Abstract
Glyoxalase 1 er en scavenging enzym av potente forløpere i reaktive oksygenartsdannelse og er involvert i forekomst og progresjon av menneskelige kreftformer. Glyoxalase jeg A111E polymorfisme har blitt foreslått å påvirke sin enzymatisk aktivitet. Denne studien var rettet mot å undersøke sammenslutningen av denne polymorfisme med oksidativt stress og dens implikasjoner i prostata kreft progresjon eller overlevelse. Den polymorfisme ble genotypet i humane forskjellig aggressive og invasive prostatakreft-cellelinjer, i 571 prostatakreft eller benign prostatahyperplasi 588 pasienter, og 580 friske personer ved polymerasekjedereaksjon /rflp. Glyoxalase en aktivitet, pro-oksidanter Glyoxalase en relaterte Argpyrimidine og oksidativt stress biomarkører ble evaluert av biokjemiske analyser. Glyoxalase en polymorfisme var assosiert med en økning i Glyoxalase en relaterte pro-oksidant Argpyrimidine og oksidativt stress og progresjon av kreft. Mutanten A-allel dratt en beskjeden risiko for prostatakreft, en markert risiko for prostatakreft progresjon og en lavere overlevelsestiden sammenlignet med vill C-allelen. Resultatene av vår eksplorerende studie peker på en betydelig rolle for Glyoxalase 1 i prostata kreft progresjon, noe som gir en ekstra kandidat for risikovurdering i prostatakreftpasienter og en uavhengig prognostisk faktor for overlevelse. Til slutt, vi gitt bevis på biologisk plausibilitet av Glyoxalase en polymorfisme, enten alene eller i kombinasjon med andre, alle relatert til oksidativt stress kontroll som representerer en viktig hendelse i PCa utvikling og progresjon
Citation. Antognelli C , Mezzasoma L, Mearini E, Talesa VN (2013) Glyoxalase 1-419C En variant er assosiert med oksidativt stress: implikasjoner i Prostate Cancer Progresjon. PLoS ONE 8 (9): e74014. doi: 10,1371 /journal.pone.0074014
Redaktør: Rui Medeiros, IPO, Inst Port Oncology, Portugal
mottatt: 24 april 2013; Akseptert: 26. juli 2013, Publisert: 10.09.2013
Copyright: © 2013 Antognelli et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Ingen strøm eksterne finansieringskilder for denne studien
konkurrerende interesser:. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Glyoxalase 1 (GLO1) er en glutation avhengig enzym som er involvert i scavenging av Methylglyoxal (MG), en potent cytotoksisk α-oxoaldehyde, med en sterk evne til å kryss-link med protein aminogrupper, danner stabile produkter kalt avanserte glycation end-produkter (alder) [1], [2]. Blant dem, argpyrimidine (AP) representerer en av de viktigste produktene som stammer fra MG-modifikasjoner av proteiner argininrester [3], [4]. Både MG og aldre er effektive forløpere av reaktive oksygenarter (ROS) og fri-radikal-[5], [6], sterkt implisert i progresjon av kreft, inkludert prostata cancer (PCA) [7] – [10]. En enkelt-nukleotid polymorfisme (SNP), -419C A (rs2736654), forårsaker en Ala111Glu (A111E) substitusjon, er blitt identifisert i exon 4 av GLO1-genet [11] og assosiert med en reduksjon av GLO1 enzymatisk aktivitet [11] – [ ,,,0],1. 3]. GLO1 A111E polymorfisme har blitt undersøkt i noen menneskelige lidelser [11], [14] – [17], inkludert kreft [18], [19], men til vår beste overbevisning, dens rolle i PCA har aldri vært undersøkt før . I den foreliggende undersøkelse har vi antatt at GLO1 polymorfisme, som er knyttet til en reduksjon av GLO1 enzymatisk aktivitet, og følgelig til en opphopning av GLO1 relaterte pro-oksidativ AP, kan være assosiert med oksidativt stress induksjon, således teller som en ny mekanisme ved PCA progresjon. Til dette formål GLO1 polymorfisme, AP og oksidativt stress biomarkører (ROS, redusert glutation, GSH, malonyldialdheyde, MDA) [20] nivåene var for det første studert i menneskelige annerledes aggressive og invasive LNCaP og PC3 prostata kreft cellelinjer, for det andre, i urin sedimenter [21], [22] og blod PCa og benign prostatahyperplasi (BPH) menn, eller friske mannlige alderstilpassede fag. Siden vår første resultatene pekte ut en rolle for GLO1 ved PCA progresjon, noe som gir en biologisk bakgrunn for en mulig sammenheng mellom GLO1 A111E polymorfisme med PCA vi, i tillegg undersøkt sin tilknytning til progresjon, evalueres av scenen og karakteren. En