Abstract
Formål
PIK3CA
genet som koder for en katalytisk subenhet av phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K) er mutert og /eller forsterkes i ulike neoplasi, inkludert lungekreft. Her undersøkte vi
PIK3CA
genet endringer, uttrykket av sentrale komponenter i PI3K veien, og evaluert klinisk betydning i ikke-småcellet lungekreft (NSCLC).
Materiale og metode
Oncogene mutasjoner /rearrangements i
PIK3CA
,
EGFR
,
KRAS
,
HER2
,
BRAF, akt1 Hotell og
ALK
gener ble påvist i svulster fra 1117 pasienter med NSCLC.
PIK3CA
genkopitallet ble undersøkt av fluorescerende
in situ
hybridisering og uttrykk for PI3K p110 subenheten alfa (PI3K p110α), p-Akt, mTOR, PTEN ble bestemt ved immunhistokjemi i
PIK3CA
mutant saker og 108 pasienter uten
PIK3CA
mutasjon.
Resultater
PIK3CA
mutasjonen ble funnet i 3,9% av plateepitelkarsinom og 2,7% av adenokarsinom. Blant 34
PIK3CA
mutant saker, 17 svulster næret samtidige
EGFR
mutasjoner og 4 hadde
KRAS
mutasjoner.
PIK3CA
mutasjon var signifikant forbundet med høy uttrykk for PI3K p110α (
p
0,0001), p-Akt (
p
= 0,024) og mTOR (
p
= 0,001), men ikke korrelert med
PIK3CA
forsterkning (
p
= 0,463). Pasienter med enkelt
PIK3CA
mutasjon hadde kortere total overlevelse enn de med
PIK3CA Anmeldelser –
EGFR /KRAS
co-mutasjon eller hvete
PIK3CA plakater (
p
= 0,004). En signifikant lavere overlevelse ble også funnet hos pasienter med
PIK3CA
mutasjoner enn de uten
PIK3CA
mutasjoner i
EGFR /KRAS
hvete undergruppe (
p
= 0,043)
Konklusjoner
PIK3CA
mutasjoner ofte eksistere sammen med
EGFR /KRAS
mutasjoner. Den dårlig prognose for pasienter med enkelt
PIK3CA
mutasjon i NSCLC og den prognostiske verdien av
PIK3CA
mutasjon i
EGFR /KRAS
hvete gruppen foreslår tydelig mutasjonsstatus av
PIK3CA
genet skal fastsettes for enkelte terapeutiske strategier i NSCLC
Citation. Wang L, Hu H, Pan Y, Wang R, Li Y, Shen L, et al. (2014)
PIK3CA
Mutasjoner Vanlige Coexist med
EGFR /KRAS
Mutasjoner i ikke-småcellet lungekreft og Foreslå dårlig prognose i
EGFR /KRAS
villtype undergruppe. PLoS ONE 9 (2): e88291. doi: 10,1371 /journal.pone.0088291
Redaktør: Giuseppe Viglietto, UNIVERSITY Magna Graecia, Italia
mottatt: 25. juli 2013, Godkjent: 06.01.2014; Publisert: 12 februar 2014
Copyright: © 2014 Wang et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet med tilskudd fra Key Construction Program av National «985» Project (Grant No. 985III-YFX0102), National Natural Science Foundation of China (Grants nr 81172218 og 81101761), Science and Technology Commission av Shanghai kommune (Program Shanghai Subject Chief Scientist, Grant No. 12XD1402000), Stiftelsen for Shanghai Health Administration (Grant nr 20114206) på, og en Grant fra Shanghai Hospital Development Center (Grant No. SHDC12012308). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
det har blitt godt etablert at den fosfatidylinositol-3-kinase (PI3K) reaksjonsveien er relatert til karsinogenese i en rekke humane cancere [1], [2], [3]. Ved aktivering, initierer PI3K hendelser som fører til fosforylering av Akt, noe som påvirker ytterligere nedstrøms signaliserings proteiner involvert i cellevekst, metabolisme, proliferasjon, overlevelse, motilitet, og invasjon [4], [5], [6]. PI3K-avhengig aktivitet er ofte forhøyet på grunn av mutasjon av
PIK3CA
, et gen som koder for p110α katalytiske subenhet av PI3K (PI3K p110α), og fravær av fosfatase og tensin homolog (PTEN) protein, en tumor suppressor med en viktig rolle i regulering av PI3K antiapoptotic og overlevelsesreaksjonsveien [7], [8]. I tillegg økte kopi antall
PIK3CA
er også vist å være assosiert med økt
PIK3CA
transkripsjon, p110α protein uttrykk og PI3-kinase aktivitet [9].
