Abstract
Bakgrunn
metabolsk syndrom egenskaper spiller en viktig rolle i utviklingen av tykktarmskreft. Adipokines, viktige metabolske syndrom cellulære mediatorer, når unormal, kan indusere kreftutvikling.
metodikk /hovedfunnene
For å undersøke om polymorfismer viktige adipokines,
adiponectin product: (
ADIPOQ
) og dets reseptorer, enten alene eller i kombinasjon med miljøfaktorer, er innblandet i kolorektal kreft, ble en to-trinns case-control studie utført. I den første fasen, evaluert vi 24 tag enkeltnukleotidpolymorfi (tag SNPs) over
ADIPOQ
ligand og to
ADIPOQ
reseptorer (
ADIPOR1 Hotell og
ADIPOR2
) blant 470 tilfeller og 458 kontroller. En SNP med lovende Foreningen ble deretter analysert i fase to blant 314 tilfeller og 355 kontroller. I vår studie,
ADIPOQ
rs1063538 var konsekvent assosiert med økt kolorektal kreftrisiko, med en odds ratio (OR) på 1,94 (95% KI: 1,48 til 2,54) for CC genotype sammenlignet med TT genotype. I to-faktor-genet-miljø interaksjon analyser, rs1063538 presenteres signifikante interaksjoner med røykestatus, familiehistorie med kreft og alkoholbruk, med ORS av 4,52 (95% KI: 2,78 til 7,34), 3,18 (95% KI: 1,73 til 5,82) og 1,97 (95% CI: 01.27 til 03.04) for røykere, personer med familiehistorie med kreft eller drikker med CC genotype sammenlignet med ikke-røykere, personer uten familiehistorie med kreft eller ikke-drikkere med TT genotype, henholdsvis. Multifaktor gen-miljø interaksjoner analyse viste signifikante interaksjoner mellom
ADIPOQ
rs1063538,
ADIPOR1
rs1539355, røykestatus og BMI. Individer som bærer en, to og minst tre risikofaktorer presenteres 1,18 ganger (95% CI: 0,89 ganger 1,58 ganger), 1,87 ganger (95% CI: 1,38 ganger to2.54 ganger) og 4,39 ganger (95% CI: 2,75 ganger til 7,01 ganger) økte tykktarmskreft sammenlignet med dem som uten risikofaktor, henholdsvis (
P
trend 0,0001)
Konklusjoner. /Betydning
Våre resultater tyder på at varianter i
ADIPOQ
kan bidra til økt tykktarmskreft risiko i kinesisk og dette bidraget kan endres av miljøfaktorer, som røyking status, familiehistorie med kreft og BMI
Citation. Liu L, Zhong R, Wei S, Yin JY, Xiang H, Zou L, et al. (2011) Interaksjoner mellom genetiske varianter i
Adiponectin
,
Adiponectin
Receptor en og miljømessige faktorer på risikoen for tykktarmskreft. PLoS ONE 6 (11): e27301. doi: 10,1371 /journal.pone.0027301
Redaktør: Takeo Yoshikawa, Rikagaku Kenkyusho Brain Science Institute, Japan
mottatt: 5 juli 2011; Godkjent: 13 oktober 2011; Publisert: 07.11.2011
Copyright: © 2011 Liu et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av Natural Science Foundation of China National [NSFC-30972534 til NS, NSFC-81001275 og 81171878 til MX https://www.nsfc.gov.cn/Portal0/default124.htm] og Program for New Century gode talenter i university [NCET-10-0388 til MX https://www.edu.cn/]. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
tykktarms~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP er en av de ledende årsak til kreft sykelighet og dødelighet, og står for anslagsvis 1, 330, 000 nye tilfeller og 608 000 kreftdødsfall i 2008 på verdensbasis [1]. Kolorektal kreft har vært lenge utbredt i vestlige populasjoner og ble beregnet til å forårsake 142, 570 nye tilfeller og 51, 370 kreftdødsfall i Unite State i 2010 [2]. I de siste tiårene, forekomsten av tykktarmskreft økt bemerkelsesverdig i Kina. For eksempel opplevde utviklet område i Kina som Shanghai en årlig økning på 4,2% i kolorektal kreftforekomst, som var enda betydelig høyere enn gjennomsnittlig økning på 2% på verdensbasis i løpet av de siste tjue årene [3].
