Abstract
Bakgrunn
Vi har undersøkt hvordan kroppsstørrelse og fysisk aktivitet påvirker risikoen for at CpG island methylator fenotype (CIMP) i tykktarmskreft (CRC).
metoder
i Nederland undersøkelsen (n = 120 852), risikofaktorer ble selvrapportert ved studiestart i 1986. Etter 7,3 år med oppfølging, 603 saker og 4,631 sub-kohort medlemmer var tilgjengelig. CIMP status i henhold til de Weisenberger markørene ble bestemt ved hjelp av metylering spesifikk PCR på DNA fra parafininnebygd svulstvev. Hazard rente forholdstall (HR) og 95% konfidensintervall for CIMP (27,7%) og ikke-CIMP (72,3%) svulster ble beregnet i henhold til BMI, BMI på 20 år, BMI endring, bukse /skjørt størrelse, høyde og fysisk aktivitet .
Resultater
BMI modellert per 5 kg /m
2 økningen ble assosiert med både CIMP og ikke-CIMP svulster, men HRS ble svekket da i tillegg justert for bukse /skjørt størrelse . Bukse /skjørt størrelse, per 2 størrelse økning, var assosiert med både tumor subtyper, selv etter justering for BMI (CIMP HR: 1,20, 95% KI: 1,01 til 1,43, ikke-CIMP HR: 1,14, 95% KI: 01.04 til 01.28 ). Høyde per 5 cm var assosiert med både kreft sub-typer, men HRS ble svekket da justert for kroppsvekt. BMI i en alder av 20 ble positivt assosiert med økt risiko for CIMP svulster og foreningen var betydelig mindre uttalt for ikke-CIMP tumorer (
P
-heterogeneity = 0,01). Fysisk aktivitet ble omvendt assosiert med begge subtypene, men en dose-respons-sammenheng ble observert kun for ikke-CIMP tumorer (
P
-trend = 0,02).
Konklusjoner
kroppsstørrelse, spesielt sentral fedme, kan øke risikoen for både CIMP og ikke-CIMP svulster. Kroppsfett i ung alder kan forskjellig innflytelse risiko. Fysisk aktivitet ser ut til å redusere risikoen for CRC uavhengig av disse molekylære undergrupper
Citation. Hughes LAE, Simons CCJM, van den Brandt PA, Goldbohm RA, de Goeij AF, de Bruine AP, et al. (2011) Body Size, fysisk aktivitet og risikoen for tykktarmskreft med eller uten CpG Island Methylator Phenotype (CIMP). PLoS ONE 6 (4): e18571. doi: 10,1371 /journal.pone.0018571
Redaktør: Syed A. Aziz, Health Canada, Canada
mottatt: 15 februar 2011; Godkjent: 04.03.2011; Publisert: 05.04.2011
Copyright: © 2011 Hughes et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette prosjektet ble finansiert av World Cancer Research Fund (WCRF), gi # 2007/54 til Matty P. Weijenberg. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
det er vel akseptert at indikatorer for energibalansen påvirker risikoen for tykktarmskreft (CRC). En høy body mass index (BMI), livvidde, og voksen oppnådd høyde er klare risikofaktorer for CRC, mens fysisk aktivitet har vist seg å være beskyttende [1]. Selv CRC er en av de best beskrives kreft i form av genetiske og epigenetiske hendelser involvert [2] – [5], er lite kjent om hvordan tiltak av antropometri og fysisk aktivitet er forbundet med ulike molekylære undergrupper av denne sykdommen. Belyse mulige forskjeller i risiko mellom molekylære undergrupper av CRC kan føre til en bedre forståelse av CRC, behandling og forebygging. Dette er spesielt viktig som den globale utbredelsen av overvekt og fedme fortsetter å stige.
En distinkt kjennetegn ved epigenetisk ustabilitet i CRC er CpG island methylator fenotype (CIMP), preget av mange promoter CpG island hypermethylated svulst suppressor- og DNA-reparasjonsgener [6] – [9]. Dette i sin tur er forbundet med transcriptional stanse av genekspresjon [10]. Få studier har undersøkt assosiasjoner mellom indikatorer for energibalansen og CIMP status, og de som har, kun vurdert BMI som en indikator på kroppsstørrelse. I en case-kontroll innstilling, Slattery
mfl.
