Abstract
p21-aktivert kinaser (Paks) er serin /treonin proteinkinaser involvert i biologiske hendelser knyttet til ondartet svulst progresjon. I denne studien uttrykk for Pak1, p-Pak2 Ser
20, Pak4, pPak4 Ser
474 i 21 normal endometrium, ble 16 hyperplastisk endometrium uten atypi, 17 atypisk kompleks hyperplasi og 67 livmorkreft vurdert av immunhistokjemi og korrelert med clinicopathological parametere. Vi åpnet også den proliferative rolle og nedstrøms mål av Pak1 i livmorkreft. Pak1 ble uttrykt i cytoplasma mens Pak4 og p-Pak4 ble uttrykt i både cytoplasma og kjernen av endometrial vev. I normal endometrium, betydelig høyere Pak1 (
P
= 0,028) og cytoplasmatiske p-Pak2 (
P
= 0,048) uttrykk ble oppdaget i proliferativ endometrium enn sekretorisk endometrium. Pak1, cytoplasma og kjernekraft Pak4 og atom p-Pak4 ble betydelig overuttrykt i livmorkreft sammenlignet med atrofisk endometrium (alle
P
0,05). Videre skriver endometroid karsinom viste signifikant høyere Pak1 uttrykk enn type II ikke-endometrioid karsinom (
P
0,001). På den annen side, Pak1, Pak4 og p-Pak4 uttrykk negativt korrelert med histologisk grad (alle
P
0,05), mens p-Pak2 og cytoplasma Pak4 uttrykk omvendt korrelert med myometriets invasjon (alle
P
0,05). Videre pasienter med livmorkreft med lavere cytoplasma Pak4 uttrykk viste dårligere overlevelse (
P
= 0,026). Multivariat analyse viste cytoplasma Pak4 er en uavhengig prognostisk faktor. Funksjonelt, knockdown av Pak1, men ikke Pak4, i livmorkreft cellelinje førte til redusert celledeling sammen med redusert cyclin D1, østrogen reseptor (ERα) og progestogen reseptor (PR) uttrykk. Signifikant korrelasjon mellom Pak1 og PR-ekspresjon ble også påvist i kliniske prøver. Våre funn tyder på at Pak1 og cytoplasmatiske p-Pak2 kan fremme celleproliferasjon i normal endometriet under menstral syklus. Pak1, cytoplasma og kjernekraft Pak4 og atom p-Pak4 er involvert i patogenesen av livmorkreft, spesielt hos postmenopausale kvinner. Pak1 fremme livmorkreft celleproliferasjon, særlig i type endometroid carcinoma. Cytoplasmatiske Pak4 kan være potensielle prognostisk markør i livmorkreft
Citation. Siu MKY, Kong DSH, Ngai SYP, Chan HY, Jiang L, Wong ESY, et al. (2015) p21-Aktivert kinaser 1, 2 og 4 i livmorkreft: Effekter på kliniske resultater og celleproliferasjon. PLoS ONE 10 (7): e0133467. doi: 10,1371 /journal.pone.0133467
Redaktør: Steen Henning Hansen, Barnesykehuset i Boston, USA
mottatt: 3 mai 2014; Godkjent: 27 juni 2015; Publisert: 28.07.2015
Copyright: © 2015 Siu et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:.. Denne studien ble støttet av Hong Kong Anti-Cancer Society Grant, University of Hong Kong Små prosjektmidler og konferanse og Forskningsrådet Grant
Konkurrerende interesser: Annie NY Cheung er en PLoS ONE Editorial styremedlem. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til PLoS ONE redaksjonelle retningslinjer og kriterier.