selv om årsaks av tykktarmskreft ikke er helt forstått, epidemiologiske studier funnet at vestlige kostholdet og atferdsmønstre, slik som høy fett, lite fiber inntak og mangel på fysisk aktivitet, var den viktigste årsaken til økende forekomst av tykktarmskreft i utviklingsland. Metabolsk syndrom, en konsekvens av vestlig kosthold og adferd, og kjennetegnes av fedme, insulinresistens og hypertensjon, ble deretter vist å bidra til tykktarmskreft [4], [5], [6]. Epidemiologiske studier har rapportert en økt risiko for tykktarmskreft hos overvektige personer sammenlignet med normalvektige individer [7], [8]. Tilsvarende markører for insulinresistens, så som høye sirkulasjonsnivåer av C-peptid og insulin-lignende vekstfaktorbindende protein 1 (IGFBP-1), ble vist å være direkte forbundet med kolorektal kreft risiko [9], [10]. I mellomtiden, observasjon av en økologisk sammenheng mellom adipokines sekresjon lidelser og metabolsk syndrom egenskaper, har gytt en rekke epidemiologiske studier av sammenhengen mellom viktige adipokines, spesielt mellom adiponectin (ADIPOQ) og dets reseptorer (ADIPORs) med fedme og insulinresistens, som viste at sirkulerende ADIPOQ nivået var signifikant negativt, mens ADIPORs nivå var positivt, assosiert med metabolske syndrom egenskaper [11], [12].
Gitt sammenhengen mellom metabolske syndrom egenskaper og tykktarmskreft og nøkkelrolle
ADIPOQ Hotell og dens reseptor gener i utviklingen av fedme og insulinresistens, gryende interesse var fokusert på rollen som
ADIPOQ Hotell og dens reseptor gener i kolorektal kreftutvikling. In vitro, ADIPOQ present tendensen av veksthemming og apoptose induksjon i kolorektal kreft cellelinjer [13]. In vivo mus med forstyrrelser i serum ADIPOQ utviklet flere tarmsvulster [14]. Nylig har flere bevislinjer viste invers sammenheng mellom serum ADIPOQ og tykktarmskreft [15], [16], [17]. I en prospektiv, nestet case-control studie ble menn i den høyeste ADIPOQ kvintilen funnet å ha en 68% lavere risiko for tykktarmskreft sammenlignet med menn i den laveste kvintil (relativ risiko [RR], 0,42; 95% konfidensintervall [CI ], 0,23 til 0,78) [18]. Anticancer rolle ADIPOQ var hovedsakelig indusert ved dets reseptorer, som har vist seg å undertrykke tykktarmskreftcellelinjer (inkludert HCT116, HT29 og LoVo) proliferasjon via ADIPOR1- og -R2-mediert 5′-AMP-aktivert proteinkinase (AMPK) . Videre knockdown av
ADIPORs
kunne avlaste undertrykkende effekt av ADIPOQ på veksten av tykktarmskreftceller [19]. I tillegg kan overekspresjon av ADIPORs aktivere peroksisom proliferator-aktiverte reseptor-a (PPAR-a), som ble rapportert å spille en rolle i hemming av FAS og aktivering av epidermal vekstfaktor-reseptor-familien for å fremme kreft formasjon [20], [21 ]. Dessuten har nyere epidemiologiske studier også påvist forhøyet uttrykk for ADIPORs i kolorektal karsinom enn i normal gastrointestinal vev [22].
Flere polymorfismer i
ADIPOQ Hotell og dets reseptor gener har vist seg å påvirke ekspresjon av disse genene og påfølgende risiko for kreft [23], [24], [25]. Kaklamani et al. viste at noen polymorfismer av
ADIPOQ
og dens reseptor gener assosiert med brystkreft [26], prostata kreft [27] og endetarmskreft [28] risiko i kaukasisk. Men til dags dato, disse har vært få studier som tar for seg rollen til genetiske varianter i
ADIPOQ Hotell og dens reseptor gener som kreft resistensfaktorer i kinesiske befolkningen. Derfor utførte vi en to-trinns case-control studie til systemisk evaluere enkeltnukleotidpolymorfi (SNPs) i
ADIPOQ Hotell og dens reseptor gener som en prediktor for tykktarmskreft i kinesiske befolkningen.
