Abstract
Bakgrunn
Denne studien tar sikte å belyse kliniske betydningen av anaplastisk lymfom kinase (
ALK
) omorganisering i valgt avansert ikke-småcellet lungekreft (NSCLC), for å sammenligne bruk av forskjellige ALK deteksjonsmetoder, og spesielt vurdere en mulig sammenheng mellom ALK uttrykk og kliniske resultater i crizotinib behandlede pasienter.
Metoder
ALK status ble vurdert av fluorescerende
in situ
hybridisering (FISH), immunhistokjemi (IHC) og kvantitativ RT-PCR (QRT-PCR) i 173 utvalgte avanserte NSCLC pasienter. Clinicopathologic data, genotype status og overlevelses utfall ble analysert. Videre ble foreningen av ALK uttrykk med kliniske resultater vurderes i ALK FISH-positiv crizotinib-behandlede pasienter, inkludert to pasienter med samtidig epidermal vekstfaktor reseptor (
EGFR
) mutasjon.
Resultater
positivitet deteksjonsraten av ALK omorganisering av FISH, IHC og QRT-PCR var 35,5% (59/166), 35,7% (61/171), og 27,9% (34/122), henholdsvis.
ALK
omorganisering ble observert hovedsakelig hos unge pasienter, aldri eller lyse røykere og adenokarsinomer, spesielt med signetring cellefunksjoner og dårlig differensiering. Median progresjonsfri overlevelse (PFS) av crizotinib-behandlede pasienter var 7,6 måneder. Den total overlevelse (OS) av disse pasientene var lengre sammenlignet med den crizotinib-naive eller vill-type kullene, men det var ingen signifikant forskjell i OS sammenlignet med pasienter med
EGFR
mutasjon. ALK uttrykk ikke forbinder med PFS; men når ALK uttrykk ble analysert som en dikotom variabel, moderat og sterk ALK uttrykk hadde en redusert risiko for død (
P
= 0,026). De to pasienter med samtidig
EGFR Hotell og
ALK
endringer viste forskjell i ALK uttrykk, som svar på EGFR og ALK-hemmere, og total overlevelse.
Konklusjoner
Selektiv berikelse ifølge clinicopathologic funksjoner i NSCLC pasienter kan sterkt forbedre positivitet oppklaringsprosenten av
ALK
omorganisering for ALK-rettet behandling. IHC kan gi flere ledetråder for klinisk utprøving design og terapeutiske strategier for ALK-positiv NSCLC pasienter, inkludert pasienter med dobbelt genetisk avvik fra
ALK Hotell og
EGFR
Citation. Zhang NN, Liu YT, Ma L, Wang L, Hao XZ, Yuan Z, et al. (2014) The Molecular Detection og kliniske betydningen av
ALK
Omorganisering i Selected Avansert ikke-småcellet lungekreft: ALK Expression gir innsikt i ALK Målrettet terapi. PLoS ONE 9 (1): e84501. doi: 10,1371 /journal.pone.0084501
Redaktør: Jung Weon Lee, Seoul National University, Sør-Korea
mottatt: 27 august 2013; Godkjent: 14 november 2013; Publisert: 03.01.2014
Copyright: © 2014 Zhang et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Finansiering: denne studien ble støttet delvis med tilskudd fra Forsknings Special Fund for offentlig velferd Industry of Health (200902002-1), National Science and Technology Major Project (2008ZX09312, 2012ZX09303012), National High Technology Research and Development Program of China (2011AA02A110), Beijing Science and Technology Commission (Z121107005112005, Z121102009212055), spesielle midler for Central Health Authority (B2009B124) og Major Research Program of Cancer Institute og Hospital of Chinese Academy of Medical Sciences (LC2012A18). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Progress in molekylære teknikker gir bedre identifisering og forståelse av molekylære markører som kan ha prognostisk verdi og kan drive terapeutisk beslutnings for ikke-småcellet lungekreft (NSCLC). I det siste tiåret, en undergruppe av NSCLC pasienter med epidermal vekstfaktor reseptor (
EGFR
) mutasjon har vært å tiltrekke mye oppmerksomhet på grunn av de høye responsrater til EGFR tyrosinkinasehemmere (EGFR-TKI) [1]. I 2007, en fusjon genet av anaplastisk lymfom kinase (
ALK
) med echinoderm microtubule-assosiert protein som 4 (
EML4
) i NSCLC ble først identifisert av Soda
et al
. [2], og ble snart en ny molekylære mål for lungekreft behandling. Vellykkede erfaringer med EGFR målrettet terapi har gitt en referansemodell for rask forskning fremdriften av
ALK
omorganisering. Crizotinib (ALK /MET /ROS1 hemmer) var den første klinisk tilgjengelig agent som viste bemerkelsesverdig antitumoraktivitet i ALK-positive avanserte NSCLC pasienter. Nylig har utvalg av pasienter med ALK omorganisering for crizotinib behandling blitt en standard i USA, EU, Kina, Japan og andre land. Enda viktigere, andre ALK-hemmere ble suksessivt med i kliniske studier [3] og lovende til å markere en ny side av genotype-drevet utvikling av legemidler for lungekreft.
