Abstract
Mål
Denne studien hadde som mål å undersøke metylering status for arrangøren regionen spalt-lignende transkripsjonsfaktor 3 (
SALL3
) og uttrykk for
SALL3
i livmorhalskreft for å utforske funksjonen av dette genet i livmorhalskreft kreftutvikling.
Metoder
metylering status for
SALL3
ble oppdaget av methylation- spesifikk PCR, og
SALL3
genekspresjon ble vurdert av sanntids kvantitativ PCR i livmorhalskreft cellelinjer, Siha, HeLa og C33A, samt i livmorhalskreft vevsprøver (n = 23), matchet pericarcinomatous vevsprøver (n = 23) og prøver normale livmorhalsen vev (n = 17). MTT ble brukt til å måle celleviabilitet og spredning kapasitet på Siha og HeLa celler.
Resultater
SALL3
arrangøren var helt metylert i Siha celler, unmethylated i C33A celler og delvis metylert i HeLa celler. Etter behandling av Siha og HeLa-celler med 5 uM og 10 uM av 5-azacytidin (5-Aza), henholdsvis metylering nivået av
SALL3
promoter redusert og observerte økningen i graden av unmethylation i en dose -avhengig måte. Videre er den relative uttrykk for
SALL3
mRNA øket når konsentrasjonen av 5-Aza økte i Siha (
p
0,05) og HeLa (
p
0,05 ) -celler. Dette nevnte økning i
SALL3
mRNA i Siha cellene var mer bemerkelsesverdig enn det som ble observert i HeLa celler. Celleproliferasjon kapasitet også redusert etter administrasjon av 5-Aza til Siha og HeLa-celler (
p
0,05). Metylering av
SALL3
promoter ble observert i 15 av 23 (65,21%) livmorhalskreft vevsprøver, 15 av 23 (65,21%) matchet pericarcinomatous vevsprøver og 5 av 17 (29,41%) normal cervical vevsprøver (
p
0,05).
SALL3
mRNA uttrykk var betydelig lavere i livmorhalskreft og pericarcinomatous vev sammenlignet med normal cervical vev (
p
0,05). I alle cervix vevsprøver, ble HPV-infeksjon positivt assosiert med hypermethylation av promotorområdet av
SALL3 plakater (
p
0,05, r = 0,408), og uttrykket for
SALL3
mRNA i HPV-positive vev var lavere enn i HPV-negative vev (
p
0,05).
Konklusjon
Den avvik hypermethylation av
SALL3
sammen med HPV engasjement inaktivert sin funksjon som en tumor suppressor og bidro til kreftutvikling i livmorhalskreft
Citation. Wei X, Zhang S, Cao D, Zhao M, Zhang Q, Zhao J, et al. (2015) Aberrant Hypermethylation av SALL3 med HPV Engasjement Bidrar til Karsinogenese av livmorhalskreft. PLoS ONE 10 (12): e0145700. doi: 10,1371 /journal.pone.0145700
Redaktør: Xuefeng Liu, Georgetown University, USA
mottatt: 9. juni 2015. Godkjent: 06.12.2015; Publisert: 23.12.2015
Copyright: © 2015 Wei et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: Alle data som ligger til grunn funnene i vår studie er fritt tilgjengelig i papir og dens saksdokumenter fil
Finansiering:.. Denne forskningen ble støttet av en Natural Science Foundation of China National (nr 81472428)
Konkurrerer interesser: forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Livmorhalskreft kreft~~POS=HEADCOMP er rangert som den nest største årsaken til kjønnsorganer kreftrelatert dødelighet blant kvinner over hele verden, og gir ca 266 000 dødsfall. hvert år i henhold til den siste National Comprehensive Cancer Network (NCCN) retningslinjer (2015 versjon) [1] .Gjennom 99% av tilfellene er knyttet til smitte av kjønnsorganer med humane papillomavirus (HPV), som er identifisert i etiologien av livmorhals kreft og har smittet ca 660 millioner mennesker [2]; derimot, er utbredelsen av HPV-infeksjon fortsatt utilstrekkelig til å gjøre rede for alle forekomster av livmorhalskreftutvikling. I de siste årene, epigenetiske mekanismer, særlig DNA metylering, har dukket opp, og har senere gitt ny innsikt i forekomst av svulster [3, 4]. Likevel, forskere fortsetter å utforske mekanismene for kreftutvikling og utvikling av kreft i genomikk.