Avvik i komponentene av PI3K-signalveien er blitt rapportert i mange faste tumorer, inkludert lungekreft [2], [4], [7], [9]. Multiple mutasjoner av
PIK3CA
som oppstår med regularitet og i sterkt konserverte regioner av genet fører til aminosyresubstitusjoner i spiralbindingsdomene er kodet for av exon 9, og i den katalytiske subenhet av p110α kodet av ekson 20, noe som resulterer i oppregulering PI3K pathway signalering [10]. I lungekreft, kopiere nummer gevinster av
PIK3CA
ble funnet å være eksklusiv til
PIK3CA
mutasjon, noe som tyder på at begge endringene kan ha onkogene potensial til å fremme kreftutvikling i lungene [11]. PTEN-proteinet regulerer negativt PI3K veien [12] og tap av PTEN protein ekspresjon har vært knyttet til dårlig overlevelse hos pasienter med tungen kreft, og med mer avanserte tumor i spiserøret og oral squamous cellekreft, henholdsvis [13], [14] . Videre Akt og mTOR ligge nedstrøms PI3K og økt mTOR fosforylering blir ofte observert sammen med aktivert Akt i NSCLC og feilregulering av mTOR bidrar til lungekreft progresjon [15], [16].
I vår forrige undersøkelse, vi rapporterte at 90% av 52 lunge adenokarsinom prøver fra østasiatiske aldri-røykere næret driver mutasjoner i bare
EGFR
,
KRAS
,
HER2 Hotell og
ALK
gener [17]. Hyppigheten av
EGFR
,
KRAS
,
HER2
mutasjoner og
EML4-ALK
fusjon var 75,3%, 2%, 5,9% og 5% separat, i fersk analyse av 202 lunge adenokarsinom prøver fra kinesiske pasienter som aldri røkt [18]. Men ikke mer enn 40% av tilfellene av NSCLC som omfatter plateepitelkarsinom, adenokarsinom og stor celle karsinom histologi vil huse slike endringer [18]. Det er nå tydelig at selv innenfor en klart identifiserbar histologisk undertype, kan distinkte molekylære endringer være forbundet med et spektrum av kliniske karakteristika og også korrelerer med sykdomsforløp og respons på behandling [19]. Som et resultat, vil det være nødvendig å avklare annen molekylær endring for individuell behandling.
Til dags dato er det få studier som utgjør et helhetlig bilde av uttrykket av komponenter i PI3K veien,
PIK3CA
gen endring, og deres korrelasjon til NSCLC [20], [21]. I denne studien undersøkte vi
PIK3CA
genmutasjon,
PIK3CA
forsterkning samt uttrykk for PI3K p110α, p-Akt, mTOR og PTEN som ligge i PI3K veien i en rad samling av NSCLC tumorprøver. Denne detaljert forståelse av PI3K pathway endringer i NSCLC kan muliggjøre en mer presis avgrensning av kandidaten målpopulasjonene tilrettelegge klinisk studie design og validering av prediktive biomarkører.
Materialer og metoder
Pasient og prøver
fra oktober 2007 til desember 2012, vi fortløpende anskaffet primær tumorprøver fra NSCLC pasienter som gjennomgikk lunge reseksjon ved Institutt for Thoracic Surgery, Fudan University i Shanghai Cancer Centre. Temaer som er kvalifisert for denne studien måtte oppfylle følgende: patologisk bekreftet lunge adenokarsinom eller lunge plateepitelkarsinom, hver prøve som inneholder tilstrekkelig vev for omfattende mutasjonsanalyser og uten neoadjuvant behandling. Pasientene ble fulgt opp hver 3. måned for de første 2 år, deretter hvert annet år etterpå. En kontrastforsterket brystet computertomografi (CT) scan ble tatt hver 3. måned for de første 2 årene, og deretter hver 6. måned etterpå. Ved tilbakefall ble mistenkt enten gjennom nylig som viser symptomer eller gjennom planlagte tester, ble integrert positronemisjonstomografi /CT (PET /CT) utføres. PET /CT ble også tatt hos pasienter uten symptomer eller unormale funn i de planlagte testene ett år etter kirurgisk reseksjon. Endelig diagnose av tilbakefall ble bekreftet ved histopatologisk undersøkelse av prøver tatt fra kirurgi eller biopsi. Hvis det var umulig å diagnostisere tilbakefall histopathologically, ble tilbakevendende malignitet ikke lenger mistenkt basert på klinisk og radiologisk oppfølgingsperioden på minst 12 måneder uten tegn til aktiv malignitet. Denne forskningen ble godkjent av Institutional Review Board av Fudan University i Shanghai Cancer Center. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle pasienter.
