Abstract
Bakgrunn
Vi forsøkte å evaluere den kliniske betydningen av microvessel tetthet (MVD), lymfekar tetthet (LVD), og kreft-assosiert fibroblaster (kafeer) i forhold til tumor beliggenhet i avansert kolorektalcancer (CRC).
Metoder
Ved hjelp av immunhistokjemi, undersøkte vi 181 avanserte CRC pasienter for CD31 og D2-40 å måle MVD og LVD henholdsvis α-glatt muskulatur aktin (SMA) og desmin å identifisere kafeer, og PTEN å undersøke genetiske endringer av kafeer. For å evaluere den regionale heterogenitet av disse egenskapene, undersøkte vi vev fra fire steder (sentrum og periferien av primær kreft, en fjernmetastaser, og en lymfeknute metastase) i hver pasient.
Resultater
MVD, LVD, og kafeer viste en betydelig heterogenitet med hensyn til tumoren sted. LVD var den største i sentrum av de primære kreft og mengden av kafeer var lavest i fjernmetastaser. I fjernmetastaser, de fra lungene hadde høyere LVD og MVD, men færre kafeer enn de fra leveren, bukhule, eller eggstokk. Pasienter med lav MVD og LVD i midten av primærcancer hadde dårligere resultater og pasienter med få kafeer i fjerne metastaser og i den primære svulsten hadde en lavere overlevelse. PTEN uttrykk i kafeer i fjernmetastaser ble borte i 11 av 181 CRC pasienter (6,1%), som ble assosiert med dårligere prognose.
Konklusjoner
Den mikromiljøet, inkludert kreft-assosiert microvasculature og fibroblaster, er heterogen med hensyn til tumoren sted i CRC-pasienter. Derfor heterogenitet av microenvironments bør tas i betraktning når du administrerer CRC pasienter
Citation. Kwak Y, Lee HE, Kim WH, Kim DW, Kang SB, Lee HS (2014) Den kliniske implikasjonen av kreft-Associated microvasculature og fibroblast i Avanserte pasienter med kolorektal kreft med synkrone eller Metachronous metastaser. PLoS ONE 9 (3): e91811. doi: 10,1371 /journal.pone.0091811
Redaktør: Anthony W. I. Lo, det kinesiske universitetet i Hong Kong, Hong Kong
mottatt: 11 januar 2014; Godkjent: 14 februar 2014; Publisert: 18 mars 2014
Copyright: © 2014 Kwak et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet av tilskudd nummer 03-2011-012 fra Seoul National University Bundang Hospital Research Fund. Den Funder hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Selv om dødeligheten av tykk- og endetarmskreft (CRC) pasienter har gått ned i de fleste vestlige land og i flere utviklingsland i Asia, avanserte CRC pasienter som i utgangspunktet tilstede med stadium IV sykdom eller de som utvikler fjernmetastaser flere måneder etter diagnose fremdeles ha en lavere fem-års overlevelsesrate [1], [2] ._ ENREF_4 den senere tid har utvalget av systemisk kjemoterapi utvidet og målrettet terapi, inkludert epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR) og vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF) som hemmer som har vært anvendt i avanserte CRC pasienter, noe som øker overlevelses [3]. Men noen CRC pasienter responderer dårlig på målrettet terapi tross presentere positive resultater i målrettede terapispesifikke mutasjonsstudier [4]. En mulig forklaring på dette terapisvikt er svulst heterogenitet; flere studier har rapportert at CRC har en heterogen genotype eller fenotype, inkludert
KRAS
, p53, og
BRAF product: [5] – [7]. Derfor de ulike egenskapene til den primære svulsten nettstedet og tilsvarende metastatisk organ må avklares for å forbedre forvaltningen av CRC pasienter med metastaserende sykdom. Videre forstå clinicopathological egenskapene til avansert CRC er viktig for utvikling og forbedring av systemisk behandling.
