Abstract
frizzled homolog 3 reseptoren ble oppregulert i flere gastrointestinale kreftformer som esophageal og mage kreft. Videre har frizzled homolog 3 nylig rapportert å bli uttrykt i kolorektal adenom prøver. I denne studien undersøkte vi den kliniske betydningen av frizzled homolog 3 protein i pasienter med kolorektal kreft. Ved hjelp immunocytokjemisk flekker, ble frizzled homolog tre uttrykk undersøkt i 186 kolorektal kreft prøver, 79 kolorektal adenom eksemplarer, 133 kolorektal polypp eksemplarer, 127 kolorektal kreft prøver med lymfeknute og /eller fjernmetastaser, 310 eksemplarer av en rekke ikke-kolorektal kreft metastatisk karsinom og 40 prøver med samtidig forekomst av tykktarmskreft, tykktarms adenom og kolorektal polypp. Statistisk analyse ble brukt til å korrelere frizzled homolog 3 protein uttrykk til clinicohistopathological faktorer, tilbakefall /metastase og overlevelse etter oppfølging i 42 måneder i pasienter med kolorektal kreft. Frizzled homolog 3 protein ble uttrykt i 100% kolorektal kreft prøver, 89% kolorektal adenom prøver, 75% kolorektal polypp prøver og 69% normale kolorektal epitelvev. Videre frizzled homolog 3 immunocytokjemiske scorene var høyt korrelert med kolorektal kreft progresjon. Videre ble frizzled homolog 3 uttrykt i en relativt lavere andel av metastatisk leverkreft og metastatisk nyre klar cellekreft med brennvidde og veldig svak flekker enn andre metastatiske tumortyper. På den annen side, de frizzled homolog 3 immunocytokjemiske score av kolorektal adenom med synkrone kolorektal karsinom var betydelig høyere enn de rene kolorektal adenomer. Statistisk analyse viste at frizzled homolog 3 immunocytokjemiske score var forbundet med Dukes stadium og lymfeknute status. Til slutt, stratifisert grupper av pasienter med kolorektal kreft hadde betydelige forskjeller i tilbakefall /metastase og overlevelse. I konklusjonen, har den nåværende storstilt studie viste klart at frizzled homolog 3 protein kan generere klinisk viktig informasjon for pasienter med kolorektal kreft.
Citation: Wong SCC, Han CW, Chan CML, Chan AKC, Wong HT, Cheung MT, et al. (2013) Klinisk Betydningen av frizzled homolog 3 Protein i pasienter med kolorektal kreft. PLoS ONE 8 (11): e79481. doi: 10,1371 /journal.pone.0079481
Redaktør: Masaru Katoh, National Cancer Center, Japan
mottatt: 5 mai 2013; Godkjent: 23 september 2013; Publisert: 08.11.2013
Copyright: © 2013 Wong et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av den direkte Grant fra det kinesiske universitetet i Hong Kong (Prosjekt Kode: 2041412) og en privat donasjon. Men de bevilgende myndighet hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet.
Konkurrerende interesser: Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Tykktarmskreft (CRC) er den tredje hyppigst diagnostisert kreft på verdensbasis, og står for mer enn. 1 million tilfeller og 600.000 dødsfall hvert år [1]. Utviklingen av CRC er en flertrinnsprosess, og denne sykdommen kan administreres dersom oppdages på et tidlig stadium når det er for det meste symptomfri [2-4]. Til tross for betydelige forbedringer i deteksjon, diagnose og behandling av CRC i de siste tiårene, den langsiktige prognosen for metastatisk CRC pasienter forblir fattige [5,6]. Kliniske studier viser at dagens staging kriterier som er basert på kliniske og patologiske funn, selv om nylig revidert, ikke gjenspeiler variasjonen i prognose og overlevelse for metastatisk CRC [7]. Derfor en nøyaktig prognostisk markør som en) bestemmer biologiske natur og oppførsel av CRC, og 2) reflekterer overlevelse forskjeller og kliniske erfaringer, vil være av største betydning for å optimalisere individuell behandling av CRC-pasienter.
