Abstract
Ifølge kreft stamceller (cscs) teori, ondartede svulster kan være heterogene der en liten bestand av cscs drive utviklingen av kreft. På grunn av sine iboende evner, kan cscs overleve en rekke behandlinger og deretter føre til terapeutisk motstand og kreft tilbakefall. Bukspyttkjertelen cscs har blitt rapportert å være ansvarlig for det ødeleggende atferd av kreft i bukspyttkjertelen, inkludert undertrykkelse av immunbeskyttelse. Således kan utvikling av immun strategier for å utrydde pankreatiske cscs være av stor verdi for behandling av kreft i bukspyttkjertelen. I denne studien beriket vi bukspyttkjertelen cscs ved dyrking Panc-1 celler etter kule dannende forhold. Panc-1 cscs uttrykte lave nivåer av HLA-ABC og CD86, som målt ved strømningscytometri-analyse. Vi har videre funnet at Panc-1 cscs modulerer immunforsvar ved inhibering av lymfocyttproliferasjon som er markedsført av fytohemagglutinin (PHA) og anti-CD3 monoklonale antistoffer. De stammer fra monocytter dendrittiske celler (DCS) ble belastet med totalt lysates generert fra Panc-1 cscs hentet fra svulsten sfære dyrkning. Etter co-dyrking med lymfocytter på forskjellige forhold, de Panc-1 cscs lysatene modifiserte DC effektivt markedsført lymfocyttproliferasjon. Den aktiverende effektivitet nådde 72,4% og 74,7% ved forholdene mellom 01:10 og 01:20 med lymfocytter. De aktiverte lymfocytter utskilte høye nivåer av INF-γ og IL-2, som er sterke antitumor-cytokiner. Videre Panc-1 cscs lysater modifisert DC induserte signifikante cytotoksiske effekter av lymfocytter på Panc-1 cscs og paren Panc-1-celler, henholdsvis, slik som vist ved laktat dehydrogenase (LDH) assay. Vår studie viser at utviklingen av cscs basert vaksine er en lovende strategi for behandling av kreft i bukspyttkjertelen
Citation. Yin T, Shi P, Gou S, Shen Q, Wang C (2014) dendrittiske celler lastet med bukspyttkjertelen Cancer Stem Cells (cscs) Lysates Fremkall Antitumor Immune Killing Effect In vitro. PLoS ONE 9 (12): e114581. doi: 10,1371 /journal.pone.0114581
Redaktør: Jingwu Xie, Indiana University School of Medicine, USA
mottatt: 31 juli 2014; Godkjent: 11 november 2014; Publisert: 18.12.2014
Copyright: © 2014 Yin et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. Den forfatterne bekrefter at alle data som underbygger funnene er fullt tilgjengelig uten restriksjoner. Alle relevante data er innenfor papir
Finansiering:. Denne studien ble støttet med tilskudd fra Natural Science Foundation of China (nr 30801100) National
Konkurrerende interesser:. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer.
Innledning
kreft i bukspyttkjertelen er en av de mest dødelige kreftformer i fordøyelsessystemet, som er rangert som den ledende årsak til kreft dødsfall i utviklede land. I de senere årene, er forekomsten av kreft i bukspyttkjertelen og dødsfall øker stadig i utviklingsland, mens prognosen for de fleste kreft i bukspyttkjertelen pasienter ikke ble bedre i løpet av de siste tretti årene. Flertallet av bukspyttkjertelkreftpasienter tapt mulighet for kirurgisk fjerning, på grunn av det faktum av avansert stadium av sykdommen ved diagnose, og egen eller ervervet resistens mot kjemoterapi eller radioterapi, som er et typisk kjennetegn for kreft i bukspyttkjertelen [1]. Dermed er det haster å utforske nye målrettet intervensjon strategier for behandling av kreft i bukspyttkjertelen.
kreft stamceller (cscs) er en undergruppe av kreftceller som besitter sterke selvfornyelse og differensiering evner til å drive kreftutvikling og progresjon av kreft. Nylig, CD44 + CD24 + ESA + bukspyttkjertelen cscs har blitt bekreftet å ha en økt karsinogent potensial, og er ansvarlig for ondartet oppførselen til kreft i bukspyttkjertelen [2]. Komplett utrydde disse cscs kan gi håp som en roman terapeutisk strategi for å behandle kreft i bukspyttkjertelen. Imidlertid er anti-apoptotiske evne en av de fremste funksjoner for cscs tvers av flere krefttyper, noe som resulterer i ineffektive drap i standard kjemoterapi og strålebehandling [3] – [4]. Levningen cscs kan dermed bli opphavet til gjentakelse og kilden til behandlingssvikt.