Hyppigheten av
ALK
omorganisering områder fra 3% til 7% i uselekterte NSCLC pasienter, som kan nå 13% ~ 18%, hvis pasienten befolkningen er valgt i henhold til bestemte clinicopathologic egenskaper, spesielt hos unge, aldri eller lys røykere med adenokarsinom [4], [5 ], [6], [7], [8], [9]. I tillegg
ALK
omorganisering var gjensidig utelukkende med
EGFR Hotell og
KRAS
mutasjoner. Men ovennevnte egenskaper ikke deles av alle
ALK
omorganisering bærere.
ALK
fusion er også funnet hos eldre pasienter, røykere [4], pasienter med
EGFR
mutasjon [10], [11], [12] og ikke-adenokarsinom histologiske subtyper, slik som adenosquamous karsinom og storcellet karsinom [3], [13]. Derfor clinicopathologic egenskaper er utilstrekkelige for screening av pasienter og molekyl testing er nødvendig for å bestemme status ALK [14].
Kvantitativ sanntids-polymerase kjedereaksjon (QRT-PCR), immunhistokjemi (IHC) og fluorescens
in situ
hybridisering (FISH) er dagens metoder for valg for ALK testing. Imidlertid har hver metode spesielle fordeler og ulemper. Det er ingen akseptert konsensus om hvilken metode er å foretrekke. QRT-PCR kan oppdage
ALK
omorganisering på mRNA nivå og definere både
ALK
fusjonspartner og fusion variant, men det er behov for høy kvalitet av RNA og kan ikke påvise ukjent
ALK
rearrangements. I tillegg finnes det en rekke
EML4-ALK
varianter og ikke-
EML4-AL
K fusjoner i NSCLC [15]. Derfor er QRT-PCR ikke mye i bruk i deteksjon av
ALK
omleiring. FISH er dagens standard metode for å detektere
ALK
omorganisering, siden det kan oppdage inversjon og trans uavhengig av
EML4-ALK
genet fusion varianter og andre fusjonspartnere. Viktigere, alle kliniske studier som viste effekten av crizotinib for
ALK
-positivt NSCLC var basert på Vysis /Abbot ALK bryte hverandre FISH analysen. Imidlertid er FISH kostbar, tidkrevende og vanskelige å tolke. Så FISH kan ikke være praktisk for screening hver NSCLC pasient. IHC er raskere, mer økonomisk og allment tilgjengelig. Videre IHC med nye antistoffer og modifiserte protokoller har utvidet sin brukbar rekkevidde for ALK testing. Flere publiserte anbefalinger [16], [17] har foreslått at ALK FISH-analyse kan utføres bare i IHC-positive tilfeller. Imidlertid er standard IHC protokoller og scoring kriterier mangler, og korrelasjonen mellom ALK uttrykk og kliniske utfall har ikke blitt bekreftet å kontrollere riktigheten av IHC.
