Abstract
En av de viktigste målene for oppfølging etter kurativ reseksjon av tykktarmskreft er tidlig oppdagelse og behandling av tumor tilbakefall. Vi har tidligere demonstrert redusert preoperative løselig CD26 (sCD26) nivåer i serum fra pasienter med kolorektal kreft. Vi har utvidet nå studien å undersøke om sCD26 nivåer i postoperativ serum tjene som markør for tilbakefall av sykdommen under overvåking. Løselig sCD26 ble målt i pre- og postoperative serumprøver av 43 pasienter med primær kolorektal kreft. Karsinoembryonisk antigen, karbohydrat antigen 19,9 og 72,4-nivåer ble også målt under overvåking. Den gjennomsnittlige oppfølgingsperioden var 41,8 ± 20,8 måneder. sCD26 nivåer under oppfølging viste veldefinerte mønstre hos pasienter uten sykdom (n = 28), og hos pasienter med tumor utholdenhet (n = 2), lokalt residiv (n = 3) eller fjernmetastaser (n = 10). Sykdomsfrie pasientene viste stabile nivåer mellom 460-850 ng /ml under oppfølging, mens høye (over 850 ng /ml) og ustabile sCD26 nivåene ble funnet før tilbakefall ble diagnostisert. De gjennomsnittlige maksimum /minimum sCD26 forholdstall under overvåking var 1,52, 2,12 og 2,63 for pasienter uten tilbakefall, lokalt residiv og metastaser, henholdsvis (
p
= 0,005). Fra cut-off hentet fra en mottaker operatør egenskaper (ROC) kurve bygget med maksimal /minimums sCD26 forholdstall og de øvre og nedre cut-offs av sCD26, var vi i stand til å diskriminere pasienter med og uten tilbakevendende sykdom. Vi foreslår at måling av serum sCD26 under oppfølging av pasienter diagnostisert med tykktarmskreft kan være verdifulle for tidlig deteksjon av lokal og fjernmetastaser. En stor, randomisert, prospektiv studie bør gjennomføres for å bekrefte våre funn
Citation:. De Chiara L, Rodríguez-Piñeiro AM, Cordero OJ, Vázquez-Tunas L, Ayude D, Rodríguez-Berrocal FJ, et al . (2014) Postoperativ serumnivåer av sCD26 for overvåkning i pasienter med kolorektal kreft. PLoS ONE ni (9): e107470. doi: 10,1371 /journal.pone.0107470
Redaktør: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, Japan
mottatt: May 16, 2014; Godkjent: 13 august 2014; Publisert: 11.09.2014
Copyright: © 2014 De Chiara et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. Den forfatterne bekrefter at alle data som underbygger funnene er fullt tilgjengelig uten restriksjoner. Alle relevante data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. Dette arbeidet ble delvis støttet av AGRUPACION estrategica INBIOMED (INVESTIGACION en Biomedicina) (2012/273 og CN 2011/024), fra DXPCTSUG Dirección ( Xeral de Promoción Científica e Tecnolóxica gjøre Sistema Universitario de Galicia) og FEDER (Fondo Europeo de Desarrollo Regional) finansiering. LD er støttet av «Fundación Científica de la Asociación Española contra el cancer» (GCB13131592CAST). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
på tidspunktet for diagnose, om lag 75% av kolorektal kreft (CRC) pasienter har svulst begrenset til en del av tarmen eller til regionale lymfeknuter, og kan bli referert til kurativ reseksjon. Dessverre, 30-50% av disse pasientene utvikler tilbakefall, 90% i løpet av de første 5 år etter behandling [1], [2].