Wnt faktorer utgjør en stor familie av utskilte glykoproteiner som deltar i embryonal utvikling ved å regulere vevet mønster, organogenese, spesifisering av legemet plan og fremme vev homeostase hos voksne [8]. På cellenivå, Wnt faktorer kontrollere spredning, differensiering, overlevelse, motilitet og polaritet [9]. Streng kontroll av Wnt signalering er avgjørende for riktig orchestration av utvikling og avvikende konstitutiv aktivering av Wnt signalveien vil føre til ukontrollert cellevekst, vekst og overlevelse, og derfor fremme utviklingen av kreft [9]. Frizzled homolog protein (FZD) er en syv-pass trans typen reseptor og ti medlemmer (FZD1-FZD10) har blitt identifisert hos mennesker [10]. Wnt er en ligand av FZDs og består av 19 familie gener hos mennesker [11]. Bindingen av Wnt ligander til sin celle-overflate reseptorer transduces intracellulære signaler gjennom enten kanonisk eller ikke-kanoniske Wnt-signalveien. I den kanoniske Wnt signalveien, Wnts binder til et kompleks av FZD og low-density lipoprotein-relaterte reseptorer 5 og 6 [12-14]. De resulterende signaler forhindre β-catenin fosforylering av et multiprotein kompleks sammensatt av adenomatøs polypose coli, glykogensyntasekinase 3β, casing kinase 1 og axins, og fremmer stabilisering av cytosoliske β-catenin som noe av det vil translocate inn i kjernen [12- 14]. Atom β-catenin vil assosiere med T-celle faktor /lymfocytter enhancer transkripsjonsfaktorer for å aktivere målgener involvert i celle overlevelse, spredning eller invasjon [12-14]. Den ikke-kanoniske Wnt signalveien består av Wnt /Ca
2 + sti og Wnt /c-Jun N-terminal kinase (planar celle polaritet) sti og Wnts binder seg til en kompleks består av FZD, reseptor tyrosin kinase-lignende foreldreløs reseptor 2 /reseptor relatert til tyrosinkinase for aktivering av nedstrøms signal [12-14]. I Wnt /Ca
2+ vei, aktiverer Wnt intracellulær Ca
2+ signalering, så vel som Ca
2 + – avhengige proteinkinaser, slik som protein-kinase C og kalmodulin-avhengig protein-kinase II [12- 14]. I Wnt /JNK-reaksjonsveien, aktiverer reseptor stimulering Dishevelled, som i sin tur aktiverer Rho familien av GTPases som RhoA og Rac [12-14]. RhoA stimulerer c-Jun uttrykk gjennom fosforylering av c-Jun ved Rho assosiert kinase [12-14]. I sammendraget, spiller FZD en avgjørende rolle i både kanoniske og ikke-kanoniske veier.
Menneske
FZD3
ble kartlagt til kromosom 8p21 [10,15].
FZD3
mRNA uttrykkes i ulike normalt vev (muskel-skjelettlidelser, nyre, bukspyttkjertel, lillehjernen og hjernebarken) [10], mens det er oppregulert i flere kreftformer (spiserørskreft, lungekreft plateepitelkarsinom, primær akutt og lymfatisk leukemi, myelom, lymfom og Ewing sarkom) [16-19]. En fersk rapport viser at
FZD3
mRNA ble uttrykt i en liten kohort av sporadisk adenom og familiær adenomatøs polypose adenom vev [20]. Betydningen av det er ikke kjent ennå, og derfor vil det være interessant å undersøke uttrykket av FZD3 protein i en stor kohort av primære og metastatisk CRC prøver og kolorektal adenom (CAD) prøver. Den innhentet informasjon vil være svært nyttig for oss å undersøke den prognostiske potensialet FZD3 protein hos pasienter med CRC. I tillegg ble ekspresjon av FZD3 protein i andre typer av metastatiske kreftformer også undersøkt for å utforske hvorvidt FZD3 protein kan brukes som et supplement diagnostisk markør for metastatisk CRC.
