Abstract
Formål
Gjennomføring av effekter den kjemiske sammensetningen og antiproliferative mot kreftceller fra ulike biologiske deler av
Artemisia herba alba
.
Metoder
Eteriske oljer ble undersøkt ved gasskromatografi koplet til massespektrometri (GC-MS) og deres antitumor-aktivitet ble testet mot P815 mastocytom og BSR nyre carcinom cellelinjer; også, for å vurdere effekten på normale humane celler, ble oljer testet mot perifere mononukleære blodceller PBMC.
Resultater
Eteriske oljer fra blader og luftig deler (blanding av capitulum og blader) ble hovedsakelig komponert av oksygen sesquiterpenes 39,89% og 46,15% henholdsvis; capitulum olje som finnes i hovedsak monoterpener (22,86%) og monosykliske monoterpener (21,48%); estere utgjorde hovedfraksjonen (62,8%) av spindelen olje. Eteriske oljer av ulike biologiske deler studert viste en differensial antiproliferativ aktivitet mot P815 og BSR kreftceller; P815-celler som er de mest følsomme for den cytotoksiske effekt. Blader og capitulum eteriske oljer er mer aktive enn luftig deler. Interessant nok var ingen cytotoksisk effekt av disse essensielle oljer observert på perifere mononukleære blodceller.
Konklusjon
Våre resultater viste at den kjemiske sammensetningen variabiliteten av essensielle oljer avhenger av arten av botaniske deler av
Artemisia herba alba
. Videre har vi vist at differensial cytotoksiske effekten avhenger ikke bare av de essensielle oljer konsentrasjon, men også på målcellene og den botaniske deler av essensielle oljer som brukes
Citation. Tilaoui M, Ait Mouse H, Jaafari A, Zyad A (2015) Sammen Phytochemical Analyse av essensielle oljer fra ulike biologiske Deler av
Artemisia herba alba Hotell og deres cytotoksisk effekt på kreftceller. PLoS ONE 10 (7): e0131799. doi: 10,1371 /journal.pone.0131799
Redaktør: Rajesh Agarwal, University of Colorado Denver, USA
mottatt: 04.08.2014; Godkjent: 07.06.2015; Publisert: 21.07.2015
Copyright: © 2015 Tilaoui et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er innenfor papir
Finansiering:. arbeidet ble finansiert av et stipend fra CNRST (PROTARSIII, D61 /07), Rabat, Marokko
Konkurrerende interesser:. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer.
Innledning
Artemisia herba-alba plakater (Asteraceae) er en grønn-sølv flerårig dvergbusk vokser i tørre og halvtørre klima. Det skjer gjennom Middelhavet regionen i Nord-Afrika, Spania, ørkener av Sinai-halvøya, Midtøsten, Northwestern Himalaya, og i India.
Artemisia herba alba
Asso (ørken malurt, Armoise blanche (Fr.), chich (Arab.) Er en dverg busk med en rask vekst i tørre og varme klima og i gjørmete områder [1] .De ulike arter er morfologisk forskjellige fra hverandre avhengig av geografiske, miljømessige og klimatiske forhold. anlegget er grønn til lys grønn, med sterke, solide røtter. blomstringen tid og høsting er rundt mai /juni og fortsetter frem til oktober i enkelte områder [2] . Dette anlegget er brukt som smakstilsetning og som medisin urt for behandling av forkjølelse, hoste, tarmforstyrrelser og som et antidiabetikum [3, 4]. Undersøkelser på de medisinske egenskapene til
Artemisia herba alba
ekstrakter rapportert anti-diabetiker, leishmanicidal, antibakteriell og soppdrepende egenskaper [5, 6]. i løpet av de siste tiårene, studier på
Artemisia herba alba
ble fokusert på sine essensielle oljer. Deres sammensetning gjennom verden avdekket et høyt nivå av polymorfisme og førte til definisjonen av flere chemotypes. På grunn av deres betydning i duften bransjen, en rekke studier på
Artemisia herba alba
eteriske oljer har blitt publisert [7, 8]. To vurderinger er også tilgjengelig [9, 10].