Siden Paget et al. først beskrevet kreft mikromiljøet av «frø og jord» teori [8], har det vært økende bevis for at kreft-assosiert stroma kan påvirke kreftcellene seg selv og bidra til kreft progresjon [9]. De viktigste komponentene i kreft mikromiljøet er microvasculature (microvessels og lymfekar), inflammatoriske celler og kreftfrem assosiert fibroblaster (kafeer) [10] – [12]. Den nåværende metoden for å verifisere angiogenetic og lymphangiogenetic aktivitet i kreftvev er å vurdere microvessel tetthet (MVD) og lymfekar tetthet (LVD), henholdsvis. MVD har vært foreslått som en surrogatmarkør for kreft-assosiert angiogenese for å identifisere pasienter med en høy risiko for tilbakefall eller de med dårlig prognose for forskjellige krefttyper, inkludert CRC [13], [14]; imidlertid fremdeles den prognostiske korrelasjon av angiogenese i CRC kontroversiell [15], [16]. I likhet med angiogenese, har LVD fått interesse som et middel til lymfesystemet metastase og overlevelse [17], [18], men dens rolle i tumorprogresjon er fremdeles uklart [19]. Den andre fremtredende del av stroma, kafeer, er konsekvent aktivert og påvirke mange aspekter av startfasen, invasjon, og progresjon [9]. Selv om noen studier har antydet at kafeer kan hemme tumorprogresjon [20], [21], andre studier har foreslått at kafeer kan fremme progresjon i prostata, bryst, og hudkreft [22] – [24]. I sammenheng med CRC, Tsujino et al. har antydet at α-glatt muskel aktin (SMA) -expressing kafeer kan være en nyttig indikator på dårlig prognose. Men disse resultatene ble begrenset til stadium II og III CRC [25].
I tillegg til kreftceller, har genetiske endringer i kafeer demonstrerte inkludert tap av heterozygositet, mikro ustabilitet, og genetiske mutasjoner [26], [27]. Nylig ble genetisk inaktivering av PTEN i kafeer rapportert hos brystkreftpasienter [28]. Trimboli et al. identifisert som PTEN tap i stromale fibroblaster resulterte i omfattende ekstracellulære matrise ombygging og angiogenese som karakteristisk for tumorprogresjon [28]. Imidlertid har uttrykket tap av PTEN og klinisk betydning ikke undersøkt hos pasienter med kolorektal kreft.
Hensikten med denne studien var å undersøke hva som kjennetegner microenvironments, inkludert microvasculatures og kafeer, i avanserte CRC pasienter. I tillegg vurderte vi de intratumoral heterogenitet i primærtumor og disharmoni mellom primærtumor og fjernmetastaser microenvironments.
Materialer og metoder
Pasient utvalg
Totalt 181 avansert CRC pasienter med synkrone eller metachronous metastaser, som ble behandlet ved Seoul National University Bundang Hospital (Seongnam-si, Sør-Korea) mellom 2003 og 2009, ble inkludert i studien. Synkrone metastaser ble definert som fjernmetastaser som oppstår innen seks måneder etter primærdiagnose på CRC og metachronous metastaser var de som forekommer etter det tidspunktet [29]. Den kreftvev anvendt i denne studien ble mottatt fra pasienter som hadde kirurgisk fjerning av både primærtumor og beslektede metastaser. Ingen av pasientene hadde mottatt kjemoterapi eller radioterapi før den reseksjon av den primære tumor. Medisinske diagrammer og patologirapporter ble gjennomgått for å registrere kliniske og patologiske data. Glass ble anmeldt for å bestemme histologisk type i henhold til WHO-klassifiseringen [30]. Oppfølging informasjon, inkludert pasientens utfall og tidsintervallet mellom datoen for kirurgisk reseksjon og død ble samlet. Sakene tapt for oppfølging og dødsfall fra andre enn CRC årsaker ble vurdert sensurerte data for overlevelse analyse. Median oppfølgingstid var 37,9 måneder (range, 0.8-104.6 måneder).
Etisk uttalelse
Alle menneskelige prøver ble hentet fra filer av kirurgisk resected sakene ved Institutt for patologi , Seoul National University Bundang Hospital for den patologiske diagnosen. Den retrospektiv studie ble utført ved hjelp av de lagrede prøver etter den patologiske diagnose, og alle prøvene ble anonymisert før studien. Deltakerne fikk ikke gi skriftlig informert samtykke i denne studien. Studien ble godkjent av Institutional Review Board of Seoul National University Bundang Hospital under forutsetning av anonymiserings. (Referanse: B-1109 /136-302)
Tissue matrise metoder
For å evaluere regionale forskjeller stromale, prøver ble tatt fra hver pasient fra fire områder: sentrum og periferien av primær cancer, fjernmetastaser, og lymfeknutemetastaser. Den fjerne metastaser for vev arrays var som følger: lever i 83 tilfeller (45,9%), lunge i 38 tilfeller (21,0%), bestander i 38 tilfeller (21,0%), fjerne lymfeknuter i 6 tilfeller (3,3%), og eggstokk i 16 tilfeller (8,3%). De representative kjerne vevsprøver (2 mm i diameter) ble tatt fra individuelle parafinblokker og bearbeidet i nye vev array-blokker ved hjelp av en trephine apparat (Superbiochips Laboratories, Seoul, Sør-Korea) [31].