Materialer og metoder
Etikk erklæringen
Undersøkelsen ble gjennomført i henhold til de prinsipper som er nedfelt i Helsinkideklarasjonen. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle pasienter eller pårørende for bruk av disse prøvene i forskning. Siden pasienten samtykke var ikke mulig for arkiv vev som noen pasienter var døde på tidspunktet for studien, etisk komité spesielt fravikes behovet for samtykke fra disse pasientene. Studien ble godkjent av Klinisk forskningsetiske komité for Queen Elizabeth Hospital, Hong Kong Special Administrative Region (HKSAR).
vevsprøver
Syv årskull av formalinfiksert, parafininnebygd (FFPE ) prøvene ble rekruttert: 1) CRC med Dukes klassifiseringssystem fase A (43), trinn B (48), trinn C (63), trinnet D (32), total: 186, 2) CAD med mild dysplasi (25), moderat dysplasi (28), alvorlig dysplasi (26), totalt: 79, 3) kolorektal polypp som er nærmere definert som ikke-adenomatøse eller ikke-neoplastiske polypper som består av juvenile (35), hyperplastisk (40), Peutz-Jeghers ( 28) og inflammatoriske polypper (30), total: 133, 4) en FFPE blokk med lymfeknutemetastase fra hver Dukes C-prøven, total: 63, 5) en FFPE blokk hver med lymfeknute og fjernmetastaser fra hver Dukes D prøven, totalt: 64, 6) tre hundre og ti ikke-CRC metastatisk karsinom som den primære svulsten var henholdsvis leverkreft (HCC) (23), nyre klar cellekreft (RCCC) (25), plateepitelkarsinom (SCC1) (30) , lunge adenokarsinom (LAC) (25), lunge ikke-småcellet karsinom (LNSCC) (27), papillær skjoldbruskkjertelen carcinoma (PTC) (24), brystkreft (BC) (28), eggstokk klarcellet karsinom (OCCC) ( 30), cervical ikke-småcellet karsinom (CNSCC) (20), eggleder serøs adenokarsinom (FTSAC) (22), overgangsordning celle carcinoma (TCC) (23), småcellet karsinom (SCC2) (15) og kreft med nevroendokrin differensiering (CND) (18), 7) prøver fra førti CRC pasienter (10 Dukes A, 10 Dukes B, 12 Dukes C, 8 Dukes D) med samtidig forekomst av CRC, adenom og polypp (120), ble hentet fra arkivet (2005-2008) fra Anatomisk patologi og cytologi Laboratory, Avdeling for patologi, Queen Elizabeth Hospital, HKSAR, for FZD3 immunocytokjemisk (ICC) farging.
De fleste tilfeller av kolorektal adenokarsinomer i det første kullet ble moderat differensiert (78%), mens resten ble enten godt differensiert (5%) eller dårlig differensiert (17%). Kjønnsfordelingen av adenokarsinom pasienter var 58% menn og 42% kvinner. Alderen varierte fra 42 til 89 år gammel. Av de 79 prøvene som ble undersøkt i adenom kohort 2, 59% var rørformet, 35% var tubulovillous, og 6% var villous adenomer. De prosenter av mild, moderat og alvorlig dysplasi i adenomer var 32, 35 og 33, henholdsvis. Kjønnsfordelingen av adenom pasienter var 53% menn og 47% kvinner. Alderen varierte fra 28 til 85 år gammel. Polypper evaluert i kohort 3 var juvenil (26%), hyperplastisk (30%), Peutz-Jeghers (21%), og inflammatoriske polypper (23%). Av de 133 polypper, den kjønnsfordeling var 51% menn, 49% kvinner og alder varierte fra 23 til 76 år gammel. Den klinisk informasjon av pasientene med samtidig forekomst av CRC, adenomer og polypper i den syvende kullet var moderat differensierte (75%), godt differensiert (7%) eller dårlig differensiert (18%). Kjønnsfordelingen av adenokarsinom pasienter var 60% menn og 40% kvinner. Alderen varierte fra 45 til 87 år gammel Mann
Antistoff
Monoklonale mus anti-human FZD3 antistoff (1: 100 fortynning, klone 169310, MAB1001, R D Systems, Inc., Minneapolis. , USA) ble brukt.
