Abstract
Nøyaktig urinanalyser for blærekreft (BCA) deteksjon ville komme både pasienter og helsevesen. Gjennom genomisk og proteomikk profilering av urin komponenter, har vi tidligere identifisert et panel av biomarkører som kan utkonkurrere dagens urinbaserte biomarkører for ikke-invasiv påvisning av BCA. Heri, rapporterer vi den diagnostiske nytten av ulike multivariate kombinasjoner av disse biomarkører. Vi utførte en case-kontrollert valideringsstudie der annullert urin fra 127 pasienter (64 tumorbærende fag) ble analysert. Urin konsentrasjoner av 14 biomarkører (IL-8, MMP-9, MMP-10, SDC1, CCL18, PAI-1, CD44, VEGF, Ang, CA9, A1AT, OPN, PTX3, og APOE) ble vurdert ved enzymbundet immunosorbent-assay (ELISA). Diagnostisk ytelsen til hver biomarkør og multivariate modellene ble sammenliknet med mottaker opererer karakteristiske kurver og chi-kvadrat test. En 8-biomarkør modell oppnås den mest nøyaktige BCA diagnose (sensitivitet 92%, spesifisitet 97%), men en kombinasjon av tre av de 8 biomarkører (IL-8, VEGF, og APOE) var også meget nøyaktig (sensitivitet 90%, spesifisitet 97%). Til sammenligning oppnådde kommersiell BTA-Trak ELISA test en sensitivitet på 79% og en spesifisitet på 83%, og annulleres urin cytologi oppdaget bare 33% av BCA saker i samme årsklasse. Disse datashow at en multivariabel urin-baserte analysen kan betydelig forbedre nøyaktigheten av ikke-invasiv BCA deteksjon. Ytterligere valideringsstudier er i gang for å undersøke den kliniske nytten av dette panelet av biomarkører for BCA diagnose og sykdom overvåking
Citation. Goodison S, Chang M, Dai Y, Urquidi V, Rosser CJ (2012) En Multi -Analyte analyse for ikke-invasiv påvisning av blærekreft. PLoS ONE 7 (10): e47469. doi: 10,1371 /journal.pone.0047469
Redaktør: Irina Agoulnik, Florida International University, USA
mottatt: 28 juni 2012; Godkjent: 11 september 2012; Publisert: 19 oktober 2012
Copyright: © Goodison et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av forskningsmidler fra Flight Attendant Medical Research Institute (CJR), Florida Department of Health James og Esther kong teamet Science Award 10KT-01 (CJR), og National Cancer Institute RO1 CA116161 (SG). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. SG, VU og CJR er ansatte /aksjonærer Nonagen Bioscience Corp. Videre er det er ingen patenter utstedt, produkter under utvikling eller markedsført produkter å erklære. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer. MC og YD har erklært at de ikke har et konkurrerende interesse.
Innledning
Den ikke-invasiv påvisning og overvåking av blærekreft (BCA) er fortsatt en utfordring. Annullert urin cytologi (HVO) er fortsatt den mest etablerte urin-baserte analysen for dette formål, men mens HVO har en spesifisitet på 93%, lider analysen fra lav følsomhet (25-40%) og observatør-avhengige variasjon [1] .Commercial tester som måler kjernematrise protein (NMP-22) og blære tumor antigen (BTA) har dukket opp som diagnostiske urinproteinprøver for BCA, men disse enkeltmarkør-analyser mangler spesifisitet HVO [2], [3]. Konseptet at tilstedeværelse eller fravær av en molekylær markør skal hjelpe til klinisk evaluering har vist seg ikke å være tilfelle. Dette er ikke overraskende når en tenker på variasjon mellom individer, krysstale mellom molekylære stier, og heterogenitet av solide svulster.
