Abstract
Prostatakreft mottakelighet har tidligere vært forbundet med avkorting germline varianter i genet
TP53AIP1
(tumor-proteinet p53 regulert apoptose induserende protein 1). For to tilsynelatende tilbakevendende mutasjoner (p.Q22fs og p.S32X) en bemerkelsesverdig OR på 5,1 ble rapportert for prostata kreftrisiko. Siden disse funnene ikke er godkjent så langt, genotypet vi p.Q22fs og p.S32X i to tyske serien med totalt 1,207 prostatakreft tilfeller og 1,495 kontroller. De avkorting varianter ble ikke signifikant assosiert med prostatakreft i ingen av de to kullene, og heller ikke i den kombinerte analysen [odds ratio (OR) = 1,16; 95% konfidensintervall (KI 95%) = 0,62 til 2,15; p = 0,66]. Carriers viste ingen signifikante forskjeller i familie historie av prostatakreft, alder ved diagnose, Gleason scorer eller PSA ved diagnose sammenlignet med ikke-bæreprostatakrefttilfeller. Den store prøven størrelsen på kombinerte gruppen avviser en høy-risiko effekt større enn 2,2 og indikerer en begrenset rolle
TP53AIP1
i prostatakreft predisposisjon
Citation. Luedeke M, Coinac jeg, Linnert CM, Bogdanova N, Rinckleb AE, Schrader M, et al. (2012) Prostate Cancer Risk endres ikke ved
TP53AIP1
kimcellelinje Mutasjoner i en tysk Case-Kontroll Series. PLoS ONE 7 (3): e34128. doi: 10,1371 /journal.pone.0034128
Redaktør: Paolo Peterlongo, IFOM, Fondazione Istituto FIRC di Oncologia Molecolare, Italia
mottatt: 18 januar 2012; Godkjent: 22 februar 2012; Publisert: 23 mars 2012
Copyright: © 2012 Luedeke et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. The Prostate kreft Genetics Project i Ulm har vært støttet av et National Cancer Institute subcontract tittelen «Prostate Cancer Følsomhet: Den ICPCG studien» – stipend # CA089600 – https://cancer.gov/. AM har vært støttet av Hannelore Munke fellesskap, en intern stipendiatstilling i Hannover Medical School. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Prostatakreft (PRCA) er den hyppigste svulst og den tredje største årsaken til kreft dødsfall hos menn i den vestlige industrialiserte verden [1]. I etiologien av PRCA en betydelig grad av arvbarhet antas å være involvert [2]. Hittil har mer enn 30 moderat risiko forbundet enkeltnukleotidpolymorfi blitt identifisert i genom vide assosiasjonsstudier, som forklarer en liten del av arve [3]. I kontrast, høy risiko gener som kan være ansvarlig for majoriteten av den observerte familiær opphopning er fortsatt ukjent.
Det er økende bevis for at gener involvert i DNA-skade svar spille en disponerende rolle for PRCA [4]. Dette omfatter DNA reparasjonsprosesser samt relaterte mekanismer som apoptotiske veier. TP53AIP1 (tumor protein p53 regulert apoptose induserende protein 1) spiller en nøkkelrolle i tumor suppressor p53 avhengige apoptotisk signalering. TP53AIP1 er lokalisert i mitokondriemembranen og formidler apoptose gjennom cytokrom
c
meldingen [5]. Ekspresjonen av
TP53AIP1
utløses ved alvorlige skader ved fosforylering av p53 ved Ser46 [6].
TP53AIP1
ble funnet å være mutert i PRCA vev i en fersk studie [7]. De to identifiserte avkorting mutasjoner p.Q22fs og p.S32X viste seg å være tilbakevendende bakterie linjer varianter og var sterkt assosiert med PRCA risiko (OR 5,1), og dermed tyder
TP53AIP1
som en lovende mottakelighet genet. I denne studien har vi vurdert risikoen effekten av disse to
TP53AIP1
mutasjoner i to uavhengige tyske PRCA kohorter.