ICC farging og evaluering
seksjoner serie vev (4 mikrometer tykk) ble kuttet og antigen gjenfinning ble utført ved hjelp av Bond epitop Retrieval Solution to på Bond-max automatisert immunostainer (Vision Biosystems, Mount Waverley, Australia) ved 100 ° C i 25 minutter. Farging ble utført i henhold til en standard protokoll i immunostainer. Polymer påvisningssystem ble valgt for å unngå problemet med ikke-spesifikk endogent biotin farging. Spiserørskreft ble anvendt som en positiv kontroll [16], som var montert på hver testbrettet og negative kontroller ble utført ved å erstatte det antistoffet med tris-bufret saltvann. For å måle FZD3 uttrykk i hver pasientprøve nøyaktig, er et maksimalt antall målceller med fargeintensitet som gjenspeiler den generelle uttrykk mønster de viktigste kriteriene for å score. De fargede objektglass ble evaluert i minst 5 felt med høyest antall målceller etter lysmikroskop på X400 forstørrelse av 2 uavhengige observatører uten kunnskap om kliniske resultater og i tilfelle av uenighet, enighet ble nådd etter grundig diskusjon og lysbilder undersøkelse ved hjelp av en multi-ledet mikroskop. Omtrent 250 celler vil bli regnet i hvert felt, og derfor minst 1250 celler vil bli regnet for hver pasientprøve. Alle snittene ble scoret semi-kvantitativt, og uttrykt som en ICC-stillingen ved å multiplisere «prosentandelen av positive celler» og «fargeintensitet», som tidligere beskrevet [21]. Fargeintensitet ble scoret som følger: 0 = negativ; 1 = svak; 2 = moderat; 3 = sterk; og 4 = veldig sterk. ICC poengsum varierte fra 0 til 400. scoring av prosent og fargeintensitet ble rettet mot en) CRC celler, 2) CAD celler og 3) tilstøtende normale epitelceller. Membranøs farging bør være forventet resultat. Men vår erfaring viste at ICC flekker ved hjelp av diaminobenzidin som kromogen ville produsere en fortykket membran flekker som var lik cytoplasma flekker. Dessuten antistoffet anvendt i denne studien hadde den beste ytelsen blant de antistoffer som var blitt testet.
Statistisk analyse
Forskjellen i ICC score til FZD3 protein blant CRC, CAD og tilstøtende normale kolorektal epitelceller ble undersøkt ved hjelp av ikke-parametrisk Kruskal-Wallis test. I tillegg ble ikke-para Spearman rank korrelasjon test brukes til å undersøke hvorvidt FZD3 ICC score var korrelert med CRC progresjon og Dukes klassifisering etapper. Mann Whitney U test ble brukt for å undersøke om ICC score til CAD med synkrone kolorektal karsinom hadde signifikant forskjell fra de av ren CAD. For korrelasjon til kliniske parametre ble multivariat regresjon brukt til å analysere om FZD3 ICC score var korrelert med de klinisk-histopatologiske faktorer av pasientene og chi-kvadrat test ble brukt for å undersøke sammenhengen mellom FZD3 ICC score og tilbakevendende eller metastatisk CRC. Den total overlevelse ble definert som at fra dato for operasjonen til datoen for død på grunn av kreft. Kaplan-Meier-metoden ble benyttet for å bestemme sannsynligheten for overlevelse og log-rank test ble brukt for å sammenligne overlevelse mellom gruppene og Cox-modellen ble brukt for å bestemme de uavhengige prognostiske faktorer for overlevelse. (Statistical Package for Social Sciences versjon 16.0 programvare for Windows, IBM SPSS statistikk, Chicago, IL., USA). En
P
verdi 0,05 ble ansett for å være statistisk signifikant i alle analyser. Alle
P
verdier er tosidig.