Spalt lignende transkripsjonsfaktor 3 (
SALL3
) er et medlem av
SAL
familie og ligger på 18q23.
SALL3
koder for et sal-lignende C
2 H
2-type sink-finger protein. Mutasjoner i noen av disse genene er forbundet med medfødte misdannelser hos mennesker, noe som indikerer deres betydning i fosterutviklingen [5-7]. Shikauchi
et al product: [8] fant at
SALL3
ble brakt til taushet av DNA metylering og at proteinproduktet av dette genet (SALL3) samhandler direkte med PWWP domenet av DNMT3A i menneskelig leverkreft ( HCC), som foreslo at
SALL3
fungerer som en tumor suppressor i HCC. Elsker
et al product: [9] sekvensert de exomes av 59 Burkitt lymfom svulster, og resultatene viste for første gang at
SALL3
ble recurrently mutert i Burkitt lymfomer. Videre, CD133 (+) kolorektal kreftceller (CRC),
SALL3
var signifikant oppregulert i forhold til CD133 (-) CRC-celler [10]. Videre er en fersk undersøkelse utnytte high-throughput DNA metylering analyse viste også at
SALL3
var en potensiell biomarkør for tykktarmskreft [11]. De ovennevnte resultater viser at unormal ekspresjon av
SALL3
er assosiert med forekomsten av en rekke kreftformer. Men om
SALL3
er involvert i kreftutvikling av livmorhalskreft er ukjent.
I vår nåværende studie, viste vi at arrangøren regionen
SALL3
er hypermethylated og, sammen med HPV-infeksjon, er involvert i kreft i livmorhalsen; i tillegg, ekspresjonsnivået av SALL3 mRNA ble nedregulert. Vi foreslår at DNA metylering av
SALL3
hemmer sin rolle som en tumor suppressor og bidrar til kreftutvikling av livmorhalskreft.
Materialer og metoder
Etikk uttalelse
Denne studien ble godkjent av «Ethics Committee of First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University» i Shannxi, Kina. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle pasienter for deltakelse i denne studien.
Cellelinjer og kulturforhold
De tre menneskelivmorhalskreft cellelinjer Siha, HeLa og C33A ble gitt til oss av Dr. Jing Ji fra First Affiliated Hospital Medical School, Xi’an Jiaotong University [12, 13]. Alle disse celler ble dyrket i høy glukose Dulbeccos modifiserte Eagles medium (DMEM) (HyClone, USA) supplert med 10% føtalt bovint serum (FBS) (Si Ji Qing, Kina) ved 37 ° C i en atmosfære av 5% CO
2.
5-azacytidin Behandling
1,0 x 10
5 /brønn Siha og HeLa-celler ble dyrket hver for seg i 6-brønners plater i DMEM med 10% FBS, og etter 24 timer, ble mediet erstattet med friskt medium inneholdende 0, 5 eller 10 uM 5-azacytidin (5-Aza) (Sigma, USA). Mediet som inneholder 5-Aza ble erstattet hver 24. time i løpet av en 72-timers periode.
MTT analysen
3 × 10
3 /brønn Siha eller HeLa-celler ble sådd på 96- brønners plater og ble dyrket med 0, 5, eller 10 uM 5-Aza. Gjennom en 5-dagers perioden, ble mediet erstattet hver 24 timer, og den samme konsentrasjon av 5-Aza ble tilsatt. A 3- (4, 5-dimetyltiazol-3-yl) -2, ble 5-difenyl-tetrazolium-bromid (MTT) test som benyttes for å vurdere den proliferative kapasiteten til Siha og HeLa-celler etter behandling med 5-azacytidin i henhold til en standard protokoll. Celleviabilitet ble målt ved absorbans ved 490 nm.
