Abstract
Gastric og kolorektal kreft (GC og CRC) har dårlig prognose og er motstandsdyktig til kjemo- og /eller strålebehandling. I den foreliggende undersøkelse, blir de profylaktiske effekter av dendrittisk celle (DC) vaksinering evaluert på sykdomsprogresjon og kliniske fordeler i en gruppe av 54 GC og CRC pasienter behandlet med DC immunterapi i kombinasjon med cytokin-induserte spekk (CIK) celler etter operasjonen med eller uten cellegift eller strålebehandling. DC ble fremstilt fra de mononukleære celler isolert fra pasienter ved bruk av IL-2 /GM-CSF og lastet med tumorantigener; CIK-celler ble fremstilt ved inkubering av lymfocytter fra perifert blod med IL-2, IFN-γ, og CD3-antistoffer. DC /CIK terapi startet 3 dager etter lavdose kjemoterapi og ble gjentatt 3-5 ganger i 2 uker i en syklus med et total på 188,3 ± 79,8 x 10
6 DC og 58,8 ± 22,3 x 10
8 CIK celler. Cytokin nivåer i pasientenes sera før og etter behandlingene ble målt og oppfølgingen ble gjennomført for 98 måneder til å bestemme sykdomsfri overlevelse (DFS) og total overlevelse (OS). Resultatene viser at alle cytokiner testet ble forhøyet med betydelig høyere nivåer av IFN-γ og IL-12 i både GC og CRC årskull av DC /CIK behandlede pasienter. Ved Cox regresjonsanalyse, DC /CIK behandling reduserte risikoen for postoperative sykdomsprogresjon (p 0,01) med en økt OS ( 0,01). Disse resultater viser at i tillegg til kjemo- og /eller radioterapi, er DC /CIK immunoterapi et potensielt effektiv metode for kontroll av tumorvekst for postoperativ GC og CRC pasienter
relasjon:. Gao D, Li C, Xie X, Zhao P, Wei X, Sun W, et al. (2014) Autolog Tumor Lysate-Pulsed Dendritic Cell Immunterapi med cytokinresistent Induced Killer Cells Forbedrer Overlevelse i Gastric og pasienter med kolorektal kreft. PLoS ONE 9 (4): e93886. doi: 10,1371 /journal.pone.0093886
Redaktør: Michael Lim, Johns Hopkins Hospital, USA
mottatt: 1 august 2013; Godkjent: 10 mars 2014; Publisert: 03.04.2014
Copyright: © 2014 Gao et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Forfatterne har ingen støtte eller finansiering for å rapportere
Konkurrerende interesser:.. Tilsvarende forfatter Jian Jian Li er en PLoS ONE Editorial Board medlem, og dette endrer ikke vår tilslutning til PLoS ONE redaksjonelle retningslinjer og kriterier
Innledning
Magekreft kreft~~POS=HEADCOMP (GC) og tykktarmskreft (CRC) er store ondartede sykdommer i fordøyelseskanalen. Mens GC er den vanligste kreftformen i Asia-Pacific-regionen, er CRC rangert som den fjerde vanligste kreftformen hele verden, med rundt 1,2 millioner nye tilfeller og 609,051 dødsfall årlig [1]. Kirurgisk reseksjon med eller uten adjuvant kjemoterapi og /eller strålebehandling fortsatt nøkkelen modalitet for GC og CRC, men dessverre viser begrensede kliniske fordeler på grunn av høy grad av tumormetastaser. Selv om nåværende adjuvant chemo-strålebehandling har vist seg å forlenge overlevelses i nærvær av tilbakevendende lesjoner [2], [3], alvorlige bivirkninger som vanligvis begrenser effektiviteten av denne anti-kreft modalitet [2] – [4]. For ytterligere å forbedre total overlevelse for GC og CRC pasienter, er det avgjørende å utforske nye måter å kontrollere metastase med eller uten bruk av tradisjonell cellegift-og /eller strålebehandling.