Resultater
ICC farging
Som nevnt i ICC farging og evaluering delen, en fortykket membran flekker som lignet cytoplasmisk farging ble oppdaget. Blant de 955 lysbilder som vi har undersøkt, ble interindividuell variasjon finnes bare i 16 slides (1,7%) og enighet ble nådd etter diskusjon ved hjelp av en multi-ledet mikroskop.
ICC farging viste at FZD3 protein ble uttrykt i 100% (186/186) av CRC eksemplarer, 89% (70/79) av DAK eksemplarer, 75% (100/133) av kolorektal polypp prøver og 69 % (129/186) av normal kolorektal epitelvev i tilknytning til CRC vev. Et representativt mikrofotografi av hver prøvetype i det første kullet som ble vist i Figur 1. Positiv kontroll av spiserørskreft viste intens positiv cytoplasma farging mens negativ kontroll ikke har noen ICC flekker (Tall 1E og 1F). Detaljert analyse viste at immunreaktiviteten FZD3 protein, som vist ved ICC score, hadde signifikant forskjell mellom CRC, CAD, kolorektal polypp og normal kolorektal epitelvev (figur 2,
P
0,0001, Kruskal-Wallis test) og omfanget av og medianen av ICC score i ulike prøvetyper ble vist i Tabell 1. FZD3 ICC skår ble sterkt korrelert med de stadier av utviklingen av CRC (
P
0,0001, Spearman rank korrelasjon test ). Videre ICC score til FZD3 protein i CRC prøver var signifikant korrelert med Dukes stadium (figur 3,
P
0,0001, Spearman rank korrelasjon test). Videre våre funn viste at FZD3 protein ble uttrykt i 100% metastatiske CRC-celler i lymfeknuter eller /og fjerne organer fra Dukes 3 og 4 prøver, henholdsvis (figur 4). I tråd med disse resultatene, fortsatte vi å undersøke om FZD3 kan brukes som et supplement diagnostisk markør for metastatisk CRC ved å utføre FZD3 ICC farging i 310 ikke-CRC metastaserende prøver. Resultatene viste at FZD3 protein ble uttrykt i 17% (4/23) av HCC, 12% (3/25) av RCCC, 80% (24/30) av SCC1, 84% (21/25) av LAC, 82% (22/27) av LNSCC, 88% (21/24) av PTC, 86% (24/28) av BC, 80% (24/30) av OCCC, 85% (17/20) av CNSCC, 82% (18/22) av FTSAC, 74% (17/23) av TCC, 100% (15/15) av SCC2 og 100% (18/18) av CND (figurene 5A og 5B). I tilfeller med positive resultater, viste detaljert undersøkelse at fargingen var fokus og veldig svak i HCC, RCCC i forhold til de i andre tumortyper (figur 5B og 6).
Kolorektalkreft
tykktarms adenom
Colorectal polypp
tilknytning normalt epitelvev
Antall specimens18679133186Range av ICC scores243 4000 til 3470-3600 for å 279Median ICC score 32724119297.5Table 1. utvalget og medianen av ICC score i ulike prøvetypene.
CSV ned CSV
(A) Prosent av ulike ikke-CRC metastatisk karsinom med FZD3 ICC flekker og (B ) ICC score til FZD3 i en rekke ikke-CRC metastatisk karsinom. (HCC = leverkreft, RCCC = nedsatt klart cellekreft, SCC1 = plateepitelkarsinom, LAC = lunge adenokarsinom, ikke-småcellet karsinom LNSCC = lunge, PTC = papillær skjoldbruskkreft, BC = brystkreft, OCCC = eggstokk klarcellet karsinom , CNSCC = cervical ikke-småcellet karsinom, FTSAC = egglederen serøs adenokarsinom, TCC = overgangsordning celle carcinoma, SCC2 = småcellet karsinom og CND = kreft med nevroendokrin differensiering).