Pasienter og prøver
Tjuetre livmorhalskreft vevsprøver, 23 matchet prøver pericarcinomatous vev og 17 eksemplarer normal cervical vev ble innhentet fra First tilknyttet Hospital of Xi’an Jiaotong University mellom januar 2014 og desember 2014. Alle pasientene ble diagnostisert ved patologisk undersøkelse, og ingen hadde fått kjemoterapi eller strålebehandling før operasjonen. Hver pasient var frivillig for denne forskningsstudien og ga skriftlig informert samtykke.
livmorhalskreft Prøver ble tatt fra midten av svulstene, mens prøver av pericarcinomatous vev oppsto 1,0 cm unna kreftvev. Sytten prøver av normal cervix ble oppnådd fra cervixuteri av pasienter som gjennomgikk en total hysterektomi på grunn av godartede sykdommer livmor. Den gjennomsnittlige størrelsen av hver prøve var 0,5 cm x 0,5 cm x 0,5 cm. Etter vev ble dissekert, ble hver prøve vasket med sterilisert PBS og lagret ved -80 ° C. Alle prosedyrer ble utført på is.
DNA ekstraksjon, bisulfitt modifikasjon og metylering-spesifikke PCR (MSP)
Genomisk DNA ble isolert fra celler og vev ved anvendelse av en mini Takara BEST Universal Genomisk DNA Extraction Kit (Takara, Kina) i henhold til produsentens instruksjoner. Totalt 500 ng av den ekstraherte DNA var sulfitt-modifisert med EZ DNA Metylering-Gold ™ Kit (Zymo Research, USA). Primerene anvendt i MSP var som følger:
SALL3
: 5′-ATTTTAGAATGGAAGGGAGTTCGTC-3 «(fremover), 5′-ATAACCTCCTAAAACTTCCCCGAA-3′ (revers) for metylering og 5»-ATTTTAGAATGGAAGGGAGTTTGTTG-3 « (fremover), 5»-AAATAACCTCCTAAAACTTCCCCAAA-3 «(bakover) for unmethylation. Begge PCR-produktene var 197 bp. Thermocycler programmene var som følger: 95 ° C i 10 minutter og 40 sykluser med 95 ° C i 30 sekunder, annealing temperaturen for de metylerte primerparene var 51 ° C, mens den for de unmethylated primerparene var 50 ° C i 30 sekunder og 72 ° C i 30 sekunder etterfulgt av en inkubering ved 72 ° C i 7 minutes.The PCR-produktene ble separert på en 2% agarosegel farget med Gelview og visualisert under ultrafiolett belysning. Hver reaksjon ble utført i tre eksemplarer.
HPV-DNA testing
HPV-DNA av tjuetre livmorhalskreft vevsprøver og sytten normale prøver livmorhalsen vev ble testet av polymerase chain reaction (PCR) og strømme gjennom hybridisering. 21 HPV-genotypene ble kvalitativt undersøkt ved HPV genotyping testsett i henhold til alkalisk fosfatase-systemet (HybriBio, Kina), inkludert høyrisiko HPV typene-16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58 , 59 og 68, lav risiko typer HPV-6,11,42,43,44 og vanlige typer i Kina HPV-53,66 og CP8304.