Et av målene med oppfølging etter kurativ reseksjon i CRC pasienter er å forbedre resultatet ved tidlig oppdagelse og behandling av tilbakefall. Dermed postoperativ overvåking må identifisere asymptomatiske tilbakefall for tidlig deteksjon av lokalt vedvarende svulster eller metastaser, slik at ytterligere kurativ behandling kan igangsettes og overlevelse forbedret. Derfor overvåkingsstrategier krever effektivt middel for å identifisere gjenværende eller tilbakevendende sykdom. Generelt meta-analyser og vurderinger er enige om at en mer intensiv oppfølging bidrar til en total overlevelse nytte [1] – [8]
Mange ulike metoder har blitt foreslått for oppfølging av CRC pasienter. , som kan deles inn i tre kategorier: laboratorietester, som fastsettelse av carcinoembryonic antigen (CEA) serumnivåer, andre markører som karbohydratantigener (CA), eller leverenzymer; bildetester, som ultralyd, røntgen eller computertomografi; og endoscopies. Sammenlignet med andre tilgjengelige diagnostiske modaliteter, serie CEA-bestemmelse synes å være den mest følsomme for deteksjon av tidlig tilbakevendende sykdom [6] – [8]. Imidlertid er dagens serum markørene brukes for å påvise kreft tilbakefall (CEA, TPS, CA-19.9 og CA-72.4) ikke er meget nøyaktig og, generelt, gi opphav til et betydelig antall falske negativer og positiver [9] – [10 ]. Derfor ytterligere testing er vanligvis nødvendig for å bekrefte tilbakefall, genererer ulempene for pasientene og å heve helsekostnader, fordi noen av teknikkene er dyre og har ikke vist seg å være kostnadseffektive [11].
protease CD26, eller dipeptidylpeptidase IV (DPP-IV), EC 3.4.14.5, er et celleoverflate-assosiert glykoprotein, uttrykt på en rekke celletyper, inkludert melanocytter, epitelceller og lymfocytter [12]. Betydelige nivåer av sin løselig form (sCD26) eksisterer i plasma /serum og andre biologiske væsker [13], [14]. I tidligere studier oppdaget vi at pasienter med primær CRC hadde redusert sCD26 nivåer i
preoperative
serum, og viste sin verdi som diagnostisk og prognostisk markør for CRC [15] og avanserte adenomer [16]. To uavhengige studier bekreftet at sCD26 er blant de beste kandidatene for fremtidige blodbaserte tester for tidlig diagnose, alene eller i kombinasjon med fecal immunkjemiske test (FIT) [17], [18].
Vi hadde notert i vårt tidligere arbeid som den diagnostiske verdien av sCD26 var verre for Dukes «stadium D pasienter, viser svært høye nivåer i enkelte individer [15]. Her utviklet vi en pilotstudie for å undersøke om sCD26 nivå målt under oppfølging av CRC pasienter (
postoperativ
sera) er nyttig som markør for tilbakefall eller regresjon av sykdommen i løpet av kreft overvåking.
Materialer og metoder
Befolkning
Førti-tre pasienter med primær CRC ble undersøkt, inkludert 28 menn (65,1%) og 15 kvinner (34,9%), med en gjennomsnittsalder på 66,4 ± 10,4 år (median = 66) (tabell S1). Førti-en pasienter (95,3%) ble behandlet av kurativ reseksjon (fullstendig fjerning av svulster
en bloc
med en del av normal tarm, mesenteric og regionale lymfeknuter), og 2 (4,7%) gjennom palliativ kirurgi. Ifølge Dukes «stadium, ble 16,3% av svulstene klassifisert som A, 46,5% som B, 25,6% som C, og 11,6% som D. Når det gjelder grad av differensiering, ble 83,3% moderat differensiert og 14,3% var dårlig differensiert, mens 2,4% var godt differensiert. Lokaliseringen av de primære svulster var: 4 i cecum (9,3%), en i stigende kolon (2,3%), 7 i lever flexure (16,2%), 2 i milten flexure (4,7%), 2 i synkende kolon (4,7% ), 10 i sigma (23,3%), 5 i endetarmen-sigma union (11,6%), 10 i endetarmen (23,3%), og synkrone tumorer i colon ascendens og cecum (2,3%), og i tverrgående kolon og cecum ( 2,3%).
Alle pasientene ble overvåket på Complejo hospitalario Universitario de Vigo (Spania). Studien fulgte de kliniske-etisk praksis av den spanske regjeringen og Helsinki-deklarasjonen, og ble godkjent av den galiciske Etisk Komité for klinisk forskning. Skriftlig informert samtykke ble innhentet og anonymitet garantert. Den kliniske informasjonen som samles inkludert Dukes «stadium, primær tumorlokalisering, type reseksjon, kreft progresjon og cellegiftbehandling.
Standarden oppfølging prosedyre besto på en legeundersøkelse hver 4. måned i løpet av det første året, og hver 6 måneder etter det. Ifølge onkolog kriterier, pasienter fikk kjemoterapi bestående av 5-fluorouracil, og i noen tilfeller irinotecan.