Ankomsten av high-throughput teknikker har gitt en utvikling fra enkelt markør forskning for å en mer global vurdering strategi, og vi har brukt disse til å identifisere lovende nye biomarkører for BCA. Bruke genomikk [4] og proteomikk [5] tilnærminger for å profilere løselige og cellulære komponenter av annullert urin, har vi identifisert et panel av biomarkører som viser lover for utvikling i nøyaktige analyser for non-invasiv BCA gjenkjenning. Vi har utført en rekke valideringsstudier [6] – [9] for å evaluere potensielle kliniske nytten av en rekke av disse biomarkører. I denne studien kombinert vi data om 14 av våre kandidat biomarkører i en kohort av 127 individer for å utlede en nøyaktig og robust multivariat analyse for ikke-invasiv påvisning av BCA.
Pasienter og metoder
Prøve og datainnsamling
Under Institutional Review Board godkjenning og informert samtykke (IRB # 560-2006), annullert urinprøver, og tilhørende klinisk informasjon ble prospektivt samlet inn en urin-vev bank. Før en hvilken som helst type terapeutisk intervensjon, ble ca. 100 ml latt urin erholdt fra hvert emne. Femti milliliter urin ble anvendt for kliniske laboratorieanalyser pr standardprosedyrer. De resterende urin prøve ble tildelt et unikt identifikasjonsnummer før umiddelbar laboratorium behandling. Hver urinprøve ble sentrifugert ved 600 x
g
4 ° C i 5 minutter. Supernatanten ble dekantert og alikvotert, mens urin pellet ble hurtigfrosset. Både supernatanten og pelleten ble lagret ved -80 ° C før analyse. Proteininnhold av aliquoter ble målt ved anvendelse av Pierce et 660-nm Protein Assay Kit (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) og et Nanodrop spektrofotometer (ND-1000, ThermoScientific, Wilmington, DE, USA). Vevet banken ble spørres etter egnede prøver for analyse, som inkluderte ikke-sammenhengende prøver fra 127 individer. Studien kohort besto av 63 personer uten tidligere historie med urothelia cellekreft, brutto hematuri, aktiv urinveisinfeksjon eller urolithiasis (65% med annullere symptomer og 35% med mikroskopisk hematuri) og 64 personer med nylig diagnostisert urothelial cell carcinoma. Prøver fra pasienter med kjent nyresykdom eller dokumentert nyresvikt ble ikke inkludert. Ifølge International Consensus Panel on blære tumor markører [10], dette kohort fungert som en fase II (valideringsstudie). Data rapporteres ved hjelp av Stard kriterier [11]. Alle forsøkspersonene ble evaluert i poliklinisk Urologi klinikken. Urinanalyse og VUC ble utført på alle fag. Alle fag gjennomgikk kontor cystoskopi og aksial avbildning av magen og pelvis.In kreften gruppen, postoperativ histologisk bekreftelse på urothelial cellekreft, inkludert grad og stadium, ble registrert. Relevant informasjon på klinisk presentasjon, iscenesettelse, histologisk gradering [12], [13] og resultatet er presentert i tabell 1. Median oppfølging av våre kontroll- og kreft kohorter ble 11,5 og 12,0 måneder, henholdsvis.