RNA ekstraksjon og sanntids kvantitativ PCR (Q- PCR)
Total RNA ble ekstrahert fra celler og vev ved hjelp av TRIzol-reagens (Life Technologies, USA) i henhold til produsentens instruksjoner. Primere som brukes for sanntids kvantitativ PCR er som følger:
SALL3
: 5′-CAAAGCGAGCTCAGAAACAG-3 «(fremover), 5′-CCTGATGCTCCAACTTCAAA-3» (bakover);
GAPDH
:
5 «
-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3′ (fremover), 5′-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3 «(bakover). Reaksjonsbetingelsene var som følger: 95 ° C i 30 sekunder, 40 sykluser av 95 ° C i 5 sekunder og 60 ° C i 30 sekunder. Vi brukte syklusen terskel (CT) som representant punktet. Den relative uttrykk for
SALL3
mRNA i hver gruppe (fold-endring i forhold til kontroll) ble beregnet ved hjelp av formelen: RQ = 2
– △△ Ct. Hver reaksjon ble utført i tre eksemplarer.
Statistical Analysis
Alle dataene ble analysert med SPSS versjon 18.0.Consecutive data ble analysert ved Wilcoxon rank sum test, Kruskal-Wallis H test eller en- veis ANOVA-analysen. Kategoriske data ble sammenlignet med Pearson Chi-Square test. Alle statistiske tester ble 2-sidig, og forskjeller der
p
. 0,05 ble ansett som statistisk signifikant
Resultater
Påvisning av metylering status i promotorområdene av
SALL3
i livmorhalskreft cellelinjer
DNA metylering oppstår alltid i områder som er rike på CpG øyer som promoter regioner. En vanlig årsak til mange ondartede sykdommer er unormal hypermethylation eller hypometylering av promotor CpG øyer, noe som resulterer i den transkripsjonelle undertrykkelse av mange tumorsuppressorgener eller reaktivering av onkogener. Vi brukte online programvare «MethPrimer» for å profilere en CpG øy i regionen som ligger -1859 til -54 bp oppstrøms fra ATG, transkripsjon start hotellet (TSS) i
SALL3
promoter (fig 1A ). Ett par av primere er designet for å forsterke
SALL3
promoter-regionen. Å identifisere metylering status for denne regionen i livmorhalskreft cellelinjer, brukte vi metylering spesifikke PCR (MSP) for å bestemme
SALL3
promoter metylering status i Siha, C33A og HeLa-celler. Resultatene viste at denne regionen i Siha cellene var fullstendig denaturert, mens dette området var fullstendig unmethylated i C33A og delvis metylert i HeLa-celler (figur 1B).
(A) Anslått CpG øyer i promoter-regionen i
SALL3
. Tallene indikerer stillinger i BP i forhold til transkripsjon start stedet. Den blå regionen representerer CPG øyene og de røde vertikale linjene er CpG loci i disse innsats sekvenser. (B) Påvisning av
SALL3
metylering status ved MSP i Siha, C33A og HeLa cellelinjer. (M: metylert, U: unmethylated)
5-azacytidin behandling demethylates
SALL3
promoter-regionen og reverserer uttrykk for
SALL3
I de fleste tilfeller er DNA-metylering en reversibel prosess. For å finne ut om metylering status i promoter regionen regulerer uttrykk for vår genet av interesse på transkripsjonsnivå, vi har oppdaget uttrykk for
SALL3
i cellelinjer der
SALL3
promoter er sterkt metylert (Siha og HeLa) etter behandling med 5-azacytidin (5-Aza), noe som kan forårsake DNA demetylering. Vi målte metylering av MSP og sanntids Q-PCR. Resultatene viste at intensiteten av metylering av det
SALL3
promoter i begge Siha og HeLa-cellelinjer redusert, mens den unmethylation av
SALL3
gradvis øket når konsentrasjonen av 5-Aza øket (fig 2). Videre fant vi at uttrykket av
SALL3
mRNA i Siha og HeLa celler økt betydelig på en doseavhengig måte etter administrasjon av 5-Aza (
p
0,05); den økte ekspresjon som ble observert i Siha cellene var mer bemerkelsesverdig enn den som ble observert i HeLa-celler (tabell 1, figur 3). Disse resultatene antydet at uttrykket av
SALL3
ble reversert av 5-Aza, som demetylert
SALL3
promoter og fremmet uttrykk for
SALL3
genet på transkripsjonsnivået .