De dendrittiske celler (DCS) spille en avgjørende rolle i induksjon av antigen-spesifikk T-celle-responser for å tilveiebringe aktiv immunterapi [5] – [7]. Kliniske studier med spesielt utformet DC-målrettede kreftcellevaksiner demonstrerte ulike kliniske fordeler. Pasienter med lymfom [8], [9], metastatisk melanom [10], [11], tykktarmskreft, og ikke-småcellet lungekreft [12] viste at vaksinering med tumor antigen-pulset DC, enten isolert direkte fra blod eller generert
ex vivo
fra blod forløpere, fremkalte antigen spesifikk immunreaksjon og, i noen tilfeller, betydelige tumorrespons. Faktisk, bruk av en aktiv immunterapi diett, Sipuleucel-T (APC8015) som brukes ved aktivering av perifere mononukleære blodceller (PBMC) med en prostatisk sur fosfatase (PAP), et fusjonsprotein av prostatacancer antigen, sammen med GM-CSF, resulterte i omtrent 4 måneders-forlenget median overlevelse i prostatakreftpasienter [13] – [15], og ble godkjent av FDA for behandling av metastatisk prostatakreft [14], [16], [17]. CIK celler er en undergruppe av natural killer T-lymfocytter (NKT) som er overveiende CD3
+ CD56
+ type II NKT-celler [18], og slike celler kan genereres
ex vivo
ved inkubasjon perifere blodlymfocytter med et agonistisk anti-CD3 monoklonalt antistoff, interleukin (IL) -2, IL1-β og interferon (IFN) -γ. CIK celler, støttet av oppmuntrende resultater fra kliniske studier i både autologe og allogene sammenhenger, er kjent for å cytolytically eliminere kreftceller [19]. I motsetning til lymfokin-aktiverte dreper (LAK) celler, som er cytotoksiske effektor-T-celler stimulert hovedsakelig som reaksjon på høy konsentrasjon av interleukin-2 (IL-2), oppviser CIK-celler forsterket tumorcelle-lytisk aktivitet [20], [21 ], høyere formeringshastigheten [22], og relativt lavere toksisitet [23]. Selv om passiv immunterapi ved adoptiv overføring av T-celler er antatt å være effektiv i kontroll av primære tumorer, er det uklart hvorvidt passiv immunterapi er effektivt ved langvarig kontroll av tumor tilbakefall [24]. På den annen side, har den aktive immunoterapi ved å bruke tumorspesifikke vaksiner, slik som DC-vaksine, av potensiell nytte til å betydelig øke tumor-spesifikke effektor og minne-T-celler. Den anti-tumorrespons som utløses av DC /CIK behandling har blitt rapportert i en rekke
ex vivo product: [25] – [29] og
in vivo product: [30] undersøkelser så vel som i foreløpige kliniske studier hos pasienter med non-Hodgkins og Hodgkins lymfom [31], [32] og ikke-småcellet lungekreft med få bivirkninger [33]. I den foreliggende undersøkelse, er kliniske nytten evaluert i en gruppe av 54 GC og CRC pasienter behandlet med DC immunterapi i kombinasjon med cytokin-indusert dreper (CIK) celler etter kirurgi med eller uten kjemoterapi eller strålebehandling. Resultatene viser forbedret forekomst av DFS og OS med forhøyede nivåer av IFN-γ og IL-12 i både GC og CRC årskull av DC /CIK behandlede pasienter.
Pasienter og metoder
Studiedesign , rekruttering av pasienter og datainnsamling
Vi gjennomførte studien med pasienter behandlet i Kirurgisk avdeling og Center of Biological Therapy, Qingdao Central Hospital, Qingdao, Kina 2005-2010 (tabell 1). Pasientene ble rekruttert med følgende kriterier: 1) 18 år og eldre, 2) patologisk bekreftet GC eller CRC, 3) gjennomgikk kirurgisk reseksjon av primærtumor, 4) ingen tegn på tumormetastaser eller residiv før du får cellebasert immunterapi, 5) å ha fullført chemo-og /eller strålebehandling i minst en måned, og 6) signerer samtykkeskjema. Pasienter i kontrollgruppen ble rekruttert med demografiske og kliniske patologiske egenskaper. I alt 27 pasienter ble randomisert til celle-basert immunterapi og 27 pasienter ble tatt med i kontrollgruppen. Svulster ble iscenesatt i henhold til International Union Against Cancer tallet (UICC) klassifikasjon basert på pTNM undergrupper. Alle pasientenes informert samtykke ble innhentet og prosedyrene fra studien ble gjennomgått og godkjent av Ethic Review Board of Qingdao Central Hospital. Etter cellebasert immunterapi, alle pasienter fått oppfølging av sykehusbesøk og /eller telefonintervjuer i minst hver 6 måneder. Lokal tumorresidiv og fjernmetastaser ble undersøkt av tenkelig analyser. DFS (sykdomsfri overlevelse, tidsintervallet mellom kirurgi og tumorresidiv) og OS (total overlevelse, tiden mellom kirurgi og siste oppfølging) ble samlet i prosjektet forskningsdatabasen. DFS og OS priser ble beregnet i både behandlings- og kontrollgrupper fra datoene for kirurgi og oppfølginger ble gjennomført for alle pasienter innen august 2011, herunder pasienter med 12 måneder eller lengre periode etter immunterapi.