Resultater
Det ble observert Begge trunkeringstegn varianter i våre kohorter. Mens rammeskifte allel p.Q22fs var til stede i 1,8% tilfeller og 1,6% kontroller, tull mutasjon p.S32X syntes å være forholdsvis sjelden (0,1% bærere i begge tilfeller og kontroller). Total, p.Q22fs og p.S32X var ikke forbundet med prostata kreftrisiko, hverken i den kombinerte serie Ulm og Hannover, og heller ikke i den enkelte prøve (tabell 1). Ingen bevis mot homogenitet ble observert mellom Ulm og Hannover serie (p = 0,39). Akkumulering i familiære prostata kreft tilfeller kan tyde på en høy risiko effekt mediert av variantene. Denne hypotesen ble testet i Ulm-serien, som inneholdt en samling av PRCA saker med positiv familiehistorie. Men ingen anrikning av mutasjonene ble observert i familiære tilfeller (6 ut av 377 (1,6%)) sammenlignet med sporadiske tilfeller (7 ut av 325 (2,1%)). Til slutt ble kliniske undergrupper av tilfellene definert for å belyse trender mot aggressive kreftformer. De mutasjonsbærere viste ingen signifikant forskjell fra ikke-bærere i alvorlighetsgraden av prostatakreft, som bestemmes av debutalder, Gleason score, eller PSA-nivå før behandling (tabell 2).
Diskusjoner
TP53AIP1
har blitt foreslått som en PRCA mottakelighet genet, siden to tilbakevendende germline mutasjoner (p.Q22fs og p.S32X) ble funnet betydelig overrepresentert blant PRCA pasienter innenfor en tidligere case-control studie [7]. For hensikten med bekreftelse, har vi genotypet p.Q22fs og p.S32X i ca 1200 prostatakreft tilfeller og 1500 kontroller, men vi klarte å gjenskape en sammenslutning av disse variantene med PRCA risiko.
De avvik mellom nåtid og den første studien kunne forklares av flere faktorer, blant annet variable etnisk bakgrunn, ulike utvalgsstørrelser og divergerende inklusjonskriteriene. Populasjons-spesifikke forskjeller er blitt tydelig i tilfellet med p.S32X, da denne varianten har blitt funnet sjelden i tysk probands, og kunne således ikke bli vurdert for sykdom krets. Den mest åpenbare forskjell mellom studieprøvene er frekvensen av varianten p.Q22fs, som dukket opp mye lavere i kontrollgruppen av Wang og medarbeidere sammenlignet med våre kontroller (0,3% mot 1,6%, henholdsvis). Verdt å merke seg, Wang et al. har rekruttert sunt, alder matchet kontroller, som kan være mer kraft å påvise assosiasjoner med prostatakreft risiko, til tross for sine 4,5 ganger mindre utvalgsstørrelsen. I kontrast, kan de umerkede kontroller for våre sammenligninger inneholder feilklassifisert prostata krefttilfeller i befolkningen prevalens, slik at ekte sykdomseffekter ville virke litt undervurdert. Men kraft beregninger tyder på at tapet av makt ved å velge befolkningen kontrollerer i stedet for «super-kontroller» ville være lite for en sykdom med en ca 10% forekomst, og at dette tapet kan bli effektivt kompensert for ved beskjedne økninger i utvalgsstørrelse [ ,,,0],8]. Det faktum at vi har observert nesten like bærefrekvenser i begge tilfeller og kontroller sterkt argumenterer mot en sammenslutning av p.Q22fs med PRCA. Basert på utvalgsstørrelser registrert her, en resulterende intervall på tillit utelukker enhver risiko effekt større enn 2,2 for p.Q22fs og p.S32X.
I subgruppeanalyser vi har vurdert predisponerende roller
TP53AIP1
mutasjoner spesielt for familiær og for aggressiv PRCA. Ingen akkumulering av p.Q22fs og p.S32X ble observert i familiære tilfeller forkaste hypotesen om en høy penetrans av disse mutasjonene. Til slutt, mangel på genotype /fenotype korrelasjon med hensyn til kliniske parametre argumenterer mot mottakelighet for mer alvorlige former for PRCA for mutasjonsbærere.
Bortsett fra avkorting mutasjoner undersøkt i denne studien, et bytte missense (s. A7V) i
TP53AIP1
har tidligere blitt studert i Hannover serien. Tilsvarende p.A7V variant heller ikke hadde vist en økt frekvens i prostata kreft tilfeller [9]. Vi konkluderer med at det er lite støtte i dag å betrakte
TP53AIP1
som en prostata kreft mottakelighet genet.