I Spania, eterisk olje fra
Artemisia herba alba product: [8, 11] viste at monoterpene hydrokarboner og oksygen monoterpener er de mest tallrike skjeletter, men store mengder sesquiterpenes også ble funnet i enkelte populasjoner. Kamfer, 1,8-cineole,
p
cymen og davanone ble de store kjemiske forbindelser funnet. To oljetyper ble funnet for planter dyrket i Israel og Sinai de av cineole-thujane bornane type og pinan type med monoterpene skjeletter [8].
I Jordan, vanlige monoterpener var dominerende og de viktigste komponentene var α- og beta thujones, klassifisere
Artemisia herba alba
som å være en thujone chemotype [12]. I Marokko, ble seksten chemotypes funnet, og tolv av dem har monoterpener som viktige komponenter av essensielle oljer. De resterende fire chemotypes, har sesquiterpene skjeletter som hovedfraksjonen. Undersøkelser rapporterte ingen sammenheng mellom chemotypes og geografisk fordeling [13].
I Algeries eterisk olje, monoterpener var de viktigste komponentene, i hovedsak kamfer, a- og b-thujones, 1,8-cineole og chrysanthenyl derivater [2 , 14]. I tunisiske olje, ble oksygen monoterpener funnet å være de viktigste komponentene i
Artemisia herba alba
olje utvunnet fra luftig deler [15, 16].
Dette notatet rapporterer den kjemiske sammensetningen og den biologiske aktiviteten mot kreft cellelinjer av essensielle oljer, hentet fra ulike biologiske deler av
Artemisia herba alba
samlet på Er-Rachidiya (Sentral–regionen av Marokko).
Materialer og metoder
Etikk uttalelse
Artemisia herba alba
Asso anlegget ble høstet i Imilchil, Errachidia distriktet sentrale Øst fra Marokko (W 5 ° 39’25.43 «- N 32 ° 12’15.059») i juni 2007 (Ingen spesielle tillatelser var nødvendig for de beskrevne feltstudier eller for innsamling av plantemateriale) .De feltstudier ikke involverer truet eller beskyttet arter
Menneskelige perifere mononukleære blodceller (PBMC). den blodprøver ble samlet inn fra forfatterne av dette manuskriptet (Mounir Tilaoui, Hassan Ait mus, Abdeslam Jaafari og Abdelmajid Zyad) under medisinsk overvåking. Godkjent av Sultan Moulay Slimane Universitetet komité, akkreditering No 2008 /01-2014. Forfatterne motta skriftlig informert samtykke fra blodgivere.
Plantemateriale
Artemisia herba alba
Asso anlegget ble høstet i Imilchil, Errachidia distriktet, sentrale østlige regionen av Marokko ( W 5 ° 39 «25.43 «- N 32 ° 12» 15.059″) i juni 2007 (Ingen spesielle tillatelser var nødvendig for de beskrevne feltstudier eller for innsamling av plantemateriale). Hele teleskopdeler (blanding av capitulum og blader) på isolerte blader, capitulum (blomsterhodet) eller stengler ble skygge-tørket ved romtemperatur med ventilasjon. Det oppnådde tørrstoffet ble isolert separat fra anlegget, hakket og straks hydrodistilled for å oppnå eteriske oljer.
Gasskromatografi og massespektroskopi (GC-MS)
Analytisk gass-kromatografi ble utført ved anvendelse av et spor GC ULTRA gasskromatografi system utstyrt med en VB-5 (metylpolysiloksan med 5% av fenyl) kolonne (30 x 0,25 mm, 0,25 mikrometer filmtykkelse). Bærergassen var helium ved en strømningshastighet på 1,4 ml /min. Kolonnetemperaturen ble først holdt ved 40 ° C i 2 minutter, og deretter gradvis økt til 300 ° C ved en hastighet på 20 ° C /min. Prøver (1 ul, passende fortynnet i etylacetat) ble injisert ved 220 ° C.
Massespektrometri analyse ble utført på en
Polaris Q MS
koplet til GC ULTRA med en ionisk felle massedetektor drifts i EI-modus (70 eV). Komponenter identifikasjon ble gjort av GC og GC-MS (i henhold til fragmentering mønstre) og ved hjelp av NIST (National Institute of Standards and Technology) MS Søk database.