I likhet observasjonene ble funnet for prøver med samtidig forekomst av tykktarmskreft, CAD og kolorektal polypp. ICC farging for FZD3 ble observert i 100% (40/40) av CRC, 93% (37/40) av CAD, 70% (28/40) av kolorektal polypp. Videre FZD3 ICC skår ble sterkt korrelert med de stadier av utviklingen av CRC (
P
0,0001, Spearman rank korrelasjon test). Av interesse, ICC score til CAD med synkrone kolorektal karsinom var betydelig høyere enn de av rent CAD (
P
0,001, Mann Whitney U test, figur 7).
Multivariat regresjonsanalyse
Multivariat regresjonsanalyse ble brukt for å undersøke om FZD3 ICC score var korrelert med clinicohistopathological faktorer av 186 Dukes A til D CRC pasienter. Signifikante sammenhenger ble funnet med Dukes stadium (
P
0,001) og lymfeknutestatus (
P
0,05), men ikke for alder (
P
= 0,547) , sex (
P
= 0,813), tumorstadium (
P
= 0,284) og grad av differensiering (
P
= 0,462).
residiverende eller metastatisk CRC
Median antall FZD3 ICC score fra 154 Dukes A til C CRC pasienter var 321,5. Ved hjelp av denne median nummer som cut-off point, 27 pasienter med FZD3 ICC poengsum 321,5 og 8 pasienter med FZD3 ICC poengsum ≤ 321,5 hadde residiverende eller metastatisk CRC etter oppfølging i 42 måneder, og sammenhengen mellom FZD3 ICC score og tilbakevendende eller metastatisk CRC var svært signifikant (Chi-kvadrat test: χ
2 = 13,34 ;
P
0,001).
Samlet overlevelse for CRC pasienter
Totalt overlevelseskurver ble plottet for CRC pasienter med FZD3 ICC score 327 og de med FZD3 ICC score ≤ 327 der 327 er median antall FZD3 ICC scorer på en
st kohort av 186 Dukes A til D CRC pasienter. Våre resultater viste at overlevelsen for disse 2 grupper av pasienter var signifikant forskjellig (
P
0,0001, log-rank test, figur 8A). For å analysere dataene på en mer spesifikk måte ble FZD3 ICC score delt inn i 4 grupper etter å ha justert det i synkende rekkefølge: 1) høy FZD3 uttrykk: høyeste 25% (76% til 100%) ICC score, 2) moderat høy FZD3 uttrykk: nest høyeste 25% (51% til 75%) ICC score, 3) moderat lav FZD3 uttrykk: sekunders laveste 25% (26% til 50%) ICC score og 4) lav FZD3 uttrykk: laveste 25% (0 % til 25%) ICC score. Som vist i figur 8B og 8C, overlevelse mellom gruppene 1 og 4 og grupper 2 og 3 var signifikant (
P
0,0001 for A vs D og
P
0,05 for B vs C, log-rank test). Til slutt ble de uavhengige prognostiske faktorer av total overlevelse identifisert av Cox regresjonsmodell funnet å være FZD3 ICC score (
P
= 0,016) og lymfeknutestatus (
P
= 0,037) .