Prøvetaking og klargjøring
preoperative blodprøver ble innsamlet fra i nærheten, men ikke alle pasientene. Postoperativ blodprøver ble samlet inn på flere tidspunkter, som ikke var den samme for hver pasient. Blodet ble tillatt å koagulere ved romtemperatur og sentrifugert ved 2000
g
i 15 minutter. Sera ble lagret ved -85 ° C inntil bruk
Fastsettelse av sCD26 nivåer
Konsentrasjonen av sCD26 ble analysert med Human løselig CD26 ELISA Kit. (EBioscience, Wien, Østerrike) i to eksemplarer . Basert på våre tidligere resultater med dette settet [15], [16], [19] sCD26 verdier mellom 460-850 ng /ml ble ansett som normale nivåer. Den nedre grense ble etablert i samsvar med 460 ng /mL cut-off foreslått i vårt utvalg av pasienter under risiko for CRC eller med beslektede kolorektale patologier [16], mens for den øvre grense vi en hypotese en 850 ng /ml cut-off for patologiske individer (med høyere nivåer) fra våre foreløpige resultater med CRC metastatiske pasienter og tumor-reseksjon pasienter (anmeldt i [20]).
Bestemmelse av CEA, CA-19.9 og CA-72,4 nivåer
CEA og CA-72,4 ble analysert i serum ved hjelp av electrochemoluminescent immunoassay Roche Elecsys System, og målt med en Modular Analytics E170 analysator (Roche Diagnostics). CA-19.9 ble bestemt ved hjelp av TRACE BRAHMS CA 19-9 KYPTOR immunoassay (Thermo Scientific) og målt i en Kryptor analysator (CIS bio international). Normale verdier var mindre enn 5 ng /ml for CEA, 7 U /ml for CA-72,4, og 40 U /ml for CA-19.9 [7] – [10]
Analyse av data.
Alle målinger inkludert var posterior til 2 måneder etter operasjonen for å tillate normalisering av markør. Statistiske analyser ble utført med SPSS pakken (v.19.0); Testene var tosidig;
p
-verdier 0,05 ble betraktet som signifikant. Chi-kvadrat eller Fischers eksakte tester ble utført med krysstabeller. Analysen av mer enn to uavhengige prøver ble gjort med Kruskal-Wallis-test. Den maksimum /minimum sCD26 konsentrasjonsforholdet ble beregnet for hver pasient for å måle sCD26 titer stabilitet. ROC kurver og områdene under kurven (AUC) ble beregnet med dette forholdet med MedCalc (v.12.7.0). Data fra sCD26, CEA, CA-19.9 og CA-72,4 for alle målingene under overvåking presenteres på Tabell S2.
Resultater
Utviklingen av kohorten under oppfølgingsperioden
Den gjennomsnittlige oppfølgingsperioden for de 43 pasientene var 41,8 ± 20,8 måneder, med en median på 34,1 måneder og en rekke 9.7-79.6 måneder (Tabell S1). De 2 pasienter som ble behandlet med palliativ reseksjon døde i løpet av studien (gjennomsnitt 7,3 ± 3,4 måneder). Når det gjelder pasienter som behandles med kurativ reseksjon, etter oppfølgingsperioden 28 (pasienter 1-28) var sykdomsfri (68,3%, gjennomsnittlig oppfølgings: 44,9 ± 19,5 måneder, Område: 17.3-81.4 måneder), mens lokale residiv ( pasienter 29-31) ble dokumentert i 3 tilfeller (7,3%; gjennomsnittlig oppfølgings: 25,7 ± 3,1 måneder, range: 22.4-28.6 måneder). På den annen side, ble metastaser funnet 10 pasienter (24,4%; gjennomsnittlig oppfølgings: 44,7 ± 22,2 måneder, Område: 15.4-79.6 måneder), klassifisert som 5 lever (pasienter 32-36), 3 lunge (pasienter 37- 39), en peritoneal (pasient 40), og en i jejunum og milt (pasient 41). Alle disse metastaser ble diagnostisert innen 3 år etter operasjonen, med unntak av en levermetastaser diagnostisert 4,3 år etter operasjonen
Kjemoterapi ble gitt til 29 pasienter. 17 fri for sykdom, to med lokalt residiv og 10 med metastaser
svulst markør nivåer i preoperative blodprøver
preoperativ serumprøver var tilgjengelig for 41 pasienter (Tabell S1), 51,2% av de som viste sCD26 nivåer under 460 ng /ml cut-off point (21 saker). De kliniske og epidemiologiske egenskapene til disse pasientene ble analysert i henhold til to grupper basert på normale nivåer er beskrevet i forrige avsnitt: pasienter med positiv (≤460 ng /ml eller 850 ng /ml) og negative (460-850 ng /ml) preoperative sCD26. Det var ingen signifikante forskjeller i kjønn, alder diagnose, Dukes «stadium, histologisk grad, tumor beliggenhet, sykdomsstatus eller
exitus
mellom disse gruppene (tabell 1).