Immunohistochemistry
Array lysbilder ble merket ved immunhistokjemi hjelp antistoffer for CD31 (1:100, DAKO, Glostrup, Danmark), D2-40 (1:100, DAKO), SMA (1:1000, Neomarkers, Fremont, CA, USA ), desmin (1:300, DAKO) og PTEN (1:80, Epitomics, Burlingame, CA, USA) etter en mikrobølgeovn antigen henting prosedyre bortsett fra SMA. Ikke-reaktive seter ble blokkert ved anvendelse av 1% hesteserum i tris-bufret saltløsning (pH 6,0) i 3 minutter. Primære antistoffer ble påført og antistoff-binding ble påvist med diaminobenzidin (DAB). Seksjoner ble kontra med hematoksylin. Reaktiviteten av PTEN i hvert vev seksjon ble scoret som negativ, svak eller sterk, og andelen av PTEN-positive fibroblaster ble kvantifisert. For statistisk analyse, ble prøven anses PTEN-positive hvis 5% eller flere kafeer ble scoret som sterke positive.
Beregning av LVD, MVD og kafeer ved hjelp av digital patologi
Lysbilder ble samtidig vurdert ved to patologer (HEL og HSL) ved anvendelse av lysmikroskopi for å forbedre nøyaktigheten av resultatene (fig. 1). CRC-celler ble betraktet som interne negative kontroller. Middels til store skip ble ansett som interne positive kontroller for CD31 og D2-40. Intestinal muskulære laget eller middels til store skip ble ansett som interne positive kontroller for desmin og SMA. Prøver som viser upassende flekker i interne negative eller positive kontroller ble ansett som ikke-informativ og ble ekskludert fra analysen. Lysbilder ble skannet med en Aperio ScanScope® CS instrument (Aperio Technologies, Inc., Vista, CA) på 20 × forstørrelse. Deretter ble de analysert i ImageScope ™ ved hjelp av microvessel Analyse v1 algoritme (Aperios Technologies), og MVD og LVD ble beregnet. Fordi desmin-positive muscularis mucosa og propria er positive for SMA immunofarging, arealet av kafeer (mm
2) ble beregnet ved å subtrahere de områdene av desmin flekker fra det av SMA farging. (SMA – desmin)
Statistisk analyse
En chi-squared test eller Fishers eksakte test (2-sidig) for ikke-kontinuerlige variabler og Mann-Whitney eller Kruskal-Wallis analyse for kontinuerlige variabler ble brukt til å sammenligne hver parameter med i forhold til CRC-området og i henhold til dens clinicopathologic egenskaper. Korrelasjonen mellom kontinuerlige variabler ble analysert ved anvendelse av Pearson korrelasjonskoeffisient. For å bestemme de beste cut-offs av kontinuerlige variabler for å forutsi pasientens overlevelse, ble maksimal chi-kvadrat-metoden utføres ved hjelp av R-programmet (https://cran.r-project.org/). De totale overlevelseskurver ble plottet ved hjelp av Kaplan-Meier produkt-limit metode og betydningen av forskjellene mellom disse kurvene ble bestemt ved bruk av log-rank test. En univariat og multivariat regresjonsanalyse ble utført ved hjelp av Cox proporsjonal farer modell for å bestemme hazard ratio (HRS).
P
-verdier på mindre enn 0,05 ble ansett som statistisk signifikant. All statistisk analyse, unntatt maksimal chi-squared test, ble utført med IBM SPSS statistikk 20 (Armonk, NY, USA).