Innledning
Livmorkreft er den vanligste gynekologiske kreft hele verden [1] og dens forekomst i Asia stiger. Det kan deles inn i to hoved clinicopathological typer. Østrogenavhengig type I endometroid karsinom, omfatter ca. 80% av livmorkreft, er vanligvis forbundet med endometrial hyperplasia [2, 3]. Type II ikke-endometroide karsinom, som er østrogen-uavhengig og inkluderer serøs karsinom og klarcellet karsinom, vanligvis oppstår i atrofisk endometrium [2, 3]. Type endometroid carcinoma har gunstig prognose mens type II livmorkreft er mer aggressive [2, 3].
p21-aktivert serin /treonin kinaser (Paks) er effektbokser for den lille Rho GTPases Rac1 og Cdc42 som spiller viktig roller i en rekke forskjellige cellulære funksjoner, inkludert celle morfogenese, motilitet, overlevelse, forankrings-uavhengig vekst og angiogenese, som alle er forutsetningen trinn for tumordannelse og tumorinvasjon [4, 5]. Basert på ulike domenestruktur og biokjemiske egenskaper, er de seks medlemmene av Pak familien klassifisert i gruppe I (Paks1-3) og gruppe II (Paks 4-6), som har forskjellig uttrykk mønster, underlaget prioritet og funksjonell spesifisitet i ulike vev [ ,,,0],5-7].
Vi har nylig identifisert Pak1 og Pak4 prognostiske markører og potensielle terapeutiske mål for eggstokkreft [8, 9]. Økt fosforylert (p) -Pak2
Ser20 uttrykk i eggstokkreft ble også påvist [9]. Pak1 og Pak4 fremme eggstokkreft cellemigrering og invasjon gjennom p38 /VEGF svei og den c-Src /MEK-1 /MMP2 vei, henholdsvis [8, 9]. Pak4 også indusere eggstokkreft celleproliferasjon gjennom Pak4 /c-Src /EGFR /cyclin D1 /CDC25A sti [8]. Vi har også avdekket overekspresjon av Pak1 i choriocarcinom og hydatidiform føflekker som utviklet seg til aggressiv sykdom [10]. Pak1 regulere choriocarcinom celleproliferasjon, migrasjon og invasjon evne i forbindelse med endret nivå av p16, VEGF og MT1-MMP [10].
Up-regulering av Pak1 og Pak4 har også blitt observert i andre humane kreftformer [4 , 5, 11], som bryst og tykktarm kreft. En fersk studie har rapportert at Pak1 er nedregulert av progesteron under den sekretoriske fasen i normal endometrium [12]. Men differensial uttrykk for Paks i livmorkreft begrenset. Heri, uttrykket og lokalisering av Pak1, fosforylert (p) -Pak2
Ser20, Pak4 og p-PAK4
Ser474 (aktivert form) i normal, hyperplastisk og kreft endometriet ble vurdert og korrelert med clinicopathological parametere. De proliferative rolle og nedstrøms mål for Pak1 i livmorkreft ble videre undersøkt.
Materialer og metoder
Kliniske prøver
Sixty-sju formalinfikserte, parafin integrert prøver av livmorkreft inkludert 56 endometrioid karsinom, 7 serøs karsinomer og 4 gjennomsiktige cellekreft ble hentet fra Avdeling for patologi, University of Hong Kong, Queen Mary Hospital for immunhistokjemi. Kliniske og patologisk parametere inkludert østrogen reseptor alfa (ERα) og progesteron reseptor (PR) status [13] som vurderes av immunhistokjemi ble hentet. Tjue-en prøver av normalt endometrium (inkludert 10 atrofisk, 5 sekretorisk og 6 proliferativ endometrium), 16 prøver av hyperplastisk endometrium uten atypi (inkludert syv enkle hyperplasi og 9 kompleks hyperplasi) og 17 prøver av atypisk kompleks hyperplasi ble også hentet. Blant de 17 atypisk kompleks hyperplasi, 8 tilfellene var ren atypisk hyperplasi mens 9 tilfeller senere utviklet livmorkreft (atypisk hyperplasi med livmorkreft). Gjennomsnittsalderen for disse pasientene var 57,2 år (20-82 år). Gjennomsnittlig oppfølgingstid var 42,75 måneder (range 1-108 måneder). Skriftlig informert samtykke ble innhentet av alle pasienter. Denne studien ble godkjent av Institutional Ethical Review Board ved University of Hong Kong /Hospital Authority Hong Kong West Cluster (HKU /HA HKW IRB). Haematoxylin eosin Seksjonene ble undersøkt av patologer å gjennomgå diagnose og for å sikre at hver prøve består av mer enn 75% tumorceller.