Cell kultur
murine mastocytom celle linje (P815, ATCC: TIB64) og nyrekreft cellelinjer av hamstere (BSR, ATCC: CCL10) var velvillig donert av laboratoriet av Dr. Michel Lepoivre, 841 institutt for biokjemi ved Universitetet i Paris XI, Frankrike. Cellelinjene ble dyrket i DMEM (Dulbeccos modifiserte Eagles medium) supplert med 10% varme-inaktivert føtalt kalveserum (Gibco BRL, Cergy Pontoise, Frankrike), penicillin G- streptomycin (1%), og 0,2% natriumbikarbonat (Sigma) ved 37 ° C i en fuktig atmosfære som inneholder 5% CO
2.
Cvtotoksisitetsmålinq
start~~POS=TRUNC Inokulant av 2 x 10
5 P815 celler /ml og 4,8 x 10
4 BSR celler /ml ble anvendt i den eksponensielle vekstfase. Cellulære levedyktigheten ble bestemt ved MTT-reduksjon analyse ved bruk av (3- [4,5-dimetyltiazol-2-yl] -2,5-difenyl-tetrazoliumbromid, MTT) [17]. BSR og P815-cellelinjer ble høstet fra kulturer som starter ved den eksponensielle vekstfase. Etter en fosfatbuffersaltløsning (PBS) vaske, ble de høstede celler helles i flatbunnede 96-brønners mikrotiterplater inneholdende 100 ul av fullstendig medium per brønn. Deretter ble cellene behandlet med eteriske oljer oppløst i dimetylsulfoksyd (DMSO) med de passende konsentrasjoner (alle essensielle oljer ble studert her som er oppløst i DMSO, er oppløselige i dyrkingsmedia). Kontrollceller ble behandlet med DMSO, ved en sluttkonsentrasjon 0, 5% (v /v). Etter 48-timers inkubering i en fuktig atmosfære ved 37 ° C, 5% CO
2, 20 ul MTT-løsning (5 mg /ml PBS) ble tilsatt. Etter 4-timers inkubering under de samme betingelser, til spaltning av MTT-formazan ved metabolsk aktive celler ble kvantifisert ved å skanne platene ved 540 og 630 nm ved hjelp av et Multiskan EX apparat. Cellelevedyktigheten ble beregnet ved formelen: hvor, OD: Optisk tetthet, Controlled celler: DMSO + celler, OD av essensielle oljer:. Behandlede celler
Effekt på humane perifere mononukleære blodceller (PBMC)
Denne test ble realisert for å evaluere effekten av de essensielle oljer på humane normale celler ved anvendelse av MTT kolorimetrisk analyse som beskrevet ovenfor. Levedyktighet av PBMC celler ble evaluert ved trypan bleu fargestoffeksklusjons hjelp Malassez hemocytometer. Cellekonsentrasjoner ble bestemt som cellene ble blandet med 0,2% trypanblått og tellet mikroskopisk med en Malasez hemocytometer ved hjelp av følgende prosedyre: 10 ul cellesuspensjon blandet med 40 ul 0,2% trypanblått og 10 mL av den samme blanding ble overført til Malassez hemocytometer. Prosentandelen av celle levedyktighet ble beregnet via formelen:.% Celleviabilitet = levedyktige celler (uten flekker) /totalt antall celler x 100. Celleviabilitet før cytotoksisitet forsøket var over 98%
For å isolere PBMC, blodprøver ble oppsamlet fra friske donorer i hepariniserte rør. Blodprøven ble fortynnet med det samme volum av PBS. Etter at den fortynnede blodprøven var forsiktig lagdelt på Ficoll-Hypaque (Amersham Pharmacia Biotech AB). Blandingen ble sentrifugert under i 2000tr /mn 30 mn. Den uforstyrret lymfocytter laget ble forsiktig overført ut. Lymfocyttene ble vasket to ganger med fosfat-bufret oppløsning (PBS) og resuspendert i DMEM medier. Essensielle oljer ble tilsatt i de samme konsentrasjoner i stand til å indusere en cytotoksisk aktivitet mot tumorceller (P815 og BSR). PBMC ble sådd i en tetthet på (1 x 10
5-celler /ml) i 96 brønners plater.