resultater
kjennetegn på studiepopulasjonen
Tabell 1 viser egenskapene til enkeltpersoner som inngår i to-trinns case-control studie. Det var ingen signifikante forskjeller i fordelingen av alder, kjønn, alkoholbruk og BMI mellom saker og kontroller i begge scenen. Median alder var 58 år (interkvartilt område, 48-67 år) og 56 år (interkvartilt område, 46-67 år) i kontroller i første og andre trinn, sammenlignet med 58 yeas gamle (interkvartilt område , 51-67 år) og 59 yeas gamle (interkvartilt område, 49-68 år) i tilfeller, henholdsvis. Flere røykere ble observert i tilfeller enn i kontrollgruppen (odds ratio [OR] = 1,95, 95% KI: 1,56 til 2,45 i kombinert analyse). I tillegg flere tilfeller besatt familiehistorie med kreft i begge case-kontrollstudier (OR = 1,78, 95% KI: 1,34 til 2,38 i kombinert analyse).
Risiko forbundet med individuelle SNP
Siden 2 SNPs i
ADIPOR1 Hotell og en SNP i
ADIPOR2
ble sviktet i utformingen av PCR-primere i den første fasen, totalt 24 tag SNPs i
ADIPOQ
og dens reseptor gener ble analysert, og derfor cut-off point for
P
verdien ble satt til 0.002 for fler sammenligning i den første fasen. Alle SNPs montert Hardy-Weinberg likevekt mellom kontrollene. Frekvensen av T-allel var 0,55 og 0,54 i kontroller i den første og andre trinn, sammenlignet med 0,46 og 0,46 i de tilfeller, respektivt. I den første fasen, ble en mulig sammenheng funnet (
P
0,001).
ADIPOQ
rs1063538 CC genotype var assosiert med økt kolorektal kreftrisiko, med en OR på 1,94 (95% KI: 1,37 til 2,74) sammenlignet med TT genotype. I valideringsstudien (trinn 2), ble rs1063538 også assosiert med økt kolorektal kreftrisiko, med en OR på 1,91 (95% KI: 1,23 til 2,95) for CC vs TT genotype. Kombinert analyse av de 2 studiene viste at rs1063538 var signifikant assosiert med økt kolorektal kreftrisiko. Personer som frakter rs1063538 CC genotype eller C-allelet presenteres 1,94 ganger (95% CI: 1,48 ganger 2,54 ganger) og 1,79 ganger (95% CI: 1,43 ganger til 2,25 ganger) økte tykktarmskreft sammenlignet med de som båret TT genotype, henholdsvis (tabell 2). For å teste den statistiske styrken i vår utvalgsstørrelse, beregnet vi makt til å oppdage en OR på 1,90 ved første feilen på 0,002 i tosidig test ved hjelp av en prevalens på 0,55 (prevalens av T allel av rs1063538 i kontroller). Resultatene var som følger: kombinert studie, strøm = 0,99; Stage 1, power = 0,94; og Stage 2, power = 0,81. Resultater for ikke-signifikante SNPs er vist i tabell S1.
To-faktor-genet-miljø interaksjon og subgruppeanalyser
Å utforske mulige interaksjoner mellom
ADIPOQ
rs1063538 og BMI, røykestatus, alkoholbruk og familiehistorie med kreft, utførte vi to-faktor-genet-miljø interaksjon analyser av Logistic Regression i samlet befolkning. Resultatene er vist i Tabell 3. Røykere bærer CC genotype betydelig økt tykktarmskreft sammenlignet med ikke-røykere bærer TT genotype, med en OR på 4,52 (95% KI: 2,78 til 7,34). Personer med familiehistorie med kreft huse CC genotype var også assosiert med betydelig økt kolorektal kreftrisiko, med en OR på 3,18 (95% KI: 1,73 til 5,82) sammenlignet med personer uten familiehistorie med kreft bærer TT genotype. Alkohol brukere med CC genotype presenteres 1,97 ganger (95% CI: 1,27 ganger til 3,04 ganger) økte tykktarmskreft sammenlignet med de som aldri drikker bærer TT genotype. Vi har også gjennomført stratifisert analysene for
ADIPOQ
rs1063538 å undersøke hvilken rolle den polymorfisme i annen undergruppe befolkningen. I aldri har røykt, CC genotype betydelig økt tykktarmskreftrisiko, med en OR på 1,74 (95% KI: 1,26 til 2,40) sammenlignet med TT genotype. Personer uten familiehistorie med kreft huse CC genotype av rs1063538 viste en betydelig økt risiko for tykktarmskreft, med en OR på 1,95 (95% KI: 1,44 til 2,65) sammenlignet med TT genotype. I aldri alkohol brukere, CC genotype betydelig økt tykktarmskreftrisiko, med en OR på 1,87 (95% KI: 1,35 til 2,58) sammenlignet med TT genotype. Videre, i undergruppe av BMI 25 kg /m
2, personer med CC genotype av rs1063538 var signifikant assosiert med økt kolorektal kreftrisiko, med en OR på 2,05 (95% KI: 1,45 til 2,90) sammenlignet med personer som bærer TT genotype (tabell 4).
