Abstract
MTDH plakater (metadherin), en viktig onkogen som er mye overuttrykt i ulike kreftformer, er en potensiell biomarkør for svulst malignitet. Varianter i
MTDH
har vært assosiert med mottakelighet for brystkreft. Men ingen studier vurdere
MTDH
genet polymorfismer og deres potensial forhold til eggstokkreft mottakelighet er rapportert. Derfor undersøkte vi sammenslutning av
MTDH plakater (-470G A) polymorfisme med eggstokkreft utvikling i 145 eggstokkreft pasienter og 254 matchede kontrollpersoner, ved hjelp av sekvensanalyse. Vi fant at
MTDH plakater (-470G A) polymorfisme ble statistisk korrelert med kreftrisiko eggstokkene (under additiv genetisk modell, GG vs. GA vs AA, P = 0,042). Sammenlignet med genotyper som inneholder G allel (GG og GA), kan AA genotype redusere risikoen for kreft i eggstokkene (P = 0,0198, OR = 0,33, 95% CI [0.12~0.78]). Sammenlignet med G-allelet, A-allelet er beskyttende mot eggstokkreft risiko (P = 0,01756, OR = 0,66, 95% CI [0.46~0.93]). Videre ble det observert en statistisk signifikant sammenheng mellom GG og GA + AA genotyper og klinisk stadium (P = 0,038). Disse dataene tyder på at
MTDH plakater (-470G A) kan være et nyttig molekylær markør for å vurdere eggstokkreft risiko og for å forutsi eggstokkreft pasient prognose
Citation. Yuan C, Li X, Yan S, Yang Q, Liu X, Kong B (2012)
MTDH plakater (-470G A) Polymorfisme er assosiert med eggstokkreft følsomhet. PLoS ONE 7 (12): e51561. doi: 10,1371 /journal.pone.0051561
Redaktør: Goli Samimi, Kinghorn Cancer Centre, Garvan Institute of Medical Research, Australia
mottatt: 5 oktober 2012; Godkjent: 02.11.2012; Publisert: 11.12.2012
Copyright: © 2012 Yuan et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av Natural Science Foundation National of China (81001166, 30872738), Foundation i Shandong-provinsen (ZR2010HQ050), Foundation of Shandong Public Health Department (2009Q2012), Kina Postdoktor Science Foundation (201104636, 20100471551), Uavhengig Innovation Foundation of Natural Science Shandong University (2012TS142). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Eggstokkreft har den høyeste dødeligheten av alle kvinnelige forplantningsorganene malignitet, og i 2008 var det anslagsvis 225,500 nye tilfeller og 140,200 dødsfall på verdensbasis [1]. Som tilfellet er for mange kreftformer, er eggstokkreft en multifaktoriell sykdom, og hormonelle faktorer, sårheling og betennelse kan alle spille en rolle i sin utvikling. Samspillet mellom miljø og genetiske faktorer spiller også viktige roller [2]. Mange studier har undersøkt den genetiske grunnlaget for eggstokkreft mottakelighet. For eksempel
BRCA1
,
BRCA2
,
MLH1
,
MSH2
,
RAD51C
,
RAD51D
RB1
,
SMAD6
,
CASP8
, og
LIN28B
har alle vært innblandet i eggstokkreft [3], [4], [5 ], [6], [7], [8], [9], [10]. Nylig har genome-wide assosiasjonsstudier (GWAS) funnet sterke sammenhenger mellom eggstokkreft og flere vanlige resistens alleler i fire loci [11], [12], [13]. Braem et al. anmeldt 147 kandidat gener, og de 3 GWAS studier publisert fra 1990 til oktober 2010 identifisert ca 1100 genetiske varianter i mer enn 200 kandidat gener og 20 intergeniske regioner [8]. Imidlertid er de kjente sammenhenger mellom genetiske varianter og eggstokkreft begrenset, og flere studier må utføres for å belyse kausale genetiske varianter og lette identifiseringen av høyrisiko undergrupper innenfor den generelle befolkning [5].
MTDH
, også kjent som astrocyte forhøyet gen-en (
AEG-en
) og
Lyric
, ble opprinnelig identifisert som en HIV-induserbar genet i primære humane føtale astrocytter [14] .