Statistisk analyse
Alle eksperimentene ble utført i tre replikere. Data er rapportert som gjennomsnitt ± S.D. n = 3. signifikans av forskjeller ble beregnet ved bruk av Students parede t-test. Den forskjell ble ansett statistisk signifikant når p-verdien var mindre enn 0,05. Alle statistiske analyser ble utført ved hjelp av STATISTICA programvaren.
Diskusjon
Resultater og
Kjemisk sammensetning av essensielle oljen
Den kjemiske sammensetningen av den essensielle oljen ble undersøkt ved hjelp av både GC og GC -MS teknikker (fig 1). Tabell 1 viser komponentene som er identifisert i den essensielle oljen fra ulike deler av
Artemisia herba alba
(capitulum, blader, luftig deler og stilker). Tabell 2 viser at essensielle olje av bladene er sammensatt hovedsakelig av oksygenerte sesquiterpenes (39,89%), sesquiterpenes (29,04%) og estere (23,97%). Monoterpener med thujone skjelett (1,24%) og monoterpener med pinan skjelett (4,48%) er representert ved lave innholdet. Disse forbindelser er representert ved variable konsentrasjoner i andre deler av planten undersøkt: β- thujone (1,24%) i bladene og (6,14%) i antennen delen, bisabolon oksid (17,55) i luftdeler og 10,27% i bladene. Ikke desto mindre, (+) 2,3,6,7-tetrametyl, 4,4aα, 5,8,8aβ, 9β, 9aα, 10,10aα-decahydroanthracen-9-ol og β-Guaiene er fraværende i andre deler av plante. I stengler eterisk olje, estere utgjør hovedfraksjonen med 62,8%. På den andre siden, er essensielle olje av capitulum forholdsvis rikt på terpenoider sammenlignet med andre biologiske deler av anlegget; oksygen monoterpener og monosykliske monoterpener er den mest tallrike med henholdsvis 22,86% og 21,48%. Andre viktige forbindelser er representert ved de sesquiterpenes (12,92%), de monoterpener med thujane skjelett (10,91%), og de monoterpener med skjelett pinan (9,24%), mens monoterpener med bornane skjelett ble funnet med lav prosentandel (3,31%).
A: blader, B: capitulum, C: Stengel, D:. Aerial deler (Blanding av blader og capitulum)
Den essensielle oljen utvinnes fra antenne deler (blanding av capitulum og blader) er svært rik på oksygen sesquiterpenes (46,15%) og pinan skjelett (26,02%), andre bestanddeler er representative av monoterpene skjelett med thujane (10,78%), monoterpener med bornane skjelett (8,98%) og monosyklisk monoterpener (6,59%). I tunisiske
Artemisia herba alba
eterisk olje, oksygen monoterpener og oksygen sesquiterpenes representerer stor brøkdel av oljen [18].
Thujone ble rapportert som den viktigste komponenten i den essensielle oljen fra Tunisia ( 64%), mens det var fraværende i Spania for alle de essensielle oljer studert [8, 11]. I denne studien thujone konsentrasjon var 1,04%. I tidligere studier, Benjilali og Richard identifisert syv chemotypes med høy konsentrasjon varierende mellom 34% og 94% av α og β thujone i
Artemisia herba alba
eteriske oljer innhentet fra ulike marokkanske regioner [19, 21]. Også i Algerie, ble α thujone og β thujone karakteriseres som de viktigste komponentene i den undersøkte olje [22,23]. I vår undersøkelse, β thujone konsentrasjon var 6,14%, men α thujone ble ikke påvist i olje antenne deler. På grunnlag av resultatene oppnådd ved Ouyahya et al [10] for tre marokkanske Artemisia oljer (
Artemisia Negri
,
Artemisia mesatlantica Hotell og
Artemisia herba alba
) det ser ut at den prosentvise sammensetning av α og β thujone varierer i henhold til den geografiske vekstplassen, årstid, miljø- og klimaforhold.