Multifaktor gen-miljø interaksjoner ved klassifisering og regresjon Trees
Vi brukte dataene i den første fasen til allment utforske potensialet gen-miljø interaksjoner ved hjelp Klassifisering og regresjon Trees (CART). I CART analyse ble den første delingen av rotnoden røykestatus, og stadig røykerne hadde mye høyere kreft prevalens enn aldri røykere (
P
0,05), noe som tyder på at røyking status var den sterkeste faktoren i kolorektal kreft mottakelighet. Videre inspeksjon av klassifisering trestruktur konsekvent angitt
ADIPOQ
rs1063538 var den sterkeste splitt, uavhengig av røykestatus. Kombinasjonen av stadig røyking og rs1063538 CC genotype utstilt den høyeste risikoen for tykktarmskreft, med en 82,4% pasient rate, mens kombinasjonen av aldri å røyke og rs1063538 T-allelet present lavest risiko for tykktarmskreft, med en 41,4% pasient rate. I ever røykere bærer rs1063538 T-allelet,
ADIPOR1
rs1539355 var den sterkeste effekten forbundet faktor, og kombinasjonen av stadig røyke, rs1063538 T-allel og rs1539355 G allel viste en nest høyeste risikoen for tykktarmskreft, med en 66,7% pasient rate. I aldri har røykt bærer
ADIPOQ
rs1063538 CC genotype, BMI var den sterkeste effekten forbundet faktor, og kombinasjonen av aldri å røyke, rs1063538 CC genotype og ikke-overvektige presentert en 52,4% pasient rate (figur 1). (Mottaker drift karakteristikk [ROC] kurve i en 10-fold kryssvalidering for CART analyse er gitt som Figur S1-området under kurven var 0,62, det er 95% KI:. 0,59 til 0,66,
P
. 0.001)
Terminal noder viser antall deltakere i Stage 1. Disease status ble klassifisert som skaper (1) og kontroller (0)
samlede virkningen av risikofaktorer
for å forbedre statistisk styrke, ble data fra kombinerte analysen brukes til å oppdage den kombinerte effekten av risikofaktorer er identifisert av CART. Siden
ADIPOR1
rs1539355 presenteres interaksjoner med andre faktorer, men den viktigste effekten av denne polymorfisme ikke ble oppdaget i den første fasen, vi fortsatt gjennomført genotyping for SNP i trinn 2 (tabell S2), som ville bidra til å gi data for factor-dosering effekt analyse i samlet befolkning. For å evaluere den kombinerte effekten av flere faktorer assosiert med tykktarmskreft, vi summert antall risikofaktorer for røykestatus,
ADIPOQ
rs1063538, BMI og
ADIPOR1
rs1539355 i hver enkelt og analysert den resulterende kolorektal kreftrisiko. For miljøfaktorer, røyking og BMI≥25 kg /m
2 ble valgt som risikofaktorer. De genotyper av
ADIPOQ
rs1063538 og
ADIPOR1
rs1539355 ble kategorisert som binære variabler i henhold til de delte resultatene av CART, nemlig rs1063538 CC, og rs1539355 AG eller GG genotype ble sett på som risikofaktorer. Vi delte den samlede befolkningen i fire undergrupper basert på antall risikofaktorer. Vi fant en signifikant dose effekt forening for økt kolorektal kreftrisiko, med et økende antall risikofaktorer (
P
for trend 0,0001). Sammenlignet med personer uten risikofaktor, enkeltpersoner bærer en, to og minst 3 risikofaktorer viste en gradient av økt tykktarmskreft risiko med ORS av 1,18 (95% CI: 0.89-1.58), 1,87 (95% KI: 1,38 til 2,54) og 4,39 (95% KI: 2,75 til 7,01)., (Tabell 5)
Diskusjoner
Denne studien systematisk undersøkt sammenhengen mellom et sett av polymorfismer i
ADIPOQ Hotell og dens reseptor gener og tykktarmskreft. Den store funn var signifikant sammenheng av en polymorfisme i
ADIPOQ plakater (rs1063538) med økt kolorektal kreftrisiko. Videre kolorektal kreft rollen
ADIPOQ
rs1063538 ble endret av miljøfaktorer som røyking status, familiehistorie med kreft, alkoholbruk og BMI, og den kombinerte effekten av flere mulige faktorer, blant annet røyking,
ADIPOQ
rs1063538, BMI og
ADIPOR1
rs1539355, viste en signifikant dose effekt i et gen-miljø interaksjon tilnærming.