DC vaksine og CIK celleterapi
En dose på 1 x 10
6 enheter IL-2 (Quangang Pharma Co. Shandong, Kina) i 250 ml fysiologisk saltvann ble utarbeidet og intravenøst administrert til pasienter i behandlingsgruppe, en gang daglig i 5 påfølgende dager. Tre til seks dager etter IL-2 injeksjon, mononukleære celler (4-6 × 10
9) ble samlet inn fra totalt 6-9 liter sirkulerende blod av COBE Spectra Aferese System (Gambro BCT Inc., Colorado, USA ) og lagret i 120-150 ml plasma. Dersom de mononukleære celler var mindre enn 4 x 10
8 /Liter, GM-CSF (150 ug) ble subkutant tilført pasientene-gang daglig i 1-3 dager før ytterligere samling av mononukleære celler ble behandlet.
antigen fremstilling
tumor antigen ble fremstilt ved å følge den etablerte protokoll [34], [35] fra human AGS gastrisk kreft eller LS-174T tykktarmskreftceller. Tumorceller ble dyrket i 2-3 passasjer (1-2 x 10
8), og oppsamlet, og vasket med normal saltløsning for 3 ganger, og lysert ved frysing-tining tre ganger, og analysert med ultralyd celleoppbrytning. Lysater fra tumorcellene ble deretter fraksjonert ved sentrifugering (1200 opm x 5 min), og supernatanten ble oppsamlet og filtrert med et 0,22 filter (Carrighwohill, Co. Cork, Irland), og proteinkonsentrasjonen i supernatanten ble målt før lagring ved – 80 ° C.
Fremstilling av DC og CIK celler
Mononukleære celler ble isolert fra de oppsamlede celler fra perifert blod av GC og CRC pasient ved å følge en etablert metode [36], [37] ved hjelp av Ficoll (GE Healthcare livet Science, Shanghai, Kina). Isolerte celler ble oppslemmet i RPMI 1640 medium ved en konsentrasjon på 1 x 10
7 mL
-1 og dyrket i 175 cm
2 cellekulturflasker ved 37 ° C, 5% CO
2 etter 2 timer. Adherente celler ble dyrket i serumfritt DC kulturmedium (CellGenix, Freiburg, Tyskland) inneholdende 20 ng /ml interleukin 4 (IL-4) og 50 ng /ml GM-CSF ved 37 ° C, 5% CO
2 etter 6 dager. DC kulturmedium innehold fremstilt tumor-antigen ble så tilsatt i dyrkede cellene til en sluttkonsentrasjon på 50 ug /ml, og dyrket i ytterligere 2 dager. Forfalt DCs ble undersøkt ved flowcytometri for DC markører CD83 og HLA-DR. Forberedelsene ble testet som bakterier og pyrogenfri. En del av den fremstilte DC ble infusert i pasientene og de gjenværende DC ble lagret ved -80 ° C. Suspensjonsceller ble dyrket i RPMI 1640 medium (2 x 10
6 /mL) inneholdende 10% BFS, 100 U /mL IL-2, 300 U /ml IFN-γ, 20 ng /ml CD3 monoklonalt antistoff (R D Systems, Minneapolis, Minnesota, USA), og 40 U /ml gentamycin. På dag 8, ble en del av cellene undersøkt ved strømningscytometri for CIK cellemarkører med antistoffer mot CD3, CD8 og CD56. Cellene ble deretter holdt i normal saltløsning med 1% albumin, og resten av suspensjoner celler ble holdt i kultur i ytterligere 7 dager.