Rapportert en sammenheng mellom høy BMI og CIMP lav, men ikke CIMP colontumorer høye [11], og ingen sammenheng mellom BMI og CIMP status i endetarmssvulster [12 ]. Intens fysisk aktivitet var assosiert med både CIMP høy og CIMP lav colontumorer, men ikke endetarmssvulster [11], [12]. Det har blitt antatt at DNA-metylering er en konsekvens av inflammasjon [13], [14]. Sentral fedme er også assosiert med kronisk inflammasjon [15]. Derfor er vurderer livvidde som en risikofaktor for CIMP i tillegg til BMI viktig. I tillegg er metylering antatt å være et tidlig hendelse i CRC [16], så vurderer høyde og BMI i ung alder kan også være informativ som disse variablene er tegn på
i utero Hotell og tidlige livs eksponeringer [17] .
ved hjelp av den potensielle Nederland undersøkelsen om kosthold og kreft (NLCS) undersøkte vi sammenhengen mellom BMI, klær størrelse (som en proxy for livvidde) og fysisk aktivitet og risiko for å utvikle en svulst preget av CIMP . Videre i forsøk på å belyse om tidspunktet for eksponering er viktig for å modulere denne risikoen, vi også undersøkt foreninger ifølge BMI på 20 år, BMI endring, og voksen-oppnådd høyde.
Resultater
baseline og molekylære egenskaper er beskrevet i tabell 1. proporsjonalt, CIMP CRC tilfeller var mer sannsynlig å være kvinne, har en svulst i proksimale colon, og være eldre enn ikke-CIMP tilfeller.
Sammenhenger mellom tiltak av antropometri, fysisk aktivitet og CRC risiko i henhold til CIMP status er vist i tabell 2. etter justering for alder og kjønn, BMI modellert per 5 kg /m
2 økningen var statistisk signifikant assosiert med CIMP svulster (HR: 1,29, 95% KI: 1,01 til 1,66), og en statistisk signifikant dose-responsforhold ble observert når modellering kvartiler av BMI (
P
-trend = 0,02). Men når modellene var gjensidig justert for bukse /skjørt størrelse, disse foreningene ble sterkt svekket. BMI var også positivt, men ikke statistisk signifikant, assosiert med ikke-CIMP tumorer. Disse ble også svekket når gjensidig justert for bukse /skjørt størrelse. HRS for CIMP og ikke-CIMP svulster var ikke signifikant forskjellig fra hverandre (
P
-heterogeneity = 0,78). BMI i en alder av 20 modellert per 5 kg /m
2 økningen var assosiert med økt risiko for begge subtyper, men HRS nådde ikke statistisk signifikans. Når BMI i en alder av 20 ble modellert i kvartiler, var en statistisk signifikant trend observert for CIMP svulster (
P
= 0,03). Denne trenden ble border betydelig da modellen ble justert for bukse /skjørt størrelse (
P
-trend = 0,07). Testen for heterogenitet mellom svulst subtyper var statistisk signifikant med hensyn til BMI i en alder av 20, selv etter justering for bukse /skjørt størrelse (
P
-heterogeneity = 0,01). Ingen statistisk signifikante observasjoner ble observert med hensyn til BMI endring
Bukse /skjørt størrelse, modellert per 2 enhet økning størrelse, var assosiert med både CIMP (HR:. 1,20, 95% KI: 1,05 til 1,37 ) og ikke-CIMP tumorer (HR: 1,14, 95% KI: 01.05 til 01.24) etter multivariate justering, og disse foreninger forble selv når modellene ble gjensidig justert for BMI. Når bukse /skjørt størrelse ble vurdert i omtrentlige kvartiler, test for trend var betydelig for CIMP (p = 0,02) og border vesentlige for ikke-CIMP (
P
= 0,06) svulster, selv om disse ble svekket når modeller ble gjensidig justert for BMI. Foreninger observert for CIMP og ikke-CIMP svulster var ikke statistisk signifikant forskjellig fra hverandre (
P
-heterogeneity = 0,61).
