Abstract
Menneske indusert pluripotent stamceller (iPSCs) blir omprogrammert av forbigående uttrykk for transkripsjonsfaktorer i somatiske celler. Omtrent 1% av somatiske celler kan omprogrammeres til iPSCs, mens de gjenværende somatiske celler er forskjellig omprogrammeres. Her har vi etablert indusert pluripotent kreft stamceller lignende celler (iCSCs) som selvfornyende pluripotente celle kloner. Stabile ICSC linjer ble etablert fra ustabile indusert epitelial stamcelle (iESC) linjer gjennom re-plating fulgt av embryoid kroppen dannelse og serie transplantasjon. iCSCs delte uttrykket av pluripotente markørgener med iPSCs, med unntak av
REX1 Hotell og
LIN28
, mens utstilt uttrykket av somatiske markørgener
EMP1 Hotell og
PPARy
. iESCs og iCSCs kan generere teratomas med høy effektivitet ved implantering i immunsvikt mus. Den andre iCSCs isolert fra dissosierte celler fra teratoma fra de første iCSCs ble stabilt opprettholdt, og viser en genekspresjon profil lik den første iCSCs. I første og andre iCSCs, transgen-avledet
Oct4
,
Sox2
,
Klf4
, og
c-myc
ble uttrykt. Sammen global genekspresjon analyser viste at de første iCSCs var lik iESCs, og klart forskjellig fra menneskelige iPSCs og somatiske celler. I iCSCs, genuttrykk kinetikken av kjernen pluripotency faktor og Myc relatert faktor var pluripotente typen, mens den polycomb komplekset faktor var somatiske type. Disse funnene tyder på at pluripotente tumorigenicity kan bli overdratt til somatiske celler gjennom oppregulering av kjerne pluripotency og Myc-relaterte faktorer, før etableringen av IPSC molekylære nettverk ved fullt omprogrammering gjennom nedregulering av polycomb kompleks faktor.
Citation: Nagata S, Hirano K, Kanemori M, Sun LT, Tada T (2012) selvfornyelse og pluripotency ervervet gjennom Somatic Omprogrammering human Cancer stamceller. PLoS ONE 7 (11): e48699. doi: 10,1371 /journal.pone.0048699
Redaktør: Martin Pera, Universitetet i Melbourne, Australia
mottatt: 18 juli 2012; Godkjent: 28 september 2012; Publisert: 08.11.2012
Copyright: © 2012 Nagata et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet er støttet av JSP Kakenhi, stipend nummer 23390067. de bevilgende myndighet hadde noen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer.
Innledning
kreft stamceller (cscs), som er subpopulasjoner av tumorceller, funksjon i å opprettholde kreft gjennom initiering og forplantning av vedlikeholdende tumorvekst [1]. Cscs antas å være sentrale mål for kreft terapi, men detaljene i deres genetiske og epigenetiske signaturer er uklart. Som en gullstandard for å definere CSC egenskaper, en seriell transplantasjon analysen basert på evnen til å fornye seg selv og generere svulster har vært mye brukt [2]. En viktig hendelse i initiere kreftformer er aktivering av selvfornyelse maskineri, som normalt er begrenset til stamceller. Derfor er det sannsynlig at cscs dele flere genekspresjonssignaturer oppdaget i pluripotente stamceller. Faktisk pluripotente markørgener,
Oct4 Hotell og
Nanog
, er uttrykt i enkelte kreftformer [3], [4], og onkogen
Myc
er involvert i generasjon av mange kreftformer [5].