MTDH
ligger ved 8q22, består av 12 eksoner og 11 introner og koder for et 582 aminosyreprotein med en beregnet molekylvekt på 64 kDa.
MTDH
over-uttrykk har blitt oppdaget i esophageal plateepitelkarsinom [15], magekreft [16], nyrekreft [17], prostata kreft [18], ikke-småcellet lungekreft [19], leverkreft [20], brystkreft [21] – [22], og neuroblastom [23], sammenlignet med normale celler og de samsvarende ikke-neoplastiske regioner [24]. Nivået på
MTDH
over-uttrykk er signifikant korrelert med tumordannelse, invasjon, migrasjon, progresjon, angiogenese [25], EMT (epitelial mesenchymale overgang), chemoresistance og radioresistance i ulike typer kreft [17], [26 ], [27], [28], [29], [30], [31]. MTDH overe-Xpression er korrelert med peritoneal formidling, lymfeknutemetastase, International Federation of gynekologi og fødselshjelp stadium, histologisk grad, tilstedeværelse av resttumor og tumorresidiv i eggstokkreft [32], [33]. Høy
MTDH
uttrykk var assosiert med progresjon og prognose for eggstokkreft [32], [33].
Vår gruppe har også tidligere funnet at varianter i
MTDH
er signifikant assosiert med brystcancer [34]. Imidlertid har foreningen av
MTDH
varianter med eggstokkreft mottakelighet ikke undersøkt
Resultater
Forholdet mellom
MTDH plakater (-470G A) Polymorfisme og eggstokkreft Risk
deltakerne i saken og kontrollgruppene var alle fra fastlands-Kina. Det var ingen signifikante kliniske forskjeller (dvs. kroppsmasseindeks [BMI], median alder, menstruasjonshistorie eller andre relaterte parametre) mellom de 2 gruppene.
Hardy-Weinberg likevekt viste at chi-kvadrat verdier av Hvis gruppen og kontrollgruppen var henholdsvis 0,1 og 3,94, henholdsvis; begge var p 0,05. Som vist i tabell 1,
MTDH plakater (-470G A) genotyper og allel distribusjoner hadde en statistisk signifikant forskjell mellom de konkrete og kontrollgrupper. Vi observerte en statistisk signifikant sammenheng med eggstokkreft risiko (additiv genetisk modell, GG vs. GA vs AA, P = 0,042). Ved hjelp av den dominerende genetisk modell (GG + GA vs AA), ble det observert en statistisk signifikant forskjell i eggstokkkreftrisiko (P = 0,0198, OR = 0,33, 95% CI [0,12 ~0. 78]). Disse dataene viste at homozygot AA genotype kan være beskyttende mot eggstokkreft utvikling og kan redusere risikoen for eggstokkreft. A-allelet ser ut til å være beskyttende (P = 0. 01756, OR = 0,66, 95% CI [0.46~0.93]) mot eggstokkreft. Sekvense kromatogrammene fra tilfeldig valgte tilfeller brukes for å illustrere varianter av
A-C, de sekvense kromatogram resultatene av genotype GG, GA og AA henholdsvis
MTDH plakater (Fig. 1).. Prøvene ble valgt tilfeldig
Forholdet mellom
MTDH plakater (-470G A). Polymorphism og Clinicopathological variabler
Tabell 2 viser sammenslutning av GG og GA + AA genotyper med clinicopathological egenskaper, herunder alder ved diagnose, grad av tumor differensiering, klinisk stadium, lymfeknutemetastase, CA125 uttrykk, tumorstørrelse og tumorhistologi. En statistisk signifikant sammenheng med klinisk stadium ble funnet (p = 0,038). Det er ingen forhold mellom polymorfisme og alder ved diagnose, var graden av tumor differensiering, lymfeknutemetastase, CA125 uttrykk, tumorstørrelse eller tumorhistologi funnet. Dermed blir
MTDH plakater (-470G A). Polymorfi kan være en indikator på klinisk stadium i eggstokkreft
Forholdet mellom
MTDH product: (- 470g A) polymorfisme og MTDH proteinnivåer
Vi videre studert mulig sammenheng mellom
MTDH plakater (-470G A) polymorfisme og MTDH protein uttrykk nivå in vivo. Som vist på fig. 2, nivåene av MTDH protein i 15 eggstokkreft vev var signifikant høyere enn i normale vev 17 (P 0,01). Som vist på fig. 2B og 2C, den MTDH protein uttrykk var høyere hos pasienter med GG eller GA genotyper enn i de med AA genotype, men disse forskjellene var ikke signifikante (P 0,05). Disse funnene tyder på at SNP -470G . En kan ikke ha betydelig innvirkning på uttrykk for
MTDH
genet
A, Relativ nivå på MTDH protein uttrykk i eggstokkreft vev i forhold til normal eggstokk vev . B, Relativ nivå av MTDH protein uttrykk i eggstokkreft vev av pasienter med ulike -470G A genotyper. C, relativ nivå av MTDH protein uttrykk i normale vev av personer med forskjellig -470G A genotyper. En sirkel representerer gjennomsnittet av tre uavhengige målinger fra en pasient. Fordelingen av de tre genotyper var tilfeldig mellom gruppene. N representerer antall sampler respektive gruppe. Barer representerer standardavvik. Student t test ble brukt for å vurdere forskjellene i uttrykket nivåer av ulike konstruksjoner.