Derfor denne studien samlet inn prøver i begynnelsen av screening pasienter for crizotinib kliniske studier (PROFIL 1005 eller PROFIL 1014) og evaluert ALK status ved hjelp av FISH, IHC og QRT-PCR. Clinicopathologic egenskaper og kliniske resultater i henhold til genotype-spesifikke og terapeutiske regimer ble analysert, med formål å belyse den kliniske betydningen av
ALK
omorganisering i utvalgte avanserte NSCLC pasienter. Videre har vi sammenlignet bruk av ulike ALK deteksjonsmetoder og vurderes spesielt en mulig sammenheng mellom ALK uttrykk og kliniske resultater i ALK FISH-positiv crizotinib behandlede pasienter.
Materialer og metoder
Studiepopulasjon og datainnsamling
Prøvene ble samlet inn fra 173 avanserte nonsquamous NSCLC pasienter som var med sikte på å gjennomgå ALK screening for crizotinib kliniske studier (PROFIL 1005 eller PROFIL 1014) fra januar 2011 til oktober 2012. Alle pasientene fikk behandling eller konsultasjon fra Cancer Institute og Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences og Peking Union Medical College og signert informert samtykke for fremtiden molekylær analyse. Denne studien ble godkjent av Institutional Review styrene i den kinesiske Academy of Medical Sciences Cancer Institute og sykehus.
Medisinsk registreringer av alle pasienter ble anmeldt for å samle demografisk, klinisk og patologisk informasjon. Histologi ble anmeldt basert på kriteriene til Verdens helseorganisasjon Klassifisering av lungesvulster [18] og IASLC /ATS /ERS tverrfaglig klassifisering av lunge adenokarsinom [19]. Vi registrerte
EGFR
mutasjon status av pasienter, som hadde blitt bestemt ved hjelp av en toveis sekvense metode for
EGFR
eksoner 18 til 21. Vi har også undersøkt behandling regimenter og kliniske resultater. Progresjonsfri overlevelse (PFS) ble beregnet fra oppstart av crizotinib til dokumentert progressiv sykdom (PD) eller død uavhengig av årsak. For bedre å kunne belyse de påvirkninger av genotype-spesifikke og terapeutiske regimer på pasientenes total overlevelse (OS), ble to typer OS analysert. OS1 og OS2 ble henholdsvis definert som tiden fra første diagnosen av NSCLC og fra signert informert samtykke til død uansett årsak. OS1 var omfattende, men mer påvirket av tidligere behandlinger. OS2 var mer spesifikt å avklare effekten av crizotinib i behandling av
ALK
-positivt avansert NSCLC.
ALK Test
Prøvene ble testet ved IHC, FISH og QRT-PCR. FISH ble gjennomført med FDA godkjente ALK probe kit (Vysis LSI ALK dual-farge, break-apart omorganisering sonde; Abbott Molecular, Abbott Park, IL) og analysert i henhold til instruksjonene i settet. ALK IHC ble utført ifølge protokollene gitt av antistoff (D5F3, Cell Signaling Technology) produsent. I likhet med tidligere studier [20], [21], IHC resultater ble scoret som 0 når ingen spesifikk farging var tydelig innenfor en svulst; 1+, svak fargeintensitet i mer enn 10% tumorceller uten bakgrunnsfarging; 2+, moderat fargeintensitet; 3+, sterk fargeintensitet. Sakene med tilstrekkelig vev ble hentet total RNA fra formalinfiksert parafin-embedded (FFPE) prøver ved hjelp RNeasy FFPE kit (Qiagen, Tyskland). For påvisning av EML4-ALK, mRNA ble først revers-transkribert til cDNA og QRT-PCR ble utført med en kommersiell EML4-ALK kit (Amoydx, Kina) inkludert ni kjente varianter (A20, E13, A20, E6a /6b; A20 , E20, A20, E15, A20, E14, A20, E18, A20, E2, A20, E17,.. A20) på ABI 7500 real-Time PCR System (Applied Biosystems, USA)
Statistisk analyse
Pearsons khikvadrattest, Fishers eksakte test eller Kruskal-Wallis test ble brukt for statistisk analyse av variabler, som passer. Kaplan-Meier tilnærming ble brukt til å estimere PFS og OS, og forskjellen mellom gruppene ble sammenlignet med log-rank test. Hazard ratio (HR) ble estimert ved proporsjonale farer regresjon med 95% Wald konfidensintervall (95% KI). Dataanalyse ble gjort med SAS versjon 9.2, ble statistisk signifikans definert som en tosidig
P
-verdi. 0,05
Resultater
ALK Detection Resultater
ett hundre og trettito resected og førti en vevsprøve prøvene ble analysert både ved IHC og FISH; Det ble imidlertid ikke tolkbare IHC resultater oppnådd for to pasienter og ingen tolk FISH resultater for sju pasienter. QRT-PCR ble vellykket utført i 122 eksemplarer. ALK forandring ble funnet i 35,5% (59/166), 35,7% (61/171), og 27,9% (34/122) samples av FISH, IHC, og QRT-PCR, respektivt. Detaljene i deteksjons resultater i henhold til de tre metodene er oppsummert i tabell 1.