Høyde, modellert per 5 cm økning var assosiert med både CIMP ( HR: 1,16, 95% KI: 1,01 til 1,33) og ikke-CIMP (HR: 1,10, 95% KI: 1,00 til 1,21) svulster etter multivariate justering. En border statistisk signifikant trend ble observert for risikoen for ikke-CIMP svulster når høyden ble vurdert i kvartiler (høyeste versus laveste kvartil HR: 1,45, 95% CI: 01.03 til 02.06;
P
= 0,06) (p- heterogenitet = 0,98). Disse foreningene ble svekket da modellen ble gjensidig justert for kroppsvekt.
Med lav fysisk aktivitet som referansekategori, var det ingen invers dose-respons-sammenheng mellom fysisk aktivitet og CIMP svulster, selv om HR for mellom fysisk aktiviteten var statistisk signifikant (HR: 0,50, 95% KI: 0,30 til 0,82) (Tabell 3). En invers assosiasjon ble observert i en dose-respons-mote for ikke-CIMP tumorer (middels fysisk aktivitet HR: 0,80, 95% KI: 0,61 til 1,04; høy fysisk aktivitet HR: 0,69, 95% KI: 0,47 til 0,96;
P
-trend = 0,02), men assosiasjoner til CIMP og ikke-CIMP svulster var ikke signifikant forskjellig fra hverandre (
P
-heterogeneity = 0,33).
foreninger for en tumor metylering indeks i forhold til antropometriske risikofaktorer og fysisk aktivitet er vist i Tabell 4. det var ingen tydelig mønster med hensyn til graden av metylering, men når modellert per to enhetsstørrelse øker, bukse /skjørt størrelse ble forbundet i en dose-respons måte med svulster som viser den høyeste grad av metylering (4-7 gener metylert HR: 1,29, 95% KI: 1,06 til 1,58;
P
-trend = 0,08)
diskusjon
Disse data tyder på at voksen kropp fedme og høyde kan øke risikoen for CRC, men er ikke ulikt assosiert med CIMP og ikke-CIMP svulster. Derimot har kanskje BMI på 20 år være en sterkere risikofaktor for CIMP + svulster. Baseline fysisk aktivitet ser ut til å redusere risikoen for CRC uansett CIMP status.
En stor styrke med denne studien er at vi undersøkt assosiasjoner i en prospektiv kohort setting. Den NLCS har nesten fullstendig konstatering av tykktarmskreft og svært lite tap til oppfølging. Selv om antallet totalt CRC etter 7,3 års oppfølging i NLCS var betydelig, antall tilfeller med CIMP fenotype var liten. Med begrenset makt for å oppdage foreninger, er det mulig at enkelte funn oppsto ved en tilfeldighet. En annen potensiell begrensning av denne studien er at antropometriske variabler ble oppnådd ved selvrapportering. Det finnes imidlertid mange eksempler i litteraturen som viser at denne metoden er en gyldig og pålitelig verktøy for å vurdere kroppsvekt og høyde i kohortstudier [18] -. [21]
Så vidt vi vet, assosiasjoner mellom indikatorer på energibalanse og CIMP status for tykktarmssvulster vært rapportert bare av Slattery
et al.
i en case-kontroll innstilling [11], [12]. I tillegg til studiedesign, det er forskjeller mellom våre studier som bør tas i betraktning når man sammenligner resultatene.
NLCS utnyttet Weisenberger panel av gener for å definere CIMP (
CACNA1G, IGF2, NEUROG1, RUNX3 Hotell og
SOCS1
), mens studiet av Slattery
et al.
