Abstract
Tidligere studier har vist at
c-MET
er overuttrykt i tilfeller av aggressiv blærekreft (BCA). Identifisering av crosstalk mellom
c-MET Hotell og annen RTK som
AXL Hotell og
PDGFR
tyder på at
c-MET
nettverks gener (
c-MET Anmeldelser –
AXL Anmeldelser –
PDGFR
) kan være klinisk relevant for BCA. Her undersøker om det uttrykk for
c-MET
nettverks gener kan brukes til å identifisere BCA pasienter med økt risiko for å utvikle aggressiv sykdom.
In vitro
analyse,
c-MET
knockdown trykt celleproliferasjon, invasjon, og migrasjon, og økt følsomhet for cisplatin-indusert apoptose. I tillegg
c-MET
nettverk genet (
c-MET
,
AXL
, og
PDGFR
) uttrykk lov diskriminering av BCA vev fra normal kontroll vev og syntes å forutsi dårlig sykdomsprogresjon i ikke-muskel invasiv BCA pasienter og dårlig total overlevelse i muskel invasiv BCA pasienter. Disse resultatene tyder på at
c-MET
nettverk genuttrykk er en roman prognostisk markør for å forutsi hvilke BCA pasienter har en økt risiko for å utvikle aggressiv sykdom. Disse genene kan være en nyttig markør for co-targeting terapi, og forventes å spille en viktig rolle i å forbedre både respons på behandling og overlevelse av BCA pasienter
Citation. Kim YW, Yun SJ, Jeong P, Kim SK, Kim SY, Yan C, et al. (2015)
c-MET
Network som Novel Prognostic Marker for å forutsi blærekreftpasienter med økt risiko for å utvikle aggressiv sykdom. PLoS ONE 10 (7): e0134552. doi: 10,1371 /journal.pone.0134552
Redaktør: Renato Franco, Istituto dei Tumori Fondazione Pascale, ITALIA
mottatt: 26 mars 2015; Godkjent: 13 juli 2015; Publisert: 30.07.2015
Copyright: © 2015 Kim et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering: Dette arbeidet ble støttet av en National Research Foundation of Korea (NRF) finansiert av den koreanske regjeringen (MSIP; http:. //www.msip.go .kr /web /main /main.do) (nr NRF-2014R1A2A1A09006983) og i grunn Science Research Program gjennom National Research Foundation of Korea (NRF) finansiert av departementet for utdanning, vitenskap og teknologi (http: //www.moe.go.kr/main.do)(2012R1A1A4A01008753). Også dette arbeidet ble delvis støttet av R01DK100974; U01 DK103260; U24 DK097154; NIH NCATS UCLA CTSI UL1TR000124; en Steven Spielberg Discovery Fund i Prostate Cancer Research Career Development Award; en IMAGINE NO IC Research Program Award (til JK). JK er en American Urological Association Foundation Forskningsstipendiat og Harvard Medical School Eleanor og Miles Shore Scholar. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Overuttrykte reseptor tyrosin kinaser (RTK) oppstår i tilfeller av aggressiv blærekreft (BCA); dermed RTK-målretting behandlinger anbefales for slike pasienter [1, 2]. Farmakologisk hemming av RTK aktivitet (f.eks med gefitinib) er gullstandarden behandling for BCA pasienter, selv om den har hatt begrenset suksess [3, 4].
c-MET
proto -oncogene, som er lokalisert på kromosom 7q21-31 [5], er overuttrykt i BCA.
c-MET
blir aktivert av sin ligand, hepatocytt-vekstfaktor (HGF), og induserer økt proliferasjon, migrering, motilitet, og invasjon av BCA-celler [6]. Ved stimulering og dimerisering av
c-MET
oppstår tyrosinfosforylering på bestemte steder innenfor det intracellulære domenet (det vil si, Y1234, Y1235, Y1349, Y1356 og), noe som øker den iboende aktivitet av tyrosin-kinaser, og fører til rekruttering av mange signaliseringsproteiner, blant annet vekstfaktor-reseptor-bundet protein 2 (GRB2), GRB2-assosiert bindemiddel-1 (GAB1), Src-homologi 2 domene inneholdende (SHC), fosfolipase C1 (PLC1), og fosfoinositid 3-kinase (PI3 -K) [7]. Ras /Erk-MAPK, PI3-K /Akt /mTOR [8], er og Stat3 signalveier også aktivert, og dermed indusere flere biologiske reaksjoner [6, 9].