Pasientens egenskaper og kliniske utfall mot Molecular Subtyper
Av de 166 avanserte NSCLC hell gjennomgått ALK screening av fisk, 59 næret
ALK
omorganisering inkludert to (3,4%, 2/59) pasienter med samtidig
EGFR
mutasjon, 20 viste
EGFR
mutasjon, 87 var vill type med
ALK
-negativ og
EGFR
-negativ eller
EGFR
-Ukjent (villtype kohorten, WT). Pasientene mest sannsynlig til båtplass
ALK
omorganisering var unge, aldri eller lyse røykere med dårlig differensiert adenokarsinom, spesielt med signetring cellefunksjoner, som sammenligner med
EGFR
mutasjon eller villtype kohort (tabell 2 ). De to pasienter med samtidig
ALK
omorganisering og
EGFR
mutasjon ble analysert separat på grunn av den lave forekomsten.
I de 59 pasientene med FISH-positiv
ALK
omorganisering, 45 fikk crizotinib i klinisk fase II studie (PROFIL 1005), 8 ble inkludert i fase III klinisk studie (PROFIL 1014) og seks deltok ikke noen klinisk studie. På grunn av crossover effekten av pemetrexed og crizotinib i klinisk fase III studie ble åtte pasienter ekskludert for overlevelsesanalyse. De øvrige 158 pasientene ble gruppert i fire typer:
ALK
positive med crizotinib behandlede pasienter (n = 45),
ALK
positive med crizotinib-naive (n = 6),
EGFR
mutasjon med TKI-behandlet (n = 20) og villtype (n = 87). Grunnlags funksjoner, kliniske behandlinger og resultater er vist i tabell 3.
ALK
-positivt gruppen viste en dramatisk yngre aldersfordeling enn noen annen gruppe, fikk flere linjer med behandling enn
EGFR
mutasjon gruppe (. median, 2,9
vs
1,8;
P
= 0,025), og hadde flere pasienter fikk pemetrexed kjemoterapi enn villtype gruppe (
P
= 0,020).
ALK
-positive pasienter med og uten crizotinib behandling hadde statistisk signifikant forskjell i både OS1 (median, 39,7
vs.
8,8 måneder,
P
= 0,003) og OS2 ( . median, 22,0
vs
1,8 måneder,
P
0,001). Det var ingen signifikant forskjell mellom
ALK
-positivt med crizotinib-behandlede gruppen og
EGFR
mutasjon med TKI-behandlede gruppen både i OS1 og OS2 (
P
= 0,249 og
P
= 0,896, henholdsvis). I tillegg
ALK
-positivt med crizotinib-behandlede pasienter hadde lengre OS2 enn villtype pasienter (median, 22,0
vs.
14,2 måneder,
P
= 0,014), men det var ingen signifikant forskjell i OS1 mellom disse to årskull (39,7
vs.
38,7 møll,
P
= 0,294) (figur 1).