, benyttet den klassiske panelet (
MINT1, MINT2, MINT31, p16 og hMLH1
) samt forskjellige cut-offs å definere CIMP i tumorer [22], [23]. «Rett» definisjon av CIMP er fortsatt et svært omdiskutert tema, som er den ideelle genet panel og den riktige metoden for metylering påvisning [12], [24]. Mens Weisenberger panel har blitt validert, kan ulike markører for metylering være mer eller mindre informativ med hensyn til å studere forskjellige eksponeringer. Forekomsten av CIMP i NLCS befolkningen er høyere enn i studie av Slattery
et al
. (27% vs. 11%) [12]. Imidlertid kan en forskjell i primer utførelser og PCR-forhold i det vesentlige å endre sensitivitet og spesifisitet av en spesiell markør for påvisning av CIMP i CRC [25]. Derfor er det sannsynlig at forskjeller i prevalens er ikke på grunn av de forskjellige metoder per se, men snarere en forskjell i valg av primere. MSP analyser som er gjennomført i NLCS har en høy detekteringssignal, og senere, har en høyere forekomst av CIMP blitt observert. I denne studien, forsøkte vi å avklare våre observasjoner ved å konstruere en metylering indeks med forskjellige loddepunkter som inkluderte sju gener som vanligvis metylert i CRC.
I denne studien vi vurderte tykktarm og endetarm svulster sammen for å øke statistisk styrke. En sensitivitetsanalyse viser at dette ikke skjevhet våre funn (data ikke vist). Videre foreslår vi at ideen om å kombinere under lokaliseringer av svulster kan være akseptabelt når man studerer molekylær endepunkter, fordi dette kan bidra til å forklare forskjeller i etiologi henhold til sub-lokalisering.
Vi observerte at BMI var assosiert med både tumor CIMP og ikke-CIMP svulster; Men etter justering for klær størrelse, disse assosiasjonene forsvant. Dette er i motsetning til kasus-kohort data tyder på at BMI er forbundet bare med CIMP negative colontumorer og ikke med endetarmssvulster [11], [12]. I vår studie, synes bukse /skjørt størrelse til å være en sterk, uavhengig prediktor for begge kreft subtyper, selv etter justering for BMI. Dette er logisk, fordi livvidde, en indikator på sentral fedme, er en sterkere prediktor for CRC enn BMI [1], [26]. Når vi betraktet foreninger ifølge en metylering indeks, gjorde vi ikke observere klare assosiasjoner med hensyn til BMI og grad av arrangøren metylering, men vi observert at bukse /skjørt størrelse ble forbundet med den høyeste grad av metylering. At vi observerte sammenhenger mellom bukse /skjørt størrelse og begge CIMP og ikke-CIMP svulster tyder på at sentral fedme kan påvirke CRC risiko gjennom både en metylering og en ikke-metylering veien.
Selv om svært få studier har vurdert sammenhengen mellom BMI og CIMP, har et antall som anses endepunkter i samme bane som CIMP. Kolorektal kreft har forskjellige molekylære undergrupper, som utvikler seg gjennom ulike veier [16]. Veien til en taggete adenokarsinom ser ut til å ta en av to store ruter: den tradisjonelle taggete sti eller fastsittende taggete vei [27]. Den fastsittende taggete veien er preget av en høy grad av CIMP,
BRAF
V600E mutasjoner, og til slutt utvikler seg til mikro ustabilitet (MSI) [27]. MSI kan tjene som en markør for CIMP eller andre molekylære hendelser i CRC [28], derfor kan det være lærerikt å vurdere funnene i denne studien i sammenheng med at forskning. To case-control studier har rapportert at BMI vises forbundet med mikro stabile (MSS) svulster, og mindre med MSI svulster [29], [30]. Verken studie rapporterte foreninger ifølge livvidde. I en nylig samlet analyse av NLCS og data fra Melbourne Collaborative Cohort Study, observerte vi lignende foreninger, selv om test for heterogenitet mellom tumor subtyper var ikke statistisk signifikant (Hughes
et al.
, Innsendt).