Overuttrykte
c- MET
korrelerer med BCA metastase [7, 10]; ja,
c-MET
er overuttrykt i mer enn 60% av lokalavansert eller metastatisk BCA tilfeller [5], og er knyttet til dårlig overlevelse [11]. Tatt i betraktning at dimerization av RTK er viktig for å kontrollere deres biologiske funksjon i sammenheng med kreft, bør crosstalk mellom
c-MET Hotell og andre RTK bli undersøkt nøye om vi skal forstå hvilken rolle
c- MET
i menneskelig kreft progresjon. Deler av primærtumor fra pasienter med en sjelden type BCA, heter nevroendokrine (NE) BCA, viser
c-MET
uttrykk [12]. Dette tyder på at NE BCA kan være et passende mål for
c-MET
hemmere. En tidligere studie viste at et medlem av
c-MET
familie, RECEPTEUR d’origine Nantais (RON), danner en heterodimer med epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR) [13]. I tillegg RTK microarray analyse viste at RTK som
AXL Hotell og
PDGFR
crosstalk med
c-MET product: [11].
AXL Hotell og
PDGFR
er forbundet med aggressiv brystkreft [14], nyre [15], lunge [16, 17], og prostata kreft [18, 19], noe som tyder på at
c-MET Z –
AXL Anmeldelser –
PDGFR
kan være klinisk relevant for BCA [11]
Formålet med denne studien var å undersøke den kliniske foreningen. mellom uttrykk for
c-MET
nettverks gener (
c-MET Anmeldelser –
AXL Anmeldelser –
PDGFR
) og sykdom utfall for BCA pasienter, og å undersøke om
c-MET
nettverks gener kan brukes til å identifisere BCA pasienter med økt risiko for å utvikle aggressiv sykdom.
Materialer og metoder
pasienter og vevsprøver
Primær tumorprøver fra pasienter som gjennomgikk transurethral reseksjon (TUR) eller radikal cystektomi på Chungbuk National University i Sør-Korea ble histologisk verifisert som urothelial carcinoma. Normal blæreslimhinnen ble høstet fra pasienter med godartede sykdommer som benign prostatahyperplasi (BPH), ureter steiner, og stressinkontinens, etter informert samtykke. Alle kontroll vev ble histologisk bekreftet som normalt. Pasienter med samtidig carcinoma
in situ plakater (CIS), CIS lesjoner alene, en kort oppfølgingsperiode (mindre enn 6 måneder), eller hvor data var ufullstendig, ble ekskludert for å gi en mer homogen studiepopulasjonen. Totalt 165 (135 mannlige og 30 kvinnelige, gjennomsnittsalder, 65 år) BCA pasienter og 34 kontroller (19 mannlige og 15 kvinnelige, gjennomsnittsalder, 54 år) ble inkludert. Alle svulster var makro-dissekert (vanligvis innen 15 minutter etter kirurgisk reseksjon), og hver BCA prøven ble bekreftet ved patologisk analyse av en fersk frosset vev delen stammer fra TUR eller cystektomi prøver. Tumorprøver ble deretter frosset i flytende nitrogen og lagret ved -80 ° C inntil bruk. NMIBC pasienter gjennomgikk en andre TUR 2-4 uker etter første reseksjon hvis BCA prøven ikke inkluderer riktig muskel lag eller når et høyverdig svulst ble oppdaget. Pasienter med en T1 svulst, flere svulster, store svulster ( 3 cm i diameter), eller høyverdig Ta NMIBC fått en syklus av intravesikal behandling [Bacillus Calmette-Guérin (BCG) eller mitomycin-C]. Behandlingsrespons ble vurdert ved cystoskopi og urin cytologi. Pasienter som var sykdomsfrie innen 3 måneder etter behandling ble fulgt opp hver 3. måned for de første 2 årene, og deretter hver 6. måned etterpå. MIBC pasienter med klinisk lokalisert eller lokalavansert svulster og god Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) funksjonsstatus (0 eller 1) gjennomgikk radikal cystektomi og komplette bekken lymfeknute disseksjon. Pasienter som ikke er kvalifisert for radikal cystektomi grunnet metastatisk sykdom, dårlig levealder, eller dårlig ECOG funksjonsstatus (≥2) gjennomgikk TUR eller biopsi for histopatologisk diagnose. Pasienter med pT3, pT4 eller node-positiv sykdom (basert på analyse av radikale cystektomi eksemplarer) og de med metastatisk sykdom, men god allmenntilstand fikk minst fire sykluser av cisplatin-basert kjemoterapi. Pasienter som nektet eller ikke fullførte en avbildning work-up [computertomografi (CT) scan eller magnetisk resonans imaging (MRI)] minst en gang hver 3. måned for å vurdere svarene ble ekskludert fra videre analyse.