det har blitt rapportert i nesten alle prøver som er beskrevet i litteraturen at cineol er en av de mest vanlige bestanddeler i
Artemisia herba alba
eterisk olje. Det har blitt funnet som en viktig komponent i den essensielle oljen fra Spania (østlige og sentrale Spania) [8, 11], Israel [8], Egypt [24], og i andre marokkanske steder [13]. Konsentrasjonen når høye verdier (bedre enn 40%) i Spania og Israel [11, 8]. I Tunisia ingen eller svært lave verdier ble funnet for 1,8-cineole konsentrasjon [15,16], som essensielle oljer fra Algerie og Jordan [12, 14]. I denne studien 1,8-cineole konsentrasjon varierte mellom 1,49% i luftig deler og 20,37% i bladene.
Kamfer ble funnet i høye konsentrasjoner i viktige oljeprøver fra Sør-Tunisia [18] og Algerie (19,14%) [14]. I Marokko, en tidligere studie viste at kamfer er en av de mest støtt komponentene i
Artemisia herba alba
eterisk olje. Fem chemotypes ble definert som kamfer type oljer [20]. I vårt arbeid, har vi funnet 5,12% av kamfer.
Chrysanthenone er et vanlig sammensatt i oljer fra Israel, Spania (28,2% -36,4%), Tunisia (17%) og Algerie (22,5% prøve fra Sidi Aissa ) [2], og til og med fra marokkansk andre prøver (77%). Her var det ikke påvist i luftig deler fra
Artemisia herba alba
; Det var heller til stede som en mindre konsentrasjon i capitulum (1,2%). Blant forbindelsene identifisert i andre
Artemisia herba alba
oljer, og ikke oppdaget i denne studien, fravær av davanon er verdt å merke seg; Det har blitt funnet å være hovedbestanddelen i enkelte populasjoner av
Artemisia herba alba
fra andre regioner av Marokko [21, 25] og som en mindre bestanddel i prøver fra israelsk [8, 26] og ørkenen Sinai og omgivelser [8, 27]. I Spania når sin konsentrasjon høye verdier (bedre enn 39,1%), men det er fraværende i andre essensielle oljer prøver [11].
Våre resultater viser at essensielle oljer fra ulike botaniske deler av
Artemisia herba alba
studerte ikke inneholder kamfer, thujone, og 1,8 cineole som hovedkomponenter som andre marokkanske [22], algeriske [2] og israelske typene av essensielle oljer. Videre vår studie identifiserer nye molekyler som ikke har blitt sitert i andre studier og mulig karakterisering av en ny chemothypes (verbenol, trans α bisabolone, Farnesene epoksydet) av
Artemisia herba alba
eteriske oljer (fig 2). Trans α bisabolone og farnesene epoksydet, har blitt rapportert å vise potensielle antitumor-aktivitet [28, 29].
Gjennom studiet av de essensielle oljer av GC-MS, har vi vært i stand til å identifisere og kvantifisere sammensetningen av de essensielle oljer i
Artemisia herba alba
, som varierer i forskjellige deler av planter. Disse kvalitative og kvantitative forskjeller i den kjemiske sammensetning av eteriske oljer kan skyldes flere faktorer, slik som geografisk faktorer (location), klimatiske virkninger av planter, innhøstingen årstid, av jordsmonnet, alderen på plantedeler (ung eller voksen) , staten av plantemateriale brukes (tørket eller frisk), den delen av planten som brukes, tidspunkt for innsamling, utpakkingen, genetisk variasjon (chemotype), [30] osv
Våre funn er i samsvar med andre rapporter som viste hvordan plantevekst påvirkes av genetiske og miljømessige faktorer, og hvordan disse faktorene bidrar til forskjeller i den kjemiske variasjonen av essensielle oljer av planter med ulike chemotypes [31, 32]. Den kjemiske variant av essensielle oljer av ulike chemotypes av
thymus
arter fra forskjellige steder eller vokser i samme habitat har blitt tilskrevet forskjellen i miljømessige og genetiske faktorer [31, 33, 34, 35]. Videre økologiske faktorer, klimatiske egenskaper, spesielt, lys og temperatur, har også blitt rapportert å påvirker produksjonen av essensielle oljer, så vel som andre aktive midler i planter [32, 36, 37, 38, 39].