i vår hovedeffektanalyse,
ADIPOQ
rs1063538 var den eneste SNP viste en statistisk signifikant sammenheng med økt kolorektal kreftrisiko. Denne foreningen er biologisk plausibel. Først
ADIPOQ Hotell og dens reseptor genene ble nylig funnet å spille en rolle i kreftutvikling, spesielt i fedme-assosiert malignitet. Det har vist seg at ADIPOQ kunne undertrykke veksten av visse maligne celler ved å regulere AMPK eller β-catenin-Wnt vei, som begge utøvet kraft i karsinogenese [29]. ADIPOQ kan også bidra til kreft ved å fremme apoptose. ADIPOQ nivå har vært assosiert med aktiveringen av apoptotiske enzymer i caspase kaskade, noe som førte til celledød, modulering av ekspresjonen av flere apoptose-relaterte gener i myelomonocytisk celler, og reduksjon av tumor neovaskularisering [30]. Høyt nivå ADIPOQ eksponering har vist seg å hemme spredning av kolorektal kreft cellelinjer [13], mens knockout av
ADIPOQ
kan fremme tumorvekst hos mus ved å redusere makrofag infiltrasjon [31]. Dessuten har epidemiologiske studier funnet underexpression av ADIPOQ som finnes i et bredt utvalg av humane kreftformer, noe som sterkt støttet betydningen av ADIPOQ i suppresjon av kreft initiering og utvikling [32]. For det andre er de SNP rs1063538 ligger innenfor 3’UTR regionen
ADIPOQ Hotell og tidligere studier har vist at polymorfismer i 3’UTR presenteres betydelig innvirkning på ADIPOQ nivå. For eksempel ble rs6773957 og rs3774261 funnet å være de mest sterkt assosiert SNPs i amerikansk i et genom-wide linkage og foreningen skanninger av ADIPOQ nivå, og som begge ligger i 3’UTR av dette genet og tatt til fange av rs1063538 [33 ]. Gitt den viktige rollen ADIPOQ i regulering av celleproliferasjon og apoptose [34], [35], og rollen til 3’UTR i reguleringen av genekspresjon, ble det utledet at polymorfismer i 3’UTR av
ADIPOQ
kan spille en rolle i tykktarmskreftutvikling, som ble dokumentert ved Kaklamani et al. [26]. Deretter kan vi slutte at rs1063538 kan påvirke tykktarmskreft med sin koblingsulikevekt med andre SNPs i 3’UTR å regulere uttrykket av
ADIPOQ
, men det forble å bli bekreftet. I tillegg, er det også sannsynlig at dette SNP er bare en kode SNP som er i koblingsulikevekt med den virkelige årsaks SNP. Den virkelige årsaks SNP kan være lokalisert i den kodende region og påvirke proteinets funksjon på posttranslational nivå [36].