Cancer immunoterapi aktiverer pasientens antitumor immunresponser å avvise ondartede kreftceller. Cscs uttrykker visse biomarkører som har distinkte antigenisitet, som kan indusere spesifikke immunresponser [5] – [6]. Cscs har vist seg å bli gjenkjent og elimineres av de CD8 + cytolytiske T-celler [7]. Videre har det blitt demonstrert at iboende immunitet mot cscs kan diktere kreft progresjon kurs [6]. Det er således et attraktivt strategi for å indusere immunresponser mot bukspyttkjertelen cscs for behandling av kreft i bukspyttkjertelen. DC er potente antigenpresenterende celler og spiller en sentral rolle i å indusere primære immunresponser mot tumorassosierte antigener. Et antall strategier er blitt utviklet for å modifisere DC med tumor-spesifikke antigener for å generere anti-tumor immunresponser. Svake tumor antigen-modifisert DC-vaksine kan fremkalle sterke anti-tumor immunresponser in vitro og in vivo [8]. I denne studien, endret vi DC med bukspyttkjertelen cscs antigen, og etterforsket drapet effekten av immunrespons oppnådd med CSC-DC på bukspyttkjertelen cscs in vitro.
Materialer og metoder
Etikk uttalelse
bruk av forsøkspersoner ble spesielt godkjent av klinisk forskningsetiske komité for unionen sykehuset, Tongji Medical College, Hust. Blodprøver ble oppnådd fra friske donorer. Alle de frivillige hadde kjent og avtalt at blodet skulle bruke for vitenskapelig forskning. Alle deltakerne undertegnet en skriftlig informert samtykkeskjema før donere blod.
Cell kultur
Panc-1 kreft i bukspyttkjertelen cellelinje ble dyrket i Dulbecco Modified Eagle Medium supplert med 10% føtalt bovint serum ( Sigma Chemical Co., St. Louis, MO), penicillin (100 U /ml) og streptomycin (100 U /ml) ved 37 ° C inkubator med 5% CO
2. Kulturen betingelse for kreft i bukspyttkjertelen celler for å danne tumor sfærer i suspensjonen ble beskrevet tidligere [9]. I korthet, ble enzymatisk dissosierte enkeltceller fortynnet til en tetthet på 10
3 celler /ml i sfære dannende medium (SFM). Cellene ble passert hver 10 til 14 dager, og på ny sådd ut i SFM. De sfæriske klynger av celler dyrket i denne tilstanden ble kalt Panc-1 cscs. SFM som ble benyttet var DMEM-F12 supplert med 10 ng /ml fibroblast vekstfaktor-basic (Peprotech) 20 ng /ml epidermal vekstfaktor (Peprotech), 5 ug /ml insulin, 2,75 ug /ml transferrin, 2,5 ng /ml natriumselenitt (Sigma) og 0,4% bovint serumalbumin (Amresco).
Fremstilling av tumorcelle-lysat
kreft i bukspyttkjertelen celler (Panc-en sfære, Panc-1) ble inkubert med 0,01% EDTA -løsning i 5 min. Etter vasking to ganger i PBS, ble cellene resuspendert i serumfritt medium. Cellesuspensjonene ble frosset ved -80 ° C og tint ved fire fryse-tine-sykluser. Etter fjerning av råolje rusk, ble lysatene sentrifugert i 10 min ved 300 g tyngdekraften. Supernatanter ble oppsamlet, og proteinkonsentrasjonen av lysatene ble bestemt ved Bio-Rad analyse (Bio-Rad, Munchen, Tyskland).