Tvungen ekspresjon av en kombinasjon av transkripsjonsfaktorer, OCT4, Sox2, Klf4, og c-Myc (OSKM), kan fremme direkte reprogrammering av humane og musesomatiske celler til indusert pluripotent stilk -celler (iPSCs) [6], [7]. I direkte omprogrammering,
Oct4 Hotell og
Sox2
, som er kjerne pluripotency faktorer, fungerer som regulatorer av utviklings- og transkripsjons-assosiert prosesser [8],
Myc
rettet mot gener overveiende som er involvert i cellulær metabolisme, cellesyklus, og proteinsynteseveier [9]. Videre
MYC
funksjoner for å øke effektiviteten ved å regulere p53 vei [10]. Dette bevis indikerer at felles trasé kan brukes både i oppkjøp av pluripotency og tumorigenesis. Hos mennesker ble CSC-lignende celler transformert fra primære hudfibroblaster ved stabil ekspresjon av hTERT, H-RasV12, og SV40 LT og ST-antigenene [11]. I mus ble cscs generert fra mus indusert pluripotent stamceller (iPSCs) ved kultur med en kondisjonert medium av kreftcellelinjer, som var en etterligner av carcinoma mikromiljøet [12]. Dermed kunne global endring av transkripsjon signatur gjennom direkte omprogrammering eller alternative kulturbetingelser fremme transformasjon til cscs. I denne sammenheng er det mulig at tvangs uttrykk for OSKM i somatiske celler induserer direkte omprogrammering inn cscs. For å møte de molekylære mekanismene som er involvert i embryonale stamceller (ES) celler og cscs, tre funksjonelt forskjellige gensettene, kalt Core (kjerne pluripotency faktorer), PRC (polycomb undertrykkende komplekse faktorer), og Myc (Myc relaterte faktorer) moduler, foreslo nylig ble brukt for komparative analyser av global genaktivitet mellom ulike typer celler [9].
Her, for å ta opp spørsmål om menneskeskapte kreft stilk-lignende celler (iCSCs) kan genereres ved somatisk omprogrammering gjennom konvensjonelle OSKM viral induksjon, og hvordan menneskelig iCSCs, men ikke iPSCs, genereres, første vi isolert iCSCs fra cellepopulasjoner, som ervervet evnen til å fornye seg selv etter at tvungen uttrykk for eksogene OSKM i humane somatiske fibroblaster TIG1. iCSCs har den egenskap pluripotency som verifisert av teratom formasjon gjennom serie transplantasjon til immunsvikt mus. Spesielt, genekspresjonen signaturen viser at iCSCs vedvarer viss somatisk celle hukommelse, selv etter oppregulering av pluripotent markørgener ved omprogrammering. Våre funn viser at oppregulering av gensettene for kjernen og MYC moduler er tilstrekkelig til å gi egenskapene til selvfornyelse og pluripotency, og sekvensiell nedregulering av gensettene for PRC-modulen er nødvendig for å installere riktig IPSC signatur på somatiske celler. Disse funnene viser at iCSCs og iPSCs dele en omprogrammering sti fra somatiske kjerner i pluripotente og selv fornybar kjerner, og deretter divergere til iCSCs eller iPSCs.
Materialer og metoder
Etikk uttalelse
Forsøk med mus ble utført i henhold til den institusjonelle retningslinjen fra Universitetet i Kyoto, Japan. Våre dyreforsøk (W-3-6) gjennomgås og tillatt av dyret forskningsutvalg av Universitetet i Kyoto, Japan.
Cell kultur
Menneske fosterets lunge fibroblaster (TIG1) levert av JCRB Cell Bank ble dyrket i Dulbeccos modifiserte Eagles medium (DMEM) (Sigma-Aldrich, USA) inneholdende 10% FBS, og ble infisert med Oct4, Sox2, Klf4 og c-myc retrovirus. På dag 4 etter infeksjon, ble cellene sådd på nytt i et 10 cm kulturskål på feeder-celler. På dag 5 etter infeksjon, ble kulturmediet skiftet til IPSC medium (DMEM /Nutrient Blanding F-12 Ham (DMEM /F12) (Sigma-Aldrich) supplert med 20% av knockout serum erstatning (Invitrogen, USA), 10 ng /ml bFGF (Peprotech, USA), L-glutamin, og ikke-essensielle aminosyrer og 2-mercaptoethanol). Kolonier, som kan selv fornye og utvide, ble plukket opp og reseeded på mateceller rundt dag 30. For å isolere menneskelige iPSCs og induserte epitelceller stamceller (iESCs), hver koloni ble plukket opp og reseeded inn Matrigel-belagte retter med mus embryonale fibroblast (MEF) -conditioned IPSC medium.
For embryoid kroppen (EB) formasjon, ble små iESC aggregater dannet av natten hengende dråpe kultur i MEF kondisjonerte IPSC medium. Aggregatene ble dyrket i bakteriekulturskåler i 5-7 dager, og deretter dyrket på gelatin-belagte tallerken med DMEM inneholdende 10% FBS.
