjoner
av 191 CRC prøver, vev av 97 pasienter var tilgjengelige for analyse for å sammenligne påvisning av
KRAS
mutasjoner med Sanger-sekvensering test og Cobas real-time PCR-test. Av de 97 svulster inkludert,
KRAS
mutasjoner ble påvist i 49 tilfeller (50,5%) av Sanger-sekvensering test. Mutasjoner i
KRAS
kodon 12 eller 13 og
KRAS
kodon 61 ble påvist i 47 (48,5%) og 2 (2,1%) tilfeller, henholdsvis. På den annen side, 56 tilfeller (57,7%) av
KRAS
mutasjoner ble detektert av real-time PCR-test; test lokalisert 52 (53,6%) mutasjoner i kodon 12 eller 13 og 4 (4,1%) mutasjoner i kodon 61. Den real-time PCR-testen viste en høyere følsomhet enn den til Sanger-sekvensering testen.
diskusjon
KRAS
er en velkjent driver onkogen i CRC og tilstedeværelsen av
KRAS
mutasjon spår dårlig respons på anti-EGFR målrettet terapi med metastatisk CRC pasienter. Vi evaluerte frekvensene og clincopathologic betydningen av mutasjoner i
KRAS
,
BRAF
, og
PIK3CA
, og
HER2
forsterkning, samt forholdet av disse genetiske endringer i avanserte CRC pasienter som var kandidater for anti-EGFR behandling i daglig praksis. Mutasjoner i
KRAS
,
BRAF
, og
PIK3CA
ble funnet i 104 (54,5%), 6 (3,1%), og 25 (13,1%) tilfeller av avansert CRC, respektivt. I tillegg MSI-H fenotype og
ble observert HER2
forsterkning i tre (1,6%) og 16 (8,4%) tilfeller, henholdsvis.
Utviklingen av målrettet terapi mot spesifikke molekylære endringer har bidratt til forvaltningen av avanserte CRC pasienter, og anti-EGFR legemidler brukes hos disse pasientene. Selv om tilstedeværelsen av
KRAS
mutasjon er nyttig for å utelukke pasienter som ikke vil dra nytte av anti-EGFR behandling, mange pasienter med villtype
KRAS
CRC vise negative reaksjoner på denne behandlingen. Til dags dato er det vurdert at
BRAF
mutasjoner,
PIK3CA
mutasjoner, og
HER2
presiseringer er knyttet til de underliggende mekanismene for disse stakkars svar [4,5]. I vår kohort, 16 av 87
KRAS
villtype tilfeller (18,4%) hadde
BRAF
mutasjoner eller
HER2
presiseringer; Videre kombinerte analysen viste at
KRAS
villtype pasienter med
BRAF
mutasjoner eller
HER2
presiseringer hadde den verste prognosen. Fordi målrettet terapi til
BRAF
mutasjoner og
HER2
presiseringer har betydelig overlevelsesgevinst i ulike kreft hos mennesker [10,18,19], behandling med anti-HER2 agenter anti-BRAF og kan være en god terapeutisk strategi for å forbedre overlevelse i CRC pasienter med villtype
KRAS
husing
BRAF
mutasjoner eller
HER2
presiseringer og som også har primær eller sekundær resistens mot anti-EGFR behandling.
til tross for et lite antall svulster med
PIK3CA
mutasjoner i vår årsklasse, fant vi at
PIK3CA
mutasjoner i stor grad overlappes med
KRAS
mutasjoner, som var i overensstemmelse med de foregående studier i europeisk [20] og [21] japanske CRC pasienter med metastasering. Foreløpig flere hemmere rettet mot
PIK3CA
signalveien har blitt utviklet, og disse agentene blir testet i prekliniske og kliniske studier av pasienter med CRC [22-24]. Vurderer vår resultat og tidligere studier [20,21] at
KRAS
mutasjoner ofte coexisted med
PIK3CA
mutasjoner, hemmer
PIK3CA
signalveien kan være et nyttig terapeutisk strategi å behandle CRC pasienter med
KRAS
mutasjoner.
Totalt 24 av 191 tilfeller (12,6%) hadde to eller flere onkogene endringer i denne studien. Det kan tolkes at disse genetiske endringer opptrer samtidig i den samme tumor, men det kan være på grunn av tumor heterogenitet. Under tumorprogresjon, onkogene endringer utvikle seg i en kloning, som bidrar til kreft metastasering og resistens. Vi brukte mer sensitive deteksjonsmetoder, og dermed mutasjoner i mindre tumor cellepopulasjon kan bli oppdaget. I administrerende CRC pasienter, er sensitive molekylær diagnostikk nyttig for å påvise mindre onkogene endringer, som kan være det neste målet i avanserte CRC pasienter med primær eller sekundær resistens mot førstelinje målrettet behandling. I vår kohort, ett tilfelle næret samtidig
KRAS Hotell og
BRAF
mutasjoner. Det er velkjent at
BRAF
mutasjoner er vanligvis oppdaget i
KRAS
villtype svulster, og at de er nesten gjensidig utelukkende med
KRAS
mutasjoner i CRC. Flere studier har rapportert at sjeldne tilfeller havn kombinert
KRAS Hotell og
BRAF
mutasjoner, som oppstår i mindre enn 0,02% [25,26]. Selv om tumorbiologi og prognosen for pasienter med samtidig
KRAS Hotell og
BRAF
mutasjoner har vært fortsatt usikkert, tyder tidligere forskning at disse samtidige mutasjoner er knyttet til tumorprogresjon som lymfeknutemetastase og høyere T scenen [25,27]. Videre store studier er nødvendig for å avklare forekomst og biologisk funksjon samtidig
KRAS Hotell og
BRAF
mutasjoner.