Diskusjoner
MTDH
spiller en avgjørende rolle i tumorbiologi, og det er involvert i en rekke tumor biologiske atferd. Vår gruppe var den første til å oppdage en signifikant sammenheng mellom
MTDH Hotell og svulst mottakelighet: det vil si at to
MTDH
varianter er forbundet med brystkreft [34]. I denne studien har vi ytterligere analysert ulike SNPs i
MTDH Hotell og fant en annen SNP (rs16896059, -470G A) med statistisk signifikante forskjeller mellom eggstokkreft case og kontrollgrupper. Videre rs16896059 var statistisk signifikant assosiert med klinisk stadium av tumoren. Så langt vi kjenner til, er dette den første varianten foreningen studie av
MTDH
SNPs og kreftrisiko eggstokkreft. Vi forventer at
MTDH
vil være en nyttig molekylær markør for å vurdere eggstokkreft risiko og for å forutsi eggstokkreft pasient prognose. Imidlertid bør dette funnet bekreftes i en større prøve.
SNP rs16896059 ligger i formidler av
MTDH Kjøpe og dermed polymorfismer ikke endre rekkefølge eller struktur av proteinet. Vi undersøkte protein ekspresjonsnivået av MTDH ved western blotting. Som tidligere rapportert, uttrykket nivåer av MTDH i eggstokkreft vev var betydelig høyere enn nivået i tilstøtende normalt vev (P 0,0001) [32], [33]. Men vi fant ikke noen statistisk signifikant effekt av -470G En SNP på protein uttrykk for
MTDH
genet i eggstokkreft vev eller normale vev. Dermed ingen påvirkning av SNP på
MTDH
uttrykk var tydelig. På grunn av den -470G En SNP ble plassert i promoter-regionen, og så det kan også påvirke promoter activeity. Derfor foreningen av
MTDH plakater (-470G A) polymorfisme med
MTDH
promoter activeity og dens effekt på kreft i eggstokkene utvikling bør studeres in vitro til å undersøke de molekylære mekanismene som er involvert.
som antydet ovenfor, de fleste pasienter som deltok i vår studie var å leve i Shandong-provinsen i Kina. På grunn av den generelle genetiske homogenitet denne etniske befolkningen, spekulerer vi at disse funnene vil være konsekvent i større utvalgsstørrelser over hele Kina. Men forholdet mellom
MTDH
polymorfisme og kreftrisiko eggstokkreft krever ytterligere undersøkelser i ulike etniske populasjoner [34].
I konklusjonen, A allel av
MTDH
SNP rs16896059 (-470G A) er beskyttende mot eggstokkreft, og homozygot AA genotype kan være en beskyttende genotype. Den polymorfisme er statistisk signifikant assosiert med klinisk stadium.