Svulster var iscenesatt og gradert etter 2002 TNM klassifisering og
European Association of Urology (EAU)
retningslinjer basert på 1973
WHO
karaktersystemet [20, 21]. Gjentagelse ble definert som gjentakelse av primær NMIBC med en lavere eller samme scene patologisk, og progresjon ble definert som identifikasjon av T2 eller høyere stadium sykdom ved tilbakefall. I tilfelle av MIBC, ble progresjon definert som lokoregionalt tilbakefall eller en ny fjernmetastaser i cystectomized pasienter og en ≥20% økning i massen av den primære tumor eller en ny fjernmetastaser i ikke-cystectomized pasienter.
RNA-ekstraksjon og revers transkripsjon til cDNA
RNA ble isolert fra vevet ved homogenisering med 1 ml TRIzol reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA) i en 5 ml glassrør. Homogenatet ble deretter overført til et 1,5 ml rør og blandet med 200 ml kloroform. Etter inkubering i 5 minutter ved 4 ° C, ble homogenatet sentrifugert i 13 minutter ved 13 000 g ved 4 ° C. Den øvre vandige fasen ble overført til et rent rør inneholdende 500 ml isopropanol. Blandingen ble inkubert i 60 min ved 4 ° C og deretter sentrifugert i 8 minutter ved 13 000 g ved 4 ° C. Den øvre vandige fasen ble fjernet og blandet med 500 ml 75% etanol og sentrifugert i 5 minutter ved 13 000 g ved 4 ° C. Det øvre vandige lag ble kastet, og pelleten ble tørket ved romtemperatur, oppløst i DEPC-behandlet vann, og deretter lagret ved -80 ° C. Kvaliteten og integritet av RNA ble bekreftet ved hjelp av en Nanodrop enhet. cDNA ble fremstilt fra 1 mg total RNA ved hjelp av en First-Strand cDNA Synthesis Kit (Amersham Biosciences Europe GmbH, Freiburg, Tyskland) i henhold til produsentens protokoll.
Cell kultur og transfeksjon
T24 BCA celler ble oppnådd og dyrket i henhold til instruksjonene gir av ATCC. Media ble supplert med 10% føtalt bovint serum, 2% glutamin og 1% antibiotika (Invitrogen, Carlsbad, CA), og cellene ble opprettholdt under en fuktig atmosfære med 5% CO2 ved 37 ° C. For knockdown eksperimenter ble celler transient transfektert med 200 pmol siRNA basseng til taushet MET (MET sirnas, Life Technologies, katalognummer 103545, 103551, 103557, 103767 og 103769) eller negative kontroll sirnas, ved hjelp Lipofectamine 2000 (Invitrogen).
proliferasjonsanalyse
siRNA-transfekterte celler ble sådd i 24-brønners plater i en tetthet på 1 x 10
4 /brønn. Cellene ble deretter farget med krystallfiolett og tellet 7 dager senere [22].
forankrings-uavhengig vekst mykagar assay
siRNA-transfekterte celler (1 x 10
4) ble sådd til 3 ml av 0,35% agar i FBS-inneholdende kulturmedium og lagt over 2 ml 0,7% agar i FBS-inneholdende dyrkningsmedium i 6-brønns plater. Bilder fra 3- (4, 5-dimethylthiaz-113 olyl-2) -2, 5-difenyltetrazoliumbromid (MTT) -stained kolonier ble tatt under et Zeiss mikroskop som tidligere beskrevet [22].