Enzyme-linked immunosorbentbestemmelser for 14 Urin Biomarkører og Hemoglobin
Levels of human interleukin 8 (IL-8, Cat # ab46032 Abcam, Cambridge, MA, USA), Matrix metalloproteinase 9 (MMP-9, Cat # DMP900 R D Systems Inc., Minneapolis, Minnesota, USA), Syndecan (SDC-en, Cat # ab46507 Abcam, Cambridge, MA, USA), chemokine (CC motiv) ligand 18 (CCL18, Cat # ab100620 Abcam, Cambridge , MA, USA), plasminogenaktivatorinhibitor 1 (PAI-1, Cat # EA-0207 Signosis Inc., Sunnyvale, CA, USA), CD44 (Cat # ab 45912Abcam, Cambridge, MA, USA), Vaskulær endotelial vekstfaktor ( VEGF, Cat # 100663 Abcam, Cambridge, MA, USA), angiogenin (ANG, katt # CK400 CellSciences, Canton, MA, USA), karbonanhydrasehemmere 9 (CA9, Cat # DCA900 R D Systems Inc., Minneapolis, Minnesota, USA), Alpha 1-antitrypsin (A1AT, Cat # ab108799 Abcam, Cambridge, MA, USA), osteopontin (OPN, Cat # DOST00 R D Systems, Inc., Minneapolis, Minnesota, USA), Pentraxin 3 (PTX3, Cat # DPTX30 R D Systems, Inc., Minneapolis, Minnesota, USA) og menneskelig Apolipoprotein E (APOE, Cat # KA 1031 Abnova, Walnut, California, USA) ble fulgt i urinprøver ved hjelp av kommersielle enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA) . En kommersiell analyse (BTA-Trak © Ca # 662150 Polymedco Inc. Cortlandt Manor, NY, USA) for BCA deteksjon, og som er tilgjengelig i ELISA format, ble også overvåket i hver urinprøve. I tillegg ble en kommersielt tilgjengelig ELISA-analysen brukes til å måle nivået av urin hemoglobin (Cat # E88-135 Bethyl Laboratories Inc., Montgomery, TX, USA) .ELISA analyser ble utført i henhold til produsentens instruksjoner. Kalibreringskurver ble fremstilt under anvendelse av rensede standarder for hvert protein vurdert. Kurvetilpasning ble oppnådd ved enten lineær eller fire-parameter logistisk å følge produsentens instruksjoner. Laboratoriepersonell ble blindet til endelig diagnose
På grunn av den uunngåelige variasjon av annullert urin med hensyn til totalvolum og tid i blæren, hver biomarkør var normalisert til urin kreatinin som tidligere beskrevet [5] -. [9] . Konsentrasjonen av urin kreatinin ble målt ved hjelp av en kommersielt tilgjengelig enzymatisk analyse (Cat # KGE005 R D Systems Inc., Minneapolis, Minnesota, USA) i henhold til produsentens instruksjoner. Creatinineconcentrations av ukjente prøver ble beregnet ved sammenligning med en standardkurve.
Data Analysis
Vi undersøkte den diagnostiske utførelsen av 14 urin biomarkører for BCA påvisning, både individuelt og i alle kombinasjoner. Vi brukte Wilcoxon Rank Sum tester for å fastslå sammenhengen mellom hver biomarkør og BCA. For kombinatoriske analyser, målene var å identifisere de mest nøyaktige multivariate modellene samlet, men også for å definere nøyaktige modeller ved hjelp av et minimum antall nødvendige biomarkører. For modellvalg, vi anvendt logistisk regresjon prosedyren med BCA status (Ja vs. Nei) som responsvariabelen og biomarkører som prediktiv variables.We brukte all-undergruppe metode for å evaluere den prediktive verdien av hver mulig undergruppe av biomarkører. Bayesiansk informasjon kriteriet (BIC) ble brukt til å sammenligne modeller [14]. BIC, en mye brukt kriterium i modellvalg, balanserer modellen sannsynligheten for og antallet av biomarkører som inngår i model.Automated variable utvelgelsesmetoder, for eksempel trinnvis seleksjon, kan gi ustabile modeller [15]. Som foreslått av Austin og Tu [15], brukte vi Bootstrap metoden (med 1000 Bootstrap prøver) for å velge den mest effektive og stabil modell for å forutsi tilstedeværelsen av BCA. For Bootstrap sampling, brukte vi lagdel teknikk: Bootstrap prøver ble tatt fra personer med BCA og uten BCA separat, og de to prøvene ble slått sammen for å danne en samlet Bootstrap prøve. Den stratifisert sampling teknikk sikrer at antall pasienter med BCA BCA og uten i et Bootstrap prøve var de samme som i det opprinnelige datasettet. For hver Bootstrap prøve, vurderte vi prediksjon verdien av hver kandidat undergruppe av biomarkører opptakerendinkandugjennomføreopptakfraen logistisk regresjonsmodell, og alle kandidat undergrupper av biomarkører ble rangert fra toppen til bunnen av BIC. Da undergruppe av biomarkører som ble rangert på toppen hyppigst blant de 1000 Bootstrap prøvene ble valgt som den beste kombinasjonen av biomarkører for prediksjon av BCA.