studie om sammenhengen mellom GLO1 polymorfisme og PCa risiko og overlevelse i utvalgte undergrupper ble også utført. Dessuten sikrer bevis for at PCA har en viktig genetisk komponent er overbevisende fra epidemiologiske, genetiske og genom-wide assosiasjonsstudier [23] – [26]. Noen risiko genvarianter er identifisert, som kan disponere bærere til utvikling og progresjon av slik sykdom [24]; Likevel er motstridende resultater er oppnådd. Derfor er studiet av andre polymorfe gener presserende behov. Forbedre kunnskap om hvordan genetiske faktorer påvirker PCa progresjon kan forbedre den kliniske behandlingen av slike over hele verden neoplasi. Til slutt, siden vi mener at enkelt alleliske varianter seg selv ikke er tilstrekkelig til å forutsi, i mange tilfeller, predisposisjon til risikoen for PCa, evaluerte vi GLO1 A111E polymorfisme i kombinasjon med andre oksidativt stress kontroll-relaterte polymorfe gener, som vi tidligere har funnet for å være forbundet med risiko for PCa i et case /kontrollstudie [27], som BPH og PCA kullene er her inkludert i den nye forstørrede populasjoner. I tillegg ble analysen utført hos friske mannlige alderstilpassede fag.
Resultatene fra vår eksplorerende studie peker på en betydelig rolle for GLO1 ved PCA progresjon, noe som gir en ekstra kandidat for risikovurdering i PCA pasienter og en uavhengig prognostisk faktor for overlevelse.
Materialer og metoder
celle~~POS=TRUNC linjer~~POS=HEADCOMP
Menneske prostatakreft LNCaP og PC3 cellelinjer ble oppnådd fra American Type Culture Collection (ATCC) og rutinemessig opprettholdt ved 37 ° C i 5% CO
2 i RPMI 1640 supplert med 10% varmeinaktivert FBS, 1X L-glutamin, 1 mM natriumpyruvat, 1 x ikke-essensielle aminosyrer, 100 enheter /ml penicillin og 0,1 mg /ml streptomycin (Invitrogen).
Pasienter
det er totalt 1739 kaukasiske italienske menn ble inkludert i denne studien. Av dem ble 1423 (PCA, BPH, friske menn) registrert mellom april 1999 og juni 2005 fra Institutt for Urologi (Universitetet i Perugia, Perugia, Italia), 316 (friske menn) ble rekruttert mellom juli 2005 og juni 2013 fra samme avdeling. Saken gruppe besto av 571 pasienter med tidligere ubehandlet, histologisk verifisert PCA diagnostisert av transrectal ultralydveiledet biopsi. Indikasjonen for prostatabiopsi var enten et mistenkelig funn på digital rektal undersøkelse eller forhøyet serumnivå av prostataspesifikt antigen (PSA), eller begge deler. Sykdommen ble klassifisert i henhold til Verdens helseorganisasjon kriterier og iscenesatt i henhold til tumormetastaser (TNM) klassifisering og Gleason gradering systemet (Gleason score). Spesielt stratifisert vi analysen i henhold til tumorstadium (lokalisert: T1 /T2, lokalavansert: T3 /T4) og histologisk grad (lav karakter: Gleason 2-6 eller godt differensiert, moderat karakter: Gleason 7 eller moderat differensiert, høy klasse: Gleason 8-10 eller dårlig differensiert), i henhold til den patologiske og /eller radiologiske rapporter. Tyder på at prostatakreft utpekt som Gleason score på syv forskjellige ganske tydelig i forhold til prognose med disse svulster med Gleason score på 3 + 4 = 7 anses som mindre aggressiv enn svulster med Gleason score på 4 + 3 = 7 [28], [29]. Siden, i foreløpige analyser, vi fant ingen signifikant forskjell i GLO1 SNP sammenheng mellom de tre + 4 eller 4 + 3 tumor karakterer, bestemte vi oss for å samle dem i en enkelt gruppe (Gleason score 7). Kontrollgruppen bestod av 588 alders-, ethnicity- og geografisk tilpasset personer med BPH, hvis diagnosen ble basert på nedre urinveissymptomer, gratis uroflowmetry, tegn på økt prostata størrelse (fås ved palpasjon eller transrectal ultralyd) og i hvem tilstedeværelsen av PCa var nøye ekskludert klinisk og hystologically (negative biopsier for PSA 4 ng /ml, ingen T1a-T1b sykdom). Til sammenligning, en sunn menn konsernet, herunder alders-, ethnicity- og geografisk tilpasset individer, ikke lider av noen prostata sykdom, ble inkludert i studien. De deltakelsen var 98%, 95% og 96% for PCA, BPH og friske menn, henholdsvis. Alle individer som ble enige om å delta i studien ble evaluert med et detaljert spørreskjema, som viste seg informasjon om livsstil og familiehistorie med kreft.