Materialer og metoder
Pasienter og Prøver
Studiet ble godkjent av etisk komité Shandong University. Alle deltakerne ga skriftlig informert samtykke til å delta i denne studien. 145 pasienter (gjennomsnittsalder på 51,8 ± 13,1 år) deltok i studien, diagnostisert med eggstokkreft i Qilu Hospital of Shandong University mellom september 2008 og juli 2011. Kliniske data informasjon, inkludert alder ved diagnose, grad av differensiering, klinisk stadium, positiv lymfeknute, CA125, størrelsen på svulsten og tumorhistologi ble hentet fra pasientenes journaler. 254 alderstilpassede friske kvinner (gjennomsnittsalder på 49,2 ± 12,8 år) ble rekruttert som kontroll. De fleste deltakerne var han-kinesere bosatt i Shandong-provinsen i Kina. DNA fra perifere blodceller s ble ekstrahert med TIANamp Genomisk DNA Kit (Tiangen, Beijing, Kina), med instruksjoner. DNA renhet og konsentrasjon ble målt ved ultrafiolett spektrofotometer (GE Healthcare, USA). DNA-prøver ble konvensjonelt lagret ved -80 ° C som tidligere beskrevet [34], [35]
Genotyping Analyse av
MTDH plakater (-470G A).
genotyping av SNP rs16896059 (-470G A) polymorfisme ble bestemt ved hjelp av PCR og sekvenseringsmetode. Sekvensen av
MTDH
genet ble hentet fra NCBI (Gene ID: 92140, nukleotid: AC_000140.1, GI: 157734173). Primere ble utformet med Primer Premier 5 i henhold til sekvensen av rs16896059 som følger: forover primer 5′-CTGGCAACTGGTAGGCACGC -3 «og revers primer 5′-GAGGGACTCGCAGGATGACG -3». PCR produksjoner størrelse var 893 bp. PCR-amplifikasjon ble utført i 50 pl reaksjonssystemer inneholdende 1 pl genomisk DNA (100 ng /ul), 4 pl 2,5 mM dNTP, 10 ul buffer, 2 ul av hver primer (0,4 uM) og 0,5 U prime HS DNA-polymerase (TAKARA Dalian, Kina). PCR-forsterkningsBetingelsene var: 94 ° C i 5 minutter, 35 sykluser ved 98 ° C i 10 sekunder, 55 ° C i 15 sekunder og 72 ° C i 2 min, og en avsluttende forlengelsestrinn på 72 ° C i 5 minutter . Alle PCR produksjoner ble sekvensert ved BioSune Bioteknologi Co, Ltd (Shanghai, Kina), og sekvensdataene ble analysert med Chromas 2.31 og MegAlign 7.0.
Western Blot
Western blot analyse ble utført som tidligere beskrevet [31], [36], Tissue ble løst opp i RIPA-buffer (1 x PBS, 0,1% natriumdodecylsulfat, 1% NP40, 5 mM EDTA, 1 mM natriumortovanadat, 0,5% natriumdeoksycholat og proteasehemmere ). 40 ug av proteiner ble underkastet elektroforese på 10% SDS-PAGE og overført til PVDF (Millipore) ved anvendelse av en mini Trans-Blot Cell (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). Immunoblotting ble utført ved hjelp av en primær antistoff
MTDH
(ab45338, 1:500, Abcam, Cambridge, MA, USA) og β-aktin (1:5,000, Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA ). De sekundære antistoffer (1:5,000, KPL, Gaithersburg, MD, USA) ble merket med HRP (pepperrot peroksidase). Membraner blir visualisert ved hjelp av en ECL-sett (Merck, Darmstadt, Tyskland). Laste kontrollen var β-aktin.
Statistical Analysis
De statistiske data ble analysert som tidligere beskrevet [34]. Hardy-Weinberg likevekt testen ble utført d ved hjelp av en web-basert statistisk verktøy OEGE (https://www.oege.org/software/hwe-mr-calc.shtml). Genotypen og allel distribusjoner i eggstokkreft grupper og kontrollgrupper ble analysert ved hjelp av chi-squared tester, og Fishers eksakte test ble brukt da en celletall var mindre enn fem. Risikoen for kreft i eggstokkene utvikling ble estimert som en odds ratio (OR) med 95% konfidensintervall (CI) ved hjelp av en ubetinget logistisk regresjonsanalyse. Alle statistiske tester var tosidig med et signifikansnivå på p≤0.05. De statistiske data ble analysert med SPSS 17.0 (SPSS, Chicago, Illinois, USA).
Takk
Vi setter pris på Ning Yang, Xiao Guan for innsamling av data for denne studien.