Når det gjelder andre preoperative markører, ble CEA bestemt i 33 pasienter, med 10 tilfeller (30,3%) registrering nivåer over cut-off; CA-19.9 ble analysert i 21 saker, noe som resulterer over cut-off i 3 tilfeller (14,3%); og CA-72,4 dukket endret i 3 av 18 tilfeller (16,7%). De kliniske og epidemiologiske egenskaper ble også undersøkt i henhold til positivitet for hver av disse kliniske markører (data ikke vist), og bare den CA-72.4 og den histologiske grad av tumoren viste signifikante forskjeller (
p = 0,022
).
svulst markør nivåer i postoperative blodprøver
nivåene av sCD26 og de kliniske CRC markører ble evaluert på medisinske undersøkelser deltok hver pasient under overvåking. Maksimum /minimum sCD26 konsentrasjonsforholdet er inkludert i tabell S1. Analyse av disse målingene viste tendenser, som tillot oss å diskriminere fire pasientgrupper:
sykdomsfri pasienter ved utgangen av overvåking
Den generelle tendensen fulgt av sykdomsfrie pasientene var. utvinning av normale nivåer når preoperativ sCD26 var lave og stabile titer over 460 ng /ml, men under 850 ng /ml. Figur 1 viser sCD26 nivåer under oppfølging av en representant pasient (pasient 25). Denne tendens ble observert hos 22 av de 28 sykdomsfrie pasienter (78,6%). Dessuten, viste gruppen stabile titere uten viktige variasjoner, noe som resulterer i en gjennomsnittlig maksimum /minimum sCD26-forhold på 1,52. Figur 1 viser også verdiene av CEA, CA-19.9 og CA-72,4 i oppfølgingen av det representative individ. Alle sykdomsfrie pasienter viste normale CEA-nivåer i serum og preoperativ gjennom overvåking tid. CA-19.9 og CA-72,4 ble ikke målt i 11 av disse pasientene, men tilgjengelige data viste at nivåene også en tendens til å være stabil og under de respektive loddepunkter, med bare ett individ (pasient 25) som viser økt CA-72.4 nivåer.
Svarte piler indikerer begynnelsen og slutten av kjemoterapi sykluser.
Pasienter med tumor utholdenhet behandlet med palliativ kirurgi.
oppfølgingsperioden for de to pasienter ikke overstige 10 måneder på grunn av deres
exitus
. Lave sCD26 nivåene var karakteristisk i denne gruppen, resterende ganske konstant. I figur 2 (pasient 42), den sCD26 nivåer rett steg over 460 ng /ml terskel, men ble redusert igjen til lave verdier i den følgende måling. Maksimum /minimum sCD26 forholdet resulterte i 1,17 for denne pasienten. Selv om den andre pasienten viste også redusert sCD26 nivåer, ble bare én måling gjort posterior til 2 måneder etter operasjonen; derfor maksimal /minimumsforholdet kan ikke beregnes.
De stiplede pilen viser
exitus
.
På den annen side, CEA, CA-19.9 og CA-72,4 målinger var tilgjengelig for en pasient (figur 2). Under oppfølgings denne personen viste økt CEA, mens CA-19.9 og CA-72,4 vist normale verdier.
Pasienter med tilbakevendende svulster.