Etikk erklæringen
Alle fag ga skriftlig informert samtykke til studien, som ble godkjent av komiteen for bioetikk ved Universitetet i Perugia i samsvar med prinsippene fastsatt i Helsinki deklarasjonen
GLO1-419C . En Polymorphism Genotyping
DNA fra perifert blod leukocytter ble ekstrahert med NucleoSpin Blood Hurtig Pure Kit (MACHEREY-NAGEL). GLO1-419C En SNP påvisning var basert på Polymerase Chain Reaction-Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) analyse som tidligere beskrevet [18], etter PCR forsterkning. All genotyping ble utført av laboratoriepersonell blindet til case-control status av prøvene, som inkluderte kvalitetskontroll prøver for validering. Konkordans for kvalitetskontroll prøvene var 100%.
Oksidativt stress Kontroll relaterte Gene Polymorfisme Genotyping
enkeltnukleotidpolymorfi (SNPs) for oksidativt stress kontrollrelaterte gener glutation S-transferase 1 (GSTP1 Ile Val), Paraoxonase 1 (PON1-192Q R, PON1-55 L M) og cytokrom P450 17 (CYP17A1 A2) ble detektert som beskrevet av Antognelli et al. [27].
Samling av urin prøver etter prostata massasje
Innsamling av urinprøver ble utført som tidligere beskrevet [21], [22].
Innsamling av Serum, Plasma og lymfocytter fra blodprøver
serum, plasma og lymfocytter ble oppnådd fra blodprøver samlet før rektal palpasjon, for å utelukke muligheten for å påvirke de resultater som følge av prostata manipulasjon. Serum og plasma ble oppnådd i henhold til standard protokoller og brukt til GLO1 eller MDA og GSH-målinger, henholdsvis. Lymfocytter ble isolert i Lymphoprep separasjon medium (Axis-Shield, Oslo, Norge) [30] og brukes for ROS deteksjon.
GLO1 Enzymatisk Spesifikk aktivitet
Klargjøring av ekstrakter fra cellelinjer og GLO1 enzymatisk spesifikk aktivitet var ifølge Antognelli et al. [31] og Mannervik et al. [32], respektivt. Serum GLO1 estimering ble utført som beskrevet av Chavan et al. [33].
Western Blot
Hel-celle protein utvinning og western blot ble utført som tidligere beskrevet [31], [34]. En passende fortynning av mus anti-MG-AGE (Arg-pyrimidin, AP) mAb (Antistoffer-online, GmbH) og anti-p-aktin mAb (Santa Cruz Biotechnology) ble brukt. AP måling i plasma ble utført i henhold til Raj et al. [35].
Måling av oksidativt stress Biomarkører (ROS, GSH og MDA)
ROS og GSH ble oppdaget etter Szabados et al. [36] eller henholdsvis Guzel et al [37],. MDA ble målt ved hjelp av OxiSelect ™ TBARS Assay Kit (MDA Kvantitering) (Cell Biolabs).