Det er bevis som tyder på at tidlige livs eksponeringer påvirke epigenetiske mekanismer forbundet med risiko voksen sykdom [31], [32]. Derfor har vi også undersøkt assosiasjoner mellom BMI på 20 år, BMI endring, høyde og CIMP status. Høyde er en markør for en aggregert foster og barndom erfaring, og kan betraktes som en proxy tiltak for viktige ernæringsmessige eksponeringer, som påvirker flere hormonelle og metabolske akser [17]. I NLCS, har vi observert at barndom og ungdom energi begrensning er assosiert med en redusert risiko for CRC senere i livet [33], [34], som er støttet av andre befolkningsbaserte studier [35] – [37]. Vi har også nylig rapportert at eksponering for alvorlig energibruken i barne- og ungdomsårene var assosiert med en lav risiko for å utvikle en CIMP svulst [32]. Videre samlede data tyder på at høyere individer har større risiko for å utvikle en MSI tumor (Hughes
et al
. Innsendt). I henhold til den foreliggende undersøkelse, er høyden ikke differensielt assosiert med risiko for tumorer, men vi observere betydelig heterogenitet med hensyn til BMI ved alder 20 og tumor subtyper. Til sammen våre funn tyder på at kroppsstørrelse kan forskjellig påvirke CIMP status i ulike perioder av livet, potensielt påvirker senere CRC risiko. Sammenhengen mellom BMI på 20 år og CIMP svulster var sterkere enn med ikke-CIMP svulster, noe som er i tråd med tidligere funn for alvorlig energibruken i barndommen og ungdomsårene. Selv om vår bootstrapping metoden er ganske konservativ, gjorde vi ikke observere en klar sammenheng med hensyn til BMI i en alder av 20 og metylering indeksen og derfor kan vi ikke utelukke at differensial tilknytning CIMP status er en sjanse funn. Hypotesen om at tidspunktet for eksponering kan påvirke epigenetiske mekanismer krever videre undersøkelser.
At vi ikke observere noen klare sammenhenger mellom BMI endring og risiko for svulster var overraskende. Dette kan tyde på at metabolske endringer i fett kan være viktigere for moduler risiko over tid, snarere enn BMI. Alternativt vurderer menn og kvinner sammen kan ha dempet disse observasjonene. Campbell
et al.
Rapporterer at voksen vektøkning var assosiert med CRC hos menn, men ikke hos kvinner, og bare med hensyn til personer som fikk mer enn 21 kg siden 20 år [29]. Til slutt, bare vurderer to tidspunkter kan ikke være en indikasjon på sann BMI endring.
Våre funn med hensyn til fysisk aktivitet støtte de av Slattery
et al.
[11], og tyder på at høy nivåer av daglig mosjon er assosiert med en redusert risiko for både CIMP og ikke-CIMP svulster. Observasjoner i forhold til vår metylering indeksen tyder på at fysisk aktivitet kan være mer beskyttende av svulster med økende metylering, men mer forskning er nødvendig før sikre konklusjoner kan trekkes.
Foreløpig tyder på at molekylære markører kan brukes til å klassifisere kolorektal kreft i ulike undergrupper, som har implikasjoner for både etiologi og forebygging [28]. Færre tumorer oppstår fra den fastsittende taggete vei i forhold til den tradisjonelle adenom veien [27], [38]. Som overvekt og fedme er så sterke risikofaktorer for CRC, er det en mulighet for at disse forholdene kan forskjellig innflytelse risiko gjennom stier og molekylære mekanismer enn hva vi undersøkt her. Mer forskning er nødvendig for å avklare sammenhengen mellom indikatorer for energibalansen og epigenetiske mekanismer som fører til CRC; fortrinnsvis i en prospektiv kohort setting, med mange tilfeller [39]. Videre, som innen molekylær patologisk epidemiologi [40] fortsetter å utvikle seg, standardisere metoder og definisjoner av molekylære endepunkt skal rettes. Dette blir særlig viktig som flere muligheter for å samle data oppstår.
I konklusjonen, våre funn tyder på at tiltak av antropometri reflekterer en stor kroppsstørrelse øker risikoen for både CIMP og ikke-CIMP svulster, og at kroppen fett i ung alder kan forskjellig innflytelse risiko. Fysisk aktivitet ser ut til å redusere risikoen for CRC uavhengig av disse molekylære undergrupper. Våre observasjoner gjenta viktigheten av en sunn kroppsvekt i forhold til generell CRC forebygging.