Anticancer aktivitet av
Artemisia herba alba
eteriske oljer
Kjemoterapi ikke gir betydelige fordeler, og det er ofte knyttet til systemisk toksisitet og narkotika motstand. Således søker etter nye terapeutiske midler som er i stand til å omgå kjemoterapi bivirkninger, forblir en mer effektiv for å redusere toksisitet og øke deres effektivitet mot cancer. Derfor gjennomførte vi
in vitro
anticancer aktivitet av essensielle oljer utvunnet av ulike biologiske deler av
Artemisia herba alba
vekst i Marokko.
Artemisia herba alba
er en hyppig komponent av urteblandinger som brukes i tradisjonell medisin [40, 3, 4].
In vitro
anti-tumor cytotoksisitetsassayer av
Artemisia herba alba
oljer ble utført mot P815 og BSR cellelinjer. Disse oljene er: de essensielle oljer av blader, capitulum og luftig deler. De oppnådde resultater er gjengitt i figurene 3 og 4; er det vist at alle essensielle oljer har en viktig doseavhengig cytotoksisk effekt overfor P815 og BSR-cellelinjer. Men i P815 cellelinje (figur 3) ble redusert cytotoksisitet i følgende rekkefølge: essensielle olje av bladene essensielle olje av capitulum essensielle olje av antenne deler. Konsentrasjonen fører til 50% cytotoksisitet (IC
50) var i ferd med 15μg /ml (P 0,05) for later olje og 36μg /ml for capitulum essensielle oljen, men; essensielle olje av antenne deler viste ikke en viktig cytotoksisitet og nådde ikke IC
50 (P 0,05). I BSR-cellelinjen (figur 4), cytotoksisiteten indusert av eteriske oljer undersøkt, viser at capitulum olje (IC
50 = 20 ug /ml, P 0,05)) er svakt følsom for etterlater olje (IC
50 = 26μg /ml, P 0,05) og mer sensitiv enn luftig deler oljer (IC
50 = 50 ug /ml) (P 0,05). Resultatene tyder på at cytotoksisitet effekten kan tilskrives natur kjemisk forbindelse innhold i essensielle oljer utvunnet fra ulike botaniske deler av
Artemisia herba alba Hotell og på kreftcellelinjer målrette.
P815 celler behandlet med ulike konsentrasjoner av essensielle oljer fra antennen deler (EOAP), blader (EOL) og capitulum (EOC). Linjer viser gjennomsnittlig prosent ± SD. * P. 0,05
BSR celler behandlet med ulike konsentrasjoner av essensielle oljer fra antennen deler (EOAP), blader (EOL) og capitulum (EOC) av
Artemisia herba alba
for 48h. Bar Grafen viser gjennomsnittlig prosent ± SD. * P 0,05.
På bakgrunn av litteraturdata er det mulig å hypoteser om at de cytotoksiske effekter utstilt ved eteriske oljer, under disse eksperimentelle forhold, kan være relatert til en samlet virkning av forbindelsene som finnes i oljer, spesielt til sesquiterpene forbindelsene [41, 42]. Den essensielle olje av blader, som presenterer en høyere konsentrasjon av sesquiterpenes (68,93%) og spesielt oksygenerte sesquiterpenes (39,89%), har vist seg å være mer aktive enn andre essensielle oljer utvunnet fra
Artemisia herba alba
. Faktisk har de anticancer aktivitet av sesquiterpenes blitt rapportert i litteraturen. Det er funnet at α-humulene er aktive mot A-549, DLD-1 og LNCaP-cellelinjer [43, 44, 45]. Også caryophyllene utstilt antiproliferativ aktivitet mot K562 cellen [46]. Derfor våre resultatene på tumorcellelinjer tyder på at den anticancer aktivitet av de essensielle oljer fra forskjellige biologiske deler av
Artemisia herba alba
kan være relatert til aktive sesquiterpenes knyttet til synergismen av andre naturprodukter til stede i den essensielle oljen sammensetning.