Statistical Analysis
Analyse av data ble utført ved hjelp av SPSS 11.0 for Windows. Beskrivende analyse inkludert fastsettelse av standardavvik (SD) samt t-test. GLO1 serumnivåer ble log-transformeres som undergruppene (lokaliserte, lokalt avansert eller lav, middels og høy klasse) ble ikke viser normal distribusjon av data per en sample-KS test. Fordeling av metabolitter var normal i hver av de ovennevnte undergrupper. Den χ
2 test ble brukt for å sammenligne genotype /allelfrekvenser mellom PCA saker og BPH eller friske kontroller. Odds ratio (ORS) ble beregnet til å estimere den relative risikoen for PCa av ubetinget logistisk regresjonsanalyse og justert for eventuelle modifiserende faktorer, inkludert alder (kontinuerlig) og prostataspesifikt antigen (PSA, kontinuerlig). Allelfrekvenser ble beregnet ved direkte genet telling. χ
2 test ble brukt til testing av Hardy-Weinberg likevekt (HWE). GLO1 SNP ble testet for mulige effekter på oksidativt stress kontrollmessige trekk ved lineær regresjonsanalyse under en additiv modell, som omfatter kovariater alder og PSA. Survival analyse av utvalgte PCA tilfeller ble brukt til å teste den mulige effekten av genotyper på risikoen for å dø av PCa. For dette formål er overlevelseskurver ble konstruert ved anvendelse av Kaplan-Meier-metoden, og forskjellene mellom gruppene ble testet ved hjelp av log-rank-metoden. Den multivariat analyse av de sannsynlige prognostiske faktorer for overlevelse ble utført ved hjelp av Cox proporsjonale hazard regresjonsanalyse. De relative hazard ratio (HR) med 95% konfidensintervall ble vurdert å justere for potensielle konfunderende variabler, så vurderes hvis de endret timer med noen av de genetiske variantene med minst 5%. Overlevelse ble beregnet fra tidspunktene for PCa diagnose til datoen for PCa spesifikk død, hentet fra databasene til Regional Kreftregisteret i 2010. Justering for multippel testing ble utført ved hjelp permutasjon-baserte metoder [38], [39]. For alle resultater, ble en p-verdi på mindre enn 0,05 ansett som statistisk signifikant.
Resultater
Kjennetegn på PCA Saker og BPH eller friske kontroller
De viktigste egenskapene PCA saker og BPH eller friske kontroller er presentert i tabell 1. saker og kontroller dukket opp godt matchet på alder, kroppsmasseindeks (BMI), drikker eller røyker status og fysisk aktivitet (p 0,05). Serum PSA nivåer var signifikant høyere ved PCA forhold til BPH eller friske menn (p 0,0001). Når stratifisert i henhold til den kliniske stadium hadde 52,0% og 48,0% av pasientene lokalisert (T1 /T2) og lokalt avansert (T3 /T4) sykdom, henholdsvis. Når stratifisert etter svulst Karakter (Gleason score), 44,7%, 28,2% og 27,1% av pasientene hadde lav (2-6), moderat (7) og høy (8-10) karakter sykdom, henholdsvis.