Cellelinjer
Et menneske normal endometrial cellelinje (NEM) utvidet fra primær dyrking av vanlige endometrial celler fra en ~ 40-åring premenopausale kvinner med vanlige 28-dagers menstruasjonssykluser, ble vennlig gitt av professor Doris Benbrook (University of Oklahoma Health Sciences Center), [14]. Tre menneskelige endometrial kreft cellelinjer, HEC-1B, HEC-1A og RL95-2 var fra ATCC (Manassas, Virginia). All kultur ble dyrket som beskrevet tidligere [15].
Transient knockdown av Pak1 og Pak4 i RL95-2
Celler ble transfektert med 100 nM hver av si
Genome
Smart -pool for Pak1, Pak4 og si
Kontroll
nontargeting siRNA basseng (Dharmacon, Lafayette, CO), ved hjelp av SilentFect (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) i henhold til produsentens instruksjoner for 48 timer før RNA og protein utvinning, celle telling og celle plating [10].
Immunohistochemistry
I korthet ble formalinfiksert parafin-embedded seksjoner farget med antistoffer mot Pak1, p-Pak2
Ser20, Pak4 og p- Pak4 Ser
474 (som oppført i S1 tabell) med EnVision + Dual Link System (K4061, Dako, Carpinteria, CA) [8-10]. Mikrobølgeovn antigen gjenvinning ble utført ved anvendelse av citrat-buffer (pH 6,0). Utelatelse eller substitusjon av det primære antistoff med preimmun IgG serum ble anvendt som en negativ kontroll. Både intensiteten og prosentandelen av fargede epitelceller ble evaluert. Immunreaktiviteten ble bedømt semikvantitativt ved intensitet og prosentandelen av epitel flekker. Fargeintensitet ble scoret som 0 (negativ), en (svak), 2 (mild), 3 (moderat) og 4 (sterk). Prosentandelen av positive celler ble vurdert som 0 (mindre enn 5%), en (5% -25%), 2 (26% -50%), 3 (51% -75%) og 4 ( 75%) . En sammensatt «Histoscore» ble gitt ved å multiplisere fargeintensitet (0-4) av andelen fargede celler (0-4) med en maksimal poengsum på 16 [16].
Real-time PCR
Total RNA ble ekstrahert fra cancercellelinjer under anvendelse av Trizol reagens (Invitrogen). 2,5 mikrogram total RNA ble revers transkribert av Super revers transkriptase (Invitrogen, San Diego, California). Real-time PCR ble utført med ABI Prism 7700 sekvens deteksjonssystem (Applied Biosystems, Foster City, California) [17, 18]. Primer sekvenser for Pak1, Pak4, CDC25A, cyclin D1, ERα, PR (mål både PRA og PRB isoformer) og GAPDH (som intern kontroll) ble vist i S2 tabell. PCR renhet ble bekreftet ved gelelektroforese.
Immunoblotting
Cellene ble høstet med lyseringsbuffer (0,125 M Tris, pH 6,8 ved 22 ° C inneholdende 1% NP-40 (v /v), 2 mM EDTA, 2 mM N-etylmaleimid, 2 mM PMSF, 1 mM natriumortovanadat og 0,1 mM natrium-okadate], og fjernet ved sentrifugering ved 4 ° C. protein~~POS=TRUNC konsentrasjonen~~POS=HEADCOMP ble bestemt ved DC (vaskemiddel PC) proteinanalyse (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). 20 mikrogram protein ble løst ved SDS-PAGE, overført til polyvinylidendifluorid membran og hybridisert med tilsvarende antistoffer (som oppført i S1 tabell) [17, 18].
Celleproliferering var bestemmes av celletall metode
3 x 10
4 celler ble sådd i 6-brønners kulturplater. celle~~POS=TRUNC ble telt ved bruk av trypan blått fargestoff eksklusjon med hematocytometer på dag 4 [18].
Statistisk analyse
Statistisk analyse ble utført ved hjelp av SPSS 15.0 for Windows (SPSS Inc., Chicago, IL). Mann-Whitney test ble brukt for sammenlikning mellom to grupper. Kruskal-Wallis rang test ble brukt for sammenlikning mellom flere grupper. Survival analyse ble utført av Kaplan-Meier analyse og log-rank test.