De 3 pasienter med tilbakevendende svulster hadde et tilbakefall tid 10,7, 25,4 og 26,6 måneder, henholdsvis (pasienter 29-31). Utviklingen av sCD26 nivåene er presentert i figur 3 for et representativt individ (pasient 31). I dette tilfellet, under oppfølging og før gjentakelse ble diagnostisert, pasientene utvinnes normale nivåer (ved lav ved starten). Imidlertid like før gjentakelse ble fastslått, de tre pasientene hadde en vesentlig økning (mer enn 850 ng /ml i 2 av 3 tilfeller), etterfulgt av en eller to på hverandre følgende og akutte synker (ikke nødvendigvis under 460 ng /ml). Derfor ustabilitet i sCD26 nivåer forut utseendet av tilbakefall. I forhold til maksimum /minimum sCD26 forholdet, det økte til 2,12.
oppover pilen representerer diagnostisering av tilbakefall, og den stiplede pil tidspunktet for
exitus
.
Når det gjelder kliniske markører, ble CEA funnet forhøyet i en av de 3 tilfeller, CA-19.9 også i en av tilfellene (figur 3) og CA-72,4 i ingen av pasientene.
pasienter med metastatisk sykdom.
gruppen av pasienter med metastaser viste en annen annen trend. I tilfelle av levermetastaser (figur 4A; pasient 34), uavhengig av den preoperative sCD26 konsentrasjon, i løpet av oppfølgings nivåer nådd eller overskredet allment 850 ng /mL øvre normale grense (i 4 av de 5 pasientene, 80,0%). I den andre pasienten, manglet vi prøver fra to år før metastase diagnosen, men den siste prøven viste en verdi nær denne grensen og den samme trenden til høyere verdier. Derfor maksimum /minimum sCD26 ratio for denne undergruppen tilsvarte 2,17, tilsvarende som for pasienter med lokal svulst tilbakefall.
Svarte piler indikerer begynnelsen og slutten av kjemoterapi sykluser og pil oppover indikerer diagnostisering av metastaser .
i forhold til pasienter med lungemetastaser (figur 4B, tålmodige 39) en viktig økning over 850 ng /ml øvre grense ble oppdaget før metastaser ble diagnostisert, etterfulgt av en nedgang, noe som tyder ustabile sCD26 nivåer. I denne undergruppen maksimum /minimum sCD26 forholdet tilsvarte 2,86, høyere enn de foregående forholdstall. Denne trenden ble også funnet hos pasienter med peritoneal eller jejunum og milt metastaser, med forhøyede sCD26 nivåer under oppfølging, og en maksimal /minimums sCD26 ratio på 1,48 (pasient 40) og 5,34 (pasient 41), henholdsvis.
i sammendraget, den generelle tendensen observert hos pasienter med metastaser var en sCD26 konsentrasjon over den øvre 850 ng /ml cut-off, og en samlet gjennomsnittlig maksimum /minimum sCD26 ratio på 2,63 for gruppen. Å være oppmerksom på, alle disse pasientene hadde kjemoterapi sykluser, som syntes å lave sCD26 nivåer midlertidig.
Oppførselen til de kliniske markører hos pasienter med metastaser er også vist i figur 4A og 4B for representative pasienter. Til tross for diagnostisering av metastaser, CEA, CA-19.9 og CA-72,4 nivåer forble normal og stabil under oppfølging på 5/10, 4/10 og 7/10 pasienter, henholdsvis.
ROC kurve analyse for postoperative serum sCD26
Statistisk signifikante forskjeller ble observert i maksimum /minimum sCD26 forholdet mellom sykdomsfrie pasienter, pasienter med lokalt tilbakefall og de med metastaser (
p
= 0,005). Disse forskjellene ble videre undersøkt ved hjelp av ROC kurven analyse (generert med maksimum /minimum sCD26 prosenter). Kun pasienter behandlet med kurativ kirurgi ble inkludert, klassifisert som sykdomsfri (n = 28) eller med lokal eller fjernmetastaser (n = 13). En AUC av 0,835 (95% KI 0,702 til 0,968;
p
0,0001) (figur 5) ble oppnådd, viser en optimal nøyaktighet for å skille pasienter med tilbakevendende sykdom. 100% sensitivitet ble oppnådd med en maksimum /minimum sCD26-forhold cut-off på 1,43 (46,4% spesifisitet). Spesifisitet kan ytterligere forbedres idet det tas hensyn til at de fleste falske positive pasienter sykdomsfrie ikke overvinne 850 ng /mL cut-off. Imidlertid ble en høyere spesifisitet (92,9%) observert for 1.98 cut-off (61,5% sensitivitet).
Den tilsvarende AUC er gitt i teksten.