(M: metylert, U: unmethylated)..
(*
p
0,05)
Demetylering av
SALL3
arrangøren kunne hemme spredning av livmorhalskreftceller
Vi brukte en MTT analyse for å undersøke om kapasiteten på Siha og HeLa celler spredning ble berørt av
SALL3
metylering. Etter behandling med 5-Aza, cellelevedyktigheten til både Siha og HeLa-celler ble svekket på en doseavhengig måte (
p
0,05) (figur 4), noe som viste at demetylering av
SALL3
i promoter regionen kan forsterke uttrykket av
SALL3 Hotell og føre til en nedgang i cellen levedyktighet og spredning kapasiteten på livmorhalskreft cellelinjer Siha og HeLa.
SALL3
promoter-regionen ble hypermethylated i livmorhalskreft vev
for ytterligere å bekrefte metylering status for promoter-regionen i
SALL3
i livmorhalskreft vev, vi spilte MSP i 23 livmorhalskreft vev, 23 matchet pericarcinomatous vev og 17 normale cervical vev. Som vist i tabell 2, i livmorhalskreft vev, ble metylert 15 (65,21%) og 8 ble unmethylated (34,78); i pericarcinomatous vev, 15 ble metylert (65,21%) og 8 var unmethylated (34.78%); i normale cervical vev, fem ble metylert (29,41%) og 12 var unmethylated (70,59%). Forskjellen mellom gruppene var signifikant (
p
0,05) (tabell 2), bortsett fra at ingen signifikant forskjell ble observert mellom kreft og pericarcinomatous vev (p 0,05). Men den gjennomsnittlige grå-skala nivå var høyere i de cancerøse vev (data ikke vist). Resultatene viste at
SALL3
promoter ble hypermethylated i kreftvev, som kan spille en rolle i kreftutvikling av livmorhalskreft (fig 5).
Hypermethylation av
SALL3
promoter hemmet genekspresjon på transkripsjonsnivået
Vi oppdaget uttrykk for
SALL3
mRNA i de 23 livmorhalskreft vev, 23 matchet pericarcinomatous vev og 17 normale cervical vev av real-time Q-PCR. Sammenlignet med normal cervix, den gjennomsnittlige relative uttrykk for
SALL3
var lavere i livmorhalskreft vev (
p
0,05) og pericarcinomatous vev (
p
0,01 ), men ble ikke observert noen signifikant forskjell mellom tumorvev og pericarcinomatous vev (
p
0,05) (figur 6A)
Disse data er representert ved den midlere med en interkvartilt område (. *
p
. 0,05)
I tillegg skilles vi disse prøvene inn i to grupper. En gruppe besto av vev, hvor den promoter-regionen i
SALL3
ble metylert, og den andre besto av vev, hvor den regionen var unmethylated. Den gjennomsnittlige relative uttrykk for
SALL3
mRNA i de metylerte vevet var lavere enn det i den unmethylated vev (
p
0,05) (figur 6B). Resultatene viste at hypermethylation av
SALL3
hemmet
SALL3
genekspresjon på transkripsjonsnivået.
Høy risiko HPV infeksjon ble positivt assosiert med hypermethylation av
SALL3
promoter-regionen i livmorhalskreft
Gitt at høyrisiko HPV-infeksjon er involvert i etiologien av livmorhalskreft, vi videre utforsket forholdet mellom HPV-infeksjon og hypermethylation av
SALL3
promoter region i livmorhalskreft. I livmorhalskreft vev, ble 14 av 18 HPV-positive prøver metylert (77,78%), og 4 var unmethylated (22,22%); 1 av 5 HPV-negative prøver ble metylert (20,00%), og 4 var unmethylated (80,00%). I normale vev cervix, ble to av seks HPV-positive prøver metylert (33,33%), og 4 var unmethylated (66,67%); 3 av 11 HPV-negative prøver ble metylert (27,27%), og 8 ble unmethylated (72,73%). De kombinerte statistiske Resultatene er vist i tabell 3. Forskjellen mellom disse to gruppene var signifikant (
p
0,05). I tillegg fant vi en positiv sammenheng mellom HPV-infeksjon og hypermethylation av
SALL3
promoter-regionen i livmorhalsen vev (p = 0,010, r = 0,408) (tabell 3), som viste at hr-HPV-infeksjon har en nær relevans med metylering i
SALL3
promoter regioner.