mutasjonsanalyser
Frozen vev av vevsprøver ble grovt deles opp i TRIZOL (Invitrogen, Life Technologies, Carlsbad, California), etterfulgt av total RNA ekstraksjon ved hjelp av standard protokoll. Totalt RNA prøver ble revers transkribert til cDNA.
PIK3CA
ekson 9 omfatter kodon 542 og 545 og
PIK3CA
ekson 20 omfatter kodon 1047, der flertallet av mutasjoner oppstå [22]. Så vi søkte etter mutasjoner i
PIK3CA
eksoner 9 og 20.
EGFR plakater (eksoner 18-21),
HER2
(eksoner 18-21),
KRAS product: (eksoner 2-3),
BRAF plakater (eksoner 11-15) og
akt1
(eksoner 2-3) ble også forsterket av PCR hjelp cDNA. Amplifiserte produkter ble analysert ved direkte dideoksynukleotid-sekvensering. Å identifisere
EML4 Anmeldelser –
ALK
fusjoner, ble flere 50 primere brukes sammen med en fast 30 primer lokalisering til
ALK
ekson 20 til å oppdage alle kjente
EML4
fusjon varianter som tidligere beskrevet [17]. Primere som brukes til å oppdage fusjoner mellom
ALK Hotell og
KIF5b
eller
TFG
var som tidligere rapportert [23], [24].
ALK
FISH ble også brukt til å bekrefte nøyaktigheten av PCR. Alle muterte tilfeller ble bekreftet to ganger med uavhengige PCR reaksjoner. Nye data ble ikke generert i vår studie.
Uttrykk av sentrale komponenter i PI3K veien
tumorvevet utvalg og immunohistochemial evaluering ble utført av to patologer (Yuan L og Lei S). Kirurgiske prøver ble fiksert i 10% formalin og innstøpt i parafin; 4-mikrometer seksjoner fra lungesvulster ble utarbeidet og deparaffinized, og antigen gjenfinning ble gjort av mikrobølgeovnen. Endogen peroxydaseaktivitet ble blokkert med 0,3% H
2o
2. Etter blokking med normal serum ble snittene inkubert i 120 minutter med monoklonale antistoffer mot PI3K p110α (1:400 fortynning, klone: C73F8; Cell Signaling Technology), PTEN (1:50 fortynning, klone: 138G6, Cell Signaling Technology), p -Akt (1:50 fortynning, klone: Ser473, Cell Signaling Technology) og mTOR (1:50 fortynning, klone: 7C10, Cell Signaling Technology). Lysbilder ble vasket i PBS og oppdaget med pepperrot peroksidase konjugert anti-kanin /mus Fast Envision Detection kit (Gene Tech), etterfulgt av kontra med hematoksylin.
Ifølge scoring system som er blitt rapportert tidligere i litteraturen [ ,,,0],25], [26], Vår PI3K p110α farging scoring ble gjort som følger: stillingen var 0 hvis ingen positive tumorceller ble funnet; 1 hvis positive tumorceller var 10%; og 2 hvis positive tumorceller var 10%. Vev med score på 0 eller 1 ble ansett som lav uttrykk; de med score til to ble vurdert høyt uttrykk. Immunreaktiviteten av p-Akt, mTOR og PTEN ble bedømt semikvantitativt basert på fargeintensitet og andel, som tidligere beskrevet [27]. Fargeintensitet ble scoret som: fraværende (0); svak (1); moderat (2), eller sterk farging (3). Beising andel ble scoret som ingen (0); mindre enn 1/3 (1); 1.3 til 2.3 (2), eller mer enn 2/3 av tumorceller (3). Den totale poengsummen ble beregnet som summen av intensiteten score og andelen score, noe som ga en poengsum mellom 0 og 6. En samlet score på 0-2 ble ansett som lav uttrykk mens de andre skår ble ansett som høyt uttrykk statistisk analyse. Immunhistokjemisk farging ble uavhengig evaluert av to patologer (Yuan L og Lei S). I tilfeller av ulike totalscore tatt fra samme svulst, var den gjennomsnittlige poengsum regnes som den endelige totale poengsummen.