Association of GLO1 polymorphism med oksidativt stress og PCa Progresjon
for å studere sammenhengen av GLO1 A111E polymorfisme med oksidativt stress, vi, for det første, studert GLO1 genotyper og enzymatisk spesifikk aktivitet i to forskjellig aggressiv og invasive menneskelige prostata kreft cellelinjer. Vi fant at dårlig aggressive, mindre invasiv og androgen-avhengige LNCaP-celler var homozygote for C-allelen (figur 1A), og hadde en GLO1 spesifikk enzymatisk aktivitet signifikant (p 0,03) høyere (gjennomsnitt ± SD, 1,47 ± 0,025 umol /min /mg protein) enn svært aggressive, mer invasive og androgen-insensitive PC3 celler (gjennomsnitt ± SD, 0,84 ± 0,01 mikromol /min /mg protein), omozygous for A-allelet (figur 1A). Siden GLO1 er nødvendig for MG avgiftning det er, intracellulært, hurtig omdannes til AGE [1], vi deretter analysert intracellulære nivåer av AP, de store AGE avledet fra spontan MG adduksjon av argininrester [3], [4], [40] , finne at i PC3 celler, husing Ala isoform av GLO1, de var signifikant (p 0,001) doblet sammenlignet med LNCaP celler, uttrykker Glu isoformen (figur 1B). Til slutt, ettersom AP har vist seg å være en effektiv forløper for ROS og fri-radikal produksjon [5], [6], [41], analyserte vi de intracellulære nivåene av oksidativt stress biomarkører, å finne en betydelig økning i MDA og ROS eller reduksjon i GSH intracellulære nivåer i PC3 cellene i forhold til LNCaP (figur 1C). Siden disse
in vitro
resultater syntes å støtte potensialet sammenslutning av GLO1 polymorfisme med progresjon, utførte vi målinger av de samme parametrene i blodprøver og celler fra urinsedimenter av pasienter med lokalisert og lokalavansert eller lav, middels og høy klasse PCa. GLO1 aktivitet, AP og oksidativt stress indekser, både i blod eller celler fra urin sedimenter, var signifikant forskjellig mellom PCA pasientene stratifisert ved scenen og klasse, bærer CC, CA og AA genotyper av GLO1 polymorfisme (alle p 0,05) (Tabell 2) , noe som reflekterer utviklingen oppnådd i de studerte annerledes aggressive cellelinjer
(A) GLO1 -419C . En homozygot villtype (CC) LNCaP og homozygot mutant type (AA) PC3 celler; (B) Argpyrimidine (AP) intracellulære nivåer og densitometrisk analyse fra Western blot gjenkjenning. Western blot ble oppnådd ved anvendelse av en mAb mus anti-AP. Blottet ble strippet av den bundne Ab og re-probet med mus anti-β-actin, for å bekrefte lik belastning. Western blot er vist er representative for tre separate eksperimenter. (C) reaktive oksygenforbindelser (ROS), malondialdehyde (MDA) og redusert glutation (GSH) intracellulære nivåer. Histograms indikerer middel ± SD av tre ulike kulturer hver en ble testet i fire og uttrykt som ganger endring ** P. 0,001, ** P. 0,001
GLO1 Polymorphism og PCa progresjon
Tabell 3 rapporter effektene av GLO1 polymorfisme på PCa progresjon evaluert av klinisk stadium og histologisk grad. Personer med minst én variant A allel (CA + AA) hadde en moderat høyere risiko for å utvikle lokalisert PCa (OR = 1,57, 95% CI = 1.17 til 2.11, p = 0,002), mens en sterk sammenheng ble funnet med lokalt avansert PCa scenen (OR = 8,97, 95% CI = 5,77 til 14,02, p 0,0001), sammenlignet med personer med CC genotype. Tilsvarende individer som bærer i det minste en variant A-allel (CA + AA) hadde en moderat høyere risiko for å utvikle lav grad av PCa (OR = 1,46, 95% CI = 1,07 til 1,98; p = 0,013) mens en sterk sammenheng ble funnet med moderat og høy klasse PCa (OR = 7,20, 95% CI = 4.28 til 12.20, p 0,0001 og OR = 10,28, 95% CI = 5,64 til 19,05, p 0,0001, henholdsvis)., sammenlignet med personer med CC genotypen
GLO1 polymorfisme og PCA risiko~~POS=TRUNC
En studie om sammenhengen mellom GLO1 polymorfisme og PCa risiko var også performed.The genotype og allelfrekvenser av GLO1 -419C En polymorfisme i PCA saker og BPH eller friske kontroller er vist i tabell 4. genotypefrekvensene i BPH og PCA pasienter eller friske menn alle dannet HWE (p 0,05). Vi fant at forekomsten av villtype CC genotypen var lavere ved PCA (43,3%) enn i BPH (50,5%) eller friske menn (52,2%) befolkning, og at hyppigheten av CA genotype var høyere blant PCA (46,2% ) enn blant BPH (41,7%) eller friske menn (40,7%) gruppe. Forekomsten av mutant AA genotype var høyere blant PCA (10,5%) sammenlignet med BPH (7,8%) eller friske menn (7,1%) gruppe. Forskjellen i frekvensfordelingen C og A-allelet blant PCA og BPH pasienter eller friske menn var også signifikant (p = 0,010). Flere studier har rapportert at frekvensene av mutanten A-allel i forskjellige normale populasjoner viste verdensom verdier mellom 27,2% og 51,7% [11], [17], [18], [42], [43]. Våre resultater på en allelfrekvenser i BPH eller friske menn grupper var også i den rapporterte rekkevidde. Siden ble det ikke observert signifikante forskjeller mellom friske og BPH menn, ble BPH valgt som referansegruppen. Personer med CA og AA genotyper hadde en marginal, men signifikant økt mottakelighet for PCa forekomst, sammenlignet med personer med CC genotypen (OR = 1,34, 95% CI = 1,06 til 1,70, p = 0,013; OR = 1,57, 95% CI = 1,01 -2,44, p = 0,035, respektivt). Videre variant A-allelet var også assosiert med en beskjeden betydelig økt risiko for PCA sammenlignet med C-allelet (OR = 1,26, 95% CI = 1,05 til 1,51, p = 0,010).