For tumor-avledede cellekultur, tumorer ble kuttet i små biter, dissosiert med kollagenase, og sådd ut på gelatin-belagte retter med 10% FBS inneholdende DMEM. Etablerte ICSC Linjene ble opprettholdt i gelatin-belagt skål med DMEM /F12 (Wako, Japan) supplert med 15% FBS, 1000 U /ml LIF (Chemicon, USA), L-glutamin, penicillin-streptomycin, natrium-bikarbonat, natrium pyruvat, og 2-mercaptoethanol gjennom passasjen bruker 0,25% trypsin /EDTA.
RT-PCR
for RT-PCR-analyser, ble total RNA fra dyrkede celler ekstrahert med TRIzol reagens (Invitrogen). cDNA ble syntetisert fra 1 mikrogram total RNA med Hevet III (Invitrogen) ved hjelp av tilfeldige heksamer følgende produsentens instruksjoner. Alle PCR-eksperimenter ble utført med glødetemperaturen ved 57 ° C. Primersekvensene som brukes i denne undersøkelsen er oppsummert i tabell S1.
Immunocytochemistry
Dyrkede celler ble fiksert med 4% PFA (paraformaldehyd) /PBS (fosfatbufret saltvann) i 10 minutter ved romtemperatur , vasket med PBST (0,1% Triton X-100 i PBS), og deretter forbehandlet med blokkeringsoppløsning (3% BSA og 2% skummet melk (Difco, USA) i PBST) ved 4 ° C over natten. Cellene ble inkubert med primære antistoffer; anti-OCT4 (1:50; Santa Cruz Biotechnology, USA), anti-SOX2 (1:500; Abcam, UK) og anti-Nanog (1:200; ReproCELL, Japan), anti-CDH1 (1:200; Takara , Japan), anti-SSEA4 (1:500, Hybridoma Bank, USA), og anti-TRA-1-60 (1:500; Millipore, USA) antistoff ved 4 ° C over natten. De ble deretter inkubert med sekundære antistoffer; anti-kanin-IgG eller anti-mus-IgG konjugert med Alexa 488 (1:500; Molecular Probes, USA) i blokkeringsbuffer i 1 time ved romtemperatur. Cellene ble kontra med DAPI (4,6-diamidino-to-phenylindole) og montert med en SlowFade lys antifade sett (Invitrogen).
Svulstdannelse
En celle suspensjon av 5,0 × 10
5 iESCs eller iCSCs i 200 ul DMEM ble subkutant injisert i lyskeområdet eller transplantert inn i nyre kapsler med immunsvikt SCID mus (Clea, Japan). Svulster ble kirurgisk dissekert ut 5-7 uker etter implantasjon, fast med 4% paraformaldehyde i PBS og i parafin. §§ 5 mikrometer tykkelse ble farget med hematoksylin og eosin.
microarray og databehandling
For microarray-analyser, ble 1 mikrogram total RNA-merket i henhold til standard Affymetrix protokoller og hybridisert til Affymetrix menneskelige genom U133 Plus 2.0 Array (prøver av human opprinnelse). Rådata ble normalisert ved MAS 5.0 metoden bruker bioconductor pakken på R program (https://www.r-project.org/). Varmekart av genet ekspresjonsprofilen for alle gener i hver cellelinje ble visualisert ved MeV program (https://www.tm4.org/mev/). Hierarkiske klynger ble beregnet ved Pearsons korrelasjonskoeffisient (r) og visualisert ved pvclust pakken på R program. For spredningsdiagram analyser, ble rådata normalisert ved Robust multichip Average (RMA). Spredningsplott ble visualisert ved hjelp av bioconductor pakken på R program.