DC vaksine og CIK celle administrasjon
Pasienter i behandlingsgruppen mottatt en syklus av lav dose kjemoterapi start på dagen etter mononukleære celler samling med Carmofure (100 mg, po., bud) for 5~6 dager. Infusjon av DCs og CIK celler ble startet på dag to eller dag tre etter kjemoterapi. Fremstilt DC-celler ble delt i to deler: en del ble blandet med CIK-celler i 250 ml normal saltoppløsning inneholdende 1500 U /mL IL-2 og 1% albumin, og infusert i pasienten intravenøst. Den andre delen ble suspendert i 1,5 ml normal saltløsning og injisert subkutant inn i området av drenerende lymfeknuter i tilknytning til tumorsteder. Behandlingen ble gjentatt 3-5 ganger i 2 uker som en syklus. Pasienter med avansert stadium sykdommer mottatt 2 sykluser av behandlingen, mens tidlig stadium pasienter ble behandlet med en syklus. Immunresponser av pasienter ble overvåket før og etter behandling ved måling av serumnivåer av IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-10 og IL-12 bestemt ved hjelp av ELISA (R 0,05. Alle statistiske analyser ble utført ved hjelp av SPSS 16.0 for Windows (SPSS, Chicago, IL, USA).
Resultater
Baseline informasjon
Totalt 54 pasienter med histologisk bekreftet mage eller kolorektal adenokarsinom ble tilfeldig rekruttert inn i denne studien består av 27 pasienter i hver gruppe. De demografiske og kliniske patologiske data for pasienter i behandlings- og kontrollgrupper ble presentert i tabell 1. Halvparten av pasientene i behandlingsgruppen og alle pasientene i kontrollgruppen hadde fått minst en syklus av chemo-stråling før innmelding. Immunterapi ble startet i minst en måned etter avslutningen av kjemoterapi og /eller strålebehandling og oppfølgingstid var 98 måneder for alle pasientene i behandlings- og kontrollgrupper.
Kjennetegn på DC /CIK celler for celle infusjon
Det gjennomsnittlige antall celler infused inn pasienter i en syklus var 188,3 ± 79 × 10
6 for DC og 58,8 ± 22,3 × 10
8 for CIK celler. Celler som uttrykker DR /CD11c og CD83 (DC markører) eller CD3 /CD8 og CD3 /CD56 (CIK markører) ble analysert. DCS fremstilt fra GC-pasientene var 88% -81% positive for DR /CD11c og 85% -71% positive for CD83 (Fig. 2A, B). CIK celler fremstilt fra GC pasientene viste 73% -46% positive for CD3 /CD8 og 42% -16% positive for CD3 /CD56 (fig. 2C, D). I tillegg DC fremstilt fra CRC-pasientene var 87% -80% positive for DR /CD11c og 84% -71% positive for CD83 (Fig. 3A, B), og CIK celler fra CRC-pasientene var 75% -48% positive etter CD3 /CD8 og 41% -11% positive for CD3 /CD56 henholdsvis (fig. 3C, D). Den samlede cytolytisk effekt av CIK celler fra alle pasientene ble forsterket ~2.5 fold. Disse resultatene tyder på at flertallet av DC og CIK celler preparert fra pasientene var moden og funksjonell.
Bilder
Serum cytokin nivåer etter DC /CIK terapi
Vi undersøkte serumnivåer av en gruppe av cytokin for hver pasient før og etter DC /CIK behandlinger (figur 4 for GC (A) og CRC (B)). Nivåene av IL-2, IL-6 og IL-10 svakt forbedret, uten noen statistisk signifikans i sera av GC og CRC pasienter (fig. 4A, B). Men serum IL-12 og IFN-y-nivåene var signifikant økt i både GC og CRC pasienter, noe som indikerer at DC /CIK terapi kan spesifikt fremme en Th1 immunrespons å megle tumor drepe effekten av DC /CIK terapi.