Vurdering av
PIK3CA
genamplifisering
Fluorescent in situ hybridisering ( FISH) analyse for
PIK3CA
ble utført ved hjelp av
PIK3CA
probe som hybridiserer til bandet 3q26.32 med Texas Red (rød) og centromere3 (CEN3) med FITC (grønn) (Abbott Molecular , Abbott Park, IL) etter rutinemetoder. FISH analyser ble tolket av to erfarne evaluatorer (Lei W og Yunjian P) blindet for de kliniske data. Minst 100 kjerner per pasient ble undersøkt. Vevsprøver med
PIK3CA Twitter /CEN3 ratio på 1,0 ble klassifisert som normal og de med en
PIK3CA Twitter /CEN3 forholdet mellom 1.0 og 2.0 ble klassifisert som har
PIK3CA
gevinster . En
PIK3CA Twitter /CEN3 andel på mer enn 2,0 ble ansett forsterket. Et minimum av 50 celler med både centromeric og
PIK3CA
genet signalene ble avsluttet til å gi avgjørende data.
Statistisk analyse
Forskjell i proporsjoner ble analysert ved
X
2
eller Fishers eksakte test. Tilbakefall overlevelse (RFS) varighet ble definert som tiden fra operasjonen til tilbakefall eller siste kontakt. Total overlevelse (OS) ble definert som tiden for operasjonen til død eller siste kontakt. Arrangementet ble oppgitt som tilbakefall eller død siden operasjonen. Pasienter i live og viser ingen tilbakefall i siste oppfølging ble sensurert. RFS og OS fordelinger ble beregnet ved hjelp av Kaplan-Meier metoden. Log-rank-test ble anvendt for å bestemme overlevelses forskjeller mellom gruppene. Regresjonsanalyser av overlevelsesdata, basert på Cox-modell, ble gjennomført på RFS og OS. En videre trinnvis utvelgelsesprosessen ble gjennomført med en
P
-verdi terskel på 0,05 for inkludering i multivariat analyse. Statistisk signifikans ble akseptert da
P
-verdi var mindre enn 0,05. Alle data ble analysert ved hjelp av statistikkprogrammet for samfunnsvitenskap versjon 16.0 programvare (SPSS Inc., Chicago, IL).
Resultater
PIK3CA
genmutasjon status i NSCLC
totalt 1,117 NSCLC pasienter inkludert 646 menn og 471 kvinner var kvalifisert for mutasjon analyse i denne studien. Som vist i tabell 1, figur 1 og figur S1 i File S1. 3,0% (34/1117) pasienter næret mutasjoner i
PIK3CA
, sto for 2,7% (22/807) av lunge adenokarsinomer, og 3,9% (12/310) av plateepitelkarsinom. Ingen signifikant korrelasjon ble observert mellom
PIK3CA
mutasjoner og clinicopathological faktorer som kjønn, alder, patologiske typer, røyking historie, tumor differensiering eller stadium (tabell 1).
Bokser representerer funksjonelle domener (den P85 bindende domene, Ras bindingsdomene, C2-domene, spiralformede domene, og kinasedomene). Frekvens og ulike typer mutasjoner som oppdages innenfor hver region er angitt under og over boksen.
Mutasjoner i ekson 9 koding for spiral domene (E545K, E545Q, E545G, E545A, Q546R, E542K, T536I) ble funnet hos 21 pasienter. Exon 20 mutasjoner som koder for den kinase domene (H1047R, H1047L, M1043L, G1007R, Y1021C) ble funnet hos 13 pasienter. De hyppigste mutasjoner var E545K og H1047R forekommer i 16 (47,1%, 16/34) av 34 pasienter med
PIK3CA
mutasjoner (Figur 1, Tabell 2). Ifølge clinicopathologic data identifisert, analyse av hyppigheten av mutasjoner i den skruelinjeformede vs. kinase domene ble utført. Det var en trend at mer spiral domene
PIK3CA
mutasjoner ble observert hos pasienter med lymfeknutemetastase iscenesatt II~III, men forskjellen var ikke statistisk signifikant (Tabell S1 i File S1).