Fremstilling av kreft i bukspyttkjertelen celler lysater modifiserte DC
Perifert blod mononukleære celler (PBMC) fra to friske donorer ble isolert ved Ficoll-densitet gradient sentrifugering. PBMC ble dyrket i RPMI 1640 som følger med 10% serum i kulturplater for tilslutning ved 37 ° C med 5% CO
2 i to timer. De ikke-adherente celler ble fjernet og dyrket i medium som inneholdt 10U /mL IL-2 for ytterligere generering av lymfocyttpopulasjon. De adherente celler ble høstet og dyrket i nærvær av GM-CSF (Genzyme, 100 ng /ml) og IL-4 (Genzyme, 100 ng /ml) i 6 dager ved 37 ° C, 5% CO2. Deretter ble cellene inkubert med lysater av kreft i bukspyttkjertelen celle (Panc1 sfære og Panc-1) ved en konsentrasjon på 100 mikrogram for hver 2 x 10
5 DC i 24 timer. Deretter DC ble aktivert med TNF-α (20 ng /ml) i 24 timer.
Immunologisk fenotypeanalyser
Flowcytometri analyse ble utført for å påvise immun fenotyper av svulsten og dendrittiske celler. Antistoffer omfatter anti-HLA-DR-FITC, anti-HLA-ABC-FITC, anti-HLA-DQ-PE, anti-CD80-FITC, anti-CD54-FITC, anti CD1a-FITC, og anti-CD86-PE (eBioscience). FITC-IgG og PE-IgG ble anvendt som interne kontroller. For farging, 5 x 10
5-celler ble platet ut i 96-brønners U-plate (Corning, USA) og inkubert med 5 ul av hver antistoff ved 4 ° C i 30 minutter. Etter vasking med PBS, ble cellene samlet opp ved 1000 g tyngdekraft i 5 minutter. Deretter ble cellene resuspendert med 300 ul av PBS og underkastet strømningscytometri-analyse.
Inhibering av kreft i bukspyttkjertelen celler på lymfocyttproliferasjon
Panc-1 cscs ble høstet som stimulatorceller. Etter å ha blitt forbehandlet med mitomycin C (25 ug /ml), ble stimulatorceller cocultured med 1 x 10
6 /ml ikke-klebende lymfocytt (reaktorer) ved et forhold på 1:10, i nærvær av PHA (Sigma) eller anti-CD3 monoklonale antistoffer (OKT3, eBioscience). Deretter 20 ul 5 ug /ul av 3- (4, 5-dim ethylthiazol-2-yl) -2, 5-difenyl- 2 H – tetrazolium-bromid (MTT) (Sigma) ble tilsatt til hver brønn. Etter inkubering i 4 timer ble supernatanten erstattet med 150 ul dimetylsulfoksid (Sigma). Absorpsjonen (A) ble avlest ved 570 nm ved hjelp av et spektrofotometer. Den relative hastighet av celleproliferasjon ble beregnet som følger: (A-B) /(C + D) x 100%. (A) eksperimentgruppen: Panc-1 cscs + lymfocytter + PHA /OKT3; (B) positiv kontroll: lymfocytter + PHA /OKT3; (C) blank kontroll: Panc-1 cscs + PHA /OKT3. Forsøkene ble utført i tre eksemplarer.
Aktivere effekten av Panc-1 cscs modifisert DC på lymfocyttproliferasjon
For å undersøke kapasiteten Panc-1 cscs modifiserte DC for å aktivere spredning av lymfocytter, annerledes grupper av DC (Panc-en CSC-DC) ble høstet som stimulator celler. Etter forbehandling med mitomycin C (25 ug /ml, Roche), den stimulatorceller ble ko-dyrket med 1 x 10
6 /ml allogen ikke-klebende lymfocytt (reaktorer) i 96-brønners plater i forhold varierende fra 1: 10 til 01:20, og ble kulturen ved 37 ° C, 5% CO
2 i 96 timer. Lymfocyttene dyrket alene, uten å stimulere ble angitt som kontroller. Deretter 20 ul 5 ug /ul av 3- (4, 5-dim ethylthiazol-2-yl) -2, 5-difenyl- 2 H – tetrazolium-bromid (MTT) (Sigma) ble tilsatt til hver brønn. Etter inkubering i 4 timer ble supernatantene erstattet med 150 ul dimetylsulfoksid (Sigma). Absorpsjonen (A) ble avlest ved 570 nm ved hjelp av et spektrofotometer. Det relative antall lymfocytter etter aktivering ble beregnet som: Et eksperiment /A-kontroll x 100%. Hastigheten av celleproliferasjon ble beregnet som: (A eksperiment-A-kontroll) /A-kontroll x 100%. Forsøkene ble utført i tre paralleller.