Materialer og metoder
Studie populasjoner og design
NLCS er en prospektiv kohortstudie som ble startet i 1986 for å undersøke sammenhengen mellom kosthold og utvikling av kreft. Det inkluderer 58,279 menn og 62,573 kvinner i alderen 55-69 år ved studiestart som fullførte en selvadministrert mat frekvens spørreskjema som involverer 150 matvarer samt spørsmål om kostvaner, livsstil, helse og demografi. Kommunale registre fra hele Nederland ble brukt til å utgjøre en effektiv prøvetaking ramme. Den NLCS bruker en case – kohorten tilnærming for databehandling og analyse; case personer ble hentet fra hele kullet, og antall årsverk i fare for hele kullet ble estimert fra en under kohort på 5000 menn og kvinner som ble tilfeldig samplet fra hele kohorten ved baseline. Alle under kohort medlemmer som rapporterte utbredt kreft (unntatt hudkreft) ved baseline ble ekskludert fra analysene, forlater 4654. Ytterligere detaljer om NLCS utformingen har blitt beskrevet [41] -. [43]
Incident CRC tilfellene var identifisert av årlige rekord kobling til ni regionale kreftregistre og et nasjonalt patologi database (PALGA) [44]. Fullstendigheten av kreft oppfølging er nesten 100% [45]. Parafin innebygd svulst materiale fra CRC pasienter ble hentet frem, slik det er beskrevet tidligere [46]. I alt ble 734 hendelses CRC pasienter identifisert fra en oppfølgingsperiode på 7,3 år etter opprinnelig plan, med unntak av de første 2 årene av oppfølging, hvorav en PALGA rapport av lesjon samt tilstrekkelig DNA var tilgjengelig [46].
studien protokollen ble godkjent av medisinsk etikk komiteer universitetssykehus Maastricht og TNO Nutrition. På rekruttering, ble deltakerne informert skriftlig om detaljene i studiet og sine mål. I henhold til regelverket på den tiden, ble skriftlig informert samtykke innhentes når deltakerne returnerte utfylt baseline spørreskjemaet. Tumor materialet ble samlet etter godkjennelse av de etiske gjennomgang styrene i Maastricht University, National Kreftregisteret, og PALGA.
Konstatering av risikofaktorer
Antropometriske variabler.
Høyde ( cm), kroppsvekt (kg), og kroppsvekt i en alder av 20 (kg) var selvrapportert på grunnlinjen spørreskjemaet. Fra disse variablene, BMI og BMI i en alder av 20, og BMI endringen ble deretter beregnet. Ved studiestart, ble individer også bedt om å rapportere sine underkroppen (bukse eller skjørt) klær størrelse fra sitt klesmerke (nederlandsk størrelser). Bukse /skjørt størrelse har vist seg å være en tilstrekkelig proxy tiltak for livvidde når forutsi risikoen for kreft i NLCS, og detaljer om hvordan klær størrelse tilsvarer midje målinger hos menn og kvinner i denne nederlandske befolkningen har blitt publisert [47]. BMI, BMI på 20 år, skjørt /buksestørrelse og høyde ble kategorisert i tilnærmet kjønnsspesifikke kvartil. Som i forrige NLCS analyser, ble BMI endring kategorisert som: 0 kg /m
2, 0-4 kg /m
2, 4-8 kg /m
2, og 8 kg /m
2 [48].
fysisk aktivitet.
Når det gjelder fysisk aktivitet og CRC risiko i NLCS befolkningen, synes yrkes fysisk aktivitet for å være viktigere for menn og rekreasjon fysisk aktivitet for kvinner for å forutsi risiko (Simons
et al.
, innsendt). Derfor brukte vi disse to variablene for å skape kjønnsspesifikke kategorier av «lav», «middels» og «høy» fysisk aktivitet.
Administrative fysisk aktivitet ble avledet fra data om deltakernes yrkeshistorie. Ved hjelp av informasjon om type jobb og varighet, energiforbruk og sitter tid ble beregnet for den lengste og siste holdt jobb. Energiforbruket var basert på et rangeringssystem utviklet av Hettinger
et al product: [49] og skiller mellom arbeidet til lav, moderat og høy aktivitet som tilsvarer energiforbruket ved. 8, 8-12 og 12 kJ /min. Menn ble kategorisert inn i kategorien «lav» om sin yrkes fysisk aktivitet var mindre enn 8 kJ /minutt, «middels» hvis de falt i 8-12 kJ /min kategori, og høy hvis deres yrkes fysisk aktivitet var 12 kJ /minutt.