PIK3CA
mutasjoner ofte eksistere sammen med
EGFR /KRAS
mutasjoner i NSCLC
for å utforske sameksistensen av
PIK3CA Hotell og andre onkogene mutasjoner i ikke-småcellet lungekreft, testing for
EGFR
,
KRAS
,
HER2
,
BRAF
,
akt1
genmutasjoner og
ALK
omorganisering ble også arrangert.
EGFR Hotell og
KRAS
genmutasjoner ble funnet i 536 (48,0%, 536/1117) og 67 (6,0%, 67/1117) av 1117 pasienter. Forekomsten forekomst av
HER2
,
BRAF
,
akt1
mutasjoner og
ALK
omorganisering var 20 (1,8%, 20/1117), 11 ( 1%, 11/1117), 2 (0,2%, 2/1117) og 33 (henholdsvis 3,0%, 33/1117). Alle de identifiserte
ALK
fusion varianter var
EML4-ALK
. Andre fusion varianter som
KIF5B-ALK Hotell og
TFG-ALK
ikke ble funnet i vår studie. Fullstendige data om
ALK
omorganisering ble vist i tabell S2 i File S1. Ingen korrelasjon ble funnet mellom
PIK3CA
mutasjoner og andre genet endringer verken i lunge plateepitelkarsinom heller ikke i adenokarsinom grupper (tabell S3-S4 i File S1).
Blant 34
PIK3CA
mutant tilfeller tjueen (61,8%, 21/34) hadde samtidige onkogene mutasjoner – 17 (81,0%, 17/21)
EGFR
mutasjoner og 4 (19,0%, 4/21)
KRAS
mutasjoner (figur 2), sto for 3,2% (17/536) av
EGFR
-mutant saker og 6,0% (4/67) av
KRAS
-mutant saker. Sameksistens av
PIK3CA
med
BFAF
,
HER2
,
akt1
genmutasjoner eller
ALK
omorganisering ble ikke funnet. Dette
PIK3CA Anmeldelser –
EGFR /KRAS
co-mutasjon var mer vanlig hos kvinner som aldri røyker enn i nåværende eller tidligere røykere (
p
= 0,039), og i adenokarsinom enn i plateepitelkarsinom (
p
0,0001). Det var også en tendens til en høyere co-mutasjon forholdet hos kvinner (
p
= 0,067) og hos pasienter i alderen ikke mer enn 60 (
p
= 0,168) (tabell S5 i File S1 ).
Spesifikk histopatologiske subtype ble også analysert i 807 lunge adenokarsinom og ingen signifikant forskjell i undertype ble funnet mellom pasienter med og uten
PIK3CA
mutasjon (
p
= 0,082, Tabell S6 i File S1). I 34
PIK3CA
mutant saker, var det ingen signifikant korrelasjon i histopatologiske subtype mellom pasienter med
PIK3CA
–
EGFR /KRAS
mutasjoner og dem bare med
PIK3CA
mutasjoner, heller. (
p
= 0,121, Tabell S7 i File S1).