A, B, C, total overlevelse beregnet ut fra diagnose (OS1); D, E, F, total overlevelse beregnet fra signert informert samtykke ved screening tid (OS2). WT: pasienter med ALK negativ og EGFR-negative eller EGFR-ukjent; | Indikerer sensurert tilfeller
Survival Analyse av ALK FISH-positive Crizotinib behandlede pasienter
Av de 45
ALK
FISH-positiv crizotinib-. behandlede pasienter, to hadde ingen IHC resultater, 4 farget 1+, 10 farget 2+ og 29 farget 3+. Av disse pasientene, 30 ble identifisert til å ha
ALK
omorganisering av QRT-PCR, 10 viste negativ og 5 hadde ingen QRT-PCR resultater. Inntil endelig oppfølging, totalt 33 pasienter (33/45, 73,3%) presenteres med PD, og 18 pasienter (18/45, 40,0%) døde. Median PFS av de 45 pasientene var 7,6 måneder. Vi analyserte det mulig sammenheng mellom ALK ekspresjon og kliniske resultater, slik som PFS, OS1 og OS2 ved hjelp av univariat analyse, og resultatene er oppsummert i tabell 4. multivariabel analyse ble ikke utført på grunn av begrensning av den lille prøvestørrelsen. Økende ALK uttrykk, som en ordnet variabel, ikke har noen tilknytning til PFS (HR = 1,08, 0,60 til 1,95;
P
= 0,792), OS1 (HR = 0,67, 0,33 til 1,37;
P
= 0.275) eller OS2 (HR = 0,71, 0,36 til 1,40;
P
= 0,325). Men når ALK uttrykk ble tatt som en dikotom variabel (dvs. IHC utføre 3 + /2 +
vs.
1+), en IHC score på 3 + /2 + betydelig spådd bedre OS1 (HR = 0,23 , 0,06 til 0,84;
P
= 0,026), men ingen signifikant sammenheng med OS2 (HR = 0,35, 0,10 til 1,22;
P
= 0,098) og PFS (HR = 0,49, 0.17- 1,42;
P
= 0,187) ble observert. Når man sammenligner IHC score 3+ med 2 + /1 +, det var ingen hvilken som helst sammenheng med PFS (HR = 0,52, 0,69 til 3,32,
P
= 0,30), OS1 (HR = 0,88, 0,34 til 2,30
P
= 0,792) og OS2 (HR = 0,84, 0,32 til 2,17,
P
= 0,713). Kaplan-Meier-kurver for PFS, OS1 og OS2 som en funksjon av ALK uttrykk (3+
vs.
2 + /1 + 3 + /2 +
vs.
1+ og 3+
vs.
2+
vs.
1+, henholdsvis) er vist i figur 2. i tillegg har vi også analysert resultatene av QRT-PCR og fant ut at det var ingen signifikant forskjellen mellom negative og positive pasienter i PFS, OS1 og OS2 (figur 2)
A, progresjonsfri overlevelse (PFS).; B, total overlevelse beregnet ut fra diagnose (OS1); C, total overlevelse beregnet fra signert informert samtykke ved screening tid (OS2). |., Indikerer sensurert tilfeller
I univariat analyse av kliniske faktorer, pasientenes alder, kjønn, røykestatus, etapper på diagnose og screening tid, hjerne og bein metastaser ved screening tid, tidligere linjer av terapi, histologi, og type terapi (inkludert pemetrexed, EGFR-TKI og strålebehandling) var ikke forbundet med kliniske resultater. Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) funksjonsstatus viste prognostisk betydning for PFS (HR = 2,06, 1,17 til 3,61;
P
= 0,012), OS1 (HR = 2,79, 1.24 til 6.26;
P
= 0,013), men ingen prognostisk betydning for OS2 (HR = 1,79, 0,86 til 3,69;
P
= 0,117)
Profiler av pasienter med samtidige ALK omorganisering og EGFR mutasjon
.