Disease overlevelse (DFS) og total overlevelse (OS) av pasientene etter celle-basert immunterapi
Som vist i figurene 5 og 6, DFS og OS ble begge signifikant forlenget hos pasienter i DC /CIK behandlingsgrupper (GC: 5 års DFS rate: 66%, OS rate: 66%; CRC: 5 års DFS rate: 66%, OS rate: 75%) sammenlignet med pasientene i kontrollgruppene (GC: 5- år DFS rate: 34%, OS rate: 34%; CRC: 5 års DFS rate: 8%, OS rate: 15%; p 0,01). For å undersøke differensial respons av GC og CRC, analyserte vi to gruppene (GC: p 0,05; CRC: p 0,01) og fant ut at CRC er mer følsomme for DC /CIK terapi enn GC. I tillegg analyse med multivariat Cox proporsjonal regresjon bekreftet at DC /CIK terapi betydelig og uavhengig reduserte risikoen for postoperativ sykdomsprogresjon (Odd forhold: 0,09, 95% CI: 0.02-0.42; p 0,01) eller pasientens sykdommer (Odd forhold: 0,05, 95% KI:. 0,01 til 0,37; p 0,01) etter justering for alder, kjønn, svulst klasse, TNM etapper, og tidligere kjemoterapi og /eller strålebehandling
(A) Den generelle overlevelses~~POS=TRUNC av mage kreftpasienter. 1-, 3- og 5-års overlevelse i behandlingsgruppen var 93%, 82% og 66%, sammenlignet med kontrollgruppen 79%, 42% og 34% henholdsvis. B) Sykdomsfri overlevelse av mage kreftpasienter. 1-, 3- og 5-års overlevelse i behandlingsgruppene (rød boks merket) var 86%, 73% og 66%, sammenlignet med kontrollgruppen 79%, 42% og 34% henholdsvis. De kumulative overlevelseskurver i A og B ble analysert av Kaplan-Meier metoden.
(A) Den totale overlevelsen av pasienter med kolorektal kreft. 1-, 3- og 5-års overlevelse i behandlingsgruppen var 100%, 77% og 75%, sammenlignet med kontrollgruppen 85%, 23% og 15% henholdsvis. (B) Sykdomsfri overlevelse av mage kreftpasienter. 1-, 3- og 5-års overlevelse i behandlingsgruppen var 100%, 69% og 66%, sammenlignet med kontrollgruppen 69%, 15% og 8% henholdsvis. De kumulative overlevelseskurver i A og B ble analysert av Kaplan-Meier metoden.
Mulige negative virkninger av cellebasert immunterapi
Den vanligste bivirkningen effekt observert i alle pasienter som får DC /CIK terapi var feber, som skjedde i 9 av 27 behandlede pasienter (33%) i området fra 37,5 til 40 ° C. Alle pasientene kom seg spontant eller etter febernedsettende behandling med ikke-steroid medisin. Det ble ikke observert andre betydelige komplikasjoner tilhørende cellebasert immunterapi.
Diskusjoner
Kreft immunterapi hadde vist en potensiell effekt på tumorvekst kontroll og pasientoverlevelse [14], [38], [39] da nyheten sluppet om at «i stedet for å bruke kirurgi, cellegift eller strålebehandling, forskere fra National Institutes of Health er å finne så-langt begrenset, men inspirerende suksess i en ny tilnærming for å bekjempe kreft, ved hjelp av immunsystemet til å angripe svulster veien det ville være en forkjølelse eller influensa. -CNN.com (August 2006) «. Selv om omfattende studert i celler og dyremodeller, kliniske data om den eksakte fordel for immunterapi i pasientens overlevelse og sykdomsutvikling gjenstår å bli ytterligere undersøkt [17], [40]. Til tross for begrensede størrelsen på årskull, denne studien viser en bemerkelsesverdig forbedring i post-kirurgiske kontroll av tumor tilbakefall og overlevelse i GC og CRC-pasienter behandlet med kombinert DC /CIK terapi. Det har vært godt etablert at DCS prime naive T-celler og DC vaksine kombinert med CIK celleterapi har oppnådd oppmuntrende løftet som en roman terapeutisk tilnærming for sykdomskontroll i bestemte kreftformer [41]. DC [6], [7], [42] har evnen til å presentere tumorantigener for å indusere T-lymfocytter, og de spesifikke cytotoksiske T-celler mot tumorantigener [43]. Sipuleucel-T, den første DC vaksine, ble godkjent for klinisk anvendelse av FDA i USA for behandling av asymptomatisk metastatisk kastrering resistent prostatakreft, bedre pasientenes OS i fase III studie [14]. Andre lovende resultater ble rapportert i de senere fase III-studier ved hjelp av svulst vaksine for å behandle ulike sent stadium kreft [44], inkludert melanom, follikulært lymfom, CRC, og NSCLC. Studier i klinikkene har etablert at DCS-fangst og prosesstumorassosierte antigener og utskiller cytokiner å sette i gang en immunrespons [45].