Etter den prediktive modellen ble valgt, vi genererte nonparametric mottaker drifts karakteristisk (ROC) kurver som plottede verdien for følsomhet mot falskt positive (1-spesifisitet). Den relative evne av kombinasjonen av utvalgte biomarkører for å indikere BCA ble estimert ved å beregne arealet under ROC-kurven (AUC), med en høyere AUC indikerer en sterkere prediktor. Vi sammenlignet AUC av chi-kvadrat test. Med hver enkelt biomarkør, beregnet vi sensitiviteten og spesifisiteten til hver biomarkør på det optimale grenseverdi definert ved Youden indeksen [16], det vil si den grenseverdi som maksimerer summen av sensitivitet og spesifisitet. Med kombinasjoner av biomarkører, vi brukte først Bootstrap metode for å identifisere den mest nøyaktige modellen ved hjelp av et minimum antall nødvendige biomarkører som beskrevet i dataanalyse delen. Vi har funnet at kombinasjonen av IL-8, VEGF, og APOE var best undergruppe av de 8 biomarkører for prediksjon av BCA. Vi utførte logistisk regresjonsanalyse med BCA status (ja vs. nei) som responsvariabel og med IL-8, VEGF, og APOE som prediktive variabler. Vi brukte regresjonskoeffisientene beregnet på logistisk regresjon som koeffisienter for å danne en lineær kombinasjon av IL-8, VEGF, og APOE, og brukte lineær kombinasjon for å forutsi BCA. Sensitiviteten og spesifisiteten av kombinasjonen av IL-8, VEGF, og APOE ble bestemt ved den optimale verdi cutoff for den lineære kombinasjon, dvs. grenseverdi den som maksimerer summen av sensitivitet og spesifisitet. Statistisk signifikans i denne studien ble satt til
p
0,05 og alle rapporterte
p
verdiene var to-sidig. Alle analyser ble utført ved hjelp av SAS programvareversjon 9.3.
Resultater
Demografisk er kliniske og patologiske kjennetegn ved de 127 pasientene som består vår studie gruppe illustrert i Tabell 1. Fem pasienter (3 i kontroll gruppe, to i kreft gruppe) med manglende biomarkør data ble ekskludert fra endelige analysis.No emner i kontrollgruppen hadde en unormal cystoskopi eller aksial bildebehandling. Videre i oppfølgingen, ble ingen av kontrollpersonene kjent for å utvikle BCA eller brutto hematuri. I kreft årsklasse, 41% av pasientene hadde ikke-muskel invasiv sykdom og 19% av pasientene hadde lav grad av sykdom. Mediantumorstørrelse var 4,5 cm. I tråd med vår tidligere erfaring [4], annullert urin cytologi (VUC) i kohorten oppnådde 98% spesifisitet, men bare 33% sensitivitet.