Dessuten er relative uttrykk for
SALL3
mRNA i HPV-positive vev var lavere enn i HPV-negative vev (fig 7). Resultatene av HPV typene 40 livmorhalsen vevsprøver ble vist i tabell S1
Disse data er representert ved den midlere med en interkvartilt område (*
p
0,05)..
Diskusjoner
på en global skala, forekomsten av livmorhalskreft står for 13% av alle maligne svulster hos kvinner og andre bare for brystkreft [14, 15]. Selv om genital HPV har vist seg å ha en nær tilknytning til etiologi av livmorhalskreft, og til tross for den utbredte bruken av screening metoder og vaksiner [16], forekomsten og dødeligheten er fortsatt høy, spesielt i mindre utviklede land [17-19 ]. Derfor belysning av patogenesen av livmorhalskreft er av stor betydning.
DNA metylering er den mest vanlige formen for epigenetisk modifikasjon, og er essensiell for ulike utviklingsprosessene gjennom sin regulering av genekspresjon, genomisk preging, og epigenetisk arv [20]. Nyere studier har vist at avvikende DNA-metylering i promotorområdene (og CG øyer i særdeleshet) er nært knyttet til dannelsen av mange kreftformer, fordi en reduksjon av metylering av hele genomet eller hypermethylation av promoter-regioner av tumorsuppressorgener påvirker genekspresjon [21, 22]. Som en konsekvens, spiller unormal metylering av tumorrelaterte gener en betydelig rolle i karsinogenese [23]. Oppdagelsen av spesifikke metylering markører for ulike kreftformer kan ha en betydelig innflytelse.
SALL3
er medlem av SAL familien finner på 18q23 [24], en viktig genet i utviklingen av menneskekroppen . Sletting av 18q23 forårsaket tap av audition, hjerteproblemer, mental retardasjon, vekstretardasjon, lem misdannelse og så videre [7, 24] .For de siste årene, forskere rettet mot relevansen mellom
SALL3
uttrykk og kreftutvikling . Yu
et al product: [25] hadde funnet
SALL3
hypermethylated i promotorområdene rike på CG dinucleotide i blærekreftcellelinjer og vev, som kan være en roman DNA metylering markør i deteksjon av blærekreft kreft. Hva mer, arrangører av
SALL3
ble hypermethylated i H719 cellelinje [26]. I tillegg Yang
et al product: [27] oppdaget at hypermethylation av
SALL3
bidro til nedgang på
SALL3
mRNA i HCC.
I vår studie har vi utforsket mulighetene for å påvise hypermethylated
SALL3
i promotorområdene som en screeningmetode for livmorhalskreft. I livmorhalskreft cellelinjer Siha og HeLa, som ble både HPV-positive cellelinjer, ble metylert i
SALL3
Promoterregionene men i C33A, en HPV-negative cellelinje,
SALL3
var unmethylated i promotorområdet. I mellomtiden, i livmorhalskreft vev, matchet pericarcinomatous vev og normal cervix vev, viste resultatene hypermethylation av
SALL3
i livmorhalskreft og pericarcinomatous vev sammenlignet med i normale livmorhalsen vev (
p
0,05 ) .Våre resultatet var konsistent med Shikauchi
et al product: [8] og Yang
et al product: [27].