Resultater
1. Heterogenitet av cancer-assosiert stroma ifølge undersøkte tumor steder
clinicopathological egenskapene til de avanserte CRC-pasienter er beskrevet i tabell 1. CRC pasienter med metastaser synkrone hadde aggressive funksjoner, inkludert større svulststørrelsen, mer avansert pT og pN stadium, og tilstedeværelsen av perinevral og venøs invasjon enn pasienter med metachronous metastaser (p 0,05).
de heterogene verdier for LVD, MVD og CAF området er vist i figur 2. LVD var den høyeste i sentrum av de primære kreft (median, interkvartilt område (IQR), 37,00, 10,50 til 81,00) enn noen annen side (5,00, 1,00 til 23,75 i periferien, 2,50, 1,00 til 15,00 i lymfeknutemetastaser, 3.00, 1.00 -20,00 i fjernmetastaser). MVD var lavere i fjerne metastaser (median, IQR, 641,50, 428,00 til 1006,75) enn ved periferien av den primære kreft (731,00, 508,25 til 1049,75) og lymfeknutemetastaser (893.50, 520,25 til 1275,25). Området okkupert av kafeer var lavest i de fjernmetastaser (median, IQR, 0,91, 0,68 til 1,18) enn noen annen side (1,12, 0,88 til 1,41 i sentrum, 1,22, 0,96 til 1,54 i periferien, 1.40, 1.00- 1.71 i lymfeknutemetastaser). I tillegg er de stromale egenskaper variert i forhold til metastatisk organ undersøkt. MVD og LVD var høyere i lungemetastaser enn de i leveren, peritoneum eller lymfeknuter (p 0,001, Fig. 3). Imidlertid er mengder av kafeer var i overensstemmelse blant de forskjellige metastatiske organer (p = 0,180).
LVD (A), MVD (B) og CAF område (C) var signifikant forskjellig i henhold til hver tumor sted.
det som kjennetegner kreft-assosiert stroma skilte med hensyn til metastatisk nettstedet. LVD (A) og MVD (B) var større i de metastatiske tumorprøver innsamlet fra lungene enn i prøver samlet inn fra andre metastaser (p 0,001). Men mengden av kafeer var ikke signifikant forskjellig mellom metastaser (C).
Til tross for heterogenitet stromal egenskaper, CRC saker med høyere LVD, MVD og kafeer i sentrum av de primære kreft hadde en tendens til høyere LVD, MVD og kafeer i periferien (p 0,05; Tabell S1). Men LVD i sentrum og periferi av primær kreft var ikke korrelert med LVD i tilhørende fjernmetastaser (tabell S1). I tillegg ble mengden av mikrovaskulaturen signifikant korrelert med mengden av kafeer (tabell S2).
2. Klinisk betydning av kreft-assosiert stroma i avanserte CRC
MVD, LVD, og mengden av kafeer tilstede på hver svulst sted ble sammenlignet i henhold til deres clinicopathologic funksjoner (tabell 2). Høy klasse CRC var assosiert med lavere kafeer i prøver tatt fra den sentrale kreft nettstedet (p = 0,041). Sammenlignet med synkrone metastaser, pasienter med metastaser metachronous hadde høyere LVD i sentrum og periferien av primærcancer og hadde høyere MVD i lymfeknutemetastaser. De fleste pasienter med metachronous metastaser ble behandlet av adjuvant kjemoterapi før metastasectomy. LVD og MVD i fjernmetastaser var betydelig høyere hos pasientene som hadde fått kjemoterapi før metastasectomy enn de som ikke gjorde det (p = 0,011 og 0,048, henholdsvis).
3. Expression tap av PTEN i kafeer
PTEN ble uttrykt i cytoplasma og noen ganger kjernen av både kreft og ikke-neoplastiske celler når undersøkt ved hjelp av immunhistokjemi. Uttrykk av PTEN gikk tapt i 8 tilfeller i sentrum, 2 tilfeller i periferien, 4 tilfeller i lymfeknutemetastaser, og 11 tilfeller i fjernmetastaser (Tabell S3). I alle 11 fjerntliggende metastaser med PTEN tap, PTEN ekspresjon var intakt i både sentrum og periferien av primærcancer (data ikke vist). PTEN tap i fjernmetastaser ble korrelert med synkron metastaser (p = 0,018).