Materialer og metoder
probands
To serier av saker og kontroller ble slått sammen for denne studien, rekruttert ved universitetene i Ulm og Hannover, Tyskland. Alle probands var av kaukasisk opprinnelse. Studien ble godkjent av Institution Review Board of Ulm (Ethikkommission der Universität Ulm – stemme nummer 87/97) og Institution Review Board of Hannover (Ethikkommission der medizinischen Hochschule Hannover – stemme nummer 3894/05). Skriftlig informert samtykke, i henhold til institusjonens vurdering Boards, ble oppnådd.
Fra prostatakreft Genetics prosjekt Ulm et totalt antall av 377 familiær og 325 sporadiske tilfeller ble inkludert. Rekrutteringen ordningen med disse pasientene er beskrevet andre steder [10]. Median alder for diagnose var 63 år (spredning 40-84 år) og de fleste ble behandlet av radikal prostatektomi. For foreningen tester 995 befolknings kontroller fra Ulm ble brukt.
Hannover studie av prostatakreft (HaPCS) består av et sykehus-basert serie med 505 uselekterte pasienter med erytroaplasi som ble behandlet med brachyterapi mellom oktober 2000 og september 2007 Hannover Medical School [9]. Alle pasientene hadde biopsi-påvist adenokarsinom i prostata. Indikasjon for permanent brachyterapi ble klinisk lokalisert lav risiko tidlig erytroaplasi (cT2a eller mindre med en PSA-serumnivå 10 ng /ml og en Gleason score 7). Median alder ved diagnose var 67 år (spredning 42-82 år). Til sammenligning ble 504 genomiske DNA-prøver samlet inn fra voksne mannlige blodgivere i Hannover Medical School mellom 2006 og 2007.
Genotyping
Genomisk DNA, hentet fra perifert blod lymfocytter, servert som mal for genotyping . Den Ulm kohorten ble skrevet for p.Q22fs med høy oppløsning smelter (HRM) -metoden. I korte trekk: PCR ble utført med AmpliTaq Gold Mastermix (Applied Biosystems, Foster City, USA). Etter PCR-amplifisering 1,0 ul EVA-grønn (Biotium, Hayward, USA) ble tilsatt til hver prøve og dissosiasjon kurve ble målt på en 96-brønners 7900HT Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, USA). HRM data ble analysert med High Resolution Melt programvare v1.1 (Applied Biosystems, Foster City, USA). Den S32X varianten ble skrevet ved hjelp av en egendefinert SNP genotyping analyse (Applied Biosystems, Foster City, USA) sammen med TaqMan Genotyping Mastermix (Applied Biosystems, Foster City, USA) i et totalt volum på 5 pl på en 384-brønners 7900HT Fast Real- Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, USA). For positive kontroller vi brukte plasmider som svarer til avkorting allel henholdsvis p.Q22fs eller p.S32X og den normale allelet. Normal allel og mutante plasmider som ble blandet 01:01 for å etterligne heterozygote genotyper. Genotyping av Hannover-serien ble utført med rflp analyser med
Bgl
jeg for p.Q22fs og
Bfa
jeg for p.S32X, etter PCR forsterkning. Primer og probe-sekvenser, så vel PCR-betingelser vil bli gitt på forespørsel. Prøvene som ble identifisert til å bære p.Q22fs eller p.S32X variant av noen av de anvendte screeningmetoder ble verifisert ved Sanger-sekvensering.
Statistiske analyser
Foreninger mellom genotyper og sykdomsstatus ble vurdert med SAS 9.2 (SAS, Cary, USA). Odds ratio og nøyaktig 95% konfidensintervall er gitt, sammen med p-verdier ved Fishers eksakte test. For den kombinerte analyser homogenitet av odds ratioer der sjekkes av Breslow-dagers test og den kombinerte odds ratio ble beregnet med Mantel-Haenszel test. Den uparet t-test ble brukt for sammenligning av kliniske parametre i mutasjonsbærere og ikke-bærere og ble beregnet med Statview 5.01 (SAS, Cary, USA).
Takk
Manuel Luedeke er deltaker av International Graduate School in Molecular Medicine Ulm.