Baseline ikke-yrkes fysisk aktivitet ble beregnet basert på to spørsmål. Den første (åpent) Spørsmålet var «Hvor mange minutter bruker du i gjennomsnitt per dag å gå eller sykle til jobben, for å shoppe eller å ta ut hunden din?» Den rapporterte tidsbruk per dag ble kategorisert i ≤10, 10-30, 30-60 og 60 minutter per dag. Det andre spørsmålet var «Hvor mange timer av din fritid tid bruker du i gjennomsnitt per uke på 1) rekreasjons sykling, turgåing, 2) hage /gjøre strøjobber og 3) sport, gymnastikk? Svare muligheter var aldri, 1 time per uke, 1-2 timer per uke og 2 timer per uke. Tiden brukt på disse aktivitetene og minutter brukt per dag på å gå eller sykle til jobben, for å shoppe eller å ta ut hunden ble summert for å få en samlet mål på baseline ikke-yrkes fysisk aktivitet, med kategorier og lt; 30, 60-90 og 90 minutter per dag. Lav fysisk aktivitet ble definert som 30 minutter /dag, mellom som 30-90 minutter /dag, og høy som 90 minutter /dag
Arrangøren metylering Analyser
CIMP i tumor. vev av CRC tilfeller ble definert av CpG island arrangøren hypermethylation av minst 3 av 5 metylering markører (
CACNA1G, IGF2, NEUROG1, RUNX3 Hotell og
SOCS1
), som foreslått av Weisenberger
et al.
[9] ble bestemt ved bisulfitt modifikasjon av 500 ng genomisk DNA ved å bruke et kommersielt tilgjengelig kit (Zymo Research), og etterfølgende metylering spesifikk PCR (MSP) [50], [51]. Vi valgte å bruke MSP som en metode fordi det er effektivt, spesifikk og ikke krever spesielt utstyr. Det har vist seg at resultatene fra MSP er i samsvar med andre teknologier som for eksempel MethyLight [52]. I tillegg er metylering status for to andre gener,
APC Hotell og
MLH1
, ble bestemt og vi lagt dem til CIMP markører for å skape en metylering indeks over sju gener.
For å lette MSP analyser på DNA hentet fra formalinfiksert, parafininnebygd vev, DNA ble først forsterket med flanke PCR primere som forsterker sulfitt-modifiserte DNA, men ikke fortrinnsvis forsterke denaturert eller unmethylated DNA. Det resulterende fragmentet ble anvendt som en mal for MSP reaksjonen. Alle PCR ble utført med kontroller for unmethylated alleler (DNA fra normale lymfocytter), denaturert alleler [normal lymfocytt DNA behandlet
in vitro
med
Sss
jeg metyltransferase (New England Biolabs, Ipswich, MA )] og en kontroll uten DNA. Ti mikroliter av hver MSP Reaksjonsblandingen ble direkte lastet på nondenaturing 6% polyakrylamidgeler farget med etidiumbromid og visualisert under UV-belysning. MSP analysene var vellykket for 81%, 79%, 79%, 90%, 83%, 93% og 93% av de 734 tilfellene for
CACNA1G, IGF2, NEUROG1, RUNX3, SOCS1
,
MLH1
, og
APC
hhv.
Statistiske analyser
data ble analysert med Stata (versjon 10, Statacorp, College Station, TX, USA). Cox analyse ved hjelp av case-kohorten tilnærming ble brukt for å få hazard ratio (HR) og 95% konfidensintervall (KI) for sammenhengen mellom tiltak av antropometri og fysisk aktivitet og CRC preget av CIMP status. For å bedre statistisk styrke, vurderte vi menn og kvinner sammen. Tester for effekt modifisering av sex var ikke statistisk signifikant. Den proporsjonale farer forutsetningen ble testet ved hjelp av de skalerte Schoenfeld residualene og visuell inspeksjon av fare kurver. For å ta høyde for den ekstra variansen introdusert av prøvetaking subcohort fra hele kullet, ble standardfeil beregnes ved hjelp av robust alternativ. Statistisk signifikans ble testet på 0,05 nivå.