I tillegg til den beskjedne viktigste effekten av
ADIPOQ
rs1063538, vi også observert signifikant virkning av gen-miljø interaksjoner, som var i stand til å forsterke den beskjedne effekten av enkelt genetisk variant, og forbedre prediktiv kraft. I to-faktor-genet-miljø interaksjon analyser og stratifiserte analyser, har vi funnet at personer som bærer
ADIPOQ
rs1063538 CC genotype presenteres forskjellig kolorektal kreftrisiko i ulike røykestatus, familiehistorie med kreft kategorier, alkoholbruk og BMI. Konsekvent, en signifikant interaksjon ble også påvist blant
ADIPOQ
rs1063538,
ADIPOR1
rs1539355, røykestatus og BMI i CART-analyse. Selv om statistiske interaksjoner ikke nødvendigvis innebærer biologiske interaksjoner, flere linjer med bevis tyder på at våre funn kan være biologisk plausibel. Som en av de viktigste adipokines, ADIPOQ virker ved tverrbinding med sine reseptorer, ADIPOR1 og ADIPOR2 [32]. Tidligere studier har dokumentert at ADIPOQ trykt tykktarmskreft cellelinjer (inkludert HCT116, HT29 og LoVo) spredning via ADIPOR1- og R2-mediert AMPK, mens knockdown av ADIPORs som ADIPOR1 lettet undertrykkende effekt av ADIPOQ på veksten av kreftceller [19]. Selv om
ADIPOR1
rs1539355 ble ikke identifisert funksjonelle SNP, var dette polymorfisme også funnet å være assosiert med redusert insulinresistens, noe som tyder på det kan være noen sammenheng mellom denne polymorfisme og genekspresjon eller funksjon [37]. Dessuten kunne de
ADIPOR1
rs1539355 markere rollen
ADIPOQ
SNPs i fedme genotype [38]. Siden både insulin resistens og fedme genotyper ble vist i forbindelse med kolorektal kreftrisiko, det var rimelig å tro samspillet mellom varianter av
ADIPOQ Hotell og dets reseptorgenene spilt en rolle i kreftutvikling av tykktarmskreft [39]. I tillegg til samspillet inne
ADIPOQ
signalveien, funksjonen til
ADIPOQ Hotell og dets reseptor gener ble også modifisert av noen tykktarmskreft risiko forbundet miljøfaktorer, som røyking status og BMI. Tidligere studier har vist at fedme potensielt kan påvirke aktiveringen av
ADIPOQ
og dens reseptor-gener og påfølgende risiko for kreft [40], [41]. For eksempel, Tang et al. indikerte at en positiv sammenheng med genetiske varianter av
ADIPOQ
med prostatakreft var begrenset til personer som var overvektige [42] og Petridou et al. viste at kvinner med høy BMI og lav plasma ADIPOQ hadde 6,5 ganger økt risiko for livmorkreft sammenlignet med kvinner med normal BMI og høyere ADIPOQ konsentrasjoner [43]. Røyk eksponering ble også vist å hemme mRNA uttrykk for
ADIPOQ
i adipocytter. Sammenlignet med ingen, ble passiv røyking på mer enn 10 sigaretter per dag forbundet med lav ADIPOQ nivå [44]. Omvendt, ble røykeavvenning funnet å være assosiert med økt plasma ADIPOQ nivå [45], [46]. Familie historie av kreft og alkoholbruk ble også etablert risikofaktorer for kolorektal kreft, men studier for påvirkning av disse to faktorene i uttrykket av
ADIPOQ Hotell og dets reseptorer genene var begrenset. Selv om det var fortsatt noen mekanisme bør tas opp, kan interaksjonen avsløre en biologisk markedsføringen av disse faktorene.