Diskusjoner
en rekke studier, systematiske oversikter og metaanalyser, samt den amerikanske og europeiske kreft samfunn, konkluderer med at den beste måten å oppnå tidlig diagnostisering av tilbakefall og forbedre overlevelse er gjennom intensiv overvåking. Imidlertid har konsensus ikke blitt oppnådd om protokollen for intensiv oppfølging (kombinasjon av tester og frekvens) [1] -. [8] Hotell
faktisk, i dag brukes kliniske markører [9], [10 ], inkludert CA-19.9 og CA-72,4, blir verken anbefalt for overvåking etter kurativ reseksjon eller for prognose [5] – [8]. I sine retningslinjer, både EGMT og ASCO grupper anbefaler måling av CEA i CRC pasienter i stadium II eller III hver 2-3 måneder [6] eller hver 3. måned [8] i minst 3 år etter diagnose. Det er imidlertid en kontinuerlig debatt rundt CEA hovedsakelig på grunn av dens mangel på spesifisitet. Enkelte forfattere konkluderte med at en økning i antigenkonsentrasjonen er en dårlig prediktor for lokalt tilbakefall, og selv hos pasienter med levermetastaser en stigende konsentrasjon er en relativ sen fenomen [21], [22]; Derfor bør serum CEA bli forlatt i rutinemessig oppfølging [6]. Våre resultater i denne studien er enig med denne anbefalingen
I våre tidligere studier, ble lavt serum sCD26 nivåer observert i CRC pasienter fra ulike kohorter: a. Case-control kohort [15] og en hovedsakelig symptomatisk kohort som gjennomgikk koloskopi [16]. I den første studien, kan ulike nivåer av preoperative sCD26 være knyttet til økt risiko for å utvikle et tilbakevendende sykdom [15]. I tillegg har vi i tillegg til andre observert at noen metastatisk CRC pasienter viste høye sCD26 konsentrasjoner [16], [20]. I denne pilotstudien har vi målt både preoperative og postoperative sCD26 nivåer for å vurdere sin evne i å forutsi og forutse diagnostisering av en tilbakevendende sykdom enten lokalt eller i et fjerntliggende organ. Som 80% av alle tilbakefall er diagnostisert i løpet av de to første årene etter operasjonen [8], [22], foretok vi en oppfølging i minst denne perioden.
De kliniske og epidemiologiske kjennetegn ved pasientene ( kjønn, alder, Dukes «stadium, differensiering eller lokalisering av svulsten) analysert i henhold til de preoperative sCD26 nivåer utførte ingen sammenheng, bekreftende våre tidligere funn [15]. Selv om fasen D pasienter viste høyere sammenlignet med mindre invasiv tumorstadier, som tidligere observert [15], ingen statistisk signifikante forskjeller ble funnet med sykdomsstatus eller tilstedeværelse /fravær av tilbakefall i forhold til sCD26 positivitet, basert på 460/850 ng /ml cut-off.
i forhold til sCD26 ytelse vurderer preoperative prøver, fant vi en redusert følsomhet for diagnostisering av CRC i denne kohorten (51,2%), sammenlignet med 81,8% observert tidligere [16] eller ved andre, [17], [18]. Forskjellene kan tilskrives studere innstillinger siden i denne kohorten bare pasienter allerede diagnostisert av CRC ble inkludert, mens i den andre studien hovedsakelig symptomatiske personer diagnostisert av ulike kolorektal patologi ble inkludert. Alternativt kan av tekniske grunner knyttet til spesifisiteten av antistoffer anvendt i ELISA for påvisning sCD26 også forklare forskjellene [14]. I forhold til dette, og som omtalt andre steder [20], den sCD26 cut-off ble endret fra 410 i vår første studie [15] til 460 ng /ml [16] brukes her. Dermed er basert på våre tidligere resultater med dette settet [15], [16], [19] sCD26 verdier mellom 460-850 ng /ml ble ansett som normalt. Vi valgte preliminær 850 ng /mL øvre grense for denne undersøkelsen fordi i våre tidligere arbeider sCD26-nivåer ble funnet innenfor dette området i ikke-patologiske individer (oversikt i [20]). Også mengden av DPP-IV /CD26 antigen som finnes i normalt serum er i overensstemmelse med de forventede verdier basert på den spesifikke aktivitet av renset serum DPP-IV [23], og det er vanligvis korrelasjon mellom DPP-IV-aktivitet og sCD26 nivåer i patologisk forhold [21].