For alle antropometriske variabler i spørsmålet, tre modeller ble vurdert. Den første ble justert bare til alder og kjønn. Den andre ble i tillegg justert for variabler som er identifisert som å være assosiert med både CRC og energibalanse fra forrige litteratur. Disse inkluderte familiehistorie med CRC (ja /nei), røykestatus (aldri røyker, ex-røyker, nåværende røyker), sosioøkonomisk status (utdanning: barneskole, ungdomsskole, videregående skole, høyere fagskole, eller universitet ), totale energiinntaket (kcal /dag), alkoholinntak (0, 0,1-4, 5-14, 15-29, ≥30 g /dag), fysisk aktivitet (lav, middels, høy som tidligere beskrevet), og forbruk av rødt kjøtt, frukt, grønnsaker og korn (g /dag). Endelig modeller ble gjensidig justert for andre antropometriske variabler. Modeller, inkludert BMI og BMI i en alder av 20 ble gjensidig justert for skjørt /buksestørrelse, ble BMI endring justert for BMI i en alder av 20, ble bukse /skjørt størrelse justert for BMI og høyde ble justert for kroppsvekt.
Vi modellert fysisk aktivitet justert for alder og kjønn, og i tillegg justert for bukse /skjørt størrelse, familiehistorie med CRC (ja /nei), røykestatus (aldri røyker, ex-røyker, nåværende røyker), sosioøkonomisk status (utdanning: barneskole, ungdomsskole, videregående skole, høyere fagskole, eller universitet), totale energiinntaket (kcal /dag), alkoholinntak (0, 0,1-4, 5-14, 15-29, ≥30 g /dag ), klær størrelse, og forbruket av rødt kjøtt, frukt, grønnsaker og fiber (g /dag).
for å vurdere hvordan tiltak av antropometri og fysisk aktivitet var assosiert med graden av arrangøren metylering i CRC svulster brukte vi den nevnte metylering indeksen for å kategorisere sakene inn i en av tre grupper: «0-1 gener metylert», «2-3 gener metylert», eller «4-7 gener metylert». Av de 734 tilfellene 556 hadde tilstrekkelig informasjon til å bli klassifisert i en av de tre kategorier. Modeller, inkludert antropometriske variabler ble justert for alder, kjønn og gjensidig justert for andre antropometriske variabler som tidligere beskrevet, og modellen for fysisk aktivitet ble justert for alder og kjønn.
Tester for heterogenitet ble gjort for å evaluere forskjeller mellom subtyper av svulster (f.eks
CIMP kontra ikke-CIMP
) med konkurrerende risikoer prosedyren i STATA. Men SE for forskjellen på log-hazard ratio fra dette foruts uavhengighet både estimert hazard ratio, noe som ville overvurdere at SE og dermed overvurdere
P
verdier for deres forskjell. Derfor er disse
P
verdier og tilhørende konfidensintervall ble estimert basert på en bootstrapping metode som ble utviklet for case-kohort design, som beskrevet tidligere [53]. Hver bootstrap Analysen var basert på 1000 kjøringer.
Takk
Vi står i gjeld til deltakerne i denne studien og takke kreftregistre (IKA, IKL, IKMN, IKN, IKO, ikr, IKST , IKW, IKZ, og VIKC) og Nederland Nationwide Registeret patologi (PALGA). Vi takker også S van de Crommert og J Nelissen for deres hjelp med dataregistrering og data management; En Volovics og A Kester for statistisk rådgivning; L Schouten, C de Zwart, M Moll, W van Dijk, M Jansen, og A Pisters for hjelp; og H van Montfort, T van Moergastel, L van den Bosch, og R Schmeitz for programmering assistanse; K Wouters, S Hulsmans, og A Spiertz for laboratorium assistanse.