Det er noen begrensninger i vår studie. Først denne to-trinns case-control studie er sykehusbasert og utvalgsskjevhet kan eksistere, ettersom kontrollene var fra en helseundersøkelse befolkning som kanskje ikke er ideelt representanter for geografisk matchet befolkningen i tilsvarende miljøeksponering. Men kontrollene kom fra samme region med saker og ble tilfeldig samplet, noe som kan redusere effekten av utvalgsskjevhet. For det andre er informasjon om pasientens BMI fås ved første diagnose av tykk- og endetarmskreft. Siden kreftutvikling er en kompleks og kroniske forbruk, kan den siste BMI bringe noen skjevhet til foreningen av fedme og tykktarmskreft. Men en fersk stor case-control studie publisert i Journal of the National Cancer Institute indikerte at BMI basert på nyere selvrapporterte tiltak rapportert lignende resultat med BMI fra prospektive studier i tykktarmskreft [47], [48], [49] . Derfor tror vi nylig BMI i vår studie vil ikke bringe betydelig skjevhet til resultatene av vår undersøkelse. For det tredje er det noen mangler data i miljøeksponering i både case-kontrollstudier, for eksempel familie historie av kreft, siden deltakerne ikke kunne gi nøyaktig informasjon om relaterte elementer under intervjuet. Derfor gjennomførte vi gen-miljø interaksjoner analyser i samlet befolkning, som kan bringe mer statistisk styrke til resultatene og redusere skjevhet forårsaket av manglende data. Fjerde, er utvalgsstørrelsen ikke stor nok for noen statistisk analyse, spesielt for noen subgruppeanalyser, som kan bringe noen innvirkning på stabiliteten og påliteligheten av resultatene. Så videre studier med mer utvalgsstørrelse, flere SNPs og funksjonell utforske garanteres å identifiseres rollen som
ADIPOQ
genet familie og gen-miljø interaksjoner i kolorektal kreftutvikling.
Oppsummert er dette første studien som systematisk vurdere effekten av kjønnsceller genetiske varianter i
ADIPOQ Hotell og dens reseptor gener og gen-miljø interaksjoner på tykktarmskreft på kinesisk. Vi fant en SNP i
ADIPOQ plakater (rs1063538) var assosiert med økt tykktarmskreft risiko og potensielle gen-miljø interaksjoner kan spille viktigere rolle i regulering av tykktarmskreft. Identifisering av nye genetiske resistensmarkører tykktarmskreft etiologi vil ikke bare hjelpe oss å forstå biologien til tykktarmskreftutvikling, men kan også integreres med kjent klinisk, epidemiologisk og genetisk kunnskap til å hjelpe oss med å forbedre risiko prediksjon av tykktarmskreft.
Materialer og metoder
Etikk uttalelse
undersøkelsen ble informert samtykke innhentes fra alle finaledeltakere og godkjent av gjennomgangen styret i Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology.
Studier deltakere
En to-trinns case-control studiedesign ble benyttet i denne undersøkelsen. Den første case-control studie ble brukt til å evaluere
ADIPOQ Hotell og dets reseptor gener polymorfismer i forhold til tykktarmskreftrisiko, og deretter å validere lovende assosiasjoner hos andre uavhengige befolkningen. I den første fasen, ble tilfeller nylig diagnostisert med tykktarmskreft mellom 1 januar 2007 og 31 november 2009 i åttende Hospital i Wuhan, uten en tidligere kreftdiagnose, og i live på tidspunktet for intervjuet. Rekruttering for trinn 2 skjedde mellom 1 januar 2009 til 31. august 2010 i Taihe Hospital i Shiyan, og inkludert kriteriene var samme med saker rekruttert i Stage 1. Kontroller ble valgt fra helseundersøkelse befolkningen i samme sykehuset i samme periode og ofte matchet med saker etter alder (± 5 år) og kjønn i hvert trinn. Ingen av kontrollene hadde noen personlig historie av kreft, fordøyelsessykdommer, hypertensjon eller diabetes ved tidspunktet for blodtapping, som ble fastslått med et spørreskjema fullført av hver friske kontroll. Blodprøve og personlige opplysninger om kjønn, fødselsår, røykestatus, alkoholbruk, fersk vekt, høyde og familiehistorie med kreft ble samlet inn fra hver deltaker, og ytterligere informasjon om alder ved tykktarmskreft diagnose og kliniske karakteristika ble spilt inn fra saker. Av kvalifiserte deltakere, 470 tilfeller (94,0%) og 458 kontroller (91,6%), og 314 tilfeller (87,22%) og 355 kontroller (98,61%) fullførte i-person intervjuer og donert blodprøver i første og andre trinn, henholdsvis.