Under datainnsamling, to pasienter næret kjøl
ALK
omorganisering og
EGFR
mutasjon (en hadde ekson 19 sletting og den andre hadde ekson 21 mutasjon). De delte noen clinicopathologic funksjoner, inkludert mannlige kjønn, unge alder (42 år og 46 år, henholdsvis), adenokarsinom og tung røykestatus. Pasient 1 var i fase IV, og pasienten 2 var i fase IIIA ved diagnose, og begge var i fase IV ved screening tid. I tillegg ble pasienten en dømt ubrukelige og pasient 2 var gjennomgikk kirurgi. Pasient 1 fikk EGFR-TKI (erlotinib) som førstelinjebehandling og den beste responsen var delvis remisjon (PR). Pasient 2 fikk EGFR-TKI (erlotinib) som fjerde behandling og den beste responsen var stabil sykdom (SD). PFS av erlotinib var 6,2 måneder (pasient 1) og 3,6 måneder (pasient 2). FISH og IHC for ALK status ble utført i både pasienter, og QRT-PCR ble bare utført i pasient 2. Begge pasientene var ALK FISH-positiv, men pasienten en viste svak ALK uttrykk. Pasient 2 hadde moderat ALK uttrykk (figur 3) og viste positive ved QRT-PCR. Begge ble innmeldt i fase II klinisk studie av crizotinib, og PFS av crizotinib var 3,1 måneder (pasient 1) og 21,7 måneder (pasient 2). Den OS1 av pasient og en pasient 2 var 20,5 og 48,0 måneder, respektivt. Og pasient 2 ikke til stede med PD under crizotinib behandling og var fortsatt i live på den endelige oppfølgingen
En, ingen farging (score, 0).; B, svak farging (score, 1+); C, moderat farging (score, 2+); D sterk farging (score, 3+); E, ALK protein farging av pasient med samtidig ALK og EGFR mutasjon (pasient 1, score, 1+); F, ALK protein farging av pasient med samtidig ALK og EGFR mutasjon (pasient 2, score, 2+). Forstørrelse, 400 ×.
Diskusjoner
ALK
omorganisering har blitt en klinisk viktig markør i å velge avanserte NSCLC for molekylær målrettet terapi. Imidlertid er forekomsten av
ALK
omleiring forholdsvis lav, selv i de tidligere rapporterte anriket populasjon. Det er vanskelig å identifisere undergrupper av
ALK
-positive pasienter. Derfor berikende pasienter med størst grad og nøyaktig bestemmelse av
ALK
rearrangementer er nøkkelen betydning å screene aktuelle kandidater for ALK-hemmere. På grunn av ulempene med dagens standard FISH, tidligere sammenlignende studier antydet at IHC, sammenlignet med QRT-PCR, var en lovende metode forhåndsscreening for pasienter med
ALK
omleiring. Men kliniske utfall data manglet for å forstå omfattende som å teste plattformen var det mest korrekt å forutsi respons på målrettet terapi. Våre data kan gi ny innsikt til molekylær deteksjon i å identifisere aktuelle personer for ALK-hemmere behandling.
ALK
er en av de nyeste tyrosin-kinase mål i NSCLC. Det er avvikende aktivert som følge av en kromosomal omleiring, som fører til ekspresjon av et oncogent fusjons kinase, ALK protein. Den vanligste omorganisering subtype er
EML4-ALK product: [15]. I NSCLC,
ALK
omorganisering er forbundet med distinkte clinicopathologic funksjoner, inkludert ung debutalder og adenokarsinom histologi hos pasienter med tidligere aldri eller lys røyking. Vanligvis clinicopathologic funksjonene i
ALK
-positivt pasientene i vår studie var lik tidligere studier rapportert [5], [22]. Spesielt,
ALK
omorganisering var mer vanlig i dårlig tumor differensiering i vår valgt befolkningen. Til dags dato, bare Takahashi
et al.
[23] rapporterte at
ALK
omorganisering ble assosiert med dårlig differensiering status i fem
ALK
-positive pasienter, våre data ytterligere bekreftet dette funnet i en relativt stor utvalgsstørrelse.
Om lag en tredjedel av pasientene næret
ALK
omorganisering i vår studie, som var høyere enn tidligere rapportert rekkevidde. Alle rekruttert pasienter ble foreslått av onkologer å screene for ALK målrettet terapi basert på kliniske betraktninger (adenokarsinom, avansert stadium, ung alder, ikke- eller lett å røyke, eller som tidligere er behandlet med cytotoksiske regimer og /eller målrettet terapi). De fleste av disse pasientene delt noen ovennevnte funksjoner, og dette kan faktisk påvirker frekvensen for positiv deteksjon.