Cytokin deteksjon av Elisa-analyse
For å bestemme stimulerende kapasitet på dendrittiske celler på lymfocyttaktivering, supernatantene av lymfocytter ble samlet 72 timer etter å ha blitt stimulert med DC og konsentrasjonen av IFN-γ, IL-2, IL-10 ble målt ved hjelp av ELISA-sett fra R 0,05 ble betraktet som signifikant
Resultater
Bukspyttkjertel cscs kultur og sfære dannende
sfæren dannende evner av kreftceller i serumfritt medium har lenge vært vant til. berike stilk-lignende celler. Forholdet mellom kulen dannende egenskaper i serumfritt medium og stamcelle tilhører Panc-1 kreft i bukspyttkjertelen celler er blitt testet i våre tidligere studier [9], [10]. Våre foreløpige undersøkelser funnet at Panc-1 celler kan forplante å danne kuler med stamcelleegenskaper. Videre disse stilk-lignende celler viste økt resistens mot kjemoterapi og økt migrasjon evne. I denne studien har vi samlet de Panc-1 cscs dyrket under serumfritt medium for videre studier av den immunologiske drapet strategi (Fig. 1).
Den immunologiske fenotype av Panc-en sfære celler
Vi oppdaget uttrykket av immunologiske molekyler på Panc-en sfære ved FACS metoder. Som vist på fig. 2, Panc-en sfære uttrykte lave nivåer av HLA-ABC og CD80 sammenlignet med Panc-1 celler. Vi fant ingen forskjeller mellom Panc-1 og Panc-1 sfærer av andre immun molekylære markører inkludert HLA-DR, HLA-DQ, CD86, og CD1a. Den lave uttrykk av immun molekylære markører på Panc-en sfære indikerer at lav stimulerende evne cscs på immunsystemet.
representativt eksempel på FCM-analyse viste at MHC jeg og CD80 ble ydmyk uttrykt i Panc-1 cscs sammen med Panc-1 celler. Ingen signifikante forskjeller ble funnet for andre immunmolekyler inkludert CD86, HLA-DR, HLA-DQ, CD86, og CD1a. Uttrykket av CD80 og HLA-ABC på Panc-1 cscs er vist med en heltrukken linje. Uttrykket av CD80 og HLA-ABC i Panc-1 celler er vist med en stiplet linje
Effekt av kreft i bukspyttkjertelen celler på spredning av lymfocytter
cscs har blitt rapportert å modulere immune og indusere immun undertrykkelse gjennom flere mekanismer. For å finne ut om bukspyttkjertelen cscs modulere aktivering av lymfocytter, effekter av Panc-1 cscs på lymfocyttproliferasjon fremmet av PHA eller anti-CD3 monoklonale antistoffer ble analysert ved MTT-analyse. Panc-1 kuler samtidig var dyrket med lymfocytt. PHA eller anti-CD3 monoklonale antistoffer ble brukt til å aktivere lymfocytt-proliferasjon. Resultatene viste at proliferasjonen av lymfocytter aktivert ved PHA eller anti-CD3 monoklonale antistoffer ble hemmet i nærvær av pankreas cscs sammenlignet med kontrollgruppen (Fig. 3).