P
verdier 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.
Resultat
uttrykk for Pak1 og cytoplasma p-Pak2 Ser
20 var høyere i proliferativ endometrium. Pak1, cytoplasma og kjernekraft Pak4 og atom p-Pak4 Ser
474 ble overuttrykt i livmorkreft sammenlignet med atrofisk endometrium
Ved immunhistokjemi, ble Pak1 hovedsakelig uttrykt i cytoplasma av endometrial vev med bare fokus nukleær farging registrert (figur 1A). I normale endometrial prøver, atrofisk og sekretorisk endometrium viste svak uttrykk mens proliferativ endometrium vises sterkt uttrykk (fig 1A i-iii). Hyperplastisk endometrium og livmorkreft viste moderat til sterkt uttrykk (fig 1A iv-ix). Pak1 uttrykk i proliferativ endometrium var betydelig høyere enn i atrofisk (
P
= 0,001) og sekretorisk (
P
= 0,004) endometrium, atypisk hyperplasi (
P
= 0,042 ) og livmorkreft (
P
= 0,044) (figur 1B). Betydelig høyere Pak1 uttrykk i hyperplastisk endometrium og livmorkreft enn i atrofisk endometrium (begge
P
0,05) ble observert (figur 1B). Selv om høyere Pak1 uttrykk ble funnet i hyperplastisk endometrium og livmorkreft enn sekretorisk endometrium, var signifikant forskjell bare nådd mellom enkel /kompleks hyperplasi og sekretorisk endometrium (Fig 1B). Ligner Pak1 uttrykk ble påvist i hyperplastiske endometrium og livmorkreft.
p-Pak2 ble påvist i både cytoplasma og kjernen av endometrial vev (Fig 2A). Blant alle kategorier, proliferativ endometrium viste den sterkeste cytoplasma og kjernekraft p-Pak2 uttrykk (Fig 2A). Atrofisk og sekretorisk endometrium samt livmorkreft viste svak cytoplasma og atom p-Pak2 uttrykk mens hyperplastisk endometrium viste moderat cytoplasma og atom p-Pak2 uttrykk (Fig 2A). Cytoplasmatiske p-Pak2 uttrykk i proliferativ endometrium var betydelig høyere enn i alle andre kategorier (alle
P
0,05), bortsett kompleks hyperplasi mens atom p-Pak2 bare viste signifikant høyere uttrykk i proliferativ endometrium enn atrofisk (
P
= 0,046) og sekretorisk (
P
= 0,028) endometrium og livmorkreft (
P
= 0,007) (figur 2B). Selv om høyere cytoplasma og atom p-Pak2 uttrykk ble funnet i hyperplastisk endometrium enn atrofisk endometrium, bare kompleks hyperplasi (
P
= 0,007) og ren atypisk hyperplasi (
P
= 0,013) viste signifikant høyere cytoplasmatiske p-Pak2 ekspresjon (fig 2B). Videre var det betydelig redusert cytoplasma og atom p-Pak2 uttrykk i livmorkreft enn at i komplekse hyperplasia (
P
= 0,009 og
P
= 0,006, henholdsvis) og ren atypisk hyperplasi (
P
= 0,038 og
P
= 0,042, henholdsvis) (figur 2B).
Pak4 ble uttrykt i både cytoplasma og kjernen av endometrial vev (fig 3) . Cytoplasmisk og kjernekraft Pak4 viste svak uttrykk i atrofisk endometrium og moderat til sterkt uttrykk i sekretorisk, proliferativ, hyperplastisk endometrium og livmorkreft (fig 3). Cytoplasmatiske Pak4 uttrykk i atrofisk endometrium var betydelig lavere enn i andre kategorier (alle
P
0,05) (figur 3B, øvre panel). Betydelig høyere cytoplasma Pak4 uttrykk ble også funnet i sekretorisk endometrium enn kompleks hyperplasi (
P
= 0,047) og livmorkreft (
P
= 0,036) (figur 3B, øvre panel). Nuclear Pak4 i atrofisk endometrium vises også lavere uttrykk enn andre kategorier. Men signifikant forskjell på atom Pak4 uttrykk bare observert mellom livmorkreft og atrofisk endometrium (
P
= 0,026) (figur 3B, nedre panel). Det er ingen vesentlig forskjell på cytoplasma og atom Pak4 uttrykk mellom andre kategorier.