invasjon assay
Cells (3 × 10
5 celler /ml) ble talt opp og sådd ut på kollagen-belagt inserts (Millipore Corp., Billerica, MA). Etter 16 timer ble cellene som migrerte til den nedre overflate av innsatsene farget med krystallfiolett oppløsning. Fargestoffet ble ekstrahert fra cellene ved hjelp av 10% eddiksyreoppløsning, og absorbansen ble avlest i en mikroplateleser FLUOstar Omega (BMG Labtech, Cary, North Carolina) som tidligere beskrevet [22].
celle apoptose assay
T24-celler transient transfektert med siRNA ble inkubert i medium med eller uten 10 mM cisplatin i 8 timer. Cellelevedyktigheten ble målt i en MTT-assay som tidligere beskrevet [23]. Celle apoptose ble kvantifisert ved å måle metabolsk aktive massen av de behandlede cellene etter normalisering mot ubehandlede celler.
sårhelende (in vitro scratch) assay
T24-celler dyrket på poly-L-lysin ble ko-transfektert med plasmid som koder GFP. De ble deretter utsatt for
in vitro
scratch analysen med bilder som er tatt på 0 og 16 timer etter inkubasjon ved hjelp av fluorescens mikroskop. Celler flyttet fra kanten av scratch mot midten av scratch (markert med gule stiplede linjer).
Western blot analyse
Transfekterte T24 celler ble raskt høstet, flash frosset i flytende nitrogen, og lagret ved -80 ° C. Totalt protein ble ekstrahert i lyseringsbuffer [1% Nonidet P-40, 50 mM Tris (pH 7,4), 10 mM NaCl, 1 mM NaF, 5 mM MgCl2, 0,1 mM EDTA, 1 mM fenylmetylsulfonylfluorid, og Complete protease inhibitor cocktail tablett (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Tyskland)] på de angitte vilkår og sentrifugert ved 12 500
g
i 15 min. 25 ug protein per hver betingelser ble underkastet SDS-PAGE-gel løping, som ble overført til nitrocellulose-membraner for Western blot-analyse. Etter blokkering med 10% BSA /PBST i 1 time, ble membranene inkubert med spesifikke antistoffer mot
c-MET
, MMP2, MMP9 eller β-aktin. Blottene ble visualisert ved forsterket kjemiluminescens.
Computational analyse
For å studere sammenhengen mellom
c-MET
nettverks gener og kliniske parametre i BCA pasienter, undersøkte vi uttrykket profiler av disse genene i BCA pasienter som bruker tidligere innhentet microarray data (tiltredelse antall GSE13507). Microarray data var tilgjengelige for 165 pasienter. Kliniske utfall, inkludert progresjonsfri overlevelse (PFS), total overlevelse (OS), og kreftspesifikk overlevelse (CSS) ble hentet fra pasientjournaler. Korrelasjonen mellom genuttrykk og sykdom utfallet ble undersøkt ved hjelp av Cox regresjonsanalyse. Kaplan-Meier (KM) overlevelseskurve analyse ved hjelp av et undersett av genekspresjonsprofiler fra pasienter med «lav» og «høy» ekspresjon av hvert gen ble anvendt for å identifisere effekter av
c-MET
nettverk genekspresjon på BCA. Den 50
persentil (median) av genekspresjon ble anvendt som mansjetten-off-verdi. Den log-rank test ble utført for å vurdere betydningen av forskjeller mellom to overlevelseskurver.
Etisk uttalelse
Studiet ble godkjent av etikkomiteen av Chungbuk National University. Alle fag som tilbys skriftlig informert samtykke. Prøvetaking og analyse ble godkjent av Institutional Review Board of Chungbuk National University.
Resultater
Kliniske og patologisk karakteristikk av BCA pasienter
Gjennomsnittsalderen for de 165 pasientene i studiekohorten var 65,2 ± 12,0 år, og gjennomsnittlig oppfølgingstid var 48,4 måneder. Av de 165 pasientene, 62,4% (103/165) hadde NMIBC og 37,6% (62/165) hadde MIBC. Gjennomsnittsalderen for de 34 pasientene i normal kontroll kohorten var 54,0 ± 10,4 år. De baseline karakteristikker av pasienter og kontroller er presentert i tabell 1.