Immunhistokjemisk uttrykk for PI3K p110α, p-AKT, mTOR, PTEN og deres sammenhenger
For å evaluere aktiviteten av PI3K /AKT vei både i
PIK3CA
mutant og
PIK3CA
hvete grupper, vi fortløpende valgt en mindre serie av
PIK3CA
hvete pasienter med primær NSCLC, kirurgisk reseksjon mellom juli 2008 og juni 2009 med lignende kliniske og patologiske egenskaper fra 1117 pasienter undersøkt ovenfor. 108
PIK3CA
hvete pasienter ble samlet inn. Vi er fast bestemt PI3K p110α, p-Akt, mTOR og PTEN proteinnivåer i 34
PIK3CA
mutant saker og 108
PIK3CA
hvete tilfeller ved immunhistokjemi (IHC). Representative immunofarging for hvert protein er illustrert i fig S2 i File S1. For
PIK3CA
mutant gruppe, høy cytoplasma uttrykk for PI3K p110α ble påvist hos 27 (79,4%, 27/34) svulster, mens høy uttrykk for p-Akt (for det meste i cytoplasma) og mTOR (i cytoplasma) var påvist i 18 (52,9%, 18/34) og 25 (73,5%, 25/34) svulster, henholdsvis. Lav uttrykk for PTEN (PTEN tap) i cytoplasma og cellekjernen ble sett i 8 (23,5%, 8/34) svulster. For
PIK3CA
vill type gruppe, høy uttrykk for PI3K p110α, p-Akt, mTOR ble funnet i 42 (38,9%, 42/108), 34 (31,5%, 34/108) og 44 (40,7% , svulster henholdsvis 44/108). Lav uttrykk for PTEN ble sett i 30 (27,8%, 30/108) svulster. Som vist i tabell S8 S9-File S1, i en av de to gruppene, foreningen mellom hvert par av PI3K p110α, p-Akt, mTOR-proteiner var statistisk signifikante. Men ingen signifikante korrelasjoner ble funnet mellom PTEN og andre proteiner. I
PIK3CA
mutant gruppe, høy PI3K p110α uttrykk var assosiert med stadium II til IV sykdom. (
p
= 0,043) (tabell S8 i File S1) og i
PIK3CA
vill type gruppe mer høy p-Akt uttrykk ble funnet i eldre pasienter (
p
= 0,037) (tabell S9 i File S1). Ingen av andre clinicopathologic kjennetegn viste en signifikant sammenheng med uttrykk for PI3K p110α, p-Akt, mTOR eller PTEN.
Analyse av
PIK3CA
genamplifisering
For å undersøke kopi antall endringer av
PIK3CA
, samme panel av 142 frosne NSCLC tumorprøver ble analysert ved fluorescens i området hybridisering inkludert 34 svulster med mutasjon i
PIK3CA
og 108 tilfeller uten
PIK3CA
mutasjon.
PIK3CA
forsterkning ble påvist i 5
PIK3CA
mutante prøver (14,7%, 5/34) som var mer utbredt i lunge plateepitelkarsinom (4/12 for lunge plateepitelkarsinom vs. 1 /12 for lunge adenokarsinomer,
p
= 0,042). Likevel, i
PIK3CA
vill type gruppe,
PIK3CA
forsterkning ble påvist i 22 (20,4%, 20/108) svulster og var signifikant assosiert med mannlige kjønn (22/90 vs. 0 /18,
p
= 0,021), strøm /tidligere røyker (22/78 vs 0/30,
p
= 0,001) og plateepitelkarsinom patologisk type (19/52 vs 3 /56,
p
0,0001). (Tabell S10 og Figur S2 i File S1)
Association blant
PIK3CA
mutasjon,
PIK3CA
forsterkning og uttrykk for PI3K p110α, p-AKT, mTOR, PTEN
Vi videre fastslått om
PIK3CA
endringer ble assosiert med aktiviteten av PI3K veien. Vi observerte at
PIK3CA
mutasjon var signifikant forbundet med høy uttrykk for PI3K p110α (
p
0,0001), p-Akt (
p
= 0,024) og mTOR (
p
= 0,001) (tabell 3). Men ingen korrelasjoner ble funnet mellom
PIK3CA
mutasjon og PTEN uttrykk (
p
= 0,626) (tabell 3). I tillegg
PIK3CA
forsterkning ble ikke korrelert med uttrykk for PI3K p110α, p-AKT, mTOR, PTEN verken i
PIK3CA
mutant eller villtype gruppen (tabell S10 i File S1). Vi har også sammenlignet
PIK3CA
forsterkning med
PIK3CA
mutasjonsstatus og funnet ut at det var fem tilfeller skjuler
PIK3CA
forsterkning i kombinasjon med
PIK3CA
mutasjoner. Ingen tydelig sammenheng ble funnet mellom
PIK3CA
mutasjon og forsterkning (
p
= 0,463) (tabell 3)
Survival utfall mot
PIK3CA