gjennomsnittlig og median nivåer av de 14 biomarkører i urin er presentert i Tabell 2. nivåene av 10 av de biomarkører ble signifikant forhøyet hos personer med BCA, i forhold til individer uten BCA. CD44 og OPN var betydelig, men negativt assosiert med BCA, og SDC1 og PTX3 var ikke signifikant assosiert med BCA. Gitt det faktum at de fleste pasienter til stede på urologi klinikk med hematuri, må man vurdere om spesifikke biomarkør analysene er å oppdage en svulst antigen eller et serum protein innført i prøven via blødning. For å kontrollere for denne muligheten, kvantifiseres vi hemoglobinnivået i alle prøver og evaluert korrelasjonen av alle 14 biomarkører med dette tiltaket av hematuri. Denne analysen viste at nivåene av CCL18 og A1AT hadde en høy korrelasjon til urin hemoglobin (Spearmans korrelasjonskoeffisient 0,8)., Og så disse ble ikke inkludert i multivariate modellene beskrevet nedenfor
Figur 1 illustrerer den diagnostiske utførelsen av ulike kombinasjoner av biomarkører. Når alle 8 positivt forbundet BCA biomarkører ble kombinert, den samlede diagnostisk nøyaktighet var 94%, med en sensitivitet på 92% og en spesifisitet på 97%. Logistisk regresjon og en 1000 Bootstrap prøve strategywere utført for å bestemme optimale diagnostiske biomarkører kombinasjoner, høy nøyaktighet med så få biomarkører som possible.For hver Bootstrap prøve dvs. ble kandidat undergrupper rangert hjelp Bayesiansk informasjon kriteriet [15]. Analyser funnet at kombinasjonen av IL-8, VEGF, og APOE ble rangert som nummer en 410 ganger (41%), kombinasjonen av VEGF og APOE rangert som nummer en 379 ganger (38%), og alle andre kombinasjoner rangert som nummer én mindre enn 100 ganger ( 10%). Kombinasjonen av IL-8, oppnådde VEGF, og APOE en ytelse nesten like godt som alle 8 biomarkører kombin (figur 1). Den 3-biomarkør analysen hadde en AUC på 0,968 (95% konfidensintervall [CI], 0,942 til 0,992), en sensitivitet på 90% og spesifisitet på 97% (total nøyaktighet 93%). Kombinasjonen av VEGF og APOE hadde en redusert total nøyaktighet (89%). Det 2-biomarkør analysen hadde en AUC på 0,957 (95% konfidensintervall [CI], 0,927 til 0,987), en sensitivitet på 81% og en spesifisitet på 97%. Til sammenligning oppnådde BTA-Trak kommersiell analyse en sensitivitet på 79%, spesifisitet på 83%, og total nøyaktighet på 81% (figur 1).
ROC-kurver ble plottet for å sammenligne egenskapene til den totale 8 -biomarker kombinasjon, en 3-biomarkør kombinasjon (IL-8, VEGF, APOE), en 2-biomarkør kombinasjon (VEGF, APOE), og BTA-Trak test. Basert på området under ROC-kurven (AUROC), ble Youden Indeks cutoff verdier som maksimert summen av sensitivitet og spesifisitet bestemmes for hver biomarkør (krysset plassen på kurve). Tabellen gir ytelsesverdier for hver kombinasjon. PPV, positiv prediktiv verdi. NPV, negativ prediktiv verdi.
Diskusjoner
Kreft i urinblæren er blant de fem vanligste kreftformen i verden. Ved presentasjon, mer enn 80% av blæren svulster er ikke-muskel invasiv papillærtumorer som har en 5-års overlevelse av 90%, men ca 70% av pasienter med disse lesjoner utvikle svulst tilbakefall innen to år etter første diagnosen . Gjentakelse fenomenet ikke-muskel invasiv BCA gjør den til en av de mest utbredte kreft hele verden. Når BCA blir oppdaget og behandlet, vil pasienter rutinemessig få hyppig overvåking cystoskopi å overvåke for svulst gjentakelse. Hvis venstre ubehandlet, i utgangspunktet ikke-invasive svulster kan utvikle seg til muskel-invasiv tumorer som har en betydelig redusert 5-års overlevelse. Dermed nøyaktig deteksjon av BCA, ideelt sett gjennom ikke-invasiv urinbasert analyse, er fortsatt et presserende mål.