Basert på den foreslåtte sCD26 normalområdet hos de postoperative målinger, var vi i stand til å definere forskjellige karakteristiske trender for sykdomsstatus. Disse ble ytterligere bekreftet med en ROC kurve basert på maksimum /minimum sCD26 forhold som måles sCD26 titer stabilitet under overvåking. Denne analysen viste en optimal nøyaktighet for å skille sykdomsfrie pasienter fra de med lokal eller fjern tilbakevendende sykdom. I henhold til ovenstående, i de fleste sykdomsfrie pasienter stabil sCD26 nivåer (460-850 ng /ml, maksimum /minimum-forhold 1,52) ble funnet. Øker over 850 ng /ml ble påvist i 6 sykdomsfrie pasientene (2 tilfeller registrert økning på slutten av overvåkingsperioden og ingen ytterligere informasjon om endringer i sykdomsstatus kunne oppnås, 2 tilfeller ble diagnostisert av plass opptar lesjoner i lever uten tegn til levermetastaser, mens ingen forklaring på høye nivåer ble funnet i de andre 2 tilfeller)
i forhold til pasienter med lokal eller fjernmetastaser, i de fleste tilfellene (10/13. ; 76,92%) sCD26 nivåer gått 850 ng /ml og var ustabil (maksimum /minimum ratio 2,49). Spesielt plutselige økninger over 850 ng /ml fulgt av sammenhengende og akutte reduksjoner kan forutsi tilbakefall minst 2-3 måneder før den kliniske diagnosen i de 3 pasienter med lokalt residiv. Dette ville føre til en tidligere onkologisk behandling og kirurgisk fjerning, med en øket overlevelsesrate [3] – [5].
I tilfelle av fjern tilbakefall, lever og lunge ble de hyppigste organene påvirkes i vår kohort , i samsvar med 35-55% av levermetastaser og 10% av lungemetastase rapportert for CRC pasienter [24] – [25]. Levermetastaser ved første diagnosen ble påvist hos 3 pasienter og under oppfølging hos 2 pasienter. I en av de sistnevnte, høye sCD26 konsentrasjoner (nådde 3,200 ng /ml) ble observert fra 2 måneder etter kirurgi og under all oppfølging, noe som indikerer på et svært tidlig stadium (mer enn 49 måneder fremover) mistanke om metastaser. Tvert imot, i den andre pasienten, nivåer under 460 ng /ml cut-off ble funnet 11 måneder før bekreftelse av metastasering, også indikerer tilstedeværelse av tilbakefall. I to av pasienter med lungemetastaser, økninger i sCD26 over 850 ng /ml ble registrert 3,8 og 29,1 måneder, henholdsvis før diagnosen metastaser; i det andre tilfellet, forhøyede nivåer (2,900 ng /ml) sammenfaller med diagnosen. Igjen, vår test ville ha forventet diagnostisering av metastaser.
Våre funn tyder på at periodisk måling av serum sCD26 nivåer hver 3. måned kan tjene som guide for onkologisk beslutninger, varsling om utseendet av tilbakefall basert på maksimum /minimum sCD26 forhold og sCD26 nivåer under overvåking. Oppførselen til sCD26 i henhold til sykdomsstatus er oppsummert på fig S1. Likevel bør disse resultatene betraktes som foreløpige, og bør utvides til et større datasett i videre prospektive og retrospektive studier. Likevel, kan gjennomføringen av denne testen for den kliniske praksis være mulig ettersom et blod ekstraksjon utføres med jevne mellomrom i løpet av oppfølgingen av CRC pasienter og testen består av et typisk Elisa-analyse.