Diskusjoner
FZD3 er en reseptor for Wnt-signalveien og FZD3 protein er nødvendig for utvikling av store fiber traktater i rostral sentralnervesystemet [22], neural crest [23] og hårsekken utvikling [24]. Dessuten har FZD3 protein en dominerende rolle i Wnt-indusert neurittutvekst i Ewing sarkom kreftceller [25] og det er sterkt uttrykt i dårlig differensierte squamous celle spiserørskreft vev [16]. Så langt vi kjenner til, er denne studien den første til å undersøke den kliniske betydningen av FZD3 protein uttrykk i en stor kohort av CRC og sine pre-maligne CAD og kolorektal polypp prøver. Til tross for det faktum at FZD3 protein ble uttrykt i 100% av CRC prøver, 89% av DAK-prøver, 75% av kolorektal polypp prøver og 69% tilstøtende normale kolorektal epitelvev, immunoreaktiviteten av FZD3 hadde signifikant forskjell mellom de 4 grupper av prøver. Videre FZD3 protein uttrykk i CAD som vist av oss passer med de av en tidligere studie som FZD3 mRNA uttrykkes i 79% (11/14) CAD prøver med en median ganger endring på 6,5 [26]. Men FZD3 mRNA ble bare funnet å ha en betydelig oppregulering i 39% (9/23) CRC eksemplarer i samme studie [26]. Årsakene står for denne motstridende resultat kan forklares av følgende grunner: 1) Et lite antall (23) av CRC prøvene ble rekruttert i forhold til oss, 2) mRNA ble oppdaget mens protein ble påvist i vår studie, 3) ved normal vev var blandet med CRC-vev som ikke mikrodisseksjon ble utført i deres studie. Det siste punktet er spesielt viktig fordi varierende grader av tilstøtende normalt vev vil vanligvis bli funnet i kirurgiske prøver og våre funn viste at FZD3 protein ble uttrykt ikke bare i 69% av det tilstøtende normale kolorektale epitelvev, men også i fibroblaster, endotelceller, lymfocytter og histiocytter (data ikke vist). ICC farging av en vev seksjon tillater oss å undersøke enkelt celle i henhold mikroskop og derfor FZD3 protein uttrykk i tumor og normale celler kan være separat kvantifiseres. I virkeligheten ICC farging av FZD3 protein var ikke bare sterkere i invasiv foran enn i tumoren sentrum, men også meget intens i alle metastatiske lymfeknuter og fjerntliggende organer. Det bemerkelsesverdige funn kan vise at FZD3 protein har en viktig rolle ikke bare i begynnelsen av CRC karsinogenese, men også i CRC metastatisk vei til lymfeknuter og fjerntliggende organer. Imidlertid fokal polarisert fordeling av FZD3 som vist ved Pourreyron et al. ble ikke funnet i vår kohort av prøver [27]. Vi fortsatte å undersøke potensialet for FZD3 protein som et supplement diagnostisk markør ved metastatisk CRC ved å utføre ICC flekker i ulike typer ikke-CRC metastatisk karsinom. Våre resultater er svært interessant fordi ICC farging for FZD3 var positiv i varierende grad i alle metastatisk karsinom. Imidlertid viser positiv farging i bare 17% av HCC og 12% av RCCC at FZD3 protein ikke være så nødvendig for den metastatiske prosess av disse 2 karsinomer (figurene 5A og 5B). Oppsummert kan FZD3 ICC flekker være nyttig for å utelukke disse 2 karsinom ved patologisk diagnose fordi flekker var fokus og veldig svak i de FZD3 flekker positive HCC og RCCC tilfeller i forhold til de i andre krefttyper. På den annen side, ble FZD3 protein uttrykt i metastatisk karsinom som inkluderer SCC1, LAC, LNSCC, PTC, BC, OCCC, CNSCC, FTSAC, TCC, SCC2 og CND. De nye resultatene kan vise at FZD3 protein kan være involvert i metastatisk prosess av disse karsinomer. Faktisk er ikke overraskende sterk farging av FZD3 protein i alle tilfeller av CND og SCC2 fordi FZD3 protein er godt kjent for å være involvert i sentralnervesystemet utvikling [22,23,28]. I tråd med disse resultatene, er vi nå undersøke FZD3 protein uttrykk i sine respektive primære svulster for de 11 typer av metastatisk ikke-CRC karsinomer som har høy grad av FZD3 protein uttrykk for å ha en mer forståelse på seg rollen som FZD3 protein i ulike karsinogenisitetsstudier veier.
et annet interessant funn fra denne studien er at median ICC poengsummen for CAD forbundet med synkrone kolorektal karsinom er mye høyere enn for gruppen som består av ren CAD, noe som tyder på at et høyt FZD3 protein uttrykk i CAD kan bety en høyere malignitetspotensiale.