ALK
omorganisering presentert en relativt sjelden forekomst i uselektert befolkning. Disse dataene indirekte antydet at oppklaringsprosenten for
ALK
genet trans kunne svært forbedret basert på selektiv berikelse ifølge clinicopathologic funksjoner. Denne informasjonen kan være nyttig for screening
ALK
positive pasienter med størst grad i klinisk rutinemessig praksis.
I fravær av ALK målrettet agenter, den prognostiske verdien av
ALK
endringer er kontroversiell [24], [25], [26]. Imidlertid, med utviklingen av molekylære målrettede midler, så som crizotinib, positiv ALK status var en positiv logisk markør for ALK-hemmere [27]. Vi analyserte overlevelse i henhold til molekylære status og behandlingsregimer, og funnet ut at crizotinib forlenget OS av
ALK
-positive pasienter. Crizotinib-naive pasienter viste en generelt dårlig resultat, verre enn den generelle befolkningen av NSCLC pasienter. Dermed
ALK
omorganisering er ikke en gunstig prognostisk faktor i avansert NSCLC. Av notatet, bør disse resultatene tolkes med forsiktighet fordi crizotinib-naive pasienter med liten utvalgsstørrelsen hadde dårligere ytelse status enn for pasienter rekruttert inn crizotinib kliniske studier. I tillegg
ALK
-positivt crizotinib-behandlede pasienter hadde ingen forskjell i OS, sammenlignet med EGFR mutasjon TKI-behandlede pasienter, selv om deres overlevelse var tallmessig kortere. Dette kan være på grunn av forskjellen i antall av tidligere linjer av behandlingen mellom de to gruppene.
EGFR
-positive pasienter representerer et veletablert, TKI-sensitive paradigme. Mest
EGFR
-positive pasienter fikk straks EGFR-TKI behandling etter molekylær diagnose og fikk overlegen overlevelse. Videre crizotinib langvarig
ALK
-positive pasienter OS beregnet fra screening tid, men ikke forlenge OS beregnet ut fra diagnosen sammenlignet med vill-type pasienter. Det ble foreslått at
ALK
-positivt NSCLC pasienter kan være spesielt lydhør overfor pemetrexed kjemoterapi [28], [29]. Derfor små arrangementer innenfor
ALK
-positivt crizotinib-behandlede gruppen pasienter med ukjent
EGFR
status i villtype gruppe og ulik behandling historie pemetrexed mellom de to gruppene kan ha tilbakevist resultatene . Selv om vår studie hadde begrensninger av en enkelt-senter, begrenset statistisk styrke på grunn av den lille størrelsen på utvalget, og konfunderende faktorer, blant annet funksjonstilstand, tidligere behandling, ukjente
EGFR
status og små arrangementer, vil vi likevel kunne tydelig avslører virkningene av crizotinib i behandling av
ALK
-positivt avansert NSCLC.
FISH brukes i dag standard basert på de pivotale studier av crizotinib. Imidlertid har enkelte mangler av ALK FISH analysen er rapportert. Kliniske studier av crizotinib rekruttert pasienter som var positive ved FISH bare, men det ble senere notert [30] at pasienter med dobbelt positiv av fisk og IHC resultater hadde en høyere svarprosent. Det ble også rapportert [31] som en pasient med ALK IHC-positive og ALK FISH-negativ måtte dramatisk respons på crizotinib. Disse funnene tyder på at det kan ha vært pasienter med falske-positive og -negative resultatene etter fisk. I tillegg uninformative frekvensen av fisk blant svulster rapportert som IHC-positive var høy [32]. Nylig har flere publiserte anbefalinger [16], [17] har foreslått at FISH-analyse kan utføres bare i IHC-positive tilfeller og andre anbefaling [33] indikerte at IHC, hvis nøye validert, kan betraktes som et screening-metode for å velge prøvestykker for FISH testing; QRT-PCR ble ikke anbefalt som et alternativ til fisk. Men til dags dato, har tidligere studier ikke har sammenlignet prognostisk effekt av IHC eller QRT-PCR. I teorien biologisk relevant