forskjellen i cytotoksisk aktivitet av essensielle oljer utvunnet fra ulike biologiske deler, tyder på at kreftcellelinjer studert forskjellige med hensyn til deres følsomhet for de stoffene som finnes i essensielle oljer av
Artemisia herba alba
og de molekylære egenskaper i cellene også. En studie av cytotoksisiteten indusert av forskjellige essensielle oljer i
Saccharomyces cerevisiae
viser at disse celler er mer sensitive for
Artemisia herba Alba
, denne cytotoksisitet følges av induksjon av cytoplasmatiske mutasjon, noe som indikerer mitokondriell skade og nedskrivning av oksidativ metabolisme [47]. I vår studie, selv om de essensielle oljer i noen deler av planten som ikke er vist en cytotoksisk effekt mot PBMC (EOC, og EOL), noen av dem viser en cytotoksisk effekt på PBMC (EOAP). På den annen side, den mikroskopiske sammenligning av levedyktige kreftceller, og de PBMC ble behandlet med 50 ug /ml av de essensielle oljer fra blader og capitulum (EOC og EOL), vist etter 24 lysis av tumorcellelinjer (70%) ved hjelp av bleu trypan eksklusjon metoden. Mens, gjør PBMC ikke demonstrere bleu farge som gjenspeiler deres levedyktighet, var denne observasjonen ikke vist etter behandling med EOAP som viser en lyse effekt mot PBMC (fig 5). Videre Tilaoui et al, (2011) rapporterte den cytotoksiske aktiviteten av antennen del essensielle olje av
Artemisia herba alba
på CEM kreftcellelinjer med IC
50 = 6μg /ml [40]. Cytotoksisiteten av
Artemisia herba alba
eteriske oljer kan være relatert til produksjon av reaktive oksygenarter (ROS). Det er rapportert at eksponering av eteriske oljer i høy grad påvirke celleveggen og membraner og skader mitokondrier. Dette kan føre til mitokondriell dysfunksjon og til et radikal utbrudd av reaktive oksygenforbindelser som utløser geninduksjon og apoptotisk celledød [48, 49]. Faktisk er mitokondriell dysfunksjon kjent for å øke intracellulære konsentrasjoner av DNA-skadende arter som superoksyd og peroksydioner knyttet til apoptotisk død [50, 51].
PBMC ble fremstilt fra humane normale donorer ved hjelp av Ficoll-hypaque tetthet sentrifugering. Celler ble inkubert i 96-brønners mikrotiterplater i nærvær av forskjellige essensielle oljer (essensielle olje av bladene: EOL, eteriske oljer av capitulum: EOC og eteriske oljer av teleskopdeler: EOAP) ved forskjellige konsentrasjoner (0, 4 ug /ml- 50 ug /ml). Etter 48 timers inkubering, ble levedyktighet bestemt ved anvendelse av MTT-analyse som beskrevet i materialer og metoder. Bar Grafen viser gjennomsnittlig prosent ± SD. * P 0,05.
Tidligere studier har vist at planter er kjent for å vise variasjonen i konsentrasjonen av de bioaktive fytokjemikalier avhengig indre faktorer som alder av anlegget, og av ytre faktorer som den geografiske klima, circadian rytme, arten av jordsmonnet, og årstid. Den cytotoksiske aktivitet av eteriske oljer kan være på grunn av den synergiske effekten av alle terpenene i den essensielle oljen, eller kanskje finnes det noen andre aktive forbindelser som er ansvarlig for den antiproliferative aktivitet av den essensielle olje, som fortjener oppmerksomhet i noen fremtidige studier [52, 53]. Det må imidlertid være oppmerksom på at essensielle oljer er komplekse blandinger av mange molekyler, og man kan lure på om deres biologiske effekter er et resultat av synergi mellom alle molekyler eller bare gjenspeiler aktivitetene til de viktigste molekyler tilstede ved de høyeste konsentrasjonene i henhold til gass-kromatografisk analyse. Vanligvis er de viktigste komponentene funnet å gjenspeile ganske godt de biofysiske og biologiske funksjonene til de essensielle oljer fra hvilke de ble isolert, med amplitudene til deres effekt er avhengig av deres konsentrasjon når de testes på egenhånd eller i eteriske oljer [54 ]. Dessuten kan forskjellige effekter som observeres mellom kreftcellelinjer være relatert på målet på disse cellene, som P815 er en suspensjon cellelinje og BSR er en adherente cellelinjer. Vår resultat er i samsvar med Kumura et al, (2004), som viser at inhibering av celleproliferasjon ved Methotrexate er forskjellig i suspensjon (FM3a, 2B4 og THP-1) og tilhenger (NIH3T3 og V79) celler [55].