4. Kreft-assosiert stroma og pasient prognose
Ved å bruke de innhentede avskjær, lavere LVD, MVD og kafeer i sentrum, LVD og kafeer i periferien og MVD og kafeer i fjernmetastaser ble alle signifikant korrelert med lavere overlevelse (p 0,05, fig. S1). Blant annet clinicopathologic funksjoner, synkron metastase, alderdom, større størrelse, høy histologisk grad, avansert pT og pN scene og tilstedeværelse av perinevral invasjon var assosiert med en dårligere prognose (tabell 3). Ved multivariat Cox regresjonsanalyse, hazard ratio synkron versus metachronous var høyest (4,029) med lavest p-verdi (p 0,001). Kafeer i fjernmetastaser, LVD og MVD i sentrum, LVD i periferien, alder og perinevral invasjon også uavhengig spådde pasientens overlevelse. I tillegg ble det tap av PTEN uttrykk i kafeer i fjernmetastaser i forbindelse med en dårligere prognose (p = 0,042; figur S2), men ikke i primær kreft eller lymfeknutemetastase
Diskusjon
.
carcinoma celler i ulike vev områder har forskjellige egenskaper [32]. I sentrale deler av svulsten, carcinoma celler opprettholde en epitelial celle fenotype, men carcinoma celler i invasive fronten få en mer ondartet og mesenchymale fenotype og antas å ha en økt trekkende kapasitet og bidra til metastatiske sykdommer. Disse metastatiske celler kan gjenopprette epitel fenotype ved metastaser [33]. I tillegg til å karcinomceller selv, er mikromiljøet foreslått å være ujevn innenfor en gitt tumor fordi tumordannelse og progresjon involverer samtidig utviklingen av kreftceller og mikromiljøer [34]. Denne studien viste at kreftassosierte mikromiljøet hadde også forskjellige egenskaper i ulike områder. Av de områdene som ble undersøkt, LVD var høyest i sentrum av den primære kreft. MVD var noe høyere i sentrum enn ved periferien av den primære kreft, men denne forskjellen var ikke statistisk signifikant. Interessant, mengden av kafeer i fjerne metastaser var betydelig lavere enn i sentrum og periferien av primærcancer. Vi viser at stromal mikromiljøet har regional heterogenitet både innenfor primærtumor og mellom primær nettstedet og dets tilhørende metastaser. Videre tyder våre data på at stromal heterogenitet kan tilskrives svulst heterogenitet. Derfor ville det være fordelaktig å vurdere både stromal og tumorcelle heterogenitet for å administrere CRC pasienter bedre.
Vi har evaluert MVD, LVD, og mengden av kafeer i metastatisk vev i ulike organer, inkludert lever, lunge , peritoneal seeding, fjerne lymfeknuter, og eggstokk. Av de metastatiske organene vi undersøkt, både LVD og MVD var den høyeste i lungen. I vår forrige undersøkelse,
KRAS
disharmoni var også signifikant høyere i matchet lungemetastaser enn i andre matchet metastatisk organer [35]. Den underliggende mekanisme er ikke kjent. Det kan være at primær CRC med høy LVD og MVD ha en tendens til å produsere lungemetastaser; Men resultatene indikerte at LVD og MVD i midten og ved periferien av de primære cancere var lavere i pasienter med lungemetastaser (data ikke vist). Alternativt kan det være på grunn av de fysiologiske egenskapene til metastatiske organer, interaksjoner mellom kreftceller og mikromiljøet innenfor metastatisk organ, eller karakteristikk av kreft celle kloner utsatt for lungemetastaser. Men tekniske eller utvalgsfeil også kan være mulig, og dermed ytterligere store studier er nødvendig.