Lymfocyttene ble stimulert til å proliferere med PHA eller anti- CD3 monoklonale antistoffer. Panc-1 cscs ble ko-dyrket med lymfocytt i et forhold på 1:10, i nærvær av PHA eller anti-CD3 monoklonale antistoffer. Lymfocytter stimulert med PHA eller anti-CD3 monoklonale antistoffer ble utelukkende angitt som kontroll. MTT-analysen indikerte at lymfocyttproliferasjon fremmet av PHA eller anti-CD3 monoklonale antistoffer ble hemmet i nærvær av Panc-1 cscs.
Den stimulerende evne cscs lysater modifisert DC på lymfocyttproliferasjon
for å bestemme effekten av cscs lysatene modifisert DC på spredning av lymfocytter, forskjellig andel av DC (Panc-1 CSC DC og primitive DC) ble ko-dyrket med lymfocytter. De aktiverende effekter av forskjellig DC på proliferasjonen av lymfocytter ble demonstrert ved MTT-metoden. Spredning av lymfocytter ble demonstrert med overholdelsen ved OD570 nm. Som vist på fig. 4, DC lastet med bukspyttkjertelen cscs lysatene vakte sterk spredning av lymfocytter, (fig. 4A). Den aktiverende virkning av forskjellig DC på lymfocytter kan bli reflektert av lymfocytter formeringshastigheten, og den aktiverende effekt av Panc-1 sfære lysater lastet DC på lymfocytter nådde 72,4% og 74,7% i forholdet 1:10 og 01:20, mens lymfocyttproliferasjon aktiveres av like bare nådde 17,5% og 14,6% (fig. 4B).
forskjellige DC (Panc-1 CSC DC) ble cocultured med lymfocytt (reaktorer) i 96-brønners plater ved forskjellige forhold (01:10, 01:20). Lymfocyttene dyrket alene ble angitt som kontroller. Etter 96 timer ble det relative celletall beregnet som absorbans ved MTT metoder. Forsøkene ble utført in triplo. A. Det relative antall lymfocytter etter stimulering kan bli reflektert av absorbans. Panc-1 cscs modifiserte DC stimulert sterkere spredning av lymfocytter sammenlignet med DC grupper. B. Den aktiverende virkninger av DC på lymfocytter kan bli reflektert av lymfocyttproliferasjon hastighet. De Panc-1 cscs lysatene modifiserte DC oppnådd en betydelig høy lymfocyttproliferasjon hastighet sammenlignet med DC grupper.
Bukspyttkjertel cscs lysatene endret DC provosert sekresjon av IFN-y IL-2 og IL-10 på lymfocytter
for å bestemme aktivering av lymfocytter ved bukspyttkjertelen cscs modifisert DC, vi har oppdaget at cytokiner utskilt av T-celler i henhold til materialer og metoder. DC pulset med bukspyttkjertelkreft cellelysatene indusert sekresjon av Th1 cytokin IFN-γ, IL-2 og Th2-cytokinet IL-10. Våre resultater viste at oppregulering av IFN-γ var spesielt viktig for den Panc-en sfære modifisert DC, og utskillelsen av IFN-γ økte til 5,03 ganger sammenlignet med primitive DC gruppe. Sekresjonen av IL-2 økte til 2,28 ganger sammenlignet med primitive DC gruppe (fig. 5). I mellomtiden Th2-assosiert cytokin IL-10 økte også i Panc-1 cscs antigen lastet DC. Mengden av IL-10 i supernatanten økes opp til 7,3 ganger i Panc-en sfære lysater modifisert DC i forhold til det primitive DC, men betydelig lavere enn den til den tilhørende Th1 cytokin (fig. 5).
forskjellige DC ble ko-dyrket med 1 x 10
6 /ml lymfocytt i 96-brønners plater. Supernatantene av lymfocytter ble oppsamlet 72 timer etter å ha blitt stimulert med DC, og konsentrasjonen av IFN-γ, IL-2, ble IL-10, målt ved hjelp av ELISA-analyse. Bukspyttkjertelen cscs lysatene modifiserte DC provosert betydelig sekresjon av IFN-γ, IL-2 og IL-10 på lymfocytt.