Tatt disse sammen, infeksjon av HPV kan delta i mekanismen for
SALL3
metylering relaterte kreftutvikling. Høyrisiko HPV (hrHPV) -indusert immortalization og malign transformasjon er ledsaget av DNA metylering av vertsgener. Schütze
et al product: [28] fant at HPV-indusert immortalization var assosiert med en sekvensiell og progressiv økning i promoter metylering av en undergruppe av gener, inkludert hTERT, mir124-2, PRDM14 og så videre, som var hovedsakelig uavhengig av viral immortalisering kapasitet. I vår studie, overraskende, ved hjelp av å analysere forholdet mellom HPV-infeksjon og
SALL3
metylering status på cervix vev, resultatene viste at genomisk hypermethylation og lavere mRNA uttrykk i transkripsjon nivå av
SALL3
i HPV-positive livmorhalskreft vev sammenlignet med i HPV-negative vev (
p
0,05) og hr-HPV-infeksjon positivt assosiert med hypermethylation av
SALL3
promoter-regionen (
p
0,05, r = 0,408), noe som var i samsvar med Schütze og vår tidligere studie på livmorhalskreft cellelinjer, og bringer oss nye bevis på at HPV-infeksjon har deltatt i kreftutvikling av livmorhalskreft. Men i vår nåværende studie, rekkefølgen på to hendelsene-hr-HPV infeksjon og
SALL3
metylering skjedde og om de hadde direkte interaksjon (med E6 /E7 eller annet gen loci) er fremdeles ukjent. Vi vil holde på å søke etter den mekanismen for kreftutvikling indusert av HPV-infeksjon og DNA metylering i følgende forskere.
For ytterligere å bekrefte forholdet mellom metylering og genuttrykk, vi behandlet Siha og HeLa, som var sterkt
SALL3
metylert i promoter-regionen, med 5-azacytidin, kan en agent spille en rolle på DNA demetylering på et genom-wide skala. Resultatene antydet at når konsentrasjonen av 5-Aza forhøyet generelt, nivået av metylering av
SALL3
droppet av så vel som unmethylated uttrykk økt betydelig i Siha og HeLa (
p
0,05 ). Samtidig, mRNA relative uttrykk for
SALL3
i Siha og HeLa øke også og økt omfang i
SALL3
helt metylert cellelinje Siha var mer bemerkelsesverdig enn i HeLa,
SALL3
delvis-metylert cellelinje, noe som antydet at demetylering av
SALL3
effektivt kunne omgjøre sitt uttrykk i transkripsjon nivå. Deretter MTT-analysen viste at etter behandling med 5-Aza, cellelevedyktigheten og spredning av Siha og HeLa vesentlig svekket som illustrert et krefthindrende funksjon av
SALL3
i cervikale kreftceller. I vevsprøver, Q-PCR resultatene antydet at mRNA uttrykk for
SALL3
ble høyere i kreft og pericarcinomatous vev enn i normale livmorhalsen vev (
p
0,05), som delte lignende ideen med tidligere studier [27]. I tillegg statistisk analyse av mRNA uttrykk mellom denaturert og unmethylated vev avslørte at i
SALL3
denaturert vev, mRNA av
SALL3
var høyere enn i unmethylated vev (
p
. 0,05) .Taken sammen, resultatene viste
SALL3
hypermethylation bidratt til nedregulering av genekspresjon i transkripsjon nivå i livmorhalskreft
i konklusjonen, vår forskning først vist at formidler av
SALL3
var av hypermethylation, og på grunn av denne mekanismen nedregulert mRNA uttrykk og akselererende cellevekst i livmorhalskreft vev og cellelinjer. Høyrisiko HPV infeksjon som en etiologi av livmorhalskreft deltatt i
SALL3
metylering. Dette avvik metylering status på hele genomet skala inaktivert sin funksjon som en tumor suppressor og bidratt til kreftutvikling av livmorhalskreft.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 Table. HPV-typer 40 livmorhalsen vevsprøver
doi:. 10,1371 /journal.pone.0145700.s001 plakater (docx)
Takk
Denne forskningen ble støttet av en National Natural Science Foundation of China (No.81472428).