Tap av
c-MET
undertrykker BCA celleproliferasjon og invasjon og øker følsomheten for cisplatin-indusert apoptose
Tidligere studier tyder på at stromal HGF signaliserer via
c-MET
veien øker invasjon og metastasering av BCA celler [6, 11, 13]; Derfor søkte vi å fastslå effekten av
c-MET
stanse på spredning og invasjon, og på den apoptotiske respons på cisplatin (en stor kjemoterapeutisk middel som brukes til å behandle BCA pasienter). Vi fant at BCA cellene der
c-MET
ble slått ned dannet færre (og mindre) kolonier enn de negative kontrollcellene, noe som tyder på en reduksjon i celleproliferasjon i myk agar (fig 1A). Cellen invasjonen analysen viste at BCA celler husing intakt
c-MET
var mer omfattende enn de hvor
c-MET
ble slått ned.
c-MET
-silenced T24 celler var mye mindre invasiv enn kontroller celler (ikke-transfekterte celler og celler transfektert med kontroll siRNA) (fig 1b). Vi neste undersøkt konsekvensen av
c-MET
tap på celle apoptose i en MTT analyse.
c-MET
knockdown-celler viste øket sensitivitet overfor cisplatin-indusert apoptose (figur 1C).
Alle forsøkene ble utført ved anvendelse av tre
c-MET
knockdown-cellelinjer (si
c-MET
-1, si
c-MET
-2, og si
c-MET
-3) transfektert med forskjellige
MET
sirnas og to kontroller cellelinjer (Ctrl og NT). Ctrl, kontroll; NT, ikke-transfektert * p .. 0.05
Tap av
c-MET
hemmer cellemigrasjon fra BCA celler ved downregulating MMP2 og MMP9
undersøkte cellemigrasjon og MMP2 og MMP9 uttrykk i BCA celler. Sårhelende analyse (også kalt in vitro scratch analyse) viste at
c-MET
-knockdown celler migrert mindre effektivt enn kontrollcellene (fig 2A). Vi har også funnet ut at å slå ned
c-MET
downregulated uttrykk for MMP2 og MMP9 i BCA celler (figur 2B).
(A) sårhelende analysen viser at knockdown av c-MET inhibitsthe migrasjon av T24 celler. (B) Tap av
c-MET
downregulated uttrykk for matriksmetalloproteinaser (MMP) -2 og MMP-9. Alle forsøkene ble utført ved hjelp av to
c-MET
knockdown cellelinjer (si
c-MET
-1 og si
c-MET
-2) transfektert med forskjellige MET sirnas og to kontroll cellelinjer (Ctrl og NT). Ctrl, kontroll; NT, ikke-transfektert.
Uttrykk for
c-MET
korrelerer med OS i MIBC pasienter
For å svare på spørsmålet om
c-MET
nettverks gener som er involvert i BCA progresjon og aggressivitet, analyserte vi ekspresjonen av mRNA for disse gener i en DNA mikroarray og sammenlignet resultatene med sykdoms egenskaper, slik som tumor grad (G), tumorstadium (t, n og m ), tumorstørrelse, gjentakelse, progresjon, og CSS. Ytterligere sammenligninger ble deretter utført etter pasienter ble kategorisert i NMIBC og MIBC grupper. Resultatene viste at
c-MET
mRNA uttrykk i MIBC pasienter korrelerte signifikant med OS (p = 0,023, HR, 2,107, 95% konfidensintervall (CI), 1,110 til 3,998) (tabell 2). Disse data ble bekreftet ved KM overlevelseskurve analyse (Figur 3). BCA pasienter med høye nivåer av
c-MET
uttrykk viste dårligere overlevelse enn de med lav uttrykk (log-rank test, p = 0,020).
Uttrykket av
AXL
kan skille mellom NMIBC og MIBC pasienter og friske kontroller
Vi neste undersøkt klinisk sammenheng mellom kjente
c-MET
partnere,
AXL Hotell og
PDGFR
, og BCA progresjon. Resultatene viste at
AXL
uttrykk klart korrelert med både NMIBC og MIBC. Blære svulster (NMIBC og MIBC) viste 0,471 ganger høyere uttrykk for
AXL
mRNA enn kontroll vev.
AXL
mRNA uttrykk av NMIBC (p 0,0001, falske funnrate (FDR) 0,0001) og MIBC (p = 0,0001, FDR = 0,0006) var betydelig høyere enn i normale kontroller (tabell 3) .