For å validere et panel av lovende biomarkører oppdaget ved hjelp av genomikk og proteomikk tilnærminger [4], [5] vi har utført en rekke studier ved hjelp av ELISA-baserte analyser [6] – [9]. I denne studien undersøkte vi et ytterligere mål og kombineres alle data -14 biomarkører i en kohort av 127 subjects- for å utlede de mest nøyaktige diagnostiske multi-analytt-analyser. Vi overvåkes også ytelsen til den kommersielle BTA-Trak analysen i de samme tilfellene for sammenligning, og vi kvantifisert hemoglobin i hvert enkelt tilfelle for å undersøke mulige sammenhenger mellom biomarkører og hematuri. To biomarkører, CCL18 og A1AT, ble funnet å ha en forholdsvis høy korrelasjon med urin hemoglobin, øke muligheten for at kilden til disse proteinene er, i det minste delvis, serum introdusert gjennom blødning. Vi vil fortsette å undersøke disse to biomarkører i uavhengige kohorter, men de ble ikke tatt med i den logistiske regresjonsanalyse utført for å identifisere optimale diagnostiske biomarkører kombinasjoner. En 8-biomarkør panel (IL-8, MMP-9, PAI-1, VEGF, ANG, CA-9, APOE, MMP-10) viste seg å være den mest nøyaktige (total nøyaktighet på 94%) multi-analytt-assay for påvisning av BCA i 127-faget kohort. Med multiplex molekylære signaturer, er det vanlig at noen av komponentene vil gi mye av prediktiv kraft, men flere markører vil gjøre modellen mer robust overfor feil [4]. Ved å teste alle mulige kombinasjoner via en bootstrap-strategi, vi viste at tre av de åtte biomarkør panel (IL-8, VEGF og APOE) bidro mest mulig informasjon. Som en frittstående analyse ble 3-biomarkør panel oppnådde en total nøyaktighet på 93% og opprettholdt både høy følsomhet (90%) og spesifisitet (97%). For å oppnå høy presisjon med så få biomarkører som mulig er optimal for praktiske grunner, men det er viktig å overvåke alle de lovende biomarkører ytterligere i større og mer variert kullene, fordi forskjellige kombinasjoner kan være mer robust under spesifikke betingelser, som for eksempel tilstedeværelsen av infeksjon, eller være mer nøyaktig for gjentakelse versus første diagnose.
komponentene av 3-biomarkør panel (VEGF, IL-8, APOE) har vært forbundet med en rekke kreftformer, inkludert blærekreft i varierende grad. I en studie av 26 fag, Crews
et al.
Vist at forhøyet urin nivåer av VEGF korrelert med nivåer i utskåret vev [17]. I en studie av 219 Midtøsten fag, urin nivåer av VEGF var signifikant høyere hos pasienter med BCA. I sin årsklasse måle VEGF utkonkurrerte VUC, oppnå en diagnostisk sensitivitet på 76% [18]. Tilsvarende Bian viste en forbedret følsomhet i urin VEGF i forhold til VUC, å oppnå 69% vs. 38%, henholdsvis [19]. I en annen studie, pasienter med forhøyet urin VEGF nivåer hadde en høyere risiko for tilbakefall av sykdommen [20]. Tidligere rapporter har impliserte IL-8 i blæren tumorbiologi og dens bruk som en potensiell biomarkør for BCA har blitt undersøkt i noen studier. IL-8 er vist å ha mitogen og angiogene egenskaper, og høye nivåer føre til økt tumordannelse, progresjon og metastase i musemodeller, velig via regulering av nukleær faktor kappa-B [21]. Kliniske studier har indikert at høye nivåer av urin-IL-8 kan være assosiert med tilstedeværelse av blærekreft. I en studie av 140 individer, oppnås en IL-8-analysen en sensitivitet på 59%, og en spesifisitet på 90% [22], og i en studie av 79 forsøkspersoner, ble en sensitivitet på 50% og en spesifisitet på 90% rapporterte [23]. Disse resultatene er svært mye i tråd med våre funn ved vurdering av IL-8 som et individ biomarkør [7]. Data er mangelvare på seg rollen APOE i kreft. Funksjoner inkluderer forbedring av lipid transport inn i celler og formidling av signaloverføring ved binding til lipoproteinreseptorer [24], [25]. APOE er vist å interagere med overgangs epithelial respons gen (TERE1), et tumorsuppressorgen, i blæretumorceller, noe som resulterer i øket celle omsetning og resistens mot apoptose [26], [27]. Nylig Linden
et al.
