Z «elementer for denne analysen, som basert på positive og negative kontroller, var mellom 0,62 og 0,67, mens signal til bakgrunn ratio var fem i begge tilfeller. Men en ~ to gangers opptrapping ble utløst av noen SMIPs i den fraksjon av NKX3.1 positive celler, ble produktet undersammenlignet med proteasomhemmere og vil ikke bli bekreftet ved immunblotting. Også, når ekspresjonen av endogene NKX3.1 ble evaluert i DU145, en annen prostatacancer cellelinje som hadde meget lave nivåer av NKX3.1, ingen av de SMIPs erholdt positive.Nutlin-3a
Selv om proteasomhemmere medført en økning i p27-Luc uttrykk, som var lett merkbar ved immuno-blotting og luciferase-analysen, var ingen av SMIPs var effektive. Dette funnet indikerer et bestemt nivå av celltype spesifisitet SMIP handlinger. Selv om celle-sentrert struktur vanlig viste materialer som robust modulerte testendepunktsatom P27 plan – i intakte celler, vår pilot skjerm også utsatt svakhetene ved denne metode, nemlig at de molekylære mål for SMIPs være uidentifiserte hvilken den modulerte testingen er endepunktet ikke nødvendigvis kausale til de beste mobil konsekvenser av forbindelsene identifisert. For eksempel vår RNA interferens forskning viste at ikke p27 ingen p21 var nødvendig for SMIP-indusert G1 forsinkelse i LNCaP-S14 vev. Det er umulig at ineffektivitet av den lille interfering RNA-mediert knockdown skjult denne typen avhengighet SMIP handlinger, siden p27 og mangler av p21 redusert brøkdel av celler i G1 og dermed avsløre at knockdown effektiviteten oppnådd her var funksjonelt følge.
i tillegg, p21 og P27 kjeder i SMIP-behandlet knockdown-celler var imidlertid lavere eller lik med nivåene i ubehandlede kontrollcellene, hvilket indikerer liten opphopning av CKIs oppdaget ved SMIP tilsyn for å knockdown cellene kommer til å være utilstrekkelig til å resultere i en celle-syklus arrest.Two potensial informasjonen kan bli tilbudt å rasjonalisere dispensability av p21 og p27 for SMIP-indusert G1 forsinkelse indusert av SMIPs: Først har det vært godt etablert at mus embryonale fibroblaster mangler p27 og p21 opphold dyktigere i å gi et svar til negative sprer signaler med cellesyklus arrest fordi pocket proteiner p107 og p130, som har CKI aktivitet selv, kompensere for tap av p27ANDp21. Deretter SMIPs indusert nedregulering av ulike gode cellesyklus regulatorer, inkludert cykliner E sammen med en og CDK4, som har blitt fullstendig bevart på p27 og p21 knock-down.UNC1215
Derfor er det tenkelig at den kombinerte effectation av cyclin /CDK nedregule andCDK hemming av pocket proteiner og andre CKIs utgjør om SMIP-mediert cellesyklusen forsinkelse i fravær av p27 og p21. Selv om det synes at materialene er identifisert i dagens foreløpige monitor forårsaket p27 oppregulering som en sekundær effekt av cellesyklus forsinkelse, ved hjelp av nukleær p27 akkumulering som et test endepunkt lett tillot identifisering av cellepermeable stoffer som har antiproliferativ aktivitet. Som de forårsaker celle-syklusforsinkelse og apoptose i flere forskjellige prostatakreftceller, men ikke i normale humane fibroblaster betydelig, både SMIPs utstillingskreftcelle selektivitet. Videre, de betraktet som en stiv surrogat for in vivo tumorutvikling og inhibere kolonidannelse i bløt agar, som er egentlig et karakteristisk for den endrede fenotype av kreftvev.