Selv om mange studier har forsøkt å demonstrere en sammenheng mellom svulstens mikromiljø egenskaper og overlevelse, prognostiske konsekvenser av MVD og LVD er fortsatt kontroversielt. Noen studier har blitt presentert som aktiv angiogenese og lymphangiogenesis representert ved høy MVD og LVD er assosiert med dårlig prognose og aggressive clinicopathologic faktorer [36], [37]. Nyere meta-analyse har vist at LVD var signifikant assosiert med sykdomsfri overlevelse, men ikke total overlevelse [38]. Andre studier har rapportert noen statistisk signifikans av MVD og LVD på overlevelse [39]. Prall et al. har rapportert at høy MVD og LVD er relatert med bedre overlevelse i en sammenhengende serie og levermetastaser [40]. Våre resultater er basert på pasienter med avansert sykdom med fjernmetastaser, og vi viste at høy MVD og LVD var i slekt med bedret overlevelse. Dette kan være fordi alle pasientene i denne studien hadde bekreftet å ha fjernmetastaser og microvasculatures kan påvirke selv levering av kjemoterapeutiske stoffet inn i svulsten. Men vår studie hadde noen begrensninger i forhold til overlevelsesanalyse. Vi har registrert CRC pasienter med tilgjengelige kirurgisk resected kreft vev fra både primære svulster og tilsvarende metastatiske svulster. Ikke alle avanserte CRC-pasienter med metastaserende sykdom ble inkludert, og langt avanserte saker ble ikke registrert på grunn av deres ikke virker. Derfor resultatførte fordommer kan ha påvirket vår overlevelse resultater.
Noen studier har vist en anti-tumorigen effekt av fibroblaster [20], [21]. Imidlertid har det blitt klart at kafeer bidra til utviklingen av kreft og deres prognostisk betydning i forskjellige kreftformer har også vært reist [41], og dessuten har flere studier observert genetiske endringer i kafeer [26], [27]. PTEN tap av kafeer er blitt observert i brystkreft og prognostisk forening av det har blitt foreslått [27], [28]. Vi observerte PTEN tap av kafeer i CRC pasienter, og det ble oftere observert i de tilsvarende fjernmetastaser. Det er foreslått at kafeer, ikke bare kreftceller, har forandret genekspresjon. Videre tap av PTEN uttrykk for kafeer i fjernmetastaser var signifikant korrelert med overlevelsen av pasienter. Så vidt vi vet er dette de første resultatene viser PTEN tap i kafeer i CRC pasienter. Selv om mer forskning er nødvendig, forventer vi at det kan være en prognostisk faktor i CRC-pasienter.
I vår store kohort av avanserte CRC pasienter med synkron og metachronous fjernmetastaser, viste vi den regionale heterogenitet stromal mikro faktorer i henhold til tumoren sted. Mengden av mikrovaskulaturen målt ved LVD og MVD var også heterogent i forhold til metastatisk organ undersøkt. Ved Cox regresjonsanalyse, senter LVD og MVD, periferi LVD, og kafeer i fjernmetastaser var uavhengig assosiert med pasientenes prognose i tillegg til synkron fjernmetastaser, alder, og perinevral invasjon. Heterogenitet av mikromiljøet, ikke bare av kreftceller, er foreslått å bidra til tumor heterogenitet og biologisk kompleksitet, og dermed bør det vurderes i forvaltningen CRC pasienter. I tillegg er våre resultater viste at PTEN uttrykket ble endret på kafeer med CRC, noe som tyder på at kafeer kan ha endret genuttrykk og spille en aktiv rolle i kreft progresjon.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
prognostisk sammenslutning av stromale egenskaper som gjelder svulst plassering. Analysen ble utført ved hjelp av cut-off verdiene oppnådd ved maksimal chi-squared metoder
doi:. 10,1371 /journal.pone.0091811.s001 plakater (TIF)
Figur S2.
Representant PTEN antistoff stainings av stromale celler og den prognostiske sammenslutning av PTEN uttrykk. (A) Intakt uttrykk for PTEN i kafeer (× 400) og (B) tap av PTEN uttrykk i kafeer (× 400). (C-F) Kaplan-Meier-overlevelseskurver for målet (C) og omkretsen (D) av den primære tumor, lymfeknutemetastaser (E), og fjernmetastaser (F) i henhold til CAF PTEN ekspresjonsstatus.
Doi : 10,1371 /journal.pone.0091811.s002 plakater (TIF)
Tabell S1.
Pearsons korrelasjonskoeffisienter mellom sentrum, periferi, lymfeknutemetastaser og fjernmetastaser
doi:. 10,1371 /journal.pone.0091811.s003 plakater (docx)
Tabell S2.
Korrelasjonskoeffisienter mellom kafeer og LVD eller MVD
doi:. 10,1371 /journal.pone.0091811.s004 plakater (docx)
tabell S3.
PTEN uttrykk i kafeer og clinicopathologic faktorer
doi:. 10,1371 /journal.pone.0091811.s005 plakater (docx)