p-Pak4 ble også påvist i både cytoplasma og kjernen av endometrial vev (fig 4a). Cytoplasmatiske p-Pak4 viste svak til moderat uttrykk i alle kategorier (Fig 4A) og signifikant forskjell ble bare funnet mellom proliferativ endometrium og enkel hyperplasia (
P
= 0,041) (fig 4B, øvre panel). Svak til moderat atom p-Pak4 uttrykk ble observert i atrofisk endometrium mens andre kategoriene vises sterkt uttrykk (Fig 4A). Signifikant forskjell ble funnet mellom atrofisk endometrium og andre kategorier (alle
P
0,05) (figur 4B, nedre panel). Siden denne studien involverte 6 proliferativ endometrium tilfeller bare er relativt stor feil bar for atom pPak2 og Pak4 i proliferativ endometrium.
Up-regulering av Pak1 og Pak4 mRNA og protein uttrykk ble også funnet i kreft cellelinjer (HEC-1B, HEC-1A og RL95-2) sammenlignet med normale endometrial celler ved qPCR (figur 5A) og Western blot analyse (figur 5B), henholdsvis.
Pak1, Pak4 og p-Pak4 ekspresjon korrelerte med clinicopathological parametere. Pak1 uttrykk korrelert med PR
Pak1 uttrykk ble funnet å korrelere signifikant med histologisk type histologisk grad (grad 1/2 vs 3) og pasientenes alder ved diagnose (alle
P
0,05), men ikke med andre kliniske parametre (S3 Table). Pasienter med type endometroid karsinom (figur 1C), grad 1 og 2 og alder ≤ 57 vises høyere Pak1 uttrykk enn de med type II serøs og klarcellet karsinom, grad 3 og alder 57. Betydelig høyere cytoplasma og atom p-Pak2 samt cytoplasma Pak4 uttrykk ble observert i overfladisk myometriets invasjon enn dypt myometriets invasjon (alle
P
0,05) (S3 tabell). Det var en signifikant korrelasjon eksisterte mellom Pak4 og p-Pak4 uttrykk (både cytoplasma og kjernekraft) og histologisk grad (alle
P
0,05) (S3 tabell). Høyere grad av svulster viste lavere uttrykk for Pak4 og p-Pak4. Cytoplasmatiske Pak4 viste signifikant lavere uttrykk hos pasienter med sent stadium sykdom og kreft som involverer cervix (alle
P
0,05) (S3 tabell). Ingen signifikant sammenheng mellom uttrykk av p-Pak2, Pak4 og p-Pak4 med andre kliniske parametre ble funnet.
Kaplan-Meier-overlevelsesanalyser viste at lavere uttrykk for cytoplasma Pak4 (
P
= 0,026), men ikke Pak1, kjernekraft og cytoplasma p-Pak2, kjernekraft Pak4, kjernekraft og cytoplasma p-Pak4, resulterte i en dårligere overlevelse i livmorkreftpasienter (figur 1D, 2C, 3C og 4C). Multivariat analyse viste at cytoplasma Pak4 er en uavhengig prognostisk faktor (
P
= 0,037).