AXL
mRNA uttrykk i NMIBC vev var omtrent 1,532 ganger høyere enn i MIBC vev (Tabell 3).
Uttrykk for
PDGFR
isoformene er vesentlig endret i BCA, og høy uttrykk for
PDGFRL
spår dårlig overlevelse
for å teste om
PDGFR
er nyttig som et diagnostisk klassifikator, undersøkte vi uttrykket av tre forskjellige isoformer (dvs.
PDGFRA
,
PDGFRB
, og
PDGFRL
). Vi fant at uttrykket av
PDGFR
isoformer kan brukes til å skille NMIBC og MIBC prøver fra normale kontroller. Uttrykket av
PDGFRA
mRNA klart diskriminert blæren svulster (NMIBC og MIBC) fra normale kontroll vev (p 0,0001, FDR 0,0001), med
PDGFRA
uttrykk i NMIBC og MIBC være ca 0.274 ganger høyere enn i kontrollene. Uttrykket av
PDGFRB
var også tydelig forskjellig mellom tumorer og normalt vev (p = 0,0001, FDR 0,0001).
PDGFRB
ekspresjon i NMIBC var signifikant større enn i normale kontroller (p 0,0001), men ingen signifikant forskjell ble vist mellom MIBC og normale kontroller (p = 0.0698). Tilsvarende
PDGFRL
ble uttrykt forskjellig i NMIBC og normale kontroller, med en beskjeden økning (0.804 ganger) (p 0,0001) i det tidligere. Dermed er det sannsynlig at
er PDGFR
uttrykk økt i alle typer BCA. Det er bemerkelsesverdig at uttrykket av
PDGFR
isoformer i vev fra NMIBC pasienter var generelt høyere enn i vev fra MIBC pasienter (Tabell 4).
Neste, for å forstå den kliniske relevansen av økt
PDGFR
uttrykk i BCA, undersøkte vi den kliniske sammenhengen mellom
PDGFR
isoform uttrykk og sykdomsutvikling. Vi fant ut at
PDGFRL
uttrykk var signifikant korrelert med NMIBC progresjon (p = 0,046, HR, 3,675; 95% CI, 1,024 til 13,188) (tabell 5). KM overlevelsesanalyse viste at NMIBC pasienter med høyt uttrykk for
viste PDGFRL
dårligere PFS enn de med lav uttrykk for
PDGFRL
(log-rank test, p = 0,032) (figur 4).
Expression nivåer av
c-MET
nettverks gener er signifikant korrelert med sykdomsprogresjon i NMIBC pasienter og med OS i MIBC pasienter
for å identifisere den kliniske betydningen av
c-MET
nettverks gener, undersøkte vi sammenhengen mellom
c-MET
nettverk genekspresjon (
c-MET
,
AXL
, og
PDGFR
) og BCA prognose. Uttrykk for
c-MET
nettverks gener var basert på en vurdering av risikoen poengsum for hver pasient beregnes ved å kombinere uttrykk nivåer av alle tre gener. Vi fant at uttrykket av
c-MET
nettverks gener korrelerte signifikant med sykdomsprogresjon i NMIBC pasienter (p = 0,023, HR, 4,386; 95% CI, 1,221 til 15,757) og med OS i MIBC pasienter (p = 0,038, HR, 1,976; 95% CI, 1,039 til 3,759) (Tabell 6). KM overlevelsesanalyse viste at NMIBC pasienter med høyt uttrykk for
c-MET
nettverks gener viste dårligere PFS (log-rank test, p = 0,013) enn de med lav uttrykk. Tilsvarende MIBC pasienter (log-rank test, p = 0,034) med høy ekspresjon av c-MET nettverks gener viste dårligere OS enn de med lav uttrykk (fig 5).
Diskusjoner
resultatene fra denne studien tyder på at tap av
c-MET
gjør BCA celler mindre invasiv og mer utsatt for cisplatin. Også uttrykket mønster av
c-MET
nettverks gener tillater diskriminering av BCA vev fra normale kontroll vev og ser ut til å forutsi dårlige kliniske resultater i en koreansk pasientpopulasjon.