GLO1 Polymorphism og PCa overlevelse i valgte Undergrupper av Tumor Stage og grade
Siden en betydelig prosentandel av pasienter med lokalisert (60,6%, Tabell 3) inneholdt eller lav karakter (58,8%, Tabell 3) PCa risikoen A-allelet hypotese vi at i disse grupper, pasienter bærende en variant A-allel kan være ved en høyere risiko for en senere tumorprogresjon, sammenlignet med pasienter som bærer CC. Når log-rank og Cox regresjonsanalyse ble brukt for å vurdere sammenhengen mellom GLO1 polymorfisme og overlevelse, personer med de CA /AA genotyper viste en lavere overlevelse enn personer med CC genotypen i begge lokaliserte eller lav grad undergrupper ( Tabell 5, figur 2).
de personer med variant CA /AA genotyper viste signifikant lavere overlevelse enn personer med CC genotypen i både lokaliserte (A) eller lav karakter (B) undergrupper.
i tillegg multivariat analyse brukes til å avgrense viktige prognostiske faktorer for overlevelse, viste i begge undergrupper at risikoen A-allelet var en uavhengig prognostisk faktor for overlevelse etter justering for alder og PSA (lokalisert PCA: justert HR = 2,48, 95% KI: 1,91 til 3,19; lav karakter PCA:. justert HR = 2,35, 95% KI: 1,79 til 3,08) (Tabell 5)
kombinasjon av GLO1, GSTP1, PON1-192 , PON-en fem, CYP17 polymorfisme som prediktiv faktor for PCa og foreningen med oksidativt stress
i en sak /control studie som kullene har nå blitt inkludert i dagens forstørrede populasjoner, vi tidligere funnet at polymorfismer i oksydativt stresskontroll relaterte GSTP1, PON1-192, PON-1 55 og CYP17 gener ble assosiert med risiko for PCa. I dette arbeidet ble det ikke sammenslutning av det samme genet polymorfismer funnet med tumorprogresjon eller overlevelse [27]. Her har vi for det første bekreftet de tidligere observerte resultater integrere dem sammen med en sammenligning med en frisk mann gruppe (tabell 6). For det andre, siden vi tror at kombinasjonen av flere polymorfismer i hvert enkelt tilfelle, med hensyn til et enkelt sted, kan det være en mer prediktiv faktor for foreningen av risikoen for PCa, evaluert vi en slik kombinasjon, også inkludert GLO1 polymorfisme. Tabell 7 viser at påvisning av GSTP1Ile /Ile-PON1 /192RR-PON1 /55LL-CYP17A2A2-GLO1CC eller GSTP1Ile /Ile-PON1 /192QQ-PON1 /55LM-CYP17A1A2-GLO1CA eller GSTP1Ile /Val-PON1 /192QR-PON1 /55MM-CYP17A1A1-GLO1AA genotype kombinasjon på individnivå, kan føre til identifisering av pasienter med lav, middels og høy risiko for PCA hhv. En signifikant (p 0,05) foreningen av lav, middels og høy risiko genotyper med nivåene av ROS, GSH og MDA oksidativt stress biomarkører i blod og celler fra urinsedimenter ble observert (tabell 7)
multiple sammenligninger
Flere sammenligninger var nødvendig før en samlet definitive utsagn om betydningen av våre funn kan gjøres. Alle resultater, bortsett fra de på foreningen av GLO1 polymorfisme med PCa risiko, tålt korreksjon for multippel testing (p 0,05).