Med hensyn til den biologiske signifikans av våre resultater, har vi anmeldt det, patofysiologiske, lave sCD26 nivåer forekomme samtidig med nedsatt immunstatus, inkludert noen hematologiske og solide maligniteter, mens økte nivåer oppstå i inflammatoriske og smittsomme sykdommer, andre hematologiske svulster, og leversykdommer som for eksempel leverkreft [14]. Den oppløselige sCD26 funnet i serum antagelig skur ved proteolytisk spalting av den transmembrane CD26 [14], [26]. Foruten den klassiske kapillær endotel, lever- og immun vev hvorfra sCD26 kan stamme [13], [14], [26], nylig fettvev [27] og muskel [28] kan også være inkludert.
det er nå klart at immun-relaterte mekanismer er ferdigheter som kreftceller bør tilegne seg på sin vei til å gi opphav til en tumor, inkludert muligheten til å trives i en kronisk betent mikromiljøet, evne til å unngå immungjenkjennelse og evnen til å undertrykke immun-reaktivitet . Disse tre egenskapene har nylig blitt anerkjent som immun kjennetegnene til kreft [29]. Derfor, for CRC har vi hypotese [14] immunsystemet som kilden for de svekkede nivåer hovedsakelig fordi CD26 ikke blir uttrykt forskjellig i primære tumorer og normale tykktarm vev [30], [31]. I tillegg har mange
in vivo
studier funnet en sammenheng mellom endringer i serum DPP-IV aktivitet og antall PBL, T-lymfocytter, CD26 + T-celler og mengden av CD26 i T-lymfocytter plasmamembraner (anmeldt i [ ,,,0],14]). Derfor kan det være mulig at det fremkallende tumor kan immunosuppressing en sCD26-genererende populasjon eller ned for å regulere produksjonen av sirkulerende sCD26 gjennom TGF-β [32].
Interessant de forhøyede sCD26 konsentrasjonene funnet i Dukes D CRC pasienter med metastaser [15] og i dette arbeidet kan ha sammenheng med de siste resultatene fra Pang og kolleger [31]. De rapporterte differensial uttrykk for CD26 mellom primærsvulster og metastaser. Disse forfatterne identifisert CD26-uttrykke celler som kreft stamceller (CSC), assosiert med forbedret invasivitet og chemoresistance. Når isolert og injisert i mus i disse CD26 + celler førte til utviklingen av fjernmetastaser [31]. Hvis disse cellene produserer økte nivåer av sCD26 det kan være relatert til rask ekspansjon av populasjonen eller kanskje på grunn av en økt metabolisme av CD26 ekspresjon og avgivelse. Denne ideen er enig og utfyller våre funn av forhøyede sCD26 nivåer i metastatiske pasienter. I tråd med forrige rapport, et nylig publisert arbeid fra Lam og kollegaer [33] rapporterte signifikant høyere svulst CD26 uttrykk nivåer i CRC pasienter med fjernmetastaser sammenlignet med ikke-metastaserende pasienter. I tillegg
in vitro
eksperimenter med disse CSC er pågående i vårt laboratorium for å analysere deres evne til å produsere sCD26, som trolig kan forklare de forhøyede sCD26 konsentrasjonene er funnet i metastatiske pasienter.
Ingen tvil disse endringene har viktige konsekvenser i onkogene prosesser. Nåværende data støtter tre mulige roller sCD26 i: (i) aktivering-deaktivering av chemokiner i inflammatoriske prosesser; (Ii) aktivering-inaktivering av andre biologisk aktive blod substrater, vekstfaktorer eller hormoner; og (iii) celle-vedheft, migrasjon og invasjon kapasiteter [12] -. [14], [31], [34], [35]
Konklusjon
Serum sCD26 nivåer viste godt -defined mønstre under oppfølging av CRC pasienter. Stabile sCD26 konsentrasjoner var karakteristisk i sykdomsfrie pasienter; mens pasienter med lokal eller fjern tilbakevendende sykdom viste forhøyede sCD26 nivåer med plutselige nedgang, noe som resulterer i ustabilitet. Målingen av sCD26 kan bidra til å oppnå en tidlig detektering av tilbakevendende CRC sykdom etter kirurgi, selv i pasienter som er under kjemoterapi. Når bekreftet i en større prospektiv studie, sCD26 kan være en verdifull markør for postoperativ overvåking.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
Skjematisk fremstilling av oppførselen til sCD26 under oppfølging av CRC pasienter i henhold til sykdomsstatus
doi:. 10,1371 /journal.pone.0107470.s001 plakater (TIF)
Tabell S1.
Kliniske kjennetegn kohorten fulgt opp i studien
doi:. 10,1371 /journal.pone.0107470.s002 plakater (docx)
Tabell S2.
Serum nivåer av sCD26, CEA, CA-19.9 og CA-72,4 for preoperative og postoperative målinger
Doi:. 10.1371 /journal.pone.0107470.s003
(XLS)
Takk