knockdown av Pak1 i livmorkreftceller redusert celleproliferasjon og nedregulert cyclin D1, ERα og PR
for å finne den proliferative rollen Pak1 og Pak4 i livmorkreftceller, ble forbigående knockdown av Pak1 og Pak4 i RL95-2 utført av siRNA tilnærming. Etter å ha bekreftet det spesifikke knockdown av Pak1 og Pak4 mRNA (figur 6A) og protein (figur 6B), ble virkningen på celleproliferasjon bestemt ved celletelling metode. Pak1 utarmet RL95-2 viste signifikant redusert spredning hastighet sammenlignet med kontrollceller som transfektert med kontroll siRNA (Fig 6C). Imidlertid ble ingen signifikant forskjell i spredning rate etter knockdown av Pak4 i RL95-2 funnet (figur 6C). Videre knockdown av Pak1 i RL95-2 vesentlig nedregulert cellesyklusrelatert gen cyclin D1 og steroidreseptorer, ERα og PR, men har ingen virkning på en annen cellesyklusrelatert gen CDC25A, som evaluert ved qPCR (figur 6D). . Cyclin D1 ble også betydelig redusert i siPak4 RL95-2 (Fig 6D)
Barer, betyr ± SD av tre eksperimenter; **
P
0,005, Mann-Whitney test
Diskusjoner
Våre data viste signifikant høyere Pak1 og cytoplasmatiske p-Pak2 uttrykk i normal proliferativ. endometrium enn sekretorisk endometrium, noe som tyder Pak1 og p-Pak2 kan være forbundet med østrogenregulert proliferativ aktivitet av endometrium under menstral syklus. I brystkreft, har regulering av Pak1 av østrogen blitt rapportert [19]. Funnene også enig med forrige rapport nedregulering av Pak1 av progesteron i normal sekretorisk endometrium [12].
proliferative rolle Pak1 og Pak2 er dokumentert i normale celler. For eksempel, i fibroblaster, Pak1 fosforylert av CDC2A er blitt funnet å endre post-mitotisk spredning, som er et viktig skritt for cellesyklusprogresjon og proliferasjon [20]. Vår tidligere studie avslørte også involvering av Pak1 i trophoblast spredning [10]. I normale mammary epitelceller ble hyperaktive Rac3 funnet å forbedre celle-proliferasjon gjennom Pak2 [21]. Fosforylering av Pak2 ved Ser
20, den tilsvarende fosforyleringssetet av Pak1 ved Ser
20 er blitt funnet å modulere Nck binding mellom cytosol og membran, og således regulere cellevandring [22, 23]. I vår forrige undersøkelse, ble cytoplasmatiske p-Pak2 påvist i cytotrophoblast som kan betraktes som trofoblastisk stamceller som er ansvarlige for spredning [10]. Vi oppdaget også atom p-Pak2 i endometrial vev, om enn rollene til p-Pak2 i kjernen fortsatt trenger å bli ytterligere undersøkt. Som Pak1 og Pak4 [8, 24], kan p-Pak2 i kjernen play-funksjonen på gentranskripsjon. I fremtidige studier, er det interesse for å avgjøre om østrogen kan regulere Pak1 og p-Pak2 uttrykk som fører til økt proliferativ aktivitet av endometrium under menstral syklus.
Vi har funnet betydelig høyere Pak1, cytoplasma og kjernekraft Pak4 og atom p- Pak4 uttrykk i livmorkreft enn atrofisk endometrium. Økt uttrykk for Pak1 og Pak4 ble også påvist i livmorkreft cellelinjer. De fleste funksjoner av Pak4 er avhengig av dets kinaseaktivitet [8]. I vår forrige undersøkelse, i tillegg til celle migrasjon utført i cytoplasma, har vi avdekket regulering av gentranskripsjon ved atom Pak4 i eggstokkreft [8]. De foreliggende funn tyder på at Pak1, kan cytoplasma og kjernekraft Pak4 og atom p-Pak4 spiller viktige roller i patogenesen av livmorkreft, spesielt hos postmenopausale kvinner, og kan være nyttig i påvisning av livmorkreft i liten endometriebiopsi fra postmenopausale kvinner.
Vi har også demonstrert redusert spredning i livmorkreftceller etter Pak1 knockdown sammen med redusert cyclin D1 uttrykk. Vi og andre har dokumentert proliferativ rolle Pak1 i andre menneskelige kreftformer, som brystkreft [25], squamous nonsmall celle lungekreft [26] og choriocarcinom [10]. Overekspresjon av cyclin D1, en D-type cyclin regulerende G1-S-fase cellesyklusprogresjon, er rapportert i endometrial cancer [27, 28]. Forrige Studien fant også at Pak1 regulerer prolactin mediert cyclin D1 promoter aktivitet i brystkreft [29]. De foreliggende funn antyder at Pak1 kan regulere celleproliferasjon gjennom endring av cellesyklusprogresjon. Siden cyklin D1 kan være et alternativt mål for terapi [30] og små-molekyl-inhibitorer for Pak familien blir utviklet [7, 31], kombineres-målrettet terapi kan oppnås for målretting endometrial cancer. Selv om vi har avdekket spredning forsterke effekten av Pak4 på eggstokkreft [8] og oppdaget redusert cyclin D1 uttrykk i RL95-2 celler etter Pak4 knockdown i denne studien, kunne ingen signifikant effekt av Pak4 på livmorkreft celleproliferasjon påvises når Pak4 var forbigående forstummet i RL95-2 celler i denne studien. Det er mulig at virkningen på celleproliferasjon må bestemmes ved bruk av stabile knockdown-celler med lengre inkubasjonstid før gjør celletall metode. En slik mulighet bør vurderes i fremtidige studier. Rollene som Pak4 i livmorkreft behov for å bli ytterligere belyst.