Diskusjoner
I denne studien vi evaluert, for første gang til vår kunnskap, sammenhengen mellom GLO1 -419C en polymorfisme og oksidativt stress ved PCA progresjon
faktisk, som tidligere antydet, A til E substitusjon grunn GLO1 SNP kan avgjøre en konformasjonsendring endring i. enzym, som fører til en isoenzymet med en lavere kapasitet avgiftning [11] – [13]. Slik det er velkjent, er GLO1 en effektiv antiglycation forsvar som reduserer konsentrasjonen av reaktive karbonylforbindelser, for eksempel MG, en av de mest potente forløpere for karbonyl stressrelaterte AGE [1]. Følgelig kan en reduksjon i aktiviteten av dette enzymet fører til en opphopning av aldre og, i sin tur, av ROS og frie radikaler i humane PCA-celler. Faktisk, som vel kjent, MG-avledet aldre er også meget effektive pro-oksidant-molekyler [5], [6] som viktigere bidra til oksidativt stress utbruddet, en nøkkelhendelse i PCa patogenese og progresjon [7]. Faktisk, akkumulering av AP, en av de mest tallrike MG-avledede AGE [3], [4], er blitt funnet i den foreliggende undersøkelse, enten i forskjellig aggressive og invasive PCA-cellelinjer modeller, eller i biologiske væsker fra pasienter med forskjellig aggressive og invasive PCa, hvor en slik opphopning vel tilpasset nærvær av en mindre fungerende GLO1 enzym så vel som en vesentlig betingelse for oksidativt stress. Videre MG-indusert posttranslational adduksjon av utvalgte target proteiner [44], er [45] raskt voksende som en ny mekanisme for kreft celle overlevelse signalering, en tilstand som vanligvis assosiert med kreft progresjon. Våre resultater godt korrelert med de av Hermani et al. som viste at ekspresjon av den oppløselige formen av AGE-reseptor (sRAGE), som gjenspeiler følsomt AGE byrde [42], er forbedret og sterkt forbundet med prostata karsinomer progresjon [46]. Dessuten utløser raseri AGEs interaksjon aktivering av en flere signalveier integrert knyttet til tumorigenesis [47] og avgjørende for PCa utvikling [48] og progresjon [49]. Resultatene på rollen til GLO1 polymorfisme med oksidativt stress i LNCaP og PC3 cellelinjer, og, fremfor alt, i biologiske prøver fra pasienter med PCa på forskjellig gradering og staging foreslått en viktig biologisk rolle av en slik enzym og dets polymorfisme til tilknytning PCa progresjon. Derfor var det rimelig å forvente at tilstedeværelsen av et lavere aktivitetsform GLO1- den GLO1 A-allelet – kan være prediktiv om alvorlige konsekvenser for den enkeltes PCa risiko for progresjon. Faktisk fant vi at mutant A-allelet overdratt en dramatisk risiko for PCa progresjon i forhold til vill C-allelet, enten når BPH eller friske menn kontrollene ble regnet som referansegruppen. Mindre viktig var foreningen av GLO1 polymorfisme med risiko for PCa utvikling. Faktisk fant vi at mutant A-allelet overdratt en beskjeden risiko for PCa forekomst i forhold til vill C-allelet, igjen enten når BPH eller friske menn kontrollene ble regnet som referansegruppen. Derfor resultatene antydet en betydelig rolle for GLO1 i progresjon i stedet for i utviklingen av PCa. Nylig er det blitt demonstrert at også andre SNP’er i GLO1 locus resultat for å være assosiert med GLO1 aktivitet [13]. I den foreliggende eksplorerende studie, analyserte vi felles koding GLO1 -419C En polymorfisme, rimelig å anta at det kan være mer sannsynlig og direkte korrelert med GLO1 aktivitet. Faktisk er det blitt beskrevet at substitusjon av Ala111Glu i GLO1 på grunn av den-419C A SNP, kan føre til konformasjonsendringer i proteinet, meget trolig interfererer med sin 3D-struktur og som påvirker enzymaktivitet [14]. Ja, vi kan ikke utelukke muligheten for at andre SNPs eller antall tagSNPs fra GLO1 locus, kan påvirke GLO1 enzymatisk aktivitet. Derfor er valg av ytterligere SNPs obligatorisk i fremtidige studier, for bedre å kunne vurdere påvirkning av genetiske variasjoner på PCa progresjon.