genmutasjon og forsterkning status
Vi ytterligere oppdage den prognostiske verdien av
PIK3CA
genmutasjon og forsterkning i samme panel av 142 tilfeller. For å avklare om de behandlingsformer påvirket løpet overlevelse (OS) og tilbakefall overlevelse (RFS), vi sammenlignet OS og RFS mellom pasienter med og uten adjuvant kjemoterapi, finner ingen signifikant forskjell mellom to grupper verken på OS eller RFS (figur S3A- S3b i File S1). For å finne ut om pasienter med
PIK3CA /EGFR
co-mutasjoner kan ha nytte av
EGFR
tyrosinkinasehemmer, vi også undersøkt adjuvant behandling av 34
PIK3CA
mutant saker. Av disse 2 pasienter, med L858R og 746-sletting separat, ble behandlet med gefitinib etter operasjonen. Delvis respons ble oppnådd i begge de to pasientene
Den over overlevelse (OS) for hele kohorten var 12,0 måneder med en median oppfølgingstid på 12,2 måneder. Det var ingen signifikant forskjell i median OS mellom
PIK3CA
mutant gruppe og
PIK3CA
villtype gruppe (
p
= 0,442; figur 3A). Men når
PIK3CA
mutante pasienter ble sub-klassifisert av enkelt
PIK3CA
mutasjon eller
PIK3CA Anmeldelser –
EGFR /KRAS
co-mutasjon, overlevelse for pasienter med enkelt
PIK3CA
mutasjon var kortere enn pasienter med
PIK3CA Anmeldelser –
EGFR /KRAS
co-mutasjon eller
PIK3CA
villtype gruppe (
p
= 0,004; figur 3B)
Totalt overlevelseskurver for pasienter:. med eller uten
PIK3CA
mutasjon (A); med enkel
PIK3CA
mutasjon, sameksistens av
PIK3CA Hotell og annen genmutasjon, og de i
PIK3CA
villtype gruppe (B); med eller uten
PIK3CA
mutasjon i
EGFR /KRAS
villtype gruppe (C); med
PIK3CA
mutasjon i ekson 9 eller ekson 20 (D).
Det har blitt godt karakterisert at
EGFR
mutasjon ble vanligvis forbundet med en relativt god prognose mens
KRAS
mutasjon ble vist å være assosiert med et dårlig resultat, og etterlater en ubestemt prognostisk undergruppe for
EGFR /KRAS
villtype pasienter. Derfor har vi undersøkt den prognostiske rollen videre
PIK3CA
mutasjoner i
EGFR /KRAS
hvete NSCLC pasienter. Vi fant en signifikant lavere overlevelse hos pasienter med
PIK3CA
mutasjoner (
p
= 0,043; figur 3C). Dessuten, etter
PIK3CA
mutante pasienter ble allokert til E9 (
PIK3CA
mutasjon i ekson 9) og E20 (
PIK3CA
mutasjon i ekson 20) gruppe, en trend ble funnet at pasienten i E20 gruppen overlevde lenger enn de i E9 gruppe (
p
= 0,080; figur 3D)
median tilbakefall overlevelse (RFS) var 15,5 måneder hos pasienter med
PIK3CA
mutasjon og 23,3 måneder hos pasienter uten
PIK3CA
mutasjoner (
p
= 0,138, figur 4A). Som median OS, pasienter med én
PIK3CA
mutasjon hadde en kortere RFS enn pasienter med
PIK3CA Anmeldelser –
EGFR /KRAS
co-mutasjon (
p
= 0,014, figur 4B). Signifikant forskjell på RFS ble også funnet mellom saker med og uten
PIK3CA
mutasjon i
EGFR /KRAS
hvete undergruppe (
p
= 0,046; figur 4C). Pasienter i E20 gruppen hadde en lengre RFS enn i E9 gruppe (
p
= 0,003; figur 4D).
PIK3CA
forsterkning var ikke assosiert med total overlevelse (
p
= 0,491; figur S4A i File S1) eller tilbakefall overlevelse (
p
= 0,884; figur S4B i File S1). Vi utførte en multivariat analyse (Cox) med
PIK3CA
mutasjonsstatus, histologisk subtype, alder, kjønn, tumorstadium, tumor klasse som variabel, og ikke funnet den uavhengig prognostisk verdi på
PIK3CA videre
mutasjon i disse faktorene
gjentakelse frie overlevelseskurver for pasienter: med eller uten
PIK3CA
mutasjon (A);. med enkel
PIK3CA
mutasjon, sameksistens av
PIK3CA Hotell og annen genmutasjon, og de i
PIK3CA
villtype gruppe (B). med eller uten
PIK3CA
mutasjon i
EGFR /KRAS
villtype gruppe (C); med
PIK3CA
mutasjon i ekson 9 eller ekson 20 (D).