Tidligere studier med avanserte CRC pasienter med metastaser rapportert at ca. 34 ~ 45% av pasientene hadde
KRAS
mutasjoner [20,21,28]. Denne studien med koreanske CRC pasienter viste at hyppigheten av
KRAS
mutasjoner var 54,5%, og at disse mutasjonene ble sett hovedsakelig i kodon 12 og 13 (93,3%). Hyppigheten av
KRAS
mutasjoner i dette kullet var noe høyere enn i tidligere publiserte rapporter om metastatisk CRC pasienter [20,21,28]. Det er flere mulige forklaringer på det. Først innrullert vi bare avanserte CRC pasienter i denne gruppen, noe som kan forklare den høyere frekvens av
KRAS
mutasjoner. For det andre var det noen forskjeller i mutasjonsdeteksjonsmetoder. Vi analyserte mutasjonsstatus ved hjelp Cobas real-time PCR, som regnes for å vise høyere sensitivitet enn for andre deteksjonsmetoder.
Det har blitt rapportert at de fleste av
KRAS
mutasjoner i CRC pasienter forekomme i kodon 12 og 13. Denne studien viste også at
KRAS
mutasjoner ble sett hovedsakelig i kodon 12 eller 13 (93,3%). I vår
KRAS
mutasjon subgruppeanalyse, mutasjon av
KRAS
kodon 61 tendens til å bli assosiert med kortere total overlevelse, men det nådde ikke statistisk signifikans. Den prognostiske effekten av
KRAS
kodon 61 mutasjoner har blitt rapportert i flere tidligere studier, men med kontroversielle resultater [29]. Fordi forekomsten av
KRAS
kodon 61 mutasjoner er sjeldne, ytterligere store studier kan bidra til å avklare forholdet mellom disse mutasjoner og klinisk resultat.
Mutasjoner av
BRAF Hotell og
PIK3CA
ble påvist hos 3,1% og 13,1% av tilfellene, henholdsvis. Selv om frekvenser av disse mutasjonene ble vurdert å være lav, de var lik de tidligere studier i avansert CRC [20,21,28]. Etter avtale med forrige undersøkelse [30],
BRAF
mutasjoner ble assosiert med aggressiv CRC histologi, for eksempel høyere T scene og tilstedeværelse av lymfatisk invasjon. Selv om resultatene ikke statistisk signifikans, pasienter husing
BRAF
mutasjoner viste også kortere OS
Vi har evaluert to deteksjonsmetoder for
KRAS
mutasjoner i CRC prøver:. Cobas real -time PCR og Sanger-sekvensering. Det var en god korrelasjon mellom
KRAS
mutasjonsdeteksjon ved real-time PCR og at av Sanger-sekvensering, og real-time PCR viste høyere sensitivitet enn for Sanger-sekvensering. I vår kohort, 7 tilfeller av
KRAS
mutasjoner ble oppdaget av sanntids test som ikke ble oppdaget av Sanger-sekvensering test, spesielt fem saker for kodon 12 eller 13 og 2 saker for kodon 61. Sanger sekvenseringsmetode, utviklet i 1975, ble ansett som en av de grunnleggende mutasjon deteksjonsmetoder; synes imidlertid denne metode for å ha begrenset sensitivitet-et lavt nivå av det mutante allel kan være detekterbar ved denne metoden [31]. Omvendt er det real-time PCR test inkludert forskjellige kommersielle sett ansett for å være en meget sensitiv metode som viser fordelene ved påvisning
KRAS
mutasjoner [32]. Hittil har den betydelige intratumoral heterogenitet av molekylære forandringer og deres kliniske betydning for målrettet terapi er beskrevet i ulike svulster. I CRC, flere studier rapporterte den kliniske betydningen av
KRAS
heterogenitet i anti-EGFR behandling [5,33,34]. Norm et al. foreslo at et lavt innhold av
KRAS
mutante alleler var tilstrekkelig til å frembringe motstandsevne mot EGFR-monoklonale antistoffer, og terskelen i deres studie var 3 ~ 10% av mutant
KRAS
allele-frekvens som var usannsynlig for å bli detektert ved hjelp av Sanger-sekvensering [33]. Selv om flere studier er nødvendig for å validere disse resultatene og avklare rollen til de molekylære endringer i resistens mot EGFR behandling, nøyaktig deteksjon av disse mutasjonene har stor klinisk betydning.
I konklusjonen, har vi funnet at forekomsten av
KRAS
mutasjoner var 54,5% i koreanske avanserte CRC pasienter, som var hyppigere enn det som er rapportert i andre populasjoner.
BRAF
mutasjoner eller
HER2
presiseringer ble funnet i 16,1% av
KRAS
villtype pasienter, og dessuten kombinert analyse viste at
KRAS
villtype pasienter med
BRAF
eller
HER2
presiseringer hadde den verste prognosen.
PIK3CA
mutasjoner ble oftere observert i
KRAS
mutant type enn i villtype
KRAS
CRC pasienter.