Når det gjelder overlevelse analyse, fant vi at GLO1 -419 Et allel var signifikant assosiert med en ugunstig overlevelse prognose hos pasienter med lokalisert (T1 /T2) eller lav karakter (GS 2-6) PCa. Derfor, hvis bekreftet ved ytterligere studier denne polymorfisme, fortrinnsvis i kombinasjon med andre, kan hjelpe til å skille mellom klinisk signifikante og lat prostata cancer, og for å forutsi det kliniske forløpet av tidlige stadier PCa. Dessverre har de ytterligere polymorfismer undersøkt i den foreliggende arbeid, enten enkeltvis eller i kombinasjon, ikke viste noen signifikant sammenheng med PCa overlevelse eller progresjon. Kombinasjonen var imidlertid betydelig i forbindelse med PCa risiko og positivt korrelert med oksidativt stress status vises av pasienter som tilhører bestemte risikoklasser, og dermed gi biologisk plausibilitet. Faktisk er slike gener som koder for proteiner relatert til kontroll av oksidativt stress, være i stand til å avgifte frie radikaler (PON 1 og GSTP1) eller redusere potensielle substrater for deres fremstilling (CYP17). I likhet med GLO1 kan de polymorfe varianter bestemme konformasjonelle modifikasjoner som fører til isoenzymer med en endret funksjonell kapasitet og følgelig bidra til utbruddet av en markert oksidativt stress tilstand som faktisk her, påpekt av genetisk assosiasjon med blod eller urinnivåer av oksidativt stress indeksene.
det er nå vel akseptert at genetiske assosiasjonsstudier har bidratt til å styrke vår forståelse av patogenesen av kreft hos mennesker, inkludert PCa. Men etablere den kliniske nytten av disse SNPs har vist seg utfordrende hovedsakelig på grunn av vanskelighetene i å utføre SNP analyser (mangel på reproduserbarhet, utilstrekkelig utvalgsstørrelser, publikasjonsskjevhet, genetisk bakgrunn) [50]. En annen ekstra problem om SNPs analyse er biologisk plausibilitet av genetisk sammenheng. Sjansen for at signifikante sammenhenger, selv med imponerende lave p-verdier, er virkelig sant, avhenger i stor grad av om foreningen er biologisk plausibel [51]. Vi ønsker å understreke at dette arbeidet, noe som gir biologisk plausibilitet til foreningen av GLO1 polymorfisme med progresjon eller til kombinasjonen av alle de analyserte polymorfismer med risikoen for PCA få opp et gyldig bidrag til studiet av genetiske foreninger. Siden et betydelig antall uavhengige statistiske tester ble anvendt i studien, multiple sammenligninger var nødvendig før en samlet definitivt utsagn om betydningen av våre funn kunne gjøres. Med unntak av dataene på den allerede observert svak sammenslutning av GLO1 polymorfisme med PCa risiko, som ikke tåler korreksjon for multippel testing, så sikkert som tyder på videre undersøkelser, fant vi bevis mot nullhypotesen (
p
verdi oppholdt fortsatt betydelig. 0,05 etter korreksjon for multippel testing med permutasjon baserte metoder) for alle de andre analysene, som indikerer hvor robust resultatet
i konklusjonen, vår studie påpekt en betydelig rolle for GLO1 ved PCA progresjon og at GLO1 -419A risiko allel kan være en uavhengig prognostisk faktor for overlevelse. Til slutt, forutsatt at vi bevis på den biologiske påliteligheten til slike polymorfismer, enten alene eller i kombinasjon med andre, alt relatert til oksidativt stress kontroll som, som kjent, er en sentral begivenhet i PCa utvikling og progresjon. Siden dette er den første studien undersøker sammenhengen mellom GLO1 -419C En polymorfisme og PCA er ytterligere forskning er nødvendig
Takk
Forfatterne takker Mrs. Roberta Frosini for utmerket teknisk assistanse..