Effekt av
Artemisia herba alba
essensielle oljer mot PBMC
de fleste klinisk godkjente legemidler mot kreft er preget av et smalt terapeutisk vindu som resulterer i hovedsak fra høy systemisk toksisitet av narkotika i kombinasjon med en tydelig mangel på selektivitet tumor [56]. I denne forbindelse har vi testet våre eteriske oljer mot de humane perifere mononukleære blodceller (PBMC) for å bestemme deres virkning mot normale celler. De oppnådde resultater er vist i figur 5. Det er vist i denne figuren at den essensielle olje av teleskopdeler som forårsaker omkring 50% av cytotoksisitet i PBMC. Imidlertid ble de essensielle oljer av blader og capitulum vist i en konsentrasjon som er i stand til å indusere en cytotoksisk aktivitet mot tumorceller (P815 og BSR); ingen cytotoksisitet effekt ble observert (figur 6), men i stedet for at blader og capitulum oljer produsert en svak proliferativ effekt på normal PBMC med 105% og 102% av levedyktighet (P 0,05) etter 48 timer for behandling av henholdsvis blader og capitulum . (Fig 5). Den differensielle cytotoksiske virkning mot PBMC og kreftceller (Fig 6) kan forklares ved forskjellen av metabolismen av hver cellelinjetype. Det kan også være på grunn av den differensielle ekspresjonen av genene, og dermed moduleringen av aktiviteten av essensielle oljer. Lignende observasjoner
in vivo
er også kjent, der det har blitt sett på som et ekstrakt utstillinger antiperoxidative og pro-oksidativ effekt for hjerte- og levervevet henholdsvis [57]
EOC. Eteriske oljer av capitulum; EOL: essensielle oljer av blader; EOAP: essensielle oljer av antennen deler (blanding av blader og capitulum). Bar Grafen viser gjennomsnittlig prosent ± SD. * P 0,05.
Konklusjon
I sammendrag, dette arbeidet bekrefter svært viktig kjemisk variasjon i
Artemisia herba alba
essensielle oljer. Så vidt vi kan undersøke, kan en slik studie betraktes som den dype detaljert rapport om den kjemiske sammensetningen og
in vitro
anticancer aktivitet av de essensielle oljer utvunnet fra stengler, blader, capitulum og blanding av capitulum og blader av
Artemisia herba alba
. Videre denne studien identifiserer nye molekyler som ikke har blitt sitert i andre studier og mulig karakterisering av nye chemotypes av
Artemisia herba alba
essensielle oljer. Antitumoraktiviteten av de essensielle oljer fra forskjellige biologiske deler av
Artemisia herba alba
er blitt bestemt omfattende to mot cancercellelinjer P815 og BSR. Total, P815-cellelinjer er mer følsomme enn BSR-cellelinjer til essensielle oljer virkning; våre resultater tyder på at blader og capitulum eteriske oljer er mer cytotoksisk enn luftig deler studert. Imidlertid ble ingen cytotoksisk effekt av disse essensielle oljer observert på de humane normale celler, bortsett fra en svak proliferativ effekt. Det virker sannsynlig at
Artemisia herba alba
kunne spille en viktig rolle i kampen mot kreft. Åpenbart bestemme det bioaktive stoffet (e) i
Artemisia herba alba
eteriske oljer som hemmer kreft cellelinjer spredning vil trenge ytterligere undersøkelser, for å avklare virkningsmekanismen og deres potensielle bruk.
Takk
forfatterne ønsker å takke Prof. Khalid Chaouch (Engelsk institutt, fakultet for litteratur og Human Sciences) for gjennomgang av manuskriptet.