I tillegg til DC vaksine, cıks blir indusert av cytokiner og ha uspesifikke cytotoksisitet mot tumorer [24]. CIK celler kan drepe tumorceller direkte, men har vesentlig kortere anti-kreft-effekt og de er mindre tilbøyelige til å få tak tumorutvekst på lang sikt [24]. I motsetning til dette er like vaksine vist seg å indusere tumor-spesifikke effektor og minne-T-celler [24]. Derfor kan en kombinasjon av DC-vaksine med CIK behandling har et potensial høyere cytotoksisk aktivitet og spesifisitet i effektor-T-celler, noe som viser både på kort og lang sikt anti-tumor effekt. Etter avtale med de kliniske fordelene observert i andre kliniske studier [44], vår studie antyder at DC /CIK behandling kan betydelig forbedre pasientens overlevelse, spørre sin fremtid klinisk undersøkelse.
Selv om en rekke av proinflammatoriske cytokiner var forhøyet i DC /CIK pasienter behandlet med bare to Th1- cytokiner, IL-12 og IFN-γ, viste en betydelig økning i pasientenes sera i vårt studium. Studier har vist at IFN-y og IL-12 spiller avgjørende roller i immunterapi ved hjelp av DC og CIK [28], [33]. Tumorceller er svært heterogen [46] og en spesifikk tumor kan inneholde celler med både høy og lav MHC-I-populasjoner [47], [48]. Interessant nok viser MHC-I ekspresjon heterogene mellom tumorceller og stråling fremmer immunologisk gjenkjennelse av tumorcellene ved å immunceller via MHC-I [49]. Imidlertid, sannsynligvis på grunn av heterogeniteten i en gitt tumor, en enkelt type immunterapi kan bare være effektiv i en subpopulasjon av kreftpasienter. På lignende måte kan tumorceller med høyere MHC-I ekspresjon være mer følsom overfor DC vaksineterapi, mens celler med lavere MHC-I ekspresjon kan bli drept av CIK. Våre resultater støtte som kombinerte DC /CIK terapi kan fremme tumorcellecytotoksisitet ved å målrette ulike populasjoner av kreftceller, slik som de med ulike nivåer av MHC-I.
De doser av DC og CIK til pasientene i denne studien ble fastsatt basert på tidligere dose eskalerende test, og funnet å være trygg i alle pasienter. Det skal bemerkes at i denne studien, data var avledet fra pasienter som er behandlet med en modifisert diett, dvs. før lymfocytt samling ved intravenøs administrering av IL-2 for å forbedre funksjonen og antall lymfocytter, noe som kan bidra til en betydelig rolle i DC /CIK terapi. I tillegg pasienter fikk også en syklus av lavdose cellegift før DC og CIK infusjon, som også kan påvirke den totale effektiviteten av DC /CIK terapi. Vi antok at en 3-dagers gap er kritisk for tilstrekkelig «utvasking» av kjemoterapeutiske midler, for ikke å påvirke effektiviteten av infusert DC og CIK. Pasienter i kontrollgruppen hadde tidligere blitt behandlet med minst en syklus av kjemoterapi, kan sammenlignes med pasienter som deltok i immunterapi-gruppen (tabell 1 og figurene 5, 6). De potensielle virkninger av lavdose kjemoterapi før celle infusjon [28] kan også indusere tumorcelledreping, oppregulerer ekspresjonen av tumorantigenet og bidra til sammensetningen av vertsimmunceller. Derfor vil videre studier gjennomføres med større pasient kohorter. Som konklusjon, tyder dette på klinisk studie at kombinasjonen av DC vaksine og CIK terapi kan betydelig bedre sykdomsfri overlevelse i mage og pasienter med kolorektal kreft.
Takk
Vi takker Dr. William Murphy og Dr. Cheikh Menaa på NCI-designet omfattende kreft sentrum av University of California i Davis for nyttige diskusjoner, og den uhyre støtte fra leger og sykepleiere i biotherapy sentrum, Qingdao Central Hospital.