Aberrant
c-MET
ekspresjon forekommer i forskjellige krefttyper, og er assosiert med en dårlig prognose [24]. Overekspresjon av
c-MET
i BCA er assosiert med dårlig OS og metastasering overlevelse [5, 7, 10]. Yeh et al. rapportert at overekspresjon av
c-MET
er positivt forbundet med muskel invasjon og dårlig langsiktig overlevelse (p 0,001) [11]. Tidligere rapporter tyder på at
c-MET
uttrykk er nært forbundet med både tumor aggressivitet og pasient overlevelse [5, 7, 10, 11, 18]. Resultatene presentert heri er i samsvar med de i tidligere studier. Vi fant at overekspresjon av
c-MET
var signifikant assosiert med dårlig overlevelse, spesielt OS i MIBC pasienter. Dette tyder på at hemme
c-MET
uttrykk kan spille en viktig rolle i å forebygge BCA progresjon og forbedre pasientens overlevelse.
In vitro
analyse viste at
c- MET
knockdown trykt celleproliferasjon, invasjon, og migrasjon, og redusert uttrykk for MMP2 og MMP9. Dette ble ledsaget av øket sensitivitet overfor cisplatin-indusert apoptose. MMP2 og MMP9 degradere ekstracellulære matrix proteiner, og dermed tilrettelegge celle invasjon og metastasering [25, 26]. Disse resultatene indikerer at
c-MET
hemming er sannsynlig å redusere kreft invasjon og metastasering og for å forbedre overlevelse av kreftpasienter. Dermed er en mer fokusert forståelse av viktigheten av
c-MET
hemming nødvendig hvis vi skal utvikle hemmere som er rettet mot
c-MET
i ulike svulster. Nylig har flere
c-MET
for målretting for legemidler ble testet i kliniske studier, og alle viser lovende klinisk aktivitet med akseptable bivirkninger [27]. For eksempel, tivantinib (også kalt ARQ197) og en dual hemmer av
c-MET Twitter /VEGFR2 (foretinib) ble undersøkt i fase I til II kliniske studier hos pasienter med papillær nyrecellekreft og avansert leverkreft, henholdsvis [24]. En roman multikinasehemmer hemmer av
MET
,
VERFR1
,
AXL
,
Tie2
,
KIT
,
FLT3
, og
RET
, kalt cabozantinib (også kjent som XL184), hemmer vekst, metastase, og angiogenese i kreft i bukspyttkjertelen og glioblastom, og reduserer motstanden til gemcitabin. Spesielt kliniske studier ved metastatisk kastrering resistent prostatakreft (mCRPC) pasienter rapporterte en lovende effekt på PFS, bein metastasering, og smerte [28]. Imidlertid kan svulster som i utgangspunktet viser en god respons på MET-hemmere senere utvikle resistens [24]. Ervervet resistens mot MET-hemmere utvikler via flere mekanismer, inkludert genetiske endringer (f.eks sekundær
EGFR
T790M mutasjon), MET forsterkning, og aktiveres signalveier [29]. Således kan multiple kombinasjonsterapi mål eller ko-målretting terapi kan være nødvendig for å hindre medikamentresistens og for å oppnå fordelaktige resultater [24].
Det er viktig å undersøke det krysstale mellom
c-MET
og andre RTK fordi crosstalk partnere av
c-MET
kan være viktige biomarkører for co-targeting terapi og bidra til å forhindre resistens mot enkelte MET-hemmere.
RON
,
AXL Hotell og
PDGFR
ha en crosstalk med
c-MET
. Overekspresjon av
AXL Hotell og
PDGFR
er assosiert med aggressivitet og prognose for en svulst serie [14-19]. Resultatene presentert heri er i samsvar med tidligere studier i denne henseende; Men var det noen forskjeller. I motsetning til studiet av enda et al, som har vurdert sammenhengen mellom
PDGFRA Hotell og BCA progresjon, vi undersøkte alle tre
PDGFR
isoformer.