SNP utvalg
totalt 100 SNP markører med en mindre allel frekvens (MAF) ≥0.1 av
ADIPOQ Hotell og dets reseptorgenene var ned fra HapMap (http: //www.hapmap.org/) med fase 1 og fase 2 data Slipp 24 (Build 36,3) for den kinesiske befolkningen (kinesiske Han fra Beijing-CHB). Tag SNPs ble valgt for hvert gen ved hjelp Tagger i Haploview (https://www.broadinstitute.org/haploview/haploview). Vi brukte parvis modus og valgt et minimalt sett med markører, slik at alle alleler å bli tatt ville være korrelert med en r
2≥0.8 med en markør i settet.
ADIPOQ
,
ADIPOR1 Hotell og
ADIPOR2
ga 10, 9 og 8 tag SNPs, henholdsvis. (Detaljert informasjon vises i tabell S1).
Polymorphism analyse
Genomisk DNA fra perifere blodprøver ble isolert ved hjelp av Blood Genomisk DNA Purification kit (Tiangen Biotech, Beijing, Kina) etter produsentens protokoll . Genotyping ble gjennomført i to faser.
I den første fasen, Sequenom MassARRAY plattform (Sequenom San Diego, CA, USA) ble brukt for høy gjennomstrømming genotyping og analyse utforming [50]. Genotyping ble utført ved anvendelse av iPLEX-kjemi på en matrise assistert laserdesorpsjon /ionisering time-of-flight (MALDI-TOF) massespektrometer. Multiplex SNP analyser ble designet ved hjelp SPECTRODESIGNER programvare. PCR reaksjoner, sykkelforhold og post-PCR forlengelse reaksjoner ble utført som produsentens protokoll. De iPLEX Reaksjonsproduktene ble behandlet med den SpectroCLEAN (Sequenom) resin for å fjerne salter og flekket på en 384 SpectroChip, og så behandlet og analysert ved hjelp av MALDI-TOF massespektrometer. Genotypene ble kalt bruker MassARRAY Typer 4.0-programvaren [51]. For hver 384-brønners plate, ble 20 prøver duplisert og 4 brønner ble arkivert med H
2o (blank) for å kryssjekke forurensning og påliteligheten til systemet. En hel plate ble ansett å ha mislyktes hvis: (i) ingen SNPs hadde gått takst på 80%; og /eller (ii) hvis den suksessrate på duplikate kontroller var mindre enn 99,5% og den for emnet 90%; og /eller (iii) suksessrate på blank sjekk alene hadde vært 75%. SNPs ble fjernet fra analysen når: (i) de var ikke ringe i minst 80% av pasienter og kontroller; og /eller (ii) de var monomorf, da disse er uninformative; og /eller (iii) sine genotypefrekvensene avvek fra Hardy-Weinberg likevekt (HWE) forventning, sannsynligvis på grunn av feil i genotype [52].
I den andre fasen, polymorfismer ble vurdert ved hjelp av 5′-nuklease ( Taqman) analyse (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Primere og prober ble designet av Primer Express 3.0 (Applied Biosystems). Reaksjonene ble ferdigstilt og lese i en 7900 HT TaqMan sekvens detektorsystemet (Applied Biosystems). Amplification blanding (12,5 ul) av polymerase-kjedereaksjon inneholdt 50 ng DNA, 900 nM av hver forover og revers primer, 300 nM av hver spesifikk probe, og 6,25 mL av Taqman Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA) . Amplifikasjon ble utført under følgende betingelser: 95 ° C i 10 minutter etterfulgt av 45 syklus på 94 ° C i 30 s og 62 ° C i 1 min. Data ble analysert ved hjelp Allelic Diskriminering Program (Applied Biosystems). Samtalen sats var 99,2%. Totalt 10% prøvene ble genotypet i duplikat og viste 100% samstemmighet.
Statistisk analyse
Pearsons χ
2 test ble brukt for å sammenligne forskjellene i fordelingen av kategoriske variabler (kjønn , røykestatus, alkoholbruk og familiehistorie med kreft) og enten Wilcoxon rank sum test eller Student
t
-test ble brukt for å fortsette variabler (alder, kroppsvekt index [BMI]), der det er hensiktsmessig. I denne studien ble BMI kategorisert som overvektig (BMI≥25 kg /m
2) og ikke-overvektige (BMI 25 kg /m
2) [53]. Personer som hadde røykt på mindre 100 sigaretter i sin levetid ble definert som røykere, og resten ble kalt ikke-røykere [54].