ALK
omleiring fører hver til overekspresjon av ALK protein, som er den egentlige medikament målet. I vår studie, pasienter med svak fargeintensitet hadde dårligere kliniske utfall og dårlig respons på ALK-hemmer. Selv kunne ikke utføres multivariat analyse på grunn av den lille størrelsen på utvalget av crizotinib-behandlede pasienter, vi demonstrere ved univariat analyse at svulsten med moderat og sterk ALK uttrykk marginalt spådd bedre OS2 og betydelig spådd en redusert risiko for død. Disse funnene ble utvetydig begrunnet i Kaplan-Meier overlevelseskurver, som viste en signifikant bedre total overlevelse av pasienter med moderat eller sterk ALK uttrykk. Den positive sammenslutning av ALK uttrykk med forbedret overlevelse er spennende og overraskende. Videre ALK positive og negative pasienter klassifisert etter QRT-PCR i crizotinib-behandlede pasienter hadde ingen signifikant forskjell i kliniske resultater. Så vidt vi vet, er dette den første rapporten som belyses foreningen av ALK uttrykk og QRT-PCR med kliniske resultater for å vurdere bruk av ALK deteksjonsmetoder. Med tanke på kostnader og følsomhet IHC og QRT-PCR, kan en IHC basert ALK test representerer en pålitelig og kostnadseffektiv screening strategi for å identifisere pasienter som kan ha nytte av ALK-hemmere. På grunn av begrensning av liten utvalgsstørrelse, våre data støtte behovet for store og prospektive biomarkør studier for å validere denne diagnostiske strategi for ALK-positiv NSCLC.
ALK
omorganisering og
EGFR
mutasjon er generelt gjensidig utelukkende [34]. Men sameksistens av
ALK Hotell og
EGFR
har blitt suksessivt rapportert ( 1% av alle behandlede NSCLC) [35], [36], [37]. I vår studie var forekomsten rente var 3,4%. Imidlertid Wang
et al.
[11] rapporterte en høyere frekvens (15%) av denne dobbelte genetiske avvik i kinesiske pasienter. Det foreslås at
EGFR
mutasjon og
ALK
omorganisering kan oppstå uavhengig under onkogenese og kan virke synergistisk. De to pasienter som hadde de doble genetiske avvik delt noen lignende egenskaper, men det var tydelig forskjell i ALK uttrykk og respons til EGFR og ALK-inhibitorer. Pasient 2 med moderat ALK uttrykk hadde bedre respons på crizotinib, men dårligere respons på erlotinib enn pasienten med svak ALK uttrykk. Det ble rapportert [5] at ALK fusjon var sterkt assosiert med resistens mot EGFR-TKI. En pasient med samtidig
EGFR
mutasjon og
ALK
omorganisering, viste ingen ALK uttrykk ved IHC med en
ALK
omorganisering kjennetegnet av en isolert 3 «FISH signal, og presenterte mest holdbare respons på en EGFR-TKI [37]. Mens en annen samtidig tilfelle av
ALK
omorganisering og
EGFR
mutasjon, present ALK uttrykk, men EGFR-TKI var ikke effektive [36]. Inntil nå, er den mest effektive behandlingen for pasienter med avansert NSCLC huse dobbelt mutasjon fortsatt et åpent spørsmål. Men våre data gitt en ledetråd for behandling av pasienter med sameksistens av
EGFR
mutasjon og
ALK
omorganisering ved å evaluere ALK uttrykk, men videre forskning er nødvendig for å bekrefte riktig behandling for disse pasienter.
i sammendraget, i en tid med ALK-målrettede hemmere, selektiv berikelse ifølge clinicopathologic funksjoner i NSCLC pasienter kunne effektivt screene ALK positive kandidater for molekylær målrettet terapi. IHC kan være en pre-screening og supplerende algoritme for å gi flere ledetråder for klinisk utprøving design og terapeutiske strategier for NSCLC husing
ALK
omorganisering, inkludert pasienter med dobbelt genetisk avvik fra
ALK Hotell og
EGFR
. Imidlertid bør den virkelige prognostisk verdi av ALK uttrykk bli ytterligere validert i fremtidige prospektive studier.