PDGFRA
,
PDGFRB
, og
PDGFRL
. Men bare
PDGFRL
var assosiert med NMIBC progresjon. De fleste studier som mål å identifisere en sammenheng mellom BCA progresjon og
PDGFR
undersøkte
PDGFRA Hotell og
PDGFRB
isoformer. Derfor er den foreliggende studien den første til å identifisere en signifikant sammenheng mellom
PDGFRL
ekspresjon og BCA prognose. I tillegg, Ennå et al. bare undersøkt rollene til
AXL Hotell og
PDGFR
i avanserte tilfeller [11]. Her viste vi at uttrykket av
AXL Hotell og
PDGFR
fornem NMIBC og MIBC fra friske kontroller. Spesielt ekspresjon av begge disse genene var høyere hos pasienter NMIBC enn i MIBC pasienter. Dermed
AXL Hotell og
PDGFRL
kan være mer spesifikke for NMIBC enn MIBC. En stor validering er nødvendig for å avklare roller og effekter av
PDGFR
isoformene på BCA (NMIBC og MIBC) prognose.
Vi har også funnet ut at
c-MET
nettverk genet (
c-MET
,
AXL
, og
PDGFR
) uttrykket var nært knyttet til sykdomsprogresjon i NMIBC pasienter og med dårlig overlevelse (spesielt OS) i MIBC pasienter. Disse resultatene tyder på at hemme
c-MET
vei kan hindre sykdomsutvikling i NMIBC pasienter og forbedre overlevelse av MIBC pasienter. Også kan multi-kombinasjon eller co-targeting behandlinger være nødvendig for å hindre at ervervet resistens. Yeh et al. demonstrerte at 21,5% (14/65) av pasientene som samtidig uttrykte
c-MET Twitter /
AXL Twitter /
PDGFR
viste dårlig langsiktig overlevelse (p = 0,015) [11]. Men de bare identifisert en klinisk sammenheng mellom
c-MET
nettverks gener hos pasienter med lokalavansert eller metastatisk BCA. Her identifiserte vi en klinisk sammenheng hos pasienter med NMIBC eller MIBC. Dermed antyder denne studien at
c-MET
nettverk er en lovende biomarkør og mål for co-targeting narkotika; dette bør testes i kliniske studier med både NMIBC og MIBC pasienter.
Samlet utgjør disse data tyder på at (1)
c-MET Twitter /
AXL Twitter /
PDGFR
trinnet kan brukes til å skille kreftpasienter fra normale kontroller og for å skille NMIBC fra MIBC; og (2) uttrykk for
c-MET
nettverks gener er signifikant assosiert med dårligere overlevelse for BCA pasienter.
Identifisere signalnettverk involvert kan gi informasjon som vil fremme vår forståelse av mekanismene bak tumorbiologi og hjelp til å forutsi potensielle legemiddelresistens [30]. Vi tror at
c-MET
nettverk genuttrykk er en roman prognostisk markør for å forutsi hvilke BCA pasienter har en økt risiko for å utvikle aggressiv sykdom. Disse genene kan være en nyttig markør for co-targeting terapi, og forventes å spille en viktig rolle i å forbedre både respons på behandling og overlevelse av BCA pasienter.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 Table. Datasett med tilbakefall, progresjon, og 5 gener i NMIBC pasienter
doi:. 10,1371 /journal.pone.0134552.s001 product: (PDF)
S2 Table. Datasett med progresjon, total overlevelse, kreft spesifikk overlevelse, og 5 gener i MIBC pasienter
doi:. 10,1371 /journal.pone.0134552.s002 product: (PDF)
S3 Table. Datasett med tilbakefall, progresjon, og
C-MET
nettverks gener i NMIBC pasienter
doi:. 10,1371 /journal.pone.0134552.s003 product: (PDF)
S4 Table. Datasett med progresjon, total overlevelse, kreft spesifikk overlevelse, og
C-MET
nettverks gener i MIBC pasienter
doi:. 10,1371 /journal.pone.0134552.s004 product: (PDF)
Takk
Dette arbeidet ble støttet av en National Research Foundation of Korea (NRF) finansiert av den koreanske regjeringen (MSIP) (nr NRF-2014R1A2A1A09006983) og i grunn Science Research Program gjennom nasjonal Stiftelsen forsknings~~POS=TRUNC Korea (NRF) finansiert av departementet for utdanning, vitenskap og teknologi (2012R1A1A4A01008753). Også dette arbeidet ble delvis støttet av R01DK100974; U01 DK103260; U24 DK097154; NIH NCATS UCLA CTSI UL1TR000124; en Steven Spielberg Discovery Fund i Prostate Cancer Research Career Development Award; en IMAGINE NO IC Research Program Award (til JK). J.K.