Bukspyttkjertel cscs modifiserte DC indusert sterk drepende effekt på bukspyttkjertel cscs
ytterligere sammenlignet den spesifikke drapet effekten av lymfocytter aktiveres av pankreas cscs modifisert DC. Autolog lymfocytter stimulert med CSC-DC ble samlet og co-dyrket med Panc-1 cscs på ulike forhold. Den spesifikke dreping virkning ble påvist ved LDH metoder. Lymfocyttene aktiveres av DC lastet med Panc-1 cscs rusk viste signifikant drepende effekt på Panc-1 cscs sammenlignet med DC-kontroller på ulike forhold (Fig. 6). Videre fant vi at primitive Panc-1 cellelysater lastet DC provosert en svakere drepende effekt på Panc-1 cscs forhold til Panc-1 cscs lysatene modifiserte DC (Fig. 7A). Men Panc-1 cscs modifiserte DC provosert sammenligndraps effekter både på Panc-1 cscs og Panc-1 celler. Selv om draps effekten var svakere på Panc-en celle sammenlignet med Panc-1 DC, var det ingen signifikant forskjell mellom Panc-en DC og Panc-1 CSC- DC (Fig. 7B). Dette drepende virkning var spesielt signifikant ved en lavere andel av 01:10 og 01:20 med lymfocytter.
Forskjellige DC ble ko-dyrket i et forhold på 1:10 med lymfocytter i 5 dager. De ikke-adherente celler ble oppsamlet og tellet som Effektor-celler. Effektorer (1 × 10
6 celler) ble cocultured med kreft i bukspyttkjertelen celler på annet forhold i 20 timer ved 37 ° C i en 5% CO
2 inkubator. Den cellefrie supernatant ble samlet og analysert ved hjelp av LDH-analyse. De Panc-1 cscs lysatene modifiserte DC viste sterkere drepende effekt på Panc-1 cscs sammenlignet med kontroller.
Ulike DC (Panc-1 fm, Panc-1CSC DC) var co-kultivert i forholdet 1:10 med lymfocytt i 5 dager. De ikke-adherente celler ble oppsamlet og tellet som Effektor-celler. Effektorer (1 x 10
6 celler) ble cocultured med kreft i bukspyttkjertelen celler (Panc-1, Panc-1 cscs) ved forskjellig forhold i 20 timer ved 37 ° C i en 5% CO2-inkubator. Den cellefrie supernatant ble samlet og analysert ved hjelp av LDH-analyse. A. Panc-1 cscs lysatene modifiserte DC viste sterkere drepe effekter på Panc-1 cscs sammenlignet med Panc-1 lysatene modifiserte DC. B. Panc-1 cscs lysatene modifiserte DC hadde sammenligndraps effekter på Panc-1 celler sammenlignet med Panc-en DC vaksine.
Diskusjoner
cscs har vært beryktet for sin motstand til terapi og kan være årsaken for tilbakefall av ondartede svulster, som tidligere rapportert [10] – [11]. Utvikling av antitumor immunitet kan således være et effektivt alternativ tilnærming til å utrydde bukspyttkjertelen cscs. Dessverre kan cscs bryte kroppens immun overvåking gjennom flere mekanismer. Cscs har blitt rapportert å være svak immunogen. Ohlfest et al rapporterte at menneske CD133 + glioma celler uttrykker lave nivåer av MHC I eller natural killer (NK) celle aktivering ligander. Lav uttrykk for disse immunstimulerende molekyler kan hjelpe glioma cscs å unngå den adaptive og medfødte immunangrep [12]. Jevnt i vår studie, flowcytometri analyse viste at bukspyttkjertelen cscs uttrykker lave nivåer av HLA-ABC og CD80. Lav uttrykk av MHC molekyler kan svekke identifisering av cscs antigen av kroppens immunsystem. Lav ekspresjon av CD80, kan føre til immun anergi [13]. De observerte immun egenskaper foreslått lavt immunstimulerende egenskaper av bukspyttkjertelen cscs til immunsystemet. Cscs ble også rapportert å modulere immunresponser. Heimberger et al rapporterte at cscs bidrar immune evasion gjennom indusere regulatoriske T-celler og sekresjon spesifikke immunsuppressive molekyler [14], [15]. Det ble også rapportert at malignt melanom initiering celler kan modulere antitumorimmunrespons ved å hemme T-celleaktivering og induserende Treg celler [14]. Vår undersøkelse fant at aktiveringen av lymfocytter stimulert med PHA eller anti-CD3 monoklonale antistoffer ble hemmet i nærvær av Panc-en sfære. Dette indikerte at bukspyttkjertelen cscs kan ha immunsuppressive egenskaper. Breaking immuntoleranse av bukspyttkjertelen cscs og induksjon av immunresponser mot cscs kan være effektive og lovende strategier for å eliminere cscs.