Diskusjoner
I vår studie undersøkte vi uttrykket av proteiner i PI3K veien, molekylær endring i
PIK3CA Hotell og dens innvirkning på overlevelse hos pasienter med NSCLC. Så langt vi kjenner til, er dette den største kohort av flere analyser
PIK3CA
genet endring og aktiviteten av PI3K veien og vi fant en negativ prognostisk effekt av enkelt
PIK3CA
mutasjon i NSCLC. Vår studie viste hyppig overlapping av
PIK3CA Hotell og
EGFR /KRAS
mutasjoner og demonstrert en dårlig prognostisk verdi på
PIK3CA
mutasjon på
EGFR /KRAS
villtype pasienter.
frekvensen av
PIK3CA
mutasjon, som bestemt ved direkte sekvensering var 3,9% i lunge-skvamøs celle carcinoma og 2,7% i adenokarsinom, noe som er sammenlignbart med verdien på 2,9% og 2,5 % i en tidligere rapport som undersøkes et lite antall japanske pasienter [21]. Interessant, i motsetning til
PIK3CA Anmeldelser –
KRAS
co-mutasjon, som er mer utbredt i vestlige land [28], halvparten av
PIK3CA
mutante pasientene i vår studie hadde samtidige
EGFR
mutasjoner. Dette kan tilskrives høyere prevalens
EGFR
mutasjoner i lungekreftpasienter fra East enn
KRAS
mutasjoner [17], [29]. Dessuten, selv om PI3K kunne aktiveres av reseptorkinaser og Ras, som i sin tur aktiverte p-Akt, den PI3K /Akt reaksjonsvei og
EGFR
signalveier interaksjon tett, kan PI3K signalering har flere aktivatorer og nedstrøms mål [11 ], [30]. Våre funn om sameksistens av
PIK3CA Hotell og andre genmutasjoner innenfor
EGFR
signalveier er i samsvar med disse observasjonene.
I samsvar med tidligere studier, høy uttrykk for PI3K p110α, p -Akt, mTOR og tap av PTEN ble funnet i 79,4%, 52,9%, 73,5%, 23,5% av
PIK3CA
mutant-gruppen og 38,9%, 31,5%, 41,7%, 27,8% av
PIK3CA
villtype-gruppe [20], [26], [27], [31], [32]. Vi observerte at tilstedeværelsen
PIK3CA
mutasjon ble forbundet med høy uttrykk for PI3K p110α, p-Akt, mTOR i NSCLC, ligner på resultatene fra eggstokkene klart cellekreft [31]. Likevel, en nyere forskning på tykktarmskreft rapportert
PIK3CA
mutasjon var ikke i samsvar med uttrykk for PI3K p110α protein, noe som indikerer at
PIK3CA
mutasjoner kan ikke være den unike årsaken som fører til høyt uttrykk for PI3K p110α og kan spille ulike roller på aktiviteten av PI3K veien i forskjellige typer karsinom [26]. Vi har også vist at PI3K p110α uttrykk var positivt korrelert med uttrykk for p-Akt og mTOR, mens p-Akt uttrykk ble også positivt korrelert med mTOR uttrykk både i
PIK3CA
mutant gruppe og
PIK3CA
vill type gruppe. Disse resultatene kan være vanskelige å forstå fordi det
PIK3CA
aktiverer p-Akt, og positivt regulerer mTOR [27], [31]. En studie av Marsit et al. foreslo at regulering av PTEN er ikke alltid på genetisk nivå, men også kan forekomme på transkripsjons eller translasjonsforskning nivå, som også kan forklare den begrensede sammenheng mellom PTEN tap og
PIK3CA
mutasjon observert [12]. Etterfølgende forening analyse viste at
PIK3CA
muterte tumorer med høy uttrykk for PI3K p110α var mer sannsynlig å være stadium II til IV sykdom sammenlignet med svulster uten høy PI3K p110α uttrykk. Ekspresjon av PI3K p110α ble også funnet å være korrelert med primære og metastatiske lesjoner, noe som tyder på at PI3K p110α kan være involvert i tumorprogresjon og metastaser [25], [26]. Den nøyaktige molekylære mekanismen fortsatt garanterer videre studier.
For å utvide vår forståelse av mekanismen under aktivering av PI3K veien, undersøkte vi sammenhengen mellom
PIK3CA
forsterkning og clinicopathological variabler i samme serie av NSCLC pasienter.