Diskusjon
Isolering av iESCs og iCSCs
Resultater og
Menneskelige iPSCs ble plukket opp som kolonier ca 30 dager etter retroviral transduksjon av Oct4, Sox2, Klf4 og c-Myc inn i de somatiske fibroblaster TIG1, en cellelinje isolert fra human fetal lunge (fig. 1A). Effektiviteten av IPSC generasjon var mindre enn 1%, og de andre populasjoner av celler ble ulikt omprogrammeres. Noen av forskjellig omprogrammeres somatiske celler viste tilhører selvfornyelse dannet kolonier som består av celler (iESCs) med epitelceller morfologi i MEF kondisjonerte IPSC medium (Fig. 1a). iESCs ble opprettholdt med epitelceller morfologi for rundt 10 passasjer siden var utsatt for differensiere (fig. S1 A). Derfor, for å analysere den differensiering potensialet i iESCs, ble EB dannelse indusert av suspensjonskultur (Fig. 1B). Vellykket dannet iESC EBS viser pluripotency som analyseres ved RT-PCR (Fig. 2A) ble festet på bunnen for å kultur retter å isolere selvfornyelse stamceller. Derfor var de første (1.) ICSC linjer ble isolert ved å plukke celleklumper av ekspanderte EBS i tre uavhengige eksperimenter ble stabilt opprettholdt i mer enn 20 passeringer, eller re-belagt fra frosne lagret celler (Fig. 1B). For å bekrefte identiteten til 1ste iCSCs, ble det andre (2.) iCSCs isolert fra svulster som genereres av serie transplantasjon med injeksjon av 1. iCSCs i inguinal regioner av immunsvikt SCID mus i to uavhengige eksperimenter (Fig. 1C). 2nd iCSCs ligner 1ste iCSCs ble stabilt opprettholdt med funksjoner av epithelial cellemorfologi og robust cellevekst i mer enn 20 passeringer (Fig. 1C). Neste, for å utforske pluripotency av iESCs, 1. iCSCs, og 2. cscs, ble cellene transplantert inn i nyre kapsler eller inguinal regioner av SCID-mus. Dannelse av teratomas inneholder ecotoderm, mesoderm og endoderm derivater ble oppdaget med hematoxylin og eosin farging ved høy frekvens i alle celletyper (Fig. 2B), noe som indikerer at de tre celletyper var stamceller anskaffe pluripotency, til tross for at epitelceller morfologi.
(A) Generering av iPSCs og iESCs gjennom direkte omprogrammering av primære føtale fibroblaster (TIG1). (B) Generering av de første (1st) iCSCs ved å plukke en celleklump (gul sirkel) gjennom iESCs-avledet embryoid organer (iESC EB) formasjonen. (C) Generering av de andre (2.) iCSCs ved å plukke en celleklump (gul sirkel) gjennom serie transplantasjon av 1. iCSCs.
(A) Uttrykk for eksogene, pluripotente markør, og avstamning markør gener i embryoid organer (EBS) dannet med iESCs og iPSCs ved RT-PCR-analyser. (B) Parafin deler av teratomas, som ble generert av iESCs, 1. iCSCs, og 2. iCSCs implantering, ble farget med hematoksylin og eosin. NE, neuroepithelium (ektoderm); CA, brusk (ektoderm); MU, muskel (mesoderm); RE, respiratorisk epitel (endoderm).
Gene uttrykk profil iESCs og iCSCs
For å undersøke genuttrykket i iESCs og iCSCs, global genekspresjon profiler oppdages av genuttrykk microarray analyser ble sammenlignet. Blant TIG1, iESCs, 1. iCSCs, og iPSCs, iESCs og iCSCs likne hverandre. Interessant, iESCs og iCSCs var mer lik somatiske celler, og TIG1 heller enn menneskelige pluripotente celler (iPSCs og ES-celler), selv med konsekvent høy uttrykk for eksogene
Oct4
,
Sox2
Klf4
, og
c-myc plakater (fig. S2 og fig. 3A og 3B). I samsvar med dette, data om varmekartet analyser viste at iESCs opprettholdt en mellomtilstand mellom somatiske fibroblaster TIG1 og pluripotente iPSCs (Fig. 3A). Mer detaljert analyser spredningsplott viste at i iESCs, uttrykk av somatiske markørgener
MAB21L1 Hotell og
NR2F2
var høy til iPSCs, mens uttrykk for pluripotent markørgener T
DGF1, Nanog, ZIC2, etter og
TPD52
lik iPSCs (fig 3A.). I likhet med iESCs, ble 1. iCSCs kjennetegnet ved ekspresjon av enkelte somatiske markørgener. RT-PCR-analyser bekreftet at uttrykket av endogene pluripotente markørgener,
OCT4
,
SOX2
,
Nanog
,
REX1
,
LIN28
var åpenbart lav, mens somatiske markørgener,
EMP1
,
PPARy
,
FOXF2
, og
NR2F2
ble sterkt uttrykt i 1. og 2. iCSCs (fig. 3A og 3B), noe som indikerer at epigenetisk omprogrammering gikk halvveis til å slette den somatiske minne og etablere et pluripotent transkripsjon nettverk. Lav uttrykk for Nanog ble oppdaget av immunocytochemistry i 1. og 2. iCSCs, mens høy ekspresjon av endogent OCT4 /eksogene Oct4 og endogen SOX2 /eksogene Sox2 ble påvist (Fig. 3C). Immunocytochemistry analyser viste at pluripotente markører CDH1 og SSEA4 ble svakt uttrykt i iESCs og iCSCs, mens høyt i iPSCs. Videre er ekspresjon av TRA-1-60 ble påvist i iPSCs, men ikke iESCs og iCSCs (fig. S3). Kollektivt, iESCs og iCSCs beholdt en mobil tilstand mellom TIG1 og iPSCs.