Vi viste signifikant høyere Pak1 uttrykk i type endometroid carcinoma enn Type II ikke-endometrioid karsinom. Type I endometroid karsinom er en østrogenavhengig tumor [2, 3]. Selv om tidligere studier har vist noen effekt på Pak1 uttrykk etter østrogenbehandling i Ishikawa-celler (en godt differensiert endometrial adenokarsinom cellelinje) [12], fant vi ERα og ER målet genet PR, ble redusert etter knockdown av Pak1 i RL95-2. Videre positiv korrelasjon mellom Pak1 og PR uttrykk i våre livmorkreft kliniske prøver støtte deres link lenger. Den sterke sammenhengen mellom ERα og PR uttrykk og type endometroid karsinom sammenlignet med Type II ikke-endometrioid kreft [32], forklarer effekten av progestin terapi for type endometroid karsinom. I brystkreft celler, Pak1 inhibitor blokkert ER trans funksjoner og downregulated ER målet produkt PR (både PRA og PRB isoformer) protein uttrykk [33]. Videre har Pak1 mediert fosforylering av ERα ved Ser305 vist seg å forbedre transaktivering av ERα fører til oppregulering av ER-regulerte gener, for eksempel cyklin D1, som i sin tur fremmer hormonuavhengig vekst av brystcancer-celler [33-35]. Det er mulig at Pak1 er en av oppstrøms meklere for ERα og PR uttrykk i Type endometroid karsinom og Pak1 kan øke veksten av livmorkreftceller gjennom regulering ERα
Vi fant lavere uttrykk for cytoplasma Pak4 var assosiert med dårligere prognose i livmorkreft. Tidligere studier inkludert vår har funnet høyere Pak4 uttrykk som bidrar til dårlig prognose hos pasienter med eggstokkreft [8] og muntlig plateepitelkreft [36]. Denne relativt overraskende krets kan være relatert til den unike biologiske miljøet av endometriet, som er en syklisk proliferativ vev følsom for hormonregulering. Bakgrunnen for en slik observasjon må videre studert i fremtiden.
I sammendraget, Pak1 og cytoplasmatiske p-Pak2 kan spille roller i proliferativ aktivitet av endometrium under menstral syklus. Pak1, cytoplasma og kjernekraft Pak4 og atom p-Pak4 er involvert i patogenesen av livmorkreft og kan være potensielle terapeutiske mål, spesielt hos postmenopausale kvinner. Pak1 forbedre livmorkreft celleproliferasjon spesielt i type endometroid carcinoma. Cytoplasmatiske Pak4 kan være potensielle prognostisk markør i livmorkreft.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 Table. Kilder og arbeids fortynninger av antistoffer som brukes i denne studien
doi:. 10,1371 /journal.pone.0133467.s001 plakater (DOC)
S2 Table. Primere som brukes for real-time PCR
doi:. 10,1371 /journal.pone.0133467.s002 plakater (DOC)
S3 Table. Korrelasjon på Pak1, kjernekraft og cytoplasma p-Pak2, Pak4 og p-Pak4 med clinicopathological parametre i livmorkreft
Doi:. 10.1371 /journal.pone.0133467.s003 plakater (DOC)
Takk
Denne studien ble støttet av Hong Kong Anti-Cancer Society Grant, University of Hong Kong Små prosjektmidler og konferanse og Forskningsrådet Grant.