DC er profesjonelle antigenpresenterende celler som spiller en nøkkelrolle i å indusere og kjøring av primære immunresponser , gjør dem som en viktig mål i å generere terapeutisk immunitet mot kreft [16]. Endring av DC med tumor antigen kan indusere T-celleaktivering og antitumor immunrespons. DC-baserte vaksinasjon utgjør en så lovende og kraftig strategi for å utløse antitumor immunitet for kreftbehandling. Generering av DC lastet med cscs assosierte antigener kan presentere en ny og verdifull metode for utløsning immunresponsen å utrydde cscs. Det hadde blitt rapportert at cytotoksiske T-lymfocytter mot cscs kan induseres ved fusjon av cscs med DC eller transfeksjon av cscs mRNA til dendrittiske celler [17] – [18]. I denne studien har vi ladet DC med bukspyttkjertelen cscs rusk. Etter ko-kultur med lymfocytter, aktiverer denne modifiserte DC og stimulerer lymfocyttproliferasjon og sekresjon av INF-γand IL-2. Oppreguleringen av IFN-γ, som er et kraftig antitumor cytokin, var spesielt signifikant. Samtidig fant vi at Th2 forbundet cytokin IL-10 også økt etter DC stimulering. IL-10 er et potent immunundertrykkende cytokin som inhiberer T-celleaktivering. Selv om oppregulering av IL-10 var mye lavere enn i Th1 forbundet cytokin, hemming av IL-10 kan styrke immunrespons mot cscs.
Vår videre studier viste at lymfocytter aktiveres av Panc-1 cscs lysates modifiserte DC viste betydelige draps effekter både på Panc-1 og Panc-1 cscs. Videre drapet effekt på Panc-1 cscs provosert av Panc-en CSC-DC var sterkere, sammenlignet med Panc-en DC. Tatt i betraktning at kreft i bukspyttkjertelen er motstandsdyktig mot nesten alle for tiden tilgjengelige terapier, og den terapeutiske resistens kan tilskrives cscs. Utvikling av immunterapi til bukspyttkjertelen cscs blir en lovende tilnærming til å behandle kreft i bukspyttkjertelen i nær fremtid.
Til dags dato har isolering av bukspyttkjertelen cscs oppnådd hovedsakelig gjennom spesifikk overflate markør-avhengige celle utvalg. Rapporterte celleoverflatemarkører inkluderer CD44, CD24, CD133, ESA, og andre for bukspyttkjertel cscs [2], [19]. Imidlertid kan pancreatic cscs utvalgte gjennom disse celleoverflatemarkører være heterogene, som ingen av disse markørene synes å selektivt karakterisere en ren populasjon av cscs [20] – [21]. På den annen side kan dyrking av cscs kuler i stamcelleavkjølte kultursystem være en annen tilnærming for å berike pankreatiske cscs. I studien, beriket vi bukspyttkjertelen cscs ved hjelp klebende sfære kultur system. Rester av celle sfære ble brukt til å lade DC og samle cscs modifiserte DC. Den immunreaksjon utløst av en slik tilnærming kan direkte rettet mot de fleste av pankreas cscs befolkningen.
I sammendraget, våre resultater viste at DC-baserte immunterapi kan være en ideell strategi for å eliminere bukspyttkjertelen cscs. Denne lovende immunbehandling verdt videre utvikling vurderer den iboende motstanden i bukspyttkjertelen cscs til eksisterende terapi.
Forfatterne hevder at det ikke er noen interessekonflikt om offentliggjøring av dette papiret.