(A) Gene uttrykk microarray analyse blant TIG1, iESCs, iCSCs, og iPSCs. Heat kartet (øvre panel) viser forskjellig uttrykt gener av somatiske og pluripotente gener. Spredningsplott (nedre panel) viser sammenligning av globale genuttrykk profiler. Gul; gener i kjernemodulen, blå; gener i PRC-modulen, og Red; -genet i den Myc-modulen. (B) Expression analyse av pluripotente markørgener, somatiske cellemarkørgener, og eksogene gener i TIG1, iPSCs, iESCs, 1. iCSCs, og 2. iCSCs ved RT-PCR-analyser. (C) Uttrykk for pluripotente markørproteiner (grønn) i iESCs, 1. iCSCs, og 2. iCSCs av immunocytochemistry. Cellekjerner er kontra blå med DAPI (blå). Exo-, eksogene; Endo-, endogen.
Acquisision av pluripotency før etableringen av IPSC identitet
I prosessen med omprogrammering somatiske celler i iPSCs, cellene gradvis endre sine uttrykk mønstre og morfologi. Derfor, for å sammenligne genuttrykk profiler av forskjellige typer omprogrammere celler, en integrert analysesystem for uttrykk profiler, i form av kinetikken moduler, er nødvendig. Tre ES-cellemoduler, Core, PRC, og Myc (CPM), som er funksjonelt separable, er definert [9]. The Core modul inneholder kjente faktorer i kjernen regulerende kretser, for eksempel
Nanog, OCT4, SOX2, TCF3
, og
REX1
. PRC modul inneholder genet generelt undertrykt i ES-celler, inkludert
HOX
klase gener. Den Myc Modulen består av gener som er felles mål for syv faktorer, MYC, MAX, NMYC, DMAP1, E2F1, E2F4, og ZFX. I tillegg ble det ES celle-lignende modul definert til å skille mellom ES-celler, vev voksne stamceller, og kreft hos mennesker [13]. Her viser vi data med CPM moduler, siden analyse med data fra ES celle-lignende modulen ble sammenlignes med data fra kjernemodulen av CPM moduler, som inkluderte pluripotente markørgener.
For å omprogrammere TIG1 inn iESCs, oppregulering av kjernen og myc-moduler var nødvendig (fig. 4 og S4 fig.). iESCs og iCSCs ble preget av den høye aktiviteten i PRC og MYC moduler, mens Core-modulen var høy i iESCs og lite iCSCs. Det var avgjørende å innføre en barriere for å slette somatisk minne at PRC modulen beholdt høy aktivitet i alle TIG1, iESCs, og iCSCs som vist av
FOXF2 Hotell og
NR2F2 plakater (fig. 3A). Å være fullt omprogrammeres til iPSCs fra TIG1, induksjon av nedregulering av PRC-modulen var nødvendig (Fig. 4 og S4 fig.), Noe som indikerer at fullføring av etableringen av IPSC-transkripsjonen nettverk er assosiert med nedregulering av PRC-modulen.
Egenskaper av selvfornyelse og pluripotency er forbundet med forbigående eller kontinuerlig oppregulering av kjernen og myc-moduler, men ikke PRC modul. C, Core moduler; P, PRC modul; M, Myc modulen.
stabile cellelinjer, TIG1, ICSC, og IPSC, ble preget av gjensidig aktivitet av kjerne og PRC moduler, mens ustabile iESCs viste samtidig oppregulering av de to modulene Dette tyder på at gener kategorisert i de to modulene fungert konkurransedyktig i omprogrammering. Spesielt, kjøp av selvfornyelse og pluripotency ble knyttet til oppregulering av Core og Myc, men ikke PRC, moduler (Fig. 4). Disse data indikerte at eiendommen til selvfornyelse og pluripotency kan bli overdratt til somatiske kjerner før full omprogrammering inn iPSCs. Oppdagelsen av at en viss cellepopulasjon av iESCs ble omprogrammert til iPSCs spontant støttet dette konseptet (Fig. S1B). Kriteriene for selvfornyelse og pluripotency er mye brukt for å definere menneskelige iPSCs. Imidlertid kan eies av selvfornyelse og pluripotency bli tillagt en rekke celletyper gjennom omprogrammering mer enn vi forventet, og det er nødvendig, men ikke tilstrekkelig, for å definere IPSC identitet.