Det endelige målet med denne studien er å undersøke den kliniske betydningen av FZD3 protein hos pasienter med CRC. Som for tiden er sparsom patologisk brukes prognostisk markør for CRC, og derfor er det uvurderlig å undersøke den prognostiske potensialet FZD3 protein som er vist i denne studien ved signifikant korrelasjon av FZD3 ICC score til Dukes stadium, lymfeknute status, tilbakefall eller metastasering. Videre er en lang-tids oppfølging av disse CRC pasienter viste at pasienter med en høy FZD3 ICC-stillingen kan ha en mindre sjanse for å overleve. Egentlig prøvene med FZD3 ICC score 327 var hovedsakelig trinn III og IV pasienter mens de med FZD3 ICC score ≤ 327 var for det meste trinn I og II pasienter. Dette kan være en forklaring på hvorfor etapper III og IV pasienter har en større risiko for tilbakefall, metastasering og kortere overlevelse enn stadiene I og II pasienter. En mer detaljert analyse av dataene ved å klassifisere det inn i 4 grupper basert på deres nivå av uttrykk kan gi oss mer informasjon om den prognostiske betydningen av FZD3 protein i CRC pasienter. forventes det signifikant forskjell i overlevelse mellom høye og lave uttrykksgrupper mens marginal signifikant forskjell (
P
0,05) i overlevelse mellom moderat høye og moderat lave uttrykk grupper gir et solid bevis på at FZD3 protein har viktig prognostisk makt. Tatt alle disse funnene sammen, kan FZD3 ICC flekker potensielt være et verdifullt verktøy for prognosen av CRC. For å validere disse funnene, er en stor multisenterstudie med en langsiktig oppfølging på å undersøke dens prognostisk betydning nå under utarbeidelse. Menneskelig Wnt5A, Wnt5B og Wnt11 er representative ikke-kanoniske Wnts førende Wnt /plane celle polaritet signaler gjennom FZD3 reseptorer [10,29-31]. En fersk studie har vist at Wnt respons trasé ble omorganisert i begynnelsen av kolorektal kreftutvikling som negativ regulator av Wnt signalveien, ble naken hårstråene homolog en induksjon ledsaget av oppregulering av β-catenin uavhengig FZD3 reseptor i CAD og CRC [26]. Videre FZD3 ikke svare på stabilisering av β-catenin
in vitro Hotell og krevde en Wnt ligand signal [26]. Derfor kan FZD3 tilveiebringe en indikasjon på graden av Wnt ligand signalering i den kolorektal tumor. Faktisk ble en liten kohort av prøver (20) med sterk og svak positiv FZD3 rekruttert og en direkte sammenligning av FZD3 farging til de av beta-catenin ble utført, og det ble funnet at det ikke var noen sammenheng mellom FZD3 og beta-catenin farging (data ikke vist). Dette funnet kan styrke rollen som FZD3 i ikke-kanoniske Wnt signalveien. Sammen med resultatene fra denne studien, kan uttrykket av FZD3 protein i forskjellige kliniske stadier av CRC ytterligere demonstrere den kliniske betydningen av FZD3 hos pasienter med CRC. Vårt neste skritt er å undersøke de underliggende molekylære mekanismene som regulerer FZD3 uttrykk og de direkte transkripsjons målgener av FZD3 med spesifikk knockdown av FZD3 av små interfererende RNA i CRC cellelinjer fordi målrettet behandling ved hjelp av molekylære markører er et viktig mål for å forbedre resultatene av pasienter med CRC. Videre vil påvisning av FZD3 protein i pasientens serum ved hjelp av enzymbundet immunosorbent assay også bli undersøkt for å vurdere hvorvidt serum FZD3 protein kan brukes som en ikke-invasiv markør. Men en stor begrensning med denne studien er at vi ikke har klinisk informasjon for å vurdere resultatene av FZD3 protein ved å sammenligne sitt uttrykk til konvensjonell CRC markør som serum carcinoembryonic antigen.
I sammendraget, FZD3 protein uttrykk som vist ved ICC farging nært korrelert med kolorektal kreftutvikling og progresjon, og kan potensielt tjene som en ny prognostisk markør. Videre kan FZD3 ICC flekker være nyttig for å utelukke HCC og RCCC i metastaser.
Takk
Vi er takknemlige til professor Benjamin Y.M. Yung og Mr. Chiu Ka Yue for deres enestående støtte.