Rapporterte at APOE var en komponent av et panel av biomarkører som detekteres av massespektroskopi, og kan være assosiert med ikke-invasiv muskel BCA [28].
Vi erkjenner at vår studie har flere limitations.First som en tertiær omsorg anlegget, har vi en tendens til å se mer av høy kvalitet, høy-stadium sykdommen, noe som gjenspeiles i vår studie kohort. For å bekrefte robustheten vår signatur, må påfølgende studier vurdere større kohorter som inkluderer pasienter med lavgradig, lav-stadium sykdommen. For det andre ble behandlet, banked urin analysert. Urin ble sentrifugert og separert i cellulære pelleten og supernatanten før lagring ved -80 ° C. Det er mulig at frisk latt urin prøvene kan gi forskjellige resultater, og det er frisk urin som ville være det materialet som brukes for point-of-care assays. Vi undersøker resultatene av utvalgte biomarkører i urin behandlet via en rekke ulike protokoller, inkludert fersk annullert urin. Deretter følsomheten av HVO i vår kohort av overveiende høy grad (grad 3) sykdom (33%) var lavere enn det som ville være forventet. Dette setter spørsmålstegn ved kjente inter-observatør variasjon tolke VUC. I senere studier, vil vi bruke to cytopathologists å tolke disse resultatene. Videre er det usikkert hvor proteinsammensetningen i urinen supernatant kan endre seg i løpet av fryselagring. Antall fryse-tine-sykluser ble holdt på 1-2 ved å dividere urinen supernatanten i flere små porsjoner. Endelig vår utvalgsstørrelse på 127 er liten og de to gruppene som utgjorde de 127 pasientene var relativt homogene, dvs. enten aktiv kreft, eller kontroll tilfeller uten aktiv kreft, ingen historie av kreft, ingen urinveisinfeksjon, ingen urolithiasis, og ingen brutto hematuri. Dermed var vi ikke i stand til å vurdere sensitivitet /spesifisitet av våre biomarkører mellom ulike stadier /grades.The spesifisitet lovende biomarkører trenger å bli testet i kohorter som er kjent for å være problematisk med andre urinbaserte analyser (for eksempel hematuri, urinveisinfeksjon , steiner og annullere dysfunksjon).
Identifiseringen av robuste BCA-forbundet biomarkører og etablering av multiplex urinbaserte analyser vil ha flere kortsiktige og langsiktige konsekvenser. Mange av validerte biomarkører i denne studien har ikke vært assosiert med kreft tidligere. Analyse av rollen til disse proteinene i tumorcellebiologi kan belyse mekanismene i startfasen eller progresjon, og kan avsløre nye terapeutiske mål. Klinisk, nøyaktige BCA analyser vil ha en klar innvirkning på innledende diagnostisk ytelse, og på den kliniske behandlingen av pasienter etter behandling. Hvis pålitelige urin diagnostiske biomarkører analyser kan redusere antall nødvendige invasiv og ubehagelig cystoskopier, vil forbedringer i pasientens etterlevelse og tilfredshet følge, og økt effektivitet og kostnadsbesparelser vil gagne helsevesenet. Det ultimate målet er å kunne oppdage BCA på en riktig måte, slik at pasienten kan forvente en bedre livskvalitet og samlet resultat.
Konklusjoner
Gjennom oppdagelsen studier som gjaldt avansert profilering teknikker til selve, foretrukne klinisk test analytt, i dette tilfellet, annullert urin, har vi identifisert molekylære signaturer som kan oppdage BCA med eksepsjonell presisjon. Validering av kombinasjoner av disse urin biomarkører som bruker immunkjemiske analyser bekrefter at flere analyseprøver kunne gi en betydelig bedre non-invasiv påvisning av BCA, og gi en begrunnelse for større, prospektive studier som skal gjennomføres.
Takk
forfatterne er takknemlige for de 127 personene som deltok i denne kliniske studien.