For å omprogrammere somatiske celler til iCSCs, oppregulering av Myc-modulen er en viktig hendelse. Promoter-regioner som er bundet av MYC er forbundet med histon H3 lysin4 trimethylation (H3K3me3), som er positivt korrelert med dannelse av åpne kromatin, og genaktivering som et epigenetisk signatur [9]. Videre interagerer MYC med histon acetyltransferases, som er forbundet med transkripsjonsaktiverings komplekser [14]. Den Myc modulen forenkler celle metabolisme ved å aktivere generelle gener. Gener i Core-modulen er også oppregulert gjennom somatisk omprogrammering til iCSCs.
OCT4
,
SOX2
, og
Nanog
, som er sentrale kjernemodulen spillere, undertrykke utviklingshemmede viktige homeodomain proteiner gjennom co-okkupasjon av sine mål gener, mens fremme selv fornyelse og pluripotency ved positiv regulering av gener som koder for komponenter av viktige signalveier [15]. Tar disse i betraktning, Core og MYC moduler spille en rolle i overdragelse funksjonene i selvfornyelse og pluripotency på somatiske kjerner, mens kontinuerlig høy aktivitet av PRC-modulen i TIG1, iESCs, og iCSCs hindrer tilbakestilling av somatiske minne om noen utviklingshemmede viktige homeodomain proteiner (fig. 4). De polycomb undertrykkende komplekser, spesielt polycomb undertrykkende kompleks 2 inneholder Ezh2, Eed, og Suz12, er avgjørende repressors av gener i forbindelse med H3K27me3 [16]. For å tilbakestille den somatiske minne av gener med en homeodomain i iESCs og iCSCs og overskrive den ES celle-lignende epigenetisk signatur i omprogrammeres kjernen av iESCs, bør aktiviteten av PRC modulen reduseres kontinuerlig eller midlertidig. Relativt redusert aktivitet av PRC modul kan være en viktig begivenhet for omprogrammering somatiske celler til iPSCs. Det er spekulert i at mangel på H3K27me3 spiller viktige roller i å fremme omprogrammering fra pre-iPSCs å iPSCs i sen fase av omprogrammering [17]. Skjebnen til somatiske celler, enten de er omprogrammert til iCSCs eller iPSCs, kan bestemmes av aktiviteten i PRC-modulen, etter anskaffe evnen til selvfornyelse og pluripotency (Fig. 4).
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
Spontan differensiering av iESCs og konvertering til iPSCs. (A) Differensiering av iESCs etter langvarig kultur. (B) Konvensjonell iPSCs (høyre panel) ble samlet inn via en liten koloni (gul sirkel i venstre panel) vises i iESC kultur på høyt celletetthet
doi:. 10,1371 /journal.pone.0048699.s001 plakater (TIF )
Figur S2.
Global genuttrykk analyse av iESCs og iCSCs. Komparativ analyse av global genekspresjon profil i IPSC, menneskelige embryonale stamceller (ES) celle, iESC, første ICSC, og TIG1 linjer ved genekspresjon microarray analyse
doi:. 10,1371 /journal.pone.0048699.s002
( TIF)
Figur S3.
Expression of pluripotente markørproteiner i iESCs og iCSCs. Uttrykk av merket celleoverflateproteiner, CDH1, SSEA4, og TRA-1-60 ble oppdaget som grønn fluorescens, mens cellekjerner var så blå med DAPI
doi:. 10,1371 /journal.pone.0048699.s003 product: ( TIF)
Figur S4.
Gjennomsnittlig genuttrykk verdier (log2) av CPM moduler i somatiske celler og pluripotente stamceller
doi:. 10,1371 /journal.pone.0048699.s004 plakater (TIF)
Tabell S1.
Grunning for RT-PCR-analyser
doi:. 10,1371 /journal.pone.0048699.s005 plakater (DOC)
